本(ben)申請(qing)要求2014年3月7日提(ti)交(jiao)的美(mei)國臨時專利申請(qing)序列(lie)號61/949,345的優先(xian)權，其此處并入為參考文(wen)獻。

技術領域

本(ben)公開通常(chang)地涉及(ji)治療(liao)(liao)蛋白(bai)質(zhi)，并且更(geng)特別地涉及(ji)具有增加的(de)穩定性的(de)蛋白(bai)質(zhi)，例如，嵌合蛋白(bai)質(zhi)，并且涉及(ji)在癌癥(zheng)和其(qi)它疾病的(de)治療(liao)(liao)中治療(liao)(liao)劑的(de)使(shi)用(yong)方法。

背景技術：

癌癥和其它疾(ji)(ji)病影響人類的(de)日常生(sheng)活。癌癥特別地(di)是由于(yu)細胞程序死亡(wang)引起的(de)遍布宿主(zhu)身體(ti)擴散(san)的(de)持續性(xing)疾(ji)(ji)病，直到(dao)宿主(zhu)最(zui)終死于(yu)該疾(ji)(ji)病為止(zhi)。

目(mu)前(qian)使用各種形式的治(zhi)(zhi)療(liao)法(fa)，范(fan)圍(wei)從侵(qin)入性到(dao)極微侵(qin)入性的治(zhi)(zhi)療(liao)法(fa)來治(zhi)(zhi)療(liao)這(zhe)些疾病(bing)。這(zhe)些治(zhi)(zhi)療(liao)法(fa)包括外(wai)科手術，化學療(liao)法(fa)、放(fang)射療(liao)法(fa)，靶(ba)向(xiang)治(zhi)(zhi)療(liao)等。然而，這(zhe)些治(zhi)(zhi)療(liao)法(fa)常常導致(zhi)患(huan)者(zhe)在治(zhi)(zhi)療(liao)期(qi)間感覺生病(bing)，并且，經(jing)常不足以(yi)完全(quan)地從人(ren)類除去(qu)疾病(bing)。

技術實現要素：

本公開(kai)(kai)提供了(le)一(yi)(yi)種(zhong)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)，例如，嵌(qian)合(he)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)，作(zuo)為給藥的(de)(de)治(zhi)療劑，具有(you)延長的(de)(de)半衰期和(he)延長的(de)(de)有(you)效性(xing)。本公開(kai)(kai)的(de)(de)一(yi)(yi)方面涉及一(yi)(yi)種(zhong)嵌(qian)合(he)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)，其(qi)能夠誘導細胞中(zhong)(zhong)細胞程(cheng)序死亡(wang)。嵌(qian)合(he)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)包(bao)含第(di)一(yi)(yi)肽(tai)(tai)和(he)第(di)二肽(tai)(tai)，該第(di)一(yi)(yi)肽(tai)(tai)是穩定的(de)(de)人類蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)的(de)(de)一(yi)(yi)部分，該第(di)二肽(tai)(tai)是人類BH3-only蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)的(de)(de)BH3結構(gou)域，其(qi)賦(fu)予第(di)一(yi)(yi)肽(tai)(tai)穩定性(xing)，因此導致整體嵌(qian)合(he)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)的(de)(de)增加的(de)(de)穩定性(xing)。BH3-only蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)的(de)(de)BH3結構(gou)域是Bim、Bid、Bad、Bik、Bmf、Hrk、Puma或Noxia中(zhong)(zhong)任一(yi)(yi)個。

嵌(qian)合(he)(he)(he)(he)蛋白(bai)(bai)質(zhi)可(ke)以(yi)具有與這里所公開的(de)(de)(de)SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8、SEQ ID No.9或(huo)SEQ ID No.10相(xiang)同的(de)(de)(de)氨基(ji)酸(suan)序(xu)列(lie)。第一肽可(ke)以(yi)是鈣結合(he)(he)(he)(he)蛋白(bai)(bai)D9k的(de)(de)(de)一部分，N-末端(duan)鈣調蛋白(bai)(bai)、C-末端(duan)鈣調蛋白(bai)(bai)或(huo)小清蛋白(bai)(bai)。而(er)且，嵌(qian)合(he)(he)(he)(he)蛋白(bai)(bai)質(zhi)可(ke)以(yi)包含靶向部分，其將嵌(qian)合(he)(he)(he)(he)蛋白(bai)(bai)質(zhi)靶向細胞。靶向部分可(ke)以(yi)通過(guo)二硫鍵(jian)或(huo)馬來(lai)酰亞胺(an)鍵(jian)綴合(he)(he)(he)(he)嵌(qian)合(he)(he)(he)(he)蛋白(bai)(bai)質(zhi)的(de)(de)(de)葉酸(suan)。此外(wai)，嵌(qian)合(he)(he)(he)(he)蛋白(bai)(bai)質(zhi)可(ke)以(yi)包含修飾基(ji)團，諸如聚(ju)乙(yi)二醇，其延(yan)長(chang)嵌(qian)合(he)(he)(he)(he)蛋白(bai)(bai)質(zhi)的(de)(de)(de)半衰期。

本公開(kai)的(de)(de)(de)另一個方(fang)面(mian)涉(she)及用嵌(qian)合蛋(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)治(zhi)療(liao)個體以誘(you)導細胞的(de)(de)(de)細胞程(cheng)序(xu)死亡的(de)(de)(de)方(fang)法(fa)。該(gai)方(fang)法(fa)包(bao)括向個體給(gei)藥治(zhi)療(liao)有效(xiao)量的(de)(de)(de)嵌(qian)合蛋(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)。嵌(qian)合蛋(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)包(bao)含第(di)一肽(tai)和第(di)二肽(tai)，該(gai)第(di)一肽(tai)是穩定的(de)(de)(de)人類蛋(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)一部分，該(gai)第(di)二肽(tai)是人類BH3-only蛋(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)BH3結(jie)構域。第(di)一肽(tai)是鈣(gai)(gai)結(jie)合蛋(dan)白(bai)D9k，N-末(mo)端(duan)鈣(gai)(gai)調(diao)(diao)蛋(dan)白(bai)、C-末(mo)端(duan)鈣(gai)(gai)調(diao)(diao)蛋(dan)白(bai)或小清蛋(dan)白(bai)。嵌(qian)合蛋(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)可以具有靶向序(xu)列。

該(gai)方法還(huan)可(ke)以(yi)(yi)(yi)(yi)包(bao)括除(chu)了給(gei)(gei)藥(yao)(yao)嵌(qian)(qian)合(he)(he)(he)(he)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)外還(huan)將(jiang)治療靶暴露于放射。而(er)且(qie)，奧(ao)沙利鉑(oxaliplatin)可(ke)以(yi)(yi)(yi)(yi)與(yu)嵌(qian)(qian)合(he)(he)(he)(he)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)一(yi)起給(gei)(gei)藥(yao)(yao)。嵌(qian)(qian)合(he)(he)(he)(he)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)也可(ke)以(yi)(yi)(yi)(yi)具(ju)有(you)與(yu)這里所(suo)公開的(de)(de)SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8、SEQ ID No.9或SEQ ID No.10相同的(de)(de)氨基酸序列。可(ke)以(yi)(yi)(yi)(yi)在藥(yao)(yao)物(wu)(wu)學(xue)上(shang)可(ke)以(yi)(yi)(yi)(yi)接受的(de)(de)組(zu)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)內(nei)給(gei)(gei)藥(yao)(yao)嵌(qian)(qian)合(he)(he)(he)(he)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)，并且(qie)藥(yao)(yao)物(wu)(wu)學(xue)上(shang)可(ke)接受的(de)(de)組(zu)合(he)(he)(he)(he)物(wu)(wu)可(ke)以(yi)(yi)(yi)(yi)包(bao)含成像探(tan)針。BH3結構域可(ke)以(yi)(yi)(yi)(yi)來自(zi)于BH3-only蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)的(de)(de)Bim、Bid、Bad、Bik、Bmf、Hrk、Puma或Noxia之(zhi)一(yi)。而(er)且(qie)，嵌(qian)(qian)合(he)(he)(he)(he)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)可(ke)以(yi)(yi)(yi)(yi)包(bao)含與(yu)其綴(zhui)合(he)(he)(he)(he)的(de)(de)葉酸，該(gai)葉酸是將(jiang)嵌(qian)(qian)合(he)(he)(he)(he)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)靶向細(xi)胞的(de)(de)靶向部(bu)分。此外，葉酸可(ke)以(yi)(yi)(yi)(yi)通過二(er)硫鍵或馬(ma)來酰亞胺鍵綴(zhui)合(he)(he)(he)(he)嵌(qian)(qian)合(he)(he)(he)(he)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)。嵌(qian)(qian)合(he)(he)(he)(he)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)還(huan)可(ke)以(yi)(yi)(yi)(yi)包(bao)含與(yu)其綴(zhui)合(he)(he)(he)(he)的(de)(de)聚乙(yi)二(er)醇(chun)(chun)，該(gai)聚乙(yi)二(er)醇(chun)(chun)延長(chang)嵌(qian)(qian)合(he)(he)(he)(he)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)的(de)(de)半衰期。BH3結構域還(huan)可(ke)以(yi)(yi)(yi)(yi)具(ju)有(you)與(yu)其綴(zhui)合(he)(he)(he)(he)的(de)(de)標記。

定義

術(shu)語“氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)”指天(tian)然存在(zai)(zai)的(de)(de)(de)和(he)(he)(he)非天(tian)然的(de)(de)(de)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)，以及以與天(tian)然存在(zai)(zai)的(de)(de)(de)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)相似(si)(si)的(de)(de)(de)方式起(qi)作用的(de)(de)(de)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)類似(si)(si)物和(he)(he)(he)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)模擬物。天(tian)然編(bian)碼的(de)(de)(de)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)是20種常(chang)規氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(丙(bing)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、精氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、天(tian)冬酰胺、天(tian)冬氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、半(ban)胱(guang)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、谷(gu)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酰胺、谷(gu)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、甘氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、組氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、異(yi)亮(liang)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、亮(liang)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、賴氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、甲(jia)(jia)硫氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、苯丙(bing)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、脯(fu)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、絲氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、蘇氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、色氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、酪氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)和(he)(he)(he)纈氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan))以及吡咯賴氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)和(he)(he)(he)硒代半(ban)胱(guang)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)。氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)類似(si)(si)物指具(ju)有(you)與天(tian)然存在(zai)(zai)的(de)(de)(de)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)相同的(de)(de)(de)基(ji)(ji)(ji)本(ben)化(hua)(hua)學結構的(de)(de)(de)化(hua)(hua)合物，僅僅舉例(li)(li)說明，結合氫的(de)(de)(de)α-碳、羧(suo)基(ji)(ji)(ji)、氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)和(he)(he)(he)R基(ji)(ji)(ji)。這種類似(si)(si)物可以具(ju)有(you)修(xiu)飾(shi)的(de)(de)(de)R基(ji)(ji)(ji)(例(li)(li)如(ru)，正(zheng)亮(liang)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan))或可以具(ju)有(you)修(xiu)飾(shi)的(de)(de)(de)肽骨架，而同時保持與天(tian)然存在(zai)(zai)的(de)(de)(de)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)相同的(de)(de)(de)基(ji)(ji)(ji)本(ben)化(hua)(hua)學結構。氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)類似(si)(si)物的(de)(de)(de)非限制性例(li)(li)子包括高絲氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、正(zheng)亮(liang)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)、甲(jia)(jia)硫氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)亞(ya)砜(feng)和(he)(he)(he)甲(jia)(jia)硫氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)甲(jia)(jia)基(ji)(ji)(ji)锍。

