一種制備馬昔瑞林的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種制備馬昔瑞林的方法，更具體地，涉及一種固相合成馬昔瑞林的 方法。
【背景技術】
[0002] 馬昔瑞林（macimorelin)是一種新型合成小分子，是胃促生長素受體激動劑。馬 昔瑞林具有口服活性，可以刺激生長激素（GH)的分泌。馬昔瑞林由阿斯利康公司研發，已 向FDA遞交了新藥申請（IND)。III期試驗數據證實該化合物可能成為第一個獲批的口服 產品，其通過誘發生長激素釋放從而評價成人生長激素缺乏，準確度與現有的靜脈和肌內 檢查方式相仿。FDA已授予該藥在AGHD治療領域的罕見藥資格。
[0003] 馬昔瑞林的結構式：
[0004]
[0005] US2009305300A1及US2002165343A1記載了用液相合成法制備馬昔瑞林。該方法 的缺點是，每一步反應完成后，需要的化合物和副產物都以混合物形式存在，需要被純化后 再進行下一步合成。因此操作較繁瑣，收率較低。
[0006] 因此，需要一種操作上簡便且收率較高的制備馬昔瑞林的方法。

【發明內容】

[0007] 本發明的目的是提供一種制備馬昔瑞林的方法，該方法通過固相合成法進行。所 述方法可以簡化液相合成法的操作步驟，提高反應收率。
[0008] 因此，本發明提供一種制備馬昔瑞林的方法，該方法包括以下步驟：
[0009] A采用固相多肽合成方法，將Sieber樹脂脫除Fmoc，得到H2N_Sieber樹脂，然后與 Fmoc-D-Trp(Boc) -0H偶聯，重復脫除Fmoc步驟和偶聯步驟，依次偶聯Fmoc-D-Trp(Boc) -0H 和Boc_Aib-〇H，得到線性膚樹脂Boc-Aib-D-Trp(Boc) _D_Trp(Boc)-Sieber樹脂；
[0010] B將步驟A中得到的線性肽樹脂裂解，得到側鏈全保護肽8〇(^讓-0-1^出〇(3)-0-Trp(Boc)-NH2；
[0011] C將步驟B中得到的全保護肽的酰胺基還原成氨基，得到側鏈全保護肽Boc-Aib-D -Trp(Boc)-D-gTrp(Boc)-H；
[0012] D將步驟C中得到的全保護肽的氨基進行酰化，得到側鏈全保護馬昔瑞林肽Boc-A ib-D-Trp(Boc)-D-gTrp(Boc)-CH0 ；
[0013]E脫除步驟D中得到的全保護馬昔瑞林肽中氮上的Boc保護基，得到馬昔瑞林 H-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO。
[0015] 本發明的方法與現有技術的液相合成法相比，避免了大量的純化步驟，提高了反 應收率。
【具體實施方式】
[0016] 本發明中的寬泛的、優選的、更優選的和最優選的定義和范圍可以相互組合。
[0017] 術語解釋
[0018] 本文中，術語"固相多肽合成方法"是指多肽合成領域已知的Fmoc固相合成方法， 例如記載于FmocSolidPhasePeptideSynthesis:APracticalApproach,W.C.Chan,Peter D.White著，March2, 2000 (ISBN-10:0199637245)，英國OxfordUniversityPress。
[0019] 本文中，"替代度"是指單位量的樹脂負載的物質（例如苯甲酸或氨基酸等）的數 量，單位為"mm〇l/g"。
[0020] 本文中，本發明中"肽"是指類似地通過多肽合成中的固相合成方法得到的偶聯產 物。
[0021] 本文中，"適量"表示所修飾的物質的用量對反應而言不是關鍵的，只要能達到所 需目的即可，無需限于一個具體范圍，而且還可以一次添加或分多次添加，本領域技術人員 可以根據經驗結合實際情況進行選擇，例如通過檢測反應終點來控制用量。
[0022] 本文中，"適當時間"表示所修飾的時間對反應而言不是關鍵的，只要能達到所需 目的即可，無需限于一個具體范圍，本領域技術人員可以根據經驗結合實際情況進行選擇， 例如通過檢測反應終點來控制時間。
[0023] 對本發明中所用縮寫及其含義說明如下：
[0024]表1.文中縮寫的含義

