生物化學以及生物制(zhi)藥,具體涉及環肽(tai)fzrcycl?a對(dui)于抑制(zhi)cldn?18.2高表達胃癌細胞的作用。
背景技術:
1、胃(wei)(wei)(wei)癌(ai)(ai)是(shi)一(yi)種嚴(yan)重危(wei)害人(ren)類(lei)健(jian)康的(de)(de)(de)(de)(de)(de)惡性(xing)(xing)腫(zhong)瘤(liu),在(zai)(zai)我國(guo)發(fa)(fa)(fa)病率(lv)占所有(you)腫(zhong)瘤(liu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)7.7%,位(wei)居第四。盡管近年來(lai)(lai)在(zai)(zai)早篩(shai)和治療方面取(qu)得重大進展,但(dan)是(shi)晚期胃(wei)(wei)(wei)癌(ai)(ai)患(huan)者(zhe)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)預后仍較差。以(yi)(yi)(yi)免(mian)疫檢查點(dian)抑制劑為(wei)代表(biao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)免(mian)疫治療和以(yi)(yi)(yi)人(ren)類(lei)表(biao)皮生(sheng)長因(yin)子(zi)受體2(her2)為(wei)代表(biao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)子(zi)靶向治療的(de)(de)(de)(de)(de)(de)進展使的(de)(de)(de)(de)(de)(de)晚期胃(wei)(wei)(wei)癌(ai)(ai)患(huan)者(zhe)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)預后得到了改(gai)善,然而程(cheng)序性(xing)(xing)死(si)亡配體1(pd-l1)和her2陰性(xing)(xing)聯合陽性(xing)(xing)分(fen)數(shu)<5的(de)(de)(de)(de)(de)(de)胃(wei)(wei)(wei)癌(ai)(ai)患(huan)者(zhe)從以(yi)(yi)(yi)上的(de)(de)(de)(de)(de)(de)治療方式中(zhong)獲益有(you)限(xian),5年生(sheng)存率(lv)較低,亟待(dai)開(kai)發(fa)(fa)(fa)針對新治療靶點(dian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)藥物。近年來(lai)(lai),claudin18.2(cldn18.2)在(zai)(zai)胃(wei)(wei)(wei)癌(ai)(ai)發(fa)(fa)(fa)生(sheng)發(fa)(fa)(fa)展中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)關鍵作用收(shou)到了研究者(zhe)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)廣泛(fan)關注。cldn18.2是(shi)一(yi)種緊密(mi)連接(jie)蛋(dan)白,在(zai)(zai)正常胃(wei)(wei)(wei)組(zu)織(zhi)中(zhong)表(biao)達有(you)限(xian),胃(wei)(wei)(wei)癌(ai)(ai)組(zu)織(zhi)上,cldn18.2的(de)(de)(de)(de)(de)(de)抗原表(biao)位(wei)得以(yi)(yi)(yi)暴露,成為(wei)胃(wei)(wei)(wei)癌(ai)(ai)治療的(de)(de)(de)(de)(de)(de)特異(yi)性(xing)(xing)靶點(dian)。
2、針對cldn18.2陽性胃癌(ai)的(de)(de)(de)靶(ba)向治(zhi)療(liao)主要包(bao)括(kuo)單克(ke)隆(long)抗(kang)(kang)體(如zolbetuximab,tst001)、car-t細胞治(zhi)療(liao)、抗(kang)(kang)體藥物(wu)(wu)(wu)偶聯(lian)等(deng)。但作(zuo)為大分子(zi)生(sheng)物(wu)(wu)(wu)制劑,抗(kang)(kang)體同時也是一種免(mian)疫原,可(ke)能誘發(fa)排斥反應(ying),使機體生(sheng)成(cheng)(cheng)與抗(kang)(kang)體藥物(wu)(wu)(wu)相對應(ying)的(de)(de)(de)抗(kang)(kang)體,導(dao)致藥物(wu)(wu)(wu)療(liao)效(xiao)(xiao)下降(jiang)或者(zhe)失效(xiao)(xiao)。