術語“保守性修飾(shi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)變(bian)體(ti)”適用于天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)和(he)(he)非(fei)(fei)(fei)(fei)(fei)天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)以及天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)和(he)(he)非(fei)(fei)(fei)(fei)(fei)天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)序(xu)列和(he)(he)它們的(de)(de)(de)(de)(de)(de)組合。對于特別的(de)(de)(de)(de)(de)(de)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)序(xu)列，“保守性修飾(shi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)變(bian)體(ti)”指編(bian)(bian)碼(ma)(ma)(ma)(ma)相(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)同(tong)或(huo)(huo)(huo)基(ji)(ji)本(ben)上(shang)相(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)同(tong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)和(he)(he)非(fei)(fei)(fei)(fei)(fei)天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)序(xu)列的(de)(de)(de)(de)(de)(de)那些天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)和(he)(he)非(fei)(fei)(fei)(fei)(fei)天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)，或(huo)(huo)(huo)者其(qi)中天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)和(he)(he)非(fei)(fei)(fei)(fei)(fei)天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)不編(bian)(bian)碼(ma)(ma)(ma)(ma)天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)和(he)(he)非(fei)(fei)(fei)(fei)(fei)天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)序(xu)列為基(ji)(ji)本(ben)上(shang)相(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)同(tong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)序(xu)列。例(li)如，因(yin)(yin)為遺傳密碼(ma)(ma)(ma)(ma)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)簡并性，大量功(gong)能(neng)(neng)相(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)同(tong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)編(bian)(bian)碼(ma)(ma)(ma)(ma)任何(he)給定的(de)(de)(de)(de)(de)(de)蛋白質。例(li)如，密碼(ma)(ma)(ma)(ma)子(zi)GCA、GCC、GCG和(he)(he)GCU所有都(dou)編(bian)(bian)碼(ma)(ma)(ma)(ma)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)丙(bing)(bing)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)。因(yin)(yin)此(ci)，在(zai)每(mei)個(ge)(ge)位置(zhi)密碼(ma)(ma)(ma)(ma)子(zi)指定丙(bing)(bing)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)，但(dan)是(shi)可(ke)以改變(bian)密碼(ma)(ma)(ma)(ma)子(zi)到所述相(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)應密碼(ma)(ma)(ma)(ma)子(zi)中的(de)(de)(de)(de)(de)(de)任何(he)一(yi)個(ge)(ge)，而不改變(bian)編(bian)(bian)碼(ma)(ma)(ma)(ma)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)多(duo)肽(tai)。這種氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)變(bian)異(yi)(yi)是(shi)“沉默(mo)(mo)變(bian)異(yi)(yi)”，這是(shi)保守性修飾(shi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)變(bian)異(yi)(yi)中的(de)(de)(de)(de)(de)(de)一(yi)種。因(yin)(yin)此(ci)，例(li)如，編(bian)(bian)碼(ma)(ma)(ma)(ma)天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)或(huo)(huo)(huo)非(fei)(fei)(fei)(fei)(fei)天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)多(duo)肽(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)這里的(de)(de)(de)(de)(de)(de)每(mei)個(ge)(ge)天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)或(huo)(huo)(huo)非(fei)(fei)(fei)(fei)(fei)天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)序(xu)列也描(miao)述了天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)或(huo)(huo)(huo)非(fei)(fei)(fei)(fei)(fei)天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)每(mei)種可(ke)能(neng)(neng)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)沉默(mo)(mo)變(bian)異(yi)(yi)。本(ben)領域技術人員承認可(ke)以修飾(shi)天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)或(huo)(huo)(huo)非(fei)(fei)(fei)(fei)(fei)天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)中每(mei)個(ge)(ge)密碼(ma)(ma)(ma)(ma)子(zi)(除了AUG，其(qi)通常(chang)是(shi)甲硫(liu)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)唯一(yi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)密碼(ma)(ma)(ma)(ma)子(zi)，以及除了TGG，其(qi)通常(chang)是(shi)色氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)唯一(yi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)密碼(ma)(ma)(ma)(ma)子(zi))，以產生功(gong)能(neng)(neng)相(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)同(tong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)分子(zi)。相(xiang)(xiang)(xiang)(xiang)應地，編(bian)(bian)碼(ma)(ma)(ma)(ma)天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)或(huo)(huo)(huo)非(fei)(fei)(fei)(fei)(fei)天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)多(duo)肽(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)和(he)(he)非(fei)(fei)(fei)(fei)(fei)天(tian)(tian)(tian)(tian)(tian)然(ran)(ran)(ran)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)每(mei)個(ge)(ge)沉默(mo)(mo)變(bian)異(yi)(yi)在(zai)每(mei)個(ge)(ge)描(miao)述的(de)(de)(de)(de)(de)(de)序(xu)列中都(dou)是(shi)隱含(han)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)。

這(zhe)里所(suo)用(yong)(yong)的(de)(de)(de)術(shu)語“有效量(liang)(liang)(liang)”指被(bei)給藥的(de)(de)(de)足夠量(liang)(liang)(liang)的(de)(de)(de)藥劑(ji)或(huo)(huo)化合(he)(he)(he)物(wu)，它們將在一(yi)定程度上緩解疾病的(de)(de)(de)一(yi)種(zhong)或(huo)(huo)多(duo)(duo)(duo)種(zhong)癥狀(zhuang)或(huo)(huo)被(bei)治療(liao)(liao)的(de)(de)(de)狀(zhuang)況。結果(guo)可(ke)(ke)以(yi)是疾病的(de)(de)(de)跡象、癥狀(zhuang)或(huo)(huo)病因的(de)(de)(de)減(jian)少(shao)和/或(huo)(huo)減(jian)輕，或(huo)(huo)者(zhe)生物(wu)學(xue)系統的(de)(de)(de)任何(he)其它期望的(de)(de)(de)改變。例(li)如，被(bei)給藥的(de)(de)(de)藥劑(ji)或(huo)(huo)化合(he)(he)(he)物(wu)包括但不限(xian)于(yu)天(tian)然(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)氨(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)多(duo)(duo)(duo)肽(tai)、非(fei)天(tian)然(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)氨(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)多(duo)(duo)(duo)肽(tai)、修(xiu)飾(shi)的(de)(de)(de)天(tian)然(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)氨(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)多(duo)(duo)(duo)肽(tai)或(huo)(huo)修(xiu)飾(shi)的(de)(de)(de)非(fei)氨(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)多(duo)(duo)(duo)肽(tai)。可(ke)(ke)以(yi)給藥包含這(zhe)種(zhong)天(tian)然(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)氨(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)多(duo)(duo)(duo)肽(tai)、非(fei)天(tian)然(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)氨(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)多(duo)(duo)(duo)肽(tai)、修(xiu)飾(shi)的(de)(de)(de)天(tian)然(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)氨(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)多(duo)(duo)(duo)肽(tai)或(huo)(huo)修(xiu)飾(shi)的(de)(de)(de)非(fei)天(tian)然(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)氨(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)多(duo)(duo)(duo)肽(tai)的(de)(de)(de)組合(he)(he)(he)物(wu)，用(yong)(yong)于(yu)預防、增強和/或(huo)(huo)治療(liao)(liao)性治療(liao)(liao)。使用(yong)(yong)技術(shu)，諸如劑(ji)量(liang)(liang)(liang)逐步升級研(yan)究(jiu)可(ke)(ke)以(yi)確定任何(he)個體病例(li)中適(shi)合(he)(he)(he)的(de)(de)(de)“有效”量(liang)(liang)(liang)。

這里所用的術(shu)語“細(xi)(xi)胞或(huo)細(xi)(xi)胞種群(qun)”指從組(zu)織切除的分(fen)離(li)的細(xi)(xi)胞或(huo)多(duo)個(ge)細(xi)(xi)胞，或(huo)者通過組(zu)織培養技術(shu)體外生長(chang)的分(fen)離(li)的細(xi)(xi)胞或(huo)多(duo)個(ge)細(xi)(xi)胞。最特別地，細(xi)(xi)胞種群(qun)指動(dong)物或(huo)人類組(zu)織中體內的細(xi)(xi)胞。

這里所用的(de)(de)(de)術語(yu)“接(jie)觸細(xi)胞(bao)或細(xi)胞(bao)種群(qun)”指向(xiang)分離的(de)(de)(de)或培(pei)養的(de)(de)(de)細(xi)胞(bao)或細(xi)胞(bao)種群(qun)遞送(song)根據本公開的(de)(de)(de)肽或探(tan)針(zhen)，或者(zhe)向(xiang)人類或動物(wu)(wu)的(de)(de)(de)靶(ba)(ba)組(zu)織給藥(yao)在適(shi)合的(de)(de)(de)藥(yao)物(wu)(wu)學上可接(jie)受載(zai)體中的(de)(de)(de)探(tan)針(zhen)。給藥(yao)可以(yi)是(shi)，但不限于靜(jing)脈(mo)內遞送(song)、腹膜(mo)內遞送(song)、肌肉內地(di)、皮下地(di)或通(tong)(tong)過本領域已知的(de)(de)(de)任(ren)何其它方法(fa)。一種有利(li)的(de)(de)(de)方法(fa)是(shi)直接(jie)地(di)遞送(song)到立即地(di)通(tong)(tong)向(xiang)靶(ba)(ba)器官或組(zu)織，諸如(ru)胰腺的(de)(de)(de)血管中，因此降低總循環系統中探(tan)針(zhen)的(de)(de)(de)稀(xi)釋。

這里所用的(de)(de)(de)術語“藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)物(wu)學上(shang)可(ke)(ke)接(jie)受(shou)的(de)(de)(de)載(zai)(zai)體(ti)(ti)”指與(yu)本公開的(de)(de)(de)異(yi)二(er)聚體(ti)(ti)探針一起給藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)的(de)(de)(de)稀釋劑(ji)(ji)(ji)、佐劑(ji)(ji)(ji)、賦(fu)形劑(ji)(ji)(ji)或(huo)(huo)(huo)(huo)載(zai)(zai)體(ti)(ti)，并(bing)且被聯邦或(huo)(huo)(huo)(huo)州政府的(de)(de)(de)管理機構批準或(huo)(huo)(huo)(huo)者(zhe)在美(mei)國藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)典或(huo)(huo)(huo)(huo)其它通常認(ren)可(ke)(ke)的(de)(de)(de)用于(yu)動物(wu)，并(bing)且更特別地人類的(de)(de)(de)藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)典中被列出(chu)。這種(zhong)藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)物(wu)學上(shang)載(zai)(zai)體(ti)(ti)可(ke)(ke)以(yi)是(shi)(shi)液(ye)體(ti)(ti)，諸(zhu)如(ru)水或(huo)(huo)(huo)(huo)油(you)(you)，包括(kuo)石(shi)(shi)油(you)(you)、動物(wu)、植物(wu)或(huo)(huo)(huo)(huo)合(he)成來源的(de)(de)(de)那(nei)些，諸(zhu)如(ru)花生油(you)(you)、大豆油(you)(you)、礦物(wu)油(you)(you)、芝麻油(you)(you)等等。藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)物(wu)學上(shang)可(ke)(ke)接(jie)受(shou)的(de)(de)(de)載(zai)(zai)體(ti)(ti)可(ke)(ke)以(yi)是(shi)(shi)鹽(yan)(yan)、阿拉伯樹膠、明膠、淀粉糊、滑石(shi)(shi)、角蛋白、膠態(tai)氧(yang)化(hua)硅(gui)、尿素等等。當向患者(zhe)給藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)時，異(yi)二(er)聚體(ti)(ti)探針和藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)物(wu)學上(shang)可(ke)(ke)接(jie)受(shou)的(de)(de)(de)載(zai)(zai)體(ti)(ti)可(ke)(ke)以(yi)是(shi)(shi)經過(guo)滅菌(jun)的(de)(de)(de)。當靜脈內(nei)給藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)異(yi)二(er)聚體(ti)(ti)探針時，水是(shi)(shi)有(you)用的(de)(de)(de)載(zai)(zai)體(ti)(ti)。鹽(yan)(yan)溶(rong)液(ye)和含水葡萄糖和甘(gan)油(you)(you)溶(rong)液(ye)也可(ke)(ke)以(yi)用作液(ye)體(ti)(ti)載(zai)(zai)體(ti)(ti)，特別地用于(yu)注射溶(rong)液(ye)。適(shi)合(he)的(de)(de)(de)藥(yao)(yao)(yao)(yao)(yao)物(wu)學上(shang)可(ke)(ke)接(jie)受(shou)的(de)(de)(de)載(zai)(zai)體(ti)(ti)還包括(kuo)賦(fu)形劑(ji)(ji)(ji)諸(zhu)如(ru)葡萄糖、乳(ru)糖、蔗糖、單硬脂酸甘(gan)油(you)(you)酯(zhi)、氯(lv)化(hua)鈉、甘(gan)油(you)(you)、丙烯(xi)、乙二(er)醇(chun)、水、乙醇(chun)等等。本組合(he)物(wu)如(ru)果期望還可(ke)(ke)以(yi)包含微量的(de)(de)(de)濕(shi)潤或(huo)(huo)(huo)(huo)乳(ru)化(hua)劑(ji)(ji)(ji)或(huo)(huo)(huo)(huo)者(zhe)pH緩(huan)沖劑(ji)(ji)(ji)。本組合(he)物(wu)有(you)利地可(ke)(ke)以(yi)采(cai)用溶(rong)液(ye)、乳(ru)液(ye)、持續釋放的(de)(de)(de)制劑(ji)(ji)(ji)或(huo)(huo)(huo)(huo)者(zhe)適(shi)于(yu)使用的(de)(de)(de)任何其它形式。