[0027] 本發明提供一種制備馬昔瑞林的方法，該方法包括以下步驟：
[0028]A采用固相多肽合成方法，將Sieber樹脂脫除Fmoc，得到H2N_Sieber樹脂，然后與 Fmoc-D-Trp(Boc) -0H偶聯，重復脫除Fmoc步驟和偶聯步驟，依次偶聯Fmoc-D-Trp(Boc) -0H 和Boc-Aib-OH，得到線性膚樹脂Boc-Aib-D-Trp(Boc) _D_Trp(Boc)-Sieber樹脂；
[0029] B將步驟A中得到的線性肽樹脂裂解，得到側鏈全 Trp(Boc)-NH2；
[0030]C將步驟B中得到的全保護肽的酰胺基還原成氨基，得到側鏈全保護肽Boc-Aib-D -Trp(Boc)-D-gTrp(Boc)-H；
[0031]D將步驟C中得到的全保護肽的氨基進行酰化，得到側鏈全保護馬昔瑞林肽Boc-A ib-D-Trp(Boc)-D-gTrp(Boc)-CH0 ；
[0032]E脫除步驟D中得到的全保護馬昔瑞林肽中氮上的Boc保護基，得到馬昔瑞林 H-Aib-D-Trp-D-gTrp-CHO。
[0033]步驟A
[0034] 在一個具體的實施方案中，在本發明步驟A中，固相合成方法包括將Sieber樹脂 脫除Fmoc，然后用溶劑洗滌，直至用檢測方法檢測到完全脫除Fmoc為止；將適量的游離氨 基酸和偶聯劑溶解于溶劑中，然后一起加入到固相反應柱中進行偶聯反應，直至用檢測方 法檢測到反應終止為止；重復脫除Fmoc步驟和偶聯步驟。
[0035] 在一個具體的實施方案中，本發明步驟A中Sieber樹脂的樹脂替代度為 0· 3-1.Ommolg，優選 0· 6-0. 8mmol/g。
[0036] 在一個具體的實施方案中，本發明步驟A中脫除Fmoc的試劑可為本領域已知的可 實現該目的的任何試劑，優選有機堿溶液，更優選體積濃度為5-50 %，進一步優選體積濃度 10-30%，更進一步優選體積濃度20%的哌啶的DMF溶液（DBLK)，其用量不受限制，適量即 可。脫保護反應的壓力優選為常壓，也可在適當提高或降低的壓力下進行；反應溫度優選為 室溫（即20±5°C)，也可在適當提高或降低的溫度下進行。
[0037] 在一個具體的實施方案中，基于樹脂上所負載的氨基的摩爾量計，參與偶聯的游 離氨基酸Fmoc-D-Trp(Boc) -0H和Boc-Aib-ΟΗ每次的用量為2-20當量，優選3-10當量，更 優選4-7當量。
[0038] 在一個具體的實施方案中，本發明步驟A中的偶聯在適當的偶聯劑的存在下進 行，偶聯劑為HOBT/DIC、HATU/HOBT/DIPEA、HBTU/HOBT/DIPEA、HATU/HOAT/DIPEA、PyAOP/ H0AT/DIPEA、PyB0P/H0BT/DIPEA，優選H0BT/DIC。其中，基于偶聯的游離氨基酸的摩爾量計， Η0ΒΤ、DIC、HBTU、HATU、Η0ΑΤ、PyAOP、DIPEA和PyBOP的量分別為 1-5 當量，優選 1-3 當量， 更優選1-2當量。
[0039] 在一個具體的實施方案中，本發明步驟A中的偶聯反應在適當的溶劑中進行，所 用的溶劑為常用于此目的的溶劑，例如，但不限于，DMF、DCM、DMS0、NMP、THF、乙酸乙酯、甲 醇、乙醚等及其任意混合物，優選體積比為1:1的DMF和DCM的混合溶液，溶劑的用量不受 限制，適量即可。
[0040] 在一個具體的實施方案中，本發明步驟A中的反應在固相反應柱中進行。對固相 反應柱無特別限制，可為可實現此目的的任意固相反應柱。此外，每種氨基酸進行偶聯反應 的時間通常為1-4小時，優選2-4小時，更優選2-3小時；反應壓力優選為常壓，也可在適當 提高或降低的壓力下進行；反應溫度優選為室溫（即20±5°C)，也可在適當提高或降低的 溫度下進行。
[0041] 在一個具體的實施方案中，本發明步驟A中的反應優選將樹脂在脫除保護基之前 進行溶脹，脫除保護基之后用溶劑洗滌，所述洗滌和溶脹的步驟本領域技術人員可采用實 現該目的的任何試劑進行，例如，但不限于，DMF、DCM、DMS0、NMP、THF、乙酸乙酯、甲醇、乙醚 等及其任意混合物，優選DMF。所述反應中應用的檢測方法是本領域已知的可實現此目的的 任意方法，例如色譜法或化學標定法，優選使用可判定反應終點的試劑，優選茚三酮，當使 用茚三酮時，若樹脂顯色則說明多肽中有游離的氨基，即氨基氮上無保護基。