此(ci)外,抗(kang)(kang)體生(sheng)產工藝復(fu)雜,涉及(ji)許(xu)多環節,包(bao)括(kuo)高表(biao)達細胞株篩選、培養基研(yan)發(fa)、純化(hua)技術要發(fa)等(deng)諸(zhu)多方(fang)面,因此(ci)抗(kang)(kang)體藥物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)研(yan)發(fa)周期長(chang),成(cheng)(cheng)本(ben)高,價(jia)格昂貴。鑒于此(ci),開發(fa)小分子(zi)靶(ba)向cldn18.2的(de)(de)(de)生(sheng)物(wu)(wu)(wu)制劑是解決上述問題的(de)(de)(de)一種重(zhong)要的(de)(de)(de)手段。
3、環(huan)肽(tai)是(shi)一類(lei)主要由氨(an)基酸以肽(tai)鍵(jian)連接形(xing)成的環(huan)狀化(hua)合(he)物,有十(shi)分豐富的生物活性。因此成為藥(yao)物研(yan)究(jiu)的重點。在前期的研(yan)究(jiu)中,我們通(tong)過生物信息學(xue)構(gou)建環(huan)肽(tai)庫結合(he)小(xiao)分子(zi)芯片合(he)成技術(shu)(shu)(pct:wo2021191247a1)的方法發現環(huan)肽(tai)fzrcycl?a能夠與cldn18.2進行靶向親和(zl?2023?1?0530284.4)。但是(shi)對于其抑制腫瘤增殖(zhi)的作用未有進一步的研(yan)究(jiu),相關(guan)現有技術(shu)(shu)也未有報道。
技術實現思路
1、針對(dui)現有技術(shu)的(de)不足之處,本(ben)發明旨在(zai)提出一種多肽,通過固(gu)相(xiang)合成,解決(jue)了(le)特異性抑制腫瘤細(xi)胞增殖的(de)問題。
2、為達(da)到(dao)上述(shu)目的,一方面(mian),本發明提(ti)供一種特異性結合cldn18.2的環(huan)(huan)肽(tai)在制備治療(liao)癌癥中的用途(tu),其特征在于,所述(shu)的環(huan)(huan)肽(tai)為fzrcyc1a,其分子式:
3、c20-dcys-asp-trp-asp-val-dcys-trp-val-arg-arg-dcys-asn-o2oc-lys(biotin)-nh2,
4、其中:
5、c20:2-(4-bromophenyl)-6-(4-chlorophenyl)pyridine-4-carboxylic?acid;
6、dcys:d-cysteine;
7、o2oc:two?repeats?of?ethylene?glycol。
8、進一步地(di),所述的癌癥為cldn18.2高表達的癌癥。
9、進一步地,所述(shu)的癌癥(zheng)為胃癌;優選的,所述(shu)的癌癥(zheng)為cldn18.2高表達的胃癌。
10、進一步的,所述的環肽fzrcyc1?a的結構式為:
11、
12、第二個(ge)方面,本(ben)發明(ming)提供一種(zhong)特異(yi)性結(jie)合cldn18.2的(de)(de)(de)環(huan)肽(tai)在制(zhi)備抑制(zhi)腫(zhong)瘤細(xi)胞(bao)增殖試劑中的(de)(de)(de)用(yong)途,所(suo)述的(de)(de)(de)用(yong)途為(wei)體外的(de)(de)(de)非(fei)治療目的(de)(de)(de)應用(yong);所(suo)述的(de)(de)(de)環(huan)肽(tai)為(wei)所(suo)述的(de)(de)(de)環(huan)肽(tai)為(wei)fzrcyc1?a,其分子式(shi):
13、c20-dcys-asp-trp-asp-val-dcys-trp-val-arg-arg-dcys-asn-o2oc-lys(biotin)-nh2,
14、其中:
15、c20:2-(4-bromophenyl)-6-(4-chlorophenyl)pyridine-4-carboxylic?acid;
16、dcys:d-cysteine;
17、o2oc:two?repeats?of?ethylene?glycol。
18、進一(yi)步地,所述的細(xi)胞為cldn18.2高表達的細(xi)胞。
19、進一(yi)步(bu)地,所述的(de)(de)細(xi)胞(bao)為(wei)胃癌細(xi)胞(bao);優選(xuan)的(de)(de),所述的(de)(de)細(xi)胞(bao)為(wei)cldn18.2高表(biao)達(da)的(de)(de)胃癌細(xi)胞(bao)。
20、進一步的(de),所述的(de)環(huan)肽fzrcyc1?a的(de)結(jie)構式為:
21、