這里所用(yong)的(de)術語“蛋白(bai)質(zhi)”指由一個(ge)或(huo)多個(ge)氨基(ji)(ji)酸鏈按照特(te)定順序組成的(de)大分子。順序由編碼(ma)蛋白(bai)質(zhi)的(de)基(ji)(ji)因(yin)中核苷酸的(de)堿基(ji)(ji)順序決定。需要蛋白(bai)質(zhi)用(yong)于(yu)身體細胞、組織和器(qi)官的(de)結構、功能(neng)和調節(jie)。每種蛋白(bai)質(zhi)具有(you)唯(wei)一的(de)功能(neng)。

這里可交換地使(shi)用術(shu)語“多肽”、“肽”和“蛋白質(zhi)”以(yi)指氨(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)殘基(ji)(ji)(ji)的聚合(he)物(wu)(wu)。術(shu)語適(shi)于其中(zhong)一種(zhong)或多個氨(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)殘基(ji)(ji)(ji)是相(xiang)應(ying)天然地存在的氨(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)的人工(gong)化學模擬物(wu)(wu)的氨(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)聚合(he)物(wu)(wu)，以(yi)及適(shi)于天然存在的氨(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)聚合(he)物(wu)(wu)和非(fei)天然存在的氨(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)聚合(he)物(wu)(wu)。

術語“變(bian)(bian)(bian)體(ti)”指不(bu)(bu)同(tong)(tong)于(yu)參考(kao)肽(tai)(tai)或(huo)(huo)多(duo)(duo)核苷(gan)(gan)酸(suan)的(de)(de)(de)(de)肽(tai)(tai)或(huo)(huo)多(duo)(duo)核苷(gan)(gan)酸(suan)，但(dan)是(shi)(shi)(shi)保(bao)留了基(ji)本特性。典型(xing)的(de)(de)(de)(de)肽(tai)(tai)變(bian)(bian)(bian)體(ti)在氨(an)(an)基(ji)酸(suan)序列上(shang)不(bu)(bu)同(tong)(tong)于(yu)另一種(zhong)參考(kao)肽(tai)(tai)。通常地，限制不(bu)(bu)同(tong)(tong)以(yi)致于(yu)參考(kao)肽(tai)(tai)和(he)變(bian)(bian)(bian)體(ti)的(de)(de)(de)(de)序列總體(ti)上(shang)接近地相似，并且在許多(duo)(duo)區(qu)域(yu)相同(tong)(tong)。變(bian)(bian)(bian)體(ti)和(he)參考(kao)肽(tai)(tai)通過一個或(huo)(huo)多(duo)(duo)個修(xiu)飾，在氨(an)(an)基(ji)酸(suan)序列上(shang)可以(yi)不(bu)(bu)同(tong)(tong)(例(li)如，取(qu)(qu)代、添加和(he)/或(huo)(huo)刪除)。肽(tai)(tai)變(bian)(bian)(bian)體(ti)包(bao)括保(bao)守性修(xiu)飾的(de)(de)(de)(de)變(bian)(bian)(bian)體(ti)(例(li)如，原序列的(de)(de)(de)(de)約(yue)(yue)75％、約(yue)(yue)80％、約(yue)(yue)85％、約(yue)(yue)90％、約(yue)(yue)95％、約(yue)(yue)98％和(he)約(yue)(yue)99的(de)(de)(de)(de)保(bao)守性變(bian)(bian)(bian)體(ti))。取(qu)(qu)代或(huo)(huo)插入的(de)(de)(de)(de)氨(an)(an)基(ji)酸(suan)殘(can)基(ji)可以(yi)是(shi)(shi)(shi)由(you)遺傳密(mi)碼編碼的(de)(de)(de)(de)氨(an)(an)基(ji)酸(suan)殘(can)基(ji)或(huo)(huo)者也可以(yi)不(bu)(bu)是(shi)(shi)(shi)。肽(tai)(tai)變(bian)(bian)(bian)體(ti)可以(yi)是(shi)(shi)(shi)天然(ran)地存(cun)在的(de)(de)(de)(de)，諸如等位(wei)基(ji)因變(bian)(bian)(bian)體(ti)，或(huo)(huo)者它可以(yi)是(shi)(shi)(shi)不(bu)(bu)知道其(qi)天然(ran)地存(cun)在的(de)(de)(de)(de)變(bian)(bian)(bian)體(ti)。

這(zhe)里所用的(de)術語“靶”指期(qi)望檢(jian)測的(de)肽(tai)、細(xi)(xi)胞(bao)(bao)、組(zu)織、腫瘤等(deng)。靶向肽(tai)可以(yi)在細(xi)(xi)胞(bao)(bao)表面上，與動物宿主分離的(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)、培養細(xi)(xi)胞(bao)(bao)，或者動物組(zu)織中的(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)或細(xi)(xi)胞(bao)(bao)種群。

本公(gong)(gong)開(kai)包括來源(yuan)于(yu)天然(ran)(ran)存(cun)在的(de)(de)(de)(de)(de)(de)肽(tai)(tai)(tai)序列(lie)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)肽(tai)(tai)(tai)。如果(guo)通過片段(duan)化天然(ran)(ran)地存(cun)在的(de)(de)(de)(de)(de)(de)序列(lie)可以獲得肽(tai)(tai)(tai)，或(huo)者如果(guo)基于(yu)天然(ran)(ran)存(cun)在的(de)(de)(de)(de)(de)(de)氨(an)基酸(suan)序列(lie)或(huo)編碼該(gai)序列(lie)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)遺傳材(cai)料(DNA或(huo)RNA)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)序列(lie)知識可以合成肽(tai)(tai)(tai)，那么肽(tai)(tai)(tai)就稱為“來源(yuan)于(yu)天然(ran)(ran)地存(cun)在的(de)(de)(de)(de)(de)(de)氨(an)基酸(suan)序列(lie)”。包括在本公(gong)(gong)開(kai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)范圍(wei)內是被稱為肽(tai)(tai)(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)“衍生(sheng)物”的(de)(de)(de)(de)(de)(de)那些分(fen)子。這種“衍生(sheng)物”或(huo)“變體”與肽(tai)(tai)(tai)或(huo)肽(tai)(tai)(tai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)相似(si)大(da)小的(de)(de)(de)(de)(de)(de)片段(duan)分(fen)享(xiang)實質相似(si)性，并且能夠(gou)與肽(tai)(tai)(tai)起到具(ju)有相同(tong)生(sheng)物學活性的(de)(de)(de)(de)(de)(de)作用。

如果衍生物(wu)的氨基(ji)酸(suan)序列(lie)是肽(tai)或(huo)具有(you)與衍生物(wu)相同(tong)數量氨基(ji)酸(suan)殘基(ji)的肽(tai)片段(duan)中任一個氨基(ji)酸(suan)序列(lie)的至少(shao)80％、至少(shao)90％、至少(shao)95％或(huo)與其相同(tong)，那么肽(tai)的衍生物(wu)稱(cheng)為與肽(tai)分享“實質相似(si)性”。

本(ben)公開的(de)(de)衍生物包括片(pian)段(duan)，該(gai)片(pian)段(duan)除了包含(han)與(yu)天然(ran)(ran)存在(zai)(zai)(zai)(zai)的(de)(de)肽(tai)(tai)的(de)(de)序列(lie)(lie)實質相(xiang)似的(de)(de)序列(lie)(lie)外，還可(ke)以在(zai)(zai)(zai)(zai)它們的(de)(de)氨(an)基(ji)末(mo)(mo)端和/或(huo)(huo)羧基(ji)末(mo)(mo)端包含(han)一(yi)個或(huo)(huo)多個附加(jia)的(de)(de)氨(an)基(ji)酸(suan)。相(xiang)似地，本(ben)公開包括肽(tai)(tai)片(pian)段(duan)，該(gai)肽(tai)(tai)片(pian)段(duan)盡管包含(han)與(yu)天然(ran)(ran)存在(zai)(zai)(zai)(zai)的(de)(de)肽(tai)(tai)的(de)(de)序列(lie)(lie)實質相(xiang)似的(de)(de)序列(lie)(lie)，但(dan)是(shi)可(ke)以在(zai)(zai)(zai)(zai)它們的(de)(de)氨(an)基(ji)末(mo)(mo)端和/或(huo)(huo)羧基(ji)末(mo)(mo)端缺少在(zai)(zai)(zai)(zai)肽(tai)(tai)上天然(ran)(ran)發現(xian)的(de)(de)一(yi)個或(huo)(huo)多個附加(jia)的(de)(de)氨(an)基(ji)酸(suan)。

這里所用的(de)(de)(de)術(shu)(shu)語“預防地有效(xiao)(xiao)量(liang)”指預防地向患者(zhe)施用的(de)(de)(de)包(bao)含至少(shao)一種(zhong)非(fei)天然(ran)氨基(ji)酸(suan)多(duo)肽(tai)或(huo)(huo)至少(shao)一種(zhong)修飾(shi)的(de)(de)(de)非(fei)天然(ran)氨基(ji)酸(suan)多(duo)肽(tai)的(de)(de)(de)組(zu)合物(wu)的(de)(de)(de)量(liang)，這將一定程度上緩解(jie)正在治療的(de)(de)(de)疾病的(de)(de)(de)一種(zhong)或(huo)(huo)多(duo)種(zhong)癥狀(zhuang)、狀(zhuang)況或(huo)(huo)障礙(ai)。在這種(zhong)預防應用中，這種(zhong)量(liang)可以取(qu)決于(yu)(yu)患者(zhe)的(de)(de)(de)健康狀(zhuang)態、體重(zhong)等等。本領域技(ji)術(shu)(shu)人員通過常規實驗法，包(bao)括但不限于(yu)(yu)劑量(liang)逐步升(sheng)級(ji)臨床試驗可以很(hen)好(hao)地考慮，確定這種(zhong)預防地有效(xiao)(xiao)量(liang)。

在(zai)兩個核酸(suan)或多(duo)肽的(de)(de)上下(xia)(xia)文中，短(duan)語(yu)“實質(zhi)相似”指當進行(xing)最大對應的(de)(de)比(bi)(bi)較和(he)對齊時，如使用序(xu)列(lie)比(bi)(bi)較算(suan)法(fa)諸如，下(xia)(xia)述的(de)(de)算(suan)法(fa)所(suo)測量的(de)(de)，例如或者(zhe)(zhe)通過(guo)可視檢查所(suo)測量的(de)(de)具有至少75％，優選地至少85％，更(geng)優選地至少90％、95％或更(geng)高，或者(zhe)(zhe)在(zai)其(qi)之(zhi)間的(de)(de)任(ren)何整數值的(de)(de)核苷酸(suan)或氨基酸(suan)殘(can)基同一(yi)性的(de)(de)兩個或多(duo)個序(xu)列(lie)或亞序(xu)列(lie)。

優選(xuan)地(di)(di)(di)，實質(zhi)同一性存(cun)在于是至(zhi)少約(yue)10個(ge)，優選(xuan)地(di)(di)(di)約(yue)20個(ge)，更優選(xuan)地(di)(di)(di)約(yue)40-60個(ge)殘基長(chang)(chang)度(du)或其間任何整數值(zhi)的(de)(de)殘基長(chang)(chang)度(du)的(de)(de)序(xu)列(lie)區(qu)(qu)域(yu)上，優選(xuan)地(di)(di)(di)比60-80個(ge)殘基更長(chang)(chang)，更優選(xuan)地(di)(di)(di)至(zhi)少約(yue)90-100個(ge)殘基的(de)(de)區(qu)(qu)域(yu)上，并且最優選(xuan)地(di)(di)(di)序(xu)列(lie)實質(zhi)上與(yu)被比較的(de)(de)序(xu)列(lie)的(de)(de)全長(chang)(chang)諸如(ru)，例如(ru)核苷酸序(xu)列(lie)的(de)(de)編碼(ma)區(qu)(qu)相同。

這里所用(yong)(yong)(yong)的(de)術語“協(xie)(xie)同(tong)”指(zhi)預(yu)防或(huo)(huo)治(zhi)療有效(xiao)(xiao)(xiao)藥劑(ji)(ji)的(de)聯(lian)合，該(gai)聯(lian)合比任何(he)兩種(zhong)或(huo)(huo)多種(zhong)單個藥劑(ji)(ji)的(de)添加效(xiao)(xiao)(xiao)果(guo)更(geng)(geng)有效(xiao)(xiao)(xiao)。預(yu)防或(huo)(huo)治(zhi)療藥劑(ji)(ji)的(de)聯(lian)合的(de)協(xie)(xie)同(tong)效(xiao)(xiao)(xiao)果(guo)可(ke)(ke)以(yi)允許使(shi)用(yong)(yong)(yong)更(geng)(geng)低劑(ji)(ji)量的(de)一種(zhong)或(huo)(huo)多種(zhong)藥劑(ji)(ji)和/或(huo)(huo)向具有特(te)定疾病或(huo)(huo)狀況的(de)受試者(zhe)更(geng)(geng)少頻率地給藥藥劑(ji)(ji)。在一些情況下，可(ke)(ke)以(yi)利(li)用(yong)(yong)(yong)預(yu)防或(huo)(huo)治(zhi)療藥劑(ji)(ji)的(de)聯(lian)合的(de)協(xie)(xie)同(tong)效(xiao)(xiao)(xiao)果(guo)以(yi)避免(mian)或(huo)(huo)減少與任何(he)單個治(zhi)療使(shi)用(yong)(yong)(yong)相關的(de)不(bu)利(li)或(huo)(huo)不(bu)想要的(de)副作用(yong)(yong)(yong)。

這里所用的(de)(de)(de)術(shu)語(yu)“治療(liao)有(you)(you)效量(liang)”指向已經遭受疾病(bing)(bing)、狀(zhuang)況(kuang)(kuang)或(huo)障(zhang)礙的(de)(de)(de)患者給(gei)藥包含至(zhi)少(shao)一(yi)種(zhong)非(fei)天然氨基酸(suan)多(duo)肽和(he)/或(huo)至(zhi)少(shao)一(yi)種(zhong)修飾的(de)(de)(de)非(fei)天然氨基酸(suan)多(duo)肽的(de)(de)(de)組合物(wu)的(de)(de)(de)量(liang)，該(gai)量(liang)足(zu)以治愈或(huo)至(zhi)少(shao)部分地阻礙或(huo)一(yi)定(ding)程度上緩(huan)解正在治療(liao)的(de)(de)(de)疾病(bing)(bing)的(de)(de)(de)一(yi)種(zhong)或(huo)多(duo)種(zhong)癥(zheng)狀(zhuang)、障(zhang)礙或(huo)狀(zhuang)況(kuang)(kuang)。這種(zhong)組合物(wu)的(de)(de)(de)有(you)(you)效性取決于情況(kuang)(kuang)，包括(kuo)但是不限于疾病(bing)(bing)、障(zhang)礙或(huo)狀(zhuang)況(kuang)(kuang)的(de)(de)(de)嚴重性和(he)病(bing)(bing)程、之(zhi)前(qian)的(de)(de)(de)治療(liao)、患者的(de)(de)(de)健康狀(zhuang)態(tai)和(he)對藥物(wu)的(de)(de)(de)反應以及治療(liao)內科醫生(sheng)的(de)(de)(de)判(pan)斷。只是舉例，可以通(tong)過常規(gui)實驗法(fa)，包括(kuo)但不限于劑量(liang)逐步升(sheng)級臨床試驗確(que)定(ding)治療(liao)有(you)(you)效量(liang)。

除非(fei)另外表(biao)明(ming)，特定的(de)核(he)酸(suan)序(xu)列(lie)也隱含(han)地(di)包括其保(bao)守性修飾的(de)變(bian)體(ti)(例如，簡并(bing)(bing)密(mi)(mi)碼子(zi)取代)和(he)互補序(xu)列(lie)，以及(ji)明(ming)確地(di)表(biao)明(ming)的(de)序(xu)列(lie)。特別地(di)，通過(guo)產生序(xu)列(lie)可(ke)以獲得簡并(bing)(bing)密(mi)(mi)碼子(zi)取代，該序(xu)列(lie)中用混合(he)堿基(ji)和(he)/或脫(tuo)氧(yang)肌苷(gan)(gan)殘基(ji)取代一個或多(duo)(duo)個選定(或所有)密(mi)(mi)碼子(zi)的(de)第三位(wei)置。術語核(he)酸(suan)與(yu)基(ji)因、cDNA、mRNA、寡(gua)核(he)苷(gan)(gan)酸(suan)和(he)多(duo)(duo)核(he)苷(gan)(gan)酸(suan)可(ke)以互換地(di)使用。

本公開(kai)也包括上述片段的明(ming)顯或普通的變(bian)體，這(zhe)些變(bian)體具(ju)有(you)(you)無意義的氨基(ji)(ji)酸取(qu)代(dai)(由此具(ju)有(you)(you)與天然序列的氨基(ji)(ji)酸序列不同(tong)的氨基(ji)(ji)酸序列)，只要這(zhe)種變(bian)體具(ju)有(you)(you)與上述衍生物(wu)的活(huo)性實質相(xiang)同(tong)的活(huo)性。明(ming)顯或普通取(qu)代(dai)的例子(zi)包括一(yi)個(ge)(ge)堿基(ji)(ji)殘(can)基(ji)(ji)取(qu)代(dai)為(wei)另一(yi)個(ge)(ge)(即(ji)，Arg取(qu)代(dai)為(wei)Lys)，一(yi)個(ge)(ge)疏水性殘(can)基(ji)(ji)取(qu)代(dai)為(wei)另一(yi)個(ge)(ge)(即(ji)，Leu取(qu)代(dai)為(wei)Ile)，或者一(yi)個(ge)(ge)芳(fang)香族殘(can)基(ji)(ji)取(qu)代(dai)為(wei)另一(yi)個(ge)(ge)(即(ji)，Phe取(qu)代(dai)為(wei)Tyr)等等。

附圖說明

參考(kao)附圖(tu)闡(chan)述詳細的(de)說明。在圖(tu)中(zhong)，附圖(tu)標記(ji)最左側(ce)的(de)數(shu)字表示附圖(tu)標記(ji)首先出(chu)現的(de)圖(tu)。不同圖(tu)中(zhong)相(xiang)(xiang)同附圖(tu)標記(ji)的(de)使(shi)用表明相(xiang)(xiang)似或相(xiang)(xiang)同的(de)項或特征。

圖1是根(gen)據本公開(kai)的嵌合蛋(dan)白質的透視圖。

圖2是圖示，示例了根(gen)據(ju)本公開細胞中不同嵌合蛋白質的表達效果。

圖3是圖示(shi)(shi)，示(shi)(shi)例了根據(ju)本公開(kai)具有不同宿(su)主肽(tai)和Bid的(de)BH3結構域的(de)嵌合蛋白質(zhi)對SW620細胞(bao)的(de)細胞(bao)程序死亡的(de)效果(guo)。

圖4是圖示，示例(li)了根據本公開具有鈣結(jie)合(he)蛋白(bai)(bai)D9k宿主肽和來自于不(bu)同BH3-only蛋白(bai)(bai)質(zhi)的(de)BH3結(jie)構域的(de)嵌合(he)蛋白(bai)(bai)質(zhi)對(dui)SW620細胞的(de)細胞程序死(si)亡的(de)效果。

圖5示例(li)了(le)根據本公開嵌合蛋白質與葉酸綴(zhui)合的效(xiao)果。

圖6是圖示，示例了(le)根據本公開(kai)癌(ai)癥(zheng)中(zhong)葉酸受體的表達。

圖7是圖示，示例(li)了根據本公開(kai)具有鈣結(jie)合(he)蛋白(bai)D9k宿(su)主肽、來自于Bid或(huo)Bim的BH3結(jie)構域(yu)和綴(zhui)合(he)葉(xie)酸的嵌合(he)蛋白(bai)質對SW620細胞的效果。

圖8是圖示(shi)(shi)，示(shi)(shi)例(li)了根據(ju)本公開用不(bu)同濃度(du)的嵌(qian)合蛋白質D-Bid處(chu)理SW620細胞，該(gai)嵌(qian)合蛋白質具有二硫鍵合(S-S)葉酸綴合物。

圖(tu)9是圖(tu)示，示例了根據本公開具有鈣結合蛋白D9k宿主肽、來(lai)自于不同BH3-only蛋白質的(de)BH3結構域和綴合葉酸的(de)嵌合蛋白質對(dui)A549、SW620和KB細胞(bao)的(de)效果(guo)。

圖10A示(shi)例了根據本公開具(ju)(ju)有(you)/不具(ju)(ju)有(you)葉(xie)酸(suan)綴合(he)(he)，或者具(ju)(ju)有(you)二硫鍵(SS)或馬來(lai)酰亞胺(an)(Mal)綴合(he)(he)的嵌合(he)(he)蛋白質(D-Bid)對SW620細胞的異種移植腫瘤的效果(終點腫瘤大(da)小(xiao))。

圖(tu)10B是圖(tu)示，示例(li)了根據本公開具(ju)有(you)(you)/不具(ju)有(you)(you)葉酸綴合，或(huo)者具(ju)有(you)(you)二硫鍵(SS)或(huo)馬(ma)來酰亞胺(Mal)綴合的嵌合蛋(dan)白質(D-Bid)對SW620細胞的異種移植腫(zhong)瘤的效果(腫(zhong)瘤生長曲線)。

圖10C是圖表，示例了根據本(ben)公開具(ju)(ju)有/不(bu)具(ju)(ju)有葉酸綴(zhui)合，或者具(ju)(ju)有二硫鍵(SS)或馬來酰(xian)亞胺(Mal)綴(zhui)合的(de)嵌合蛋白(bai)質(D-Bid)對SW620細胞(bao)的(de)異種(zhong)移植腫瘤的(de)效果(終點腫瘤重量(liang))。

圖11A示(shi)例了(le)根據(ju)本公(gong)開多臂(bei)PEG化(hua)試劑綴合(he)嵌合(he)蛋白質。

圖(tu)11B是圖(tu)示(shi)，示(shi)例了根據本公開通(tong)過多臂(bei)PEG化試(shi)劑(ji)綴合不同數量(liang)的(de)嵌(qian)合蛋白質D-Nox的(de)單葉酸的(de)效果(腫瘤生長曲線)。

圖(tu)12是(shi)圖(tu)示，示例了根據(ju)本公開通過多臂(bei)PEG化試劑綴合不同數量(liang)的(de)嵌合蛋白質D-Nox的(de)單葉酸的(de)效(xiao)果(終(zhong)端腫瘤重量(liang))。

圖13是圖示，示例了(le)根據(ju)本公(gong)開通過多(duo)臂PEG化試劑(ji)綴合(he)不同數量的(de)嵌(qian)合(he)蛋白質(zhi)D-Nox的(de)單葉酸(suan)的(de)效果。

圖14是圖示，示例(li)了根據本公開放射治療(liao)與嵌(qian)合蛋(dan)白(bai)質(zhi)對SW620細胞的協同(tong)效果，該嵌(qian)合蛋(dan)白(bai)質(zhi)包(bao)含鈣結合蛋(dan)白(bai)D9k宿主肽和不同(tong)BH3-only蛋(dan)白(bai)質(zhi)的BH3結構(gou)域。

圖15是圖示，示例了根據本(ben)公開奧沙利(li)鉑與嵌合蛋白(bai)質對SW620細胞的協(xie)同(tong)效果，該嵌合蛋白(bai)質包含鈣結合蛋白(bai)D9k宿(su)主肽和不同(tong)BH3-only蛋白(bai)質的BH3結構域。

圖(tu)16是圖(tu)示，示例了(le)根據本公(gong)開用嵌合(he)(he)蛋白質處理Raw264.7細胞，即，巨噬細胞，該(gai)嵌合(he)(he)蛋白質包(bao)含鈣結(jie)合(he)(he)蛋白D9k宿主肽(tai)和(he)不同BH3-only蛋白質的BH3結(jie)構域。

具體實施方式

在更詳細地描述本公開之前，要(yao)理(li)解本公開不(bu)限(xian)于所描述的特定實(shi)施(shi)方式，并(bing)且(qie)正因為如此當然可以變化。也要(yao)理(li)解這里(li)所用的術語目的僅僅是描述特定的實(shi)施(shi)方式，并(bing)且(qie)不(bu)意欲是限(xian)制(zhi)性的，因為本公開的范圍將僅受所附權利要(yao)求的限(xian)制(zhi)。

如一旦(dan)閱讀該公開將對本領域技(ji)術人員而(er)言(yan)顯(xian)而(er)易(yi)見(jian)，這里所描述和示例(li)的(de)(de)單獨實施方(fang)式(shi)中(zhong)每個都有可(ke)以容易(yi)地從其它(ta)幾個實施方(fang)式(shi)中(zhong)任(ren)(ren)何實施方(fang)式(shi)中(zhong)的(de)(de)特征分離或者(zhe)與其組(zu)合的(de)(de)分立的(de)(de)構成和特征，而(er)不背離本公開的(de)(de)范圍(wei)或精神。按照(zhao)所述事件(jian)的(de)(de)順(shun)序或者(zhe)按照(zhao)邏輯地可(ke)能(neng)的(de)(de)任(ren)(ren)何其它(ta)順(shun)序，可(ke)以實施任(ren)(ren)何所述的(de)(de)方(fang)法。

除非(fei)另外說明(ming)，本(ben)公開的實施方(fang)式將利(li)用藥(yao)物學(xue)、有(you)機化學(xue)、生(sheng)物化學(xue)、分子生(sheng)物學(xue)、藥(yao)理(li)學(xue)等等的技術(shu)(shu)(shu)，這些(xie)技術(shu)(shu)(shu)在(zai)(zai)本(ben)領域技術(shu)(shu)(shu)內。在(zai)(zai)文獻(xian)中(zhong)充分地解(jie)釋了(le)這些(xie)技術(shu)(shu)(shu)。

可以(yi)對(dui)本公開的(de)(de)肽(tai)(tai)(tai)(tai)的(de)(de)結構進(jin)行(xing)修(xiu)改和改變，并(bing)且仍舊(jiu)獲得與(yu)肽(tai)(tai)(tai)(tai)具有(you)相(xiang)似特征的(de)(de)分子(例如，保守性(xing)氨(an)基酸(suan)取(qu)(qu)代)。例如，序(xu)列(lie)(lie)中(zhong)一些氨(an)基酸(suan)可以(yi)被取(qu)(qu)代為(wei)其它(ta)氨(an)基酸(suan)，而不會有(you)明(ming)顯的(de)(de)活(huo)性(xing)損失。因(yin)為(wei)肽(tai)(tai)(tai)(tai)的(de)(de)相(xiang)互作用能(neng)力和性(xing)質限定了肽(tai)(tai)(tai)(tai)的(de)(de)生物學功能(neng)活(huo)性(xing)，所以(yi)可以(yi)在肽(tai)(tai)(tai)(tai)序(xu)列(lie)(lie)中(zhong)進(jin)行(xing)一些氨(an)基酸(suan)序(xu)列(lie)(lie)取(qu)(qu)代，并(bing)且仍然獲得具有(you)相(xiang)似特性(xing)的(de)(de)肽(tai)(tai)(tai)(tai)。

在進行這(zhe)種(zhong)改變(bian)中，可以(yi)考慮氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)的親(qin)(qin)(qin)水(shui)性(xing)(xing)(xing)(xing)指數(shu)。本領域通常理解(jie)在給予相(xiang)互作用生物功能中親(qin)(qin)(qin)水(shui)性(xing)(xing)(xing)(xing)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)指數(shu)對(dui)肽(tai)的重要(yao)性(xing)(xing)(xing)(xing)。已知一些(xie)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)可以(yi)被取代為具有(you)相(xiang)似(si)親(qin)(qin)(qin)水(shui)性(xing)(xing)(xing)(xing)指數(shu)或記分的其它(ta)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)，并且仍舊產(chan)生具有(you)相(xiang)似(si)生物學(xue)活(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)的肽(tai)。每(mei)種(zhong)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)基(ji)(ji)于(yu)它(ta)的疏(shu)水(shui)性(xing)(xing)(xing)(xing)和電荷特性(xing)(xing)(xing)(xing)，都(dou)已經被分配了親(qin)(qin)(qin)水(shui)性(xing)(xing)(xing)(xing)指數(shu)。這(zhe)些(xie)指數(shu)是：異亮(liang)(liang)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(+4.5)、纈氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(+4.2)、亮(liang)(liang)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(+3.8)、苯丙(bing)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(+2.8)、半胱氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(+2.5)、甲硫氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(+1.9)、丙(bing)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(+1.8)、甘氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(-0.4)、蘇(su)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(-0.7)、絲氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(-0.8)、色氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(-0.9)、酪(lao)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(-1.3)、脯氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(-1.6)、組(zu)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(-3.2)、谷氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(-3.5)、谷氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酰胺(-3.5)、天(tian)冬氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(-3.5)、天(tian)冬酰胺(-3.5)、賴氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(-3.9)和精氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(-4.5)。

認為氨基(ji)酸(suan)(suan)的(de)相(xiang)對親(qin)水特(te)性(xing)決定所得(de)到肽(tai)的(de)二級結構，這接著限定肽(tai)與其它分子，諸如酶、底物、受體、抗(kang)體、抗(kang)原等(deng)等(deng)的(de)相(xiang)互作(zuo)用。本(ben)領域已知氨基(ji)酸(suan)(suan)可(ke)以被具(ju)有相(xiang)似親(qin)水性(xing)指數的(de)另一(yi)種氨基(ji)酸(suan)(suan)所取代(dai)，并且仍舊獲得(de)功(gong)能等(deng)同(tong)的(de)肽(tai)。在(zai)(zai)這種變(bian)化(hua)中(zhong)，優選其親(qin)水指數在(zai)(zai)±2內的(de)氨基(ji)酸(suan)(suan)取代(dai)，特(te)別地(di)優選在(zai)(zai)±1內的(de)氨基(ji)酸(suan)(suan)取代(dai)，以及甚(shen)至更(geng)特(te)別地(di)優選在(zai)(zai)±0.5內的(de)氨基(ji)酸(suan)(suan)取代(dai).

基(ji)(ji)(ji)(ji)于親水(shui)性(xing)(xing)也(ye)可(ke)(ke)以進行相似氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)的(de)(de)取(qu)(qu)代(dai)，特別(bie)地(di)，其中(zhong)由此產生的(de)(de)生物(wu)學功能等同的(de)(de)肽意欲用在免疫學實施(shi)方式中(zhong)。下列(lie)親水(shui)性(xing)(xing)數值已經被(bei)分配給氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)殘(can)基(ji)(ji)(ji)(ji)：精氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(+3.0)、賴氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(+3.0)、天冬氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(+3.0±1)、谷(gu)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(+3.0±1)、絲氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(+0.3)、天冬酰胺(+0.2)、谷(gu)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)酰胺(+0.2)、甘氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(0)、脯氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-0.5±1)、蘇氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-0.4)、丙氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-0.5)、組氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-0.5)、半胱氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-1.0)、甲(jia)硫氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-1.3)、纈氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-1.5)、亮氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-1.8)、異亮氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-1.8)、酪氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-2.3)、苯丙氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-2.5)和色(se)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(-3.4)。理解氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)可(ke)(ke)以被(bei)取(qu)(qu)代(dai)為具有(you)相似親水(shui)性(xing)(xing)數值的(de)(de)另(ling)一種(zhong)(zhong)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)，并(bing)且(qie)(qie)仍舊獲得(de)生物(wu)學等同的(de)(de)，并(bing)且(qie)(qie)特別(bie)地(di)免疫等同的(de)(de)肽。在這種(zhong)(zhong)變化(hua)中(zhong)，優選其親水(shui)性(xing)(xing)數值在±2內(nei)的(de)(de)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)取(qu)(qu)代(dai)，特別(bie)地(di)優選在±1內(nei)的(de)(de)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)取(qu)(qu)代(dai)，并(bing)且(qie)(qie)甚至(zhi)更特別(bie)地(di)優選±0.5內(nei)的(de)(de)氨(an)(an)(an)(an)(an)(an)基(ji)(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)(suan)取(qu)(qu)代(dai).

如上所概述的，氨(an)基(ji)酸取(qu)(qu)代(dai)通常基(ji)于氨(an)基(ji)酸側鏈取(qu)(qu)代(dai)基(ji)的相對相似性(xing)，例如，它們的疏水性(xing)、親水性(xing)、電荷、大小等等。本領(ling)域(yu)技術人員(yuan)公知考慮各種前述特征的示例性(xing)取(qu)(qu)代(dai)，并且該示例性(xing)取(qu)(qu)代(dai)包括(kuo)(原始殘基(ji)：示例性(xing)取(qu)(qu)代(dai))：(Ala:Gly,Ser)、(Arg:Lys)、(Asn:Gln,His)、(Asp:Glu,Cys,Ser)、(Gln:Asn)、(Glu:Asp)、(Gly:Ala)、(His:Asn,Gln)、(Ile:Leu,Val)、(Leu:Ile,Val)、(Lys:Arg)、(Met:Leu,Tyr)、(Ser:Thr)、(Thr:Ser)、(Trp:Tyr)、(Thr:Trp,Phe)和(Val:Ile,Leu)。

這里(li)互(hu)換(huan)地(di)使(shi)用(yong)術語“受(shou)試者”、“個體”、“患(huan)者”和“宿主”，并(bing)且指(zhi)任何脊(ji)椎動(dong)物、特別地(di)任何哺乳動(dong)物，并(bing)且最特別地(di)包括人類受(shou)試者、農場(chang)動(dong)物和哺乳動(dong)物的(de)寵物。受(shou)試者可以(yi)是(shi)，但是(shi)不必一定是(shi)在(zai)健康護理(li)專業人員，諸如醫生(sheng)或(huo)獸醫護理(li)下，并(bing)且可以(yi)需要本公開的(de)組合物的(de)治療性處(chu)理(li)。

如這(zhe)里(li)所用的(de)術(shu)語“穩(wen)定(ding)(ding)性”指(zhi)一旦儲存和(he)(he)暴露于將(jiang)要失活(huo)條件，包括但(dan)不限(xian)于氧化、熱變性、肽(tai)切割(ge)等等，肽(tai)基(ji)本上保(bao)留(liu)其物理和(he)(he)化學穩(wen)定(ding)(ding)性和(he)(he)完整(zheng)性，并(bing)且與肽(tai)還沒有受(shou)到這(zhe)種條件時(shi)相比(bi)較，這(zhe)些條件將(jiang)明(ming)顯地(di)減小(xiao)或(huo)排(pai)除(chu)肽(tai)的(de)生物學活(huo)性或(huo)結構(gou)完整(zheng)性。

如這里(li)所用(yong)的(de)術語“載(zai)體”意指用(yong)作(zuo)載(zai)體的(de)DNA分子(zi)，其能夠穩定地(di)攜帶外源基因到(dao)宿主細胞(bao)(bao)中(zhong)。對于(yu)(yu)有(you)用(yong)的(de)應用(yong)，載(zai)體應該是可復制的(de)，具有(you)用(yong)于(yu)(yu)將其本身(shen)引(yin)入到(dao)宿主細胞(bao)(bao)中(zhong)的(de)系統，并且具有(you)可篩選標記。

本公開通常地(di)提供一(yi)(yi)種蛋(dan)白(bai)質，特(te)別地(di)在(zai)體內環境中的蛋(dan)白(bai)質，當給藥(yao)為治療藥(yao)劑時具有延(yan)長的半衰期和(he)延(yan)長的有效(xiao)性。每個蛋(dan)白(bai)質包括連接另一(yi)(yi)個更穩定(ding)第(di)(di)二肽(tai)的第(di)(di)一(yi)(yi)肽(tai)，因(yin)此(ci)形成融(rong)合肽(tai)，該(gai)融(rong)合肽(tai)的第(di)(di)二肽(tai)的穩定(ding)性給予了第(di)(di)一(yi)(yi)肽(tai)。例如，第(di)(di)一(yi)(yi)肽(tai)可以取代第(di)(di)二肽(tai)的結構(gou)域，諸(zhu)如α-螺旋結構(gou)域，而(er)還保持其生(sheng)物學(xue)活性。

圖1示例了嵌合(he)(he)蛋(dan)白質(zhi)(zhi)，其具有連接第(di)(di)二(er)肽的(de)第(di)(di)一/宿主肽，因(yin)此形(xing)成融(rong)合(he)(he)蛋(dan)白質(zhi)(zhi)，該融(rong)合(he)(he)蛋(dan)白質(zhi)(zhi)的(de)第(di)(di)二(er)肽的(de)穩定(ding)性給予了第(di)(di)一肽。蛋(dan)白質(zhi)(zhi)可以是誘導(dao)細胞程序死亡的(de)藥(yao)劑(ji)，癌(ai)癥治療藥(yao)劑(ji)和/或用于抑制癌(ai)癥轉移的(de)藥(yao)劑(ji)。

第一/宿(su)主肽(tai)可以是鈣(gai)結合蛋(dan)(dan)白D9k(“D”)、鈣(gai)調(diao)蛋(dan)(dan)白(“Ca”)的(de)(de)N-末端或(huo)C-末端半結構(gou)域、小清蛋(dan)(dan)白(“Pa”)，它們的(de)(de)氨基酸序列變(bian)體或(huo)者(zhe)是它們的(de)(de)修飾(shi)變(bian)體。而(er)且(qie)，宿(su)主肽(tai)可以是人類來源。第二肽(tai)是不同BH3-only蛋(dan)(dan)白質的(de)(de)BH3結構(gou)域肽(tai)，諸(zhu)如，例(li)如，Bim(DMRPEIWIAQELRRIGDEFNAYYAR)、Bid(EDIIRNIARHLAQVGDSMDRSIPP)、Bad(NLWAAQRYGRELRRMSDEFVDSFKK)、Bik(CMEGSDALALRLACIADQFHRLHT),Bmf(LQHRAEVQIARKLQCIADQFHRLHT),Hrk(LRSSAAQLTAARLKALGDELHQRTM)、Puma(EEQWAREIGAQLRRMADDLNAQYER)和Noxia(PAELEVECATQLRRFGDKLNFRQKLL)。所得到的(de)(de)接(jie)枝或(huo)嵌合蛋(dan)(dan)白質保(bao)留了沒有與其連接(jie)的(de)(de)BH3結構(gou)域的(de)(de)原(yuan)始蛋(dan)(dan)白質的(de)(de)生物(wu)物(wu)理/生物(wu)化學特性(xing)，并且(qie)可以誘導癌細胞或(huo)其它細胞的(de)(de)細胞程序性(xing)死(si)亡。而(er)且(qie)，蛋(dan)(dan)白質可以包含這里所明確公開的(de)(de)肽(tai)的(de)(de)保(bao)守性(xing)變(bian)體。

在一些情況下，嵌合(he)蛋白質(zhi)的(de)第(di)二(er)肽(tai)可以具有(you)BH3結構(gou)域的(de)氨基酸序(xu)列(lie)，并(bing)且第(di)一/宿(su)主肽(tai)可以具有(you)是(shi)人類蛋白質(zhi)一部分的(de)氨基酸序(xu)列(lie)(SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.10)，說(shuo)明如下：

D-Bim(Sequence Id No.1)

D-Bid(Sequence Id No.2)

Ca-Bim(Sequence Id No.3)

Ca-Bid(Sequence Id No.4)

D-Bim1(Sequence Id No.5)

D-Bad(Sequence Id No.6)

D-Puma(Sequence Id No.7)

D-Nox(Sequence Id No.8)

PaN-Bid(Sequence Id No.9)

PaC-Bid(Sequence Id No.10)

鑒(jian)定(ding)宿主蛋白質中(zhong)α-螺旋區段(duan)，其具有與(yu)選定(ding)的(de)(de)BH3結構(gou)域的(de)(de)長度相似的(de)(de)長度，即殘基數，并且置換(huan)位點位于(yu)鄰近選定(ding)的(de)(de)α-螺旋區段(duan)的(de)(de)環(huan)(huan)中(zhong)。BH3結構(gou)域序列置換(huan)一部分(fen)選定(ding)的(de)(de)環(huan)(huan)，即，環(huan)(huan)的(de)(de)幾個氨基酸被BH3結構(gou)域的(de)(de)末(mo)端序列置換(huan)。所得到的(de)(de)嵌合(he)蛋白質構(gou)造可以通(tong)過基于(yu)網絡的(de)(de)蛋白質結構(gou)建模(mo)/預測程(cheng)序被計算機模(mo)擬，以基于(yu)例如，BH3結構(gou)域的(de)(de)穩定(ding)性和表(biao)面暴露(lu)發現最好的(de)(de)分(fen)析(xi)。

基(ji)于(yu)遺傳工(gong)程(cheng)(cheng)和蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)工(gong)程(cheng)(cheng)技術，嵌(qian)合(he)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)或(huo)嵌(qian)合(he)納(na)米顆粒通(tong)過(guo)結(jie)(jie)合(he)BH3結(jie)(jie)構域變體和宿(su)(su)主(zhu)(zhu)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)，包括具(ju)有各種功能性的(de)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)。例(li)如，BH3結(jie)(jie)構域肽(tai)可(ke)以接枝(zhi)到穩定的(de)人類(lei)宿(su)(su)主(zhu)(zhu)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)，例(li)如鈣結(jie)(jie)合(he)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)D9K、鈣調(diao)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)半結(jie)(jie)構域或(huo)者人類(lei)小清蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)，基(ji)于(yu)接枝(zhi)BH3結(jie)(jie)構域肽(tai)到穩定的(de)宿(su)(su)主(zhu)(zhu)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)將穩定肽(tai)和整(zheng)個(ge)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)的(de)二級結(jie)(jie)構。在另一個(ge)實(shi)施例(li)中，鈣結(jie)(jie)合(he)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)D9K宿(su)(su)主(zhu)(zhu)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)或(huo)其部分包含BH3肽(tai)。通(tong)過(guo)置換C-末端螺旋，BH3肽(tai)接枝(zhi)到鈣結(jie)(jie)合(he)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)D9K宿(su)(su)主(zhu)(zhu)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)中。因(yin)此，根據本公開的(de)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)藥(yao)劑可(ke)以用(yong)于(yu)治療癌癥(zheng)和靶(ba)(ba)向到特定的(de)癌細(xi)胞(bao)(bao)。例(li)如，具(ju)有BH3肽(tai)的(de)嵌(qian)合(he)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)可(ke)以誘導靶(ba)(ba)細(xi)胞(bao)(bao)，例(li)如癌細(xi)胞(bao)(bao)的(de)細(xi)胞(bao)(bao)程(cheng)(cheng)序死(si)亡(wang)。

圖(tu)(tu)2示例了細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)中(zhong)不同(tong)嵌合蛋白(bai)質的(de)表(biao)達(da)效果。實(shi)驗的(de)所有的(de)BH3結構域在(zai)(zai)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)中(zhong)表(biao)達(da)時，在(zai)(zai)誘導細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)程(cheng)序死亡中(zhong)是有效的(de)。在(zai)(zai)標明(ming)(ming)的(de)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)中(zhong)表(biao)達(da)標明(ming)(ming)的(de)蛋白(bai)質。通過(guo)使(shi)用(yong)抗(kang)單獨宿主蛋白(bai)質的(de)抗(kang)體的(de)免(mian)疫印跡確認了表(biao)達(da)水平(ping)。通過(guo)所標明(ming)(ming)蛋白(bai)質的(de)外(wai)源表(biao)達(da)后(hou)48小時細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)計數，測量細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)生(sheng)存力(li)。載體(“Vec”)表(biao)達(da)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)用(yong)作參(can)考(100％細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)生(sheng)存力(li))。誤差直方(fang)圖(tu)(tu)表(biao)示5次重復(fu)實(shi)驗之間的(de)標準(zhun)偏差。

圖(tu)3示(shi)例了具有不同宿(su)主肽(tai)和Bid的(de)(de)(de)BH3結(jie)(jie)構域的(de)(de)(de)嵌合蛋(dan)白(bai)(bai)質對SW620細(xi)胞的(de)(de)(de)細(xi)胞程序(xu)死亡的(de)(de)(de)效果。如所示(shi)，在誘導細(xi)胞程序(xu)死亡中(zhong)，鈣結(jie)(jie)合蛋(dan)白(bai)(bai)D9k是最有效的(de)(de)(de)宿(su)主肽(tai)。用(yong)5μM標(biao)(biao)明的(de)(de)(de)蛋(dan)白(bai)(bai)質處(chu)理(li)SW620細(xi)胞。蛋(dan)白(bai)(bai)質通過(guo)二硫鍵經(jing)由5kDaPEG綴(zhui)合到葉酸。通過(guo)用(yong)標(biao)(biao)明的(de)(de)(de)蛋(dan)白(bai)(bai)質處(chu)理(li)后48小時細(xi)胞計數，測量細(xi)胞生存力。緩(huan)沖液處(chu)理(li)的(de)(de)(de)細(xi)胞用(yong)作(zuo)參考(kao)(100％細(xi)胞生存力)。誤差直(zhi)方圖(tu)表(biao)示(shi)5次重復實驗之(zhi)間的(de)(de)(de)標(biao)(biao)準偏差。

圖4示(shi)例了具有鈣(gai)結(jie)合蛋(dan)白D9k宿主(zhu)肽和不同BH3結(jie)構(gou)域(yu)的(de)嵌合蛋(dan)白質對SW620細(xi)胞(bao)的(de)細(xi)胞(bao)程(cheng)序死(si)亡的(de)效果。如所示(shi)，在(zai)誘導細(xi)胞(bao)程(cheng)序死(si)亡中(zhong)，包含(han)Noxia(“Nox”)的(de)BH3結(jie)構(gou)域(yu)的(de)嵌合蛋(dan)白質是最(zui)有效的(de)。用(yong)(yong)5μM標明的(de)蛋(dan)白質處(chu)理(li)SW620細(xi)胞(bao)。蛋(dan)白質通(tong)過二硫鍵(jian)經(jing)由(you)5kDa PEG綴(zhui)合到葉(xie)酸。通(tong)過用(yong)(yong)標明的(de)蛋(dan)白質處(chu)理(li)后(hou)48小時細(xi)胞(bao)計數，測量細(xi)胞(bao)生(sheng)(sheng)存(cun)力。緩沖液處(chu)理(li)的(de)細(xi)胞(bao)用(yong)(yong)作參(can)考(kao)(100％細(xi)胞(bao)生(sheng)(sheng)存(cun)力)。誤差(cha)(cha)直方圖表(biao)示(shi)5次重(zhong)復實驗之間的(de)標準偏差(cha)(cha)。

嵌合蛋(dan)白質(zhi)(zhi)可(ke)(ke)以包含靶向(xiang)(xiang)部分(fen)，諸如(ru)，例(li)如(ru)葉(xie)(xie)(xie)(xie)酸。在靶向(xiang)(xiang)嵌合蛋(dan)白質(zhi)(zhi)到(dao)具有(you)一個(ge)或(huo)(huo)多個(ge)葉(xie)(xie)(xie)(xie)酸受體的(de)(de)(de)(de)(de)細胞(bao)中(zhong)或(huo)(huo)表達過量葉(xie)(xie)(xie)(xie)酸受體的(de)(de)(de)(de)(de)細胞(bao)中(zhong)，葉(xie)(xie)(xie)(xie)酸的(de)(de)(de)(de)(de)用(yong)(yong)途是有(you)益的(de)(de)(de)(de)(de)。葉(xie)(xie)(xie)(xie)酸可(ke)(ke)以通(tong)過S-S鍵(jian)、二(er)硫橋(qiao)或(huo)(huo)另一種類型(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)共價鍵(jian)，經(jing)由例(li)如(ru)Cys殘基附著(zhu)到(dao)蛋(dan)白質(zhi)(zhi)。用(yong)(yong)二(er)硫鍵(jian)，總(zong)的(de)(de)(de)(de)(de)連(lian)接性是R-S-S-R。二(er)硫橋(qiao)的(de)(de)(de)(de)(de)使用(yong)(yong)改善了蛋(dan)白質(zhi)(zhi)向(xiang)(xiang)靶細胞(bao)的(de)(de)(de)(de)(de)遞送。本公開的(de)(de)(de)(de)(de)蛋(dan)白質(zhi)(zhi)可(ke)(ke)以顯示(shi)(shi)20倍(bei)增(zeng)強的(de)(de)(de)(de)(de)靶向(xiang)(xiang)能力(li)。圖5中(zhong)示(shi)(shi)例(li)了如(ru)這里所公開的(de)(de)(de)(de)(de)嵌合蛋(dan)白質(zhi)(zhi)與葉(xie)(xie)(xie)(xie)酸的(de)(de)(de)(de)(de)綴合。其(qi)它的(de)(de)(de)(de)(de)靶向(xiang)(xiang)部分(fen)，包括但不限于與細胞(bao)表面受體相互作用(yong)(yong)和(he)觸(chu)發(fa)胞(bao)吞作用(yong)(yong)的(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)子(例(li)如(ru)，胃泌素釋放肽和(he)其(qi)衍(yan)生(sheng)物、抑生(sheng)長素和(he)其(qi)衍(yan)生(sheng)物，諸如(ru)奧曲(qu)肽(Octreotide)、用(yong)(yong)于HER2的(de)(de)(de)(de)(de)Affibody、用(yong)(yong)于各(ge)種生(sheng)長因子受體的(de)(de)(de)(de)(de)適體、血管活性腸肽和(he)其(qi)它)。

圖(tu)6示例了癌癥中葉(xie)酸受(shou)(shou)體(ti)的(de)表(biao)達。晚期和難以(yi)治療的(de)癌癥超(chao)表(biao)達葉(xie)酸受(shou)(shou)體(ti)。而且，葉(xie)酸受(shou)(shou)體(ti)表(biao)達與差的(de)預后相關(guan)。

圖(tu)7示例了具有(you)鈣結(jie)合(he)(he)(he)蛋(dan)(dan)白(bai)D9k宿主蛋(dan)(dan)白(bai)質、Bid或(huo)Bim的(de)BH3結(jie)構(gou)域和綴(zhui)合(he)(he)(he)葉酸(suan)的(de)嵌(qian)合(he)(he)(he)蛋(dan)(dan)白(bai)質對(dui)SW620細(xi)(xi)胞(bao)的(de)效果。用(yong)5μM具有(you)D-Bid(空白(bai)直方圖(tu))或(huo)D-Bim(填充直方圖(tu))的(de)嵌(qian)合(he)(he)(he)蛋(dan)(dan)白(bai)質處(chu)理(li)SW620細(xi)(xi)胞(bao)。蛋(dan)(dan)白(bai)質通過二硫鍵(jian)(S-S)或(huo)馬來酰亞胺鍵(jian)(MAL)經由(you)5kDa PEG綴(zhui)合(he)(he)(he)到葉酸(suan)。沒(mei)有(you)葉酸(suan)表示用(yong)不含有(you)綴(zhui)合(he)(he)(he)葉酸(suan)的(de)蛋(dan)(dan)白(bai)質處(chu)理(li)的(de)細(xi)(xi)胞(bao)。通過用(yong)標明的(de)蛋(dan)(dan)白(bai)質處(chu)理(li)后48小時細(xi)(xi)胞(bao)計數，測量(liang)細(xi)(xi)胞(bao)生存力(li)(li)。緩沖液處(chu)理(li)的(de)細(xi)(xi)胞(bao)用(yong)作參考(kao)(100％細(xi)(xi)胞(bao)生存力(li)(li))。誤差直方圖(tu)表示5次重復實驗(yan)之間(jian)的(de)標準偏差。如圖(tu)7表明，二硫鍵(jian)合(he)(he)(he)的(de)綴(zhui)合(he)(he)(he)物產生了最低(di)的(de)細(xi)(xi)胞(bao)生存力(li)(li)，即，它對(dui)細(xi)(xi)胞(bao)程序死亡具有(you)最大影(ying)響。

圖8示例了用不同濃度的嵌合蛋白質D-Bid處理SW620細胞，該嵌合蛋白質具有二硫鍵合(S-S)的葉酸綴合物。使用Tunnel試劑盒，通過Tunnel染色處理后48小時測量細胞程序死亡。通過計數陽性染色對總細胞數(6次計數的平均值)，細胞程序死亡表示為細胞程序死亡百分比，以及標準化為緩沖液處理的細胞的細胞程序死亡百分比。在約2.2μM，通過處理下50％細胞程序死亡來估測EC₅₀。

圖(tu)9示例了具(ju)有鈣結合蛋(dan)白(bai)D9k宿主蛋(dan)白(bai)質、不同的BH3結構域和綴(zhui)(zhui)合葉酸(suan)的嵌合蛋(dan)白(bai)質對A549、SW620和KB細(xi)(xi)(xi)胞(bao)的效果。如所(suo)示，KB細(xi)(xi)(xi)胞(bao)具(ju)有高(gao)葉酸(suan)受體(ti)水(shui)平，SW620細(xi)(xi)(xi)胞(bao)具(ju)有中等葉酸(suan)受體(ti)水(shui)平，并且A549細(xi)(xi)(xi)胞(bao)具(ju)有非常低的葉酸(suan)受體(ti)水(shui)平。而且，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)程(cheng)序(xu)死(si)亡誘導具(ju)有強(qiang)的葉酸(suan)受體(ti)依賴。用(yong)5μM蛋(dan)白(bai)質處理A549、SW620和KB細(xi)(xi)(xi)胞(bao)。蛋(dan)白(bai)質通(tong)過二(er)硫鍵，經由5Kda PEG綴(zhui)(zhui)合到葉酸(suan)。通(tong)過用(yong)標(biao)明的蛋(dan)白(bai)質處理后48小時(shi)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)計數，測量細(xi)(xi)(xi)胞(bao)生存(cun)力(li)。緩沖(chong)液(ye)處理的細(xi)(xi)(xi)胞(bao)用(yong)作參考(100％細(xi)(xi)(xi)胞(bao)生存(cun)力(li))。誤(wu)差直方圖(tu)表示5次重復實驗之間的標(biao)準偏(pian)差。

圖10A、10B和10C示例了綴合葉酸的嵌合蛋白質對SW620細胞的效果。在裸鼠中接種SW620細胞(1×10⁷)。在接種后18天，測量腫瘤生長在約290mm³。然后，用每日劑(ji)量(liang)10mg/kg標明的蛋白質經由腹腔注(zhu)射，處(chu)理小(xiao)鼠(shu)。11天后停止這(zhe)些每日處(chu)理。腫瘤接種后32天殺(sha)死所有(you)小(xiao)鼠(shu)。切(qie)片腫瘤和稱(cheng)重(zhong)。測量(liang)腫瘤體積和用下列公式(shi)計算：

腫瘤體積＝II/6×(寬度)²×長度

D-Bid是帶(dai)(dai)有葉酸綴合物的蛋白(bai)質(zhi)，D-Bid/SS是帶(dai)(dai)有二硫鍵(jian)合葉酸綴合物的蛋白(bai)質(zhi)，并且D-Bid/MAL是帶(dai)(dai)有馬來酰(xian)亞胺鍵(jian)合葉酸綴合物的蛋白(bai)質(zhi)。誤差直方圖表示5次重復實(shi)驗(yan)之間的標準偏差。

圖11A示(shi)例了各種(zhong)多臂PEG化試劑。圖11B(腫瘤生長曲(qu)線)和圖12(終(zhong)端腫瘤重量(liang))示(shi)例了通過(guo)多臂PEG化試劑綴(zhui)合不同數量(liang)的(de)嵌合蛋(dan)白(bai)質D-Nox的(de)葉酸對SW620細(xi)胞(bao)的(de)效(xiao)果。腫瘤接種(zhong)后5天開始異(yi)種(zhong)移植(zhi)SW620細(xi)胞(bao)(6只小鼠(shu)(shu)/組(zu))的(de)處理(li)。處理(li)包括(蛋(dan)白(bai)質D-Nox測量(liang)的(de))10mg/kg腹腔給(gei)藥，每隔一天給(gei)藥一次劑量(liang)，總共10次劑量(liang)。D-Nox 1臂、2臂和3臂表示(shi)一個葉酸分別地綴(zhui)合1、2和3個D-Nox蛋(dan)白(bai)質。誤差直方圖表示(shi)6只小鼠(shu)(shu)之(zhi)間的(de)標準偏差。

圖13示(shi)例了通(tong)過多臂(bei)(bei)PEG化試劑綴合不同數量(liang)的(de)(de)嵌(qian)合蛋(dan)(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)D-Nox的(de)(de)葉酸對SW620細(xi)胞的(de)(de)效果。用(yong)5μM(空白(bai)直(zhi)方圖)或(huo)10μM(填充直(zhi)方圖)(蛋(dan)(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)D-Nox測(ce)量(liang)的(de)(de))嵌(qian)合蛋(dan)(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)D-Nox 1臂(bei)(bei)、2臂(bei)(bei)、3臂(bei)(bei)或(huo)緩沖液處(chu)(chu)理SW620細(xi)胞。1臂(bei)(bei)、2臂(bei)(bei)和3臂(bei)(bei)表(biao)示(shi)一(yi)個葉酸通(tong)過S-S鍵分別地綴合1、2或(huo)3個D-Nox蛋(dan)(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)。通(tong)過染(ran)色測(ce)量(liang)細(xi)胞生存力，并(bing)且表(biao)示(shi)為處(chu)(chu)理細(xi)胞的(de)(de)百分數。

可(ke)以(yi)(yi)通過(guo)向嵌(qian)合蛋(dan)(dan)白質綴合修(xiu)飾基(ji)(ji)團(tuan)(tuan)諸如，例如聚乙二醇(PEG)修(xiu)飾蛋(dan)(dan)白質以(yi)(yi)延(yan)長(chang)，甚至進一步延(yan)長(chang)它們的(de)(de)半衰(shuai)期。修(xiu)飾基(ji)(ji)團(tuan)(tuan)的(de)(de)綴合可(ke)以(yi)(yi)包(bao)括識(shi)別(bie)可(ke)以(yi)(yi)被(bei)Cys取代的(de)(de)一個(ge)殘基(ji)(ji)或多(duo)個(ge)殘基(ji)(ji)，并且(qie)以(yi)(yi)提供用于修(xiu)飾基(ji)(ji)團(tuan)(tuan)的(de)(de)附(fu)著位點(dian)。

而且，標記可以附著到(dao)嵌合蛋白(bai)質的第二肽。

當向受(shou)(shou)(shou)試者動物(wu)(wu)或(huo)人(ren)類給(gei)藥(yao)嵌合蛋白(bai)質時，受(shou)(shou)(shou)試者動物(wu)(wu)或(huo)人(ren)類可(ke)以接(jie)受(shou)(shou)(shou)綴合有(you)(you)藥(yao)物(wu)(wu)學上(shang)可(ke)接(jie)受(shou)(shou)(shou)的載(zai)體的有(you)(you)效(xiao)劑量(liang)的嵌合蛋白(bai)質，因此產生(sheng)藥(yao)物(wu)(wu)學上(shang)可(ke)接(jie)受(shou)(shou)(shou)的組合物(wu)(wu)。藥(yao)物(wu)(wu)學上(shang)可(ke)接(jie)受(shou)(shou)(shou)的組合物(wu)(wu)可(ke)以包含成像探(tan)針。

嵌合蛋白質可以(yi)作為可誘(you)導的(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)程(cheng)序死(si)亡系統(tong)起(qi)作用，以(yi)提供用在哺(bu)(bu)乳動物(wu)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)和有機體(ti)中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)普(pu)遍(bian)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)消融系統(tong)，這允(yun)(yun)許研(yan)究哺(bu)(bu)乳動物(wu)身體(ti)中(zhong)(zhong)(zhong)選(xuan)定細(xi)(xi)(xi)胞(bao)或(huo)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)類(lei)型(xing)(xing)的(de)(de)(de)生物(wu)學功能(neng)，因(yin)此允(yun)(yun)許產生廣泛范圍的(de)(de)(de)人(ren)類(lei)疾病的(de)(de)(de)動物(wu)模(mo)型(xing)(xing)。這種(zhong)可誘(you)導的(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)程(cheng)序死(si)亡系統(tong)對要求(qiu)在哺(bu)(bu)乳動物(wu)身體(ti)，包括(kuo)大腦的(de)(de)(de)任(ren)何器官和任(ren)何細(xi)(xi)(xi)胞(bao)類(lei)型(xing)(xing)中(zhong)(zhong)(zhong)它的(de)(de)(de)普(pu)遍(bian)激活的(de)(de)(de)所有應(ying)用都(dou)是有益的(de)(de)(de)。要注意到(dao)通過可誘(you)導的(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)程(cheng)序死(si)亡，非人(ren)類(lei)的(de)(de)(de)轉基因(yin)動物(wu)可以(yi)用于研(yan)究例(li)如小鼠中(zhong)(zhong)(zhong)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)的(de)(de)(de)功能(neng)。為此目(mu)的(de)(de)(de)，重組體(ti)或(huo)嵌合蛋白質的(de)(de)(de)編碼區(qu)可以(yi)聯合適合的(de)(de)(de)序列，例(li)如細(xi)(xi)(xi)胞(bao)類(lei)型(xing)(xing)特異的(de)(de)(de)啟動子區(qu)，并(bing)且通過前核注射(she)或(huo)本領域已知(zhi)的(de)(de)(de)其它方(fang)法，蛋白質轉基因(yin)可以(yi)插入到(dao)小鼠種(zhong)系中(zhong)(zhong)(zhong)。

根據本公開的(de)(de)蛋(dan)白質可以(yi)與另一(yi)(yi)種(zhong)(zhong)形式(shi)的(de)(de)療(liao)(liao)(liao)法共給(gei)(gei)藥(yao)。當(dang)提到癌(ai)癥(zheng)的(de)(de)治(zhi)(zhi)療(liao)(liao)(liao)時，如(ru)這里所(suo)用(yong)的(de)(de)術語(yu)“共治(zhi)(zhi)療(liao)(liao)(liao)”和其衍生詞意指同時給(gei)(gei)藥(yao)或任何(he)方式(shi)分離(li)順(shun)序的(de)(de)給(gei)(gei)藥(yao)除了這里所(suo)述的(de)(de)蛋(dan)白質藥(yao)劑(ji)以(yi)外的(de)(de)藥(yao)劑(ji)，以(yi)及已(yi)知(zhi)用(yong)在癌(ai)癥(zheng)治(zhi)(zhi)療(liao)(liao)(liao)中的(de)(de)至少一(yi)(yi)種(zhong)(zhong)化(hua)(hua)(hua)療(liao)(liao)(liao)藥(yao)劑(ji)和進一(yi)(yi)步的(de)(de)活性組(zu)分，包括化(hua)(hua)(hua)療(liao)(liao)(liao)和放射治(zhi)(zhi)療(liao)(liao)(liao)。如(ru)這里所(suo)用(yong)的(de)(de)術語(yu)“進一(yi)(yi)步活性組(zu)分”包括已(yi)知(zhi)的(de)(de)或者(zhe)當(dang)給(gei)(gei)藥(yao)需要癌(ai)癥(zheng)治(zhi)(zhi)療(liao)(liao)(liao)的(de)(de)患者(zhe)時證(zheng)明有(you)(you)利(li)特性的(de)(de)任何(he)化(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)或治(zhi)(zhi)療(liao)(liao)(liao)藥(yao)劑(ji)。如(ru)果給(gei)(gei)藥(yao)不是同時的(de)(de)，以(yi)彼此緊密靠近(jin)的(de)(de)時間給(gei)(gei)藥(yao)化(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)。而(er)且，如(ru)果以(yi)相(xiang)同劑(ji)量形式(shi)給(gei)(gei)藥(yao)化(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)，這沒有(you)(you)關系(xi)，例如(ru)，一(yi)(yi)種(zhong)(zhong)化(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)可以(yi)局部地給(gei)(gei)藥(yao)，并且可以(yi)口服地給(gei)(gei)藥(yao)另一(yi)(yi)種(zhong)(zhong)化(hua)(hua)(hua)合(he)(he)物(wu)。

圖(tu)14示例了放射(she)(she)(she)療法與嵌(qian)合(he)(he)蛋白(bai)質對SW620細胞(bao)(bao)的(de)協同效果，該嵌(qian)合(he)(he)蛋白(bai)質包含鈣結合(he)(he)蛋白(bai)D9k宿主肽和不同的(de)BH3結構域。用(yong)(yong)5μM標明的(de)蛋白(bai)質處(chu)(chu)理(li)SW620細胞(bao)(bao)1小時。然后(hou)，用(yong)(yong)10格雷(Gray)放射(she)(she)(she)輻射(she)(she)(she)細胞(bao)(bao)(填充直方圖(tu))，或者沒有放射(she)(she)(she)(空白(bai)直方圖(tu))。通過(guo)放射(she)(she)(she)治療開始后(hou)24小時細胞(bao)(bao)計數測量(liang)細胞(bao)(bao)生存力。緩沖液處(chu)(chu)理(li)的(de)沒有放射(she)(she)(she)的(de)細胞(bao)(bao)用(yong)(yong)作參考(kao)(100％生存力)。誤差直方圖(tu)表示5次重復實(shi)驗(yan)之間的(de)標準(zhun)偏差。

圖(tu)(tu)15示例了奧(ao)沙利鉑(bo)與(yu)嵌合蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質對SW620細(xi)胞的(de)(de)協同效果(guo)，該嵌合蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質包含鈣結(jie)合蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)D9k宿主(zhu)肽和不(bu)同的(de)(de)BH3結(jie)構(gou)域。用帶(填充直方圖(tu)(tu))或不(bu)帶(空白(bai)(bai)(bai)直方圖(tu)(tu))20μM奧(ao)沙利鉑(bo)的(de)(de)5μM標明的(de)(de)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質處理SW620細(xi)胞。通過用標明的(de)(de)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質處理后48小(xiao)時細(xi)胞計數測量細(xi)胞生(sheng)存(cun)力(li)。緩沖液處理的(de)(de)沒有奧(ao)沙利鉑(bo)的(de)(de)細(xi)胞用作參(can)考(100％生(sheng)存(cun)力(li))。誤差直方圖(tu)(tu)表示5次重復(fu)實驗之間(jian)的(de)(de)標準偏差。

治療蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)可以用(yong)(yong)(yong)于(yu)治療炎性疾病，諸(zhu)如類風濕(shi)性關(guan)節炎，它是由(you)巨噬(shi)細(xi)(xi)(xi)胞細(xi)(xi)(xi)胞程序死(si)(si)亡誘(you)導作用(yong)(yong)(yong)而介(jie)導的。圖16示例了用(yong)(yong)(yong)嵌(qian)合(he)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)處(chu)理(li)Raw264.7細(xi)(xi)(xi)胞，即(ji)，巨噬(shi)細(xi)(xi)(xi)胞，該嵌(qian)合(he)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)包(bao)含鈣結(jie)合(he)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)D9k宿主肽和(he)不同的BH3結(jie)構域。如所示的，嵌(qian)合(he)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)有(you)效(xiao)地誘(you)導了激(ji)活巨噬(shi)細(xi)(xi)(xi)胞的細(xi)(xi)(xi)胞程序死(si)(si)亡。用(yong)(yong)(yong)5μM標(biao)明的蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)處(chu)理(li)Raw264.7細(xi)(xi)(xi)胞，該蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)經由(you)S-S鍵綴合(he)葉酸。通過(guo)用(yong)(yong)(yong)標(biao)明的蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)處(chu)理(li)后48小時細(xi)(xi)(xi)胞計數測量(liang)細(xi)(xi)(xi)胞生存力(li)(li)。緩沖(chong)液處(chu)理(li)的細(xi)(xi)(xi)胞用(yong)(yong)(yong)作參考(100％生存力(li)(li))。誤差(cha)直方圖表示5次重復實(shi)驗之間的標(biao)準偏差(cha)。

可(ke)(ke)以(yi)用(yong)不(bu)同的(de)劑(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)和劑(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)體系(xi)完成處(chu)(chu)理(li)，只要劑(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)組合(he)(he)在處(chu)(chu)理(li)大量(liang)(liang)治療(liao)參數中任何一個(ge)或(huo)多個(ge)是有(you)效(xiao)(xiao)的(de)。這些處(chu)(chu)理(li)體系(xi)可(ke)(ke)以(yi)可(ke)(ke)替(ti)代地或(huo)者(zhe)也可(ke)(ke)以(yi)基于最(zui)大化治療(liao)效(xiao)(xiao)果(guo)的(de)劑(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)和劑(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)方案(an)，諸如(ru)這里(li)所(suo)述的(de)那些。當(dang)單獨(du)地給(gei)藥(yao)(yao)(yao)時，蛋白(bai)質的(de)劑(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)不(bu)可(ke)(ke)以(yi)是治療(liao)有(you)效(xiao)(xiao)的(de)，但是當(dang)與另(ling)一種藥(yao)(yao)(yao)劑(ji)(ji)(ji)聯(lian)合(he)(he)給(gei)藥(yao)(yao)(yao)時，可(ke)(ke)以(yi)是治療(liao)有(you)效(xiao)(xiao)的(de)。因此，蛋白(bai)質和治療(liao)放射性同位素聯(lian)合(he)(he)的(de)治療(liao)有(you)效(xiao)(xiao)劑(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)可(ke)(ke)以(yi)包含單獨(du)的(de)活性藥(yao)(yao)(yao)劑(ji)(ji)(ji)的(de)劑(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)，當(dang)單獨(du)給(gei)藥(yao)(yao)(yao)時，該劑(ji)(ji)(ji)量(liang)(liang)不(bu)是治療(liao)有(you)效(xiao)(xiao)的(de)或(huo)者(zhe)與彼(bi)此聯(lian)合(he)(he)給(gei)藥(yao)(yao)(yao)時相比不(bu)太(tai)治療(liao)有(you)效(xiao)(xiao)。

嵌合(he)蛋白(bai)(bai)質的靶(ba)(ba)細胞(bao)可(ke)(ke)以是分(fen)離的蛋白(bai)(bai)質。而且，靶(ba)(ba)細胞(bao)可(ke)(ke)以在受試(shi)者動(dong)(dong)物(wu)或人(ren)類的組(zu)織中(zhong)。可(ke)(ke)以向(xiang)受試(shi)者動(dong)(dong)物(wu)或人(ren)類