22、第三個(ge)方(fang)面,本發(fa)明提(ti)供(gong)一種特異性(xing)結合(he)(he)(he)cldn18.2的(de)(de)環肽在制(zhi)備(bei)綴合(he)(he)(he)物用途,其(qi)特征(zheng)在于,所述的(de)(de)綴合(he)(he)(he)物由環肽和(he)(he)對具有細胞毒性(xing)的(de)(de)小分(fen)子化合(he)(he)(he)物通過共價(jia)和(he)(he)/或非(fei)共價(jia)的(de)(de)形式鏈接(jie),其(qi)中,所述環肽為fzrcyc1?a,其(qi)分(fen)子式:
23、c20-dcys-asp-trp-asp-val-dcys-trp-val-arg-arg-dcys-asn-o2oc-lys(biotin)-nh2,
24、其中:
25、其中:
26、c20為2-(4-溴苯基)-6-(4-氯(lv)苯基)吡啶-4-羧酸(2-(4-bromophenyl)-6-(4-chlorophenyl)pyridine-4-carboxylic?acid)
27、dcys為d-半胱氨酸(suan)(d-cysteine);
28、o2oc:乙二醇的兩個重復單元(two?repeats?of?ethylene?glycol);
29、所述的(de)細胞毒性(xing)的(de)小分子化(hua)合物(wu)為癌癥化(hua)療藥物(wu);
30、進一(yi)步地(di),所述(shu)的綴合物(wu)(wu)為(wei)治療(liao)腫瘤的藥物(wu)(wu);
31、進(jin)一步地,所述的癌(ai)癥為cldn18.2高表(biao)達(da)的癌(ai)癥。
32、進一步地,所述(shu)的(de)癌癥為胃癌;優(you)選的(de),所述(shu)的(de)癌癥為ldn18.2高表達的(de)胃癌。
33、進一步的,所述的環肽fzrcyc1?a的結(jie)構式為:
34、
35、相(xiang)對(dui)于現有技術,本發(fa)明具有如下優勢,
36、1)在(zai)在(zai)先研(yan)究基礎上,發現,fzrcycl?a是能夠與cldn?18.2進行靶向親和的(de)環肽,通過活/死細(xi)胞染(ran)色、cck-8實驗和細(xi)胞增殖(zhi)流式(shi)分(fen)選分(fen)別驗證(zheng)fzrcycl?a能夠抑制cldn18.2細(xi)胞的(de)增殖(zhi);
37、2)后(hou)(hou)經(jing)過轉錄組測序并進行通路富(fu)集后(hou)(hou)發現fzrcycl?a環肽通過上調高表達cldn18.2細胞的內吞和(he)溶酶體相關蛋白活性(xing)抑制(zhi)細胞增(zeng)殖。
1.一(yi)種特異性(xing)結合cldn18.2的環肽在制備治療癌(ai)癥(zheng)中的用(yong)途,其特征在于,所(suo)述的環肽為(wei)fzrcyc1?a,其分子式:
2.根據權利要求1所述的用途,所述的癌癥(zheng)為cldn18.2高表達(da)的癌癥(zheng)。
3.根據權利要求1所述(shu)的用途,所述(shu)的癌癥為胃癌。
4.根據權利要求1-3任一項所述的用途,所述的環肽fzrcyc1?a的結構(gou)式為(wei):
5.一種特異性結合cldn18.2的(de)(de)(de)(de)(de)環(huan)肽(tai)在制備(bei)抑制腫(zhong)瘤細胞增殖試劑(ji)中的(de)(de)(de)(de)(de)用途,所述(shu)的(de)(de)(de)(de)(de)用途為(wei)體外的(de)(de)(de)(de)(de)非治療目的(de)(de)(de)(de)(de)應(ying)用;所述(shu)的(de)(de)(de)(de)(de)環(huan)肽(tai)為(wei)所述(shu)的(de)(de)(de)(de)(de)環(huan)肽(tai)為(wei)fzrcyc1?a,其分子式:
6.根(gen)據權利要(yao)求5所(suo)述的用途,所(suo)述的細胞為cldn18.2高表達(da)的細胞。
7.根(gen)據權利要(yao)求5所述的用途(tu),所述的細胞(bao)為(wei)胃癌(ai)細胞(bao)。
8.根據權利(li)要求5-7任意(yi)一項(xiang)所述的(de)用途,所述的(de)環肽(tai)fzrcyc1?a的(de)結構式為(wei):
9.一種特異性結合(he)cldn18.2的(de)環肽(tai)在制備(bei)綴合(he)物用(yong)途(tu),其特征在于,所述的(de)綴合(he)物由環肽(tai)和(he)對(dui)具(ju)有細胞毒性的(de)小分(fen)子化合(he)物通過共價和(he)/或(huo)非共價的(de)形式鏈接,其中,所述環肽(tai)為(wei)fzrcyc1?a,其分(fen)子式:
10.根據權利要求9所述的(de)用途,所述的(de)環肽(tai)fzrcyc1?a的(de)結構式(shi)為(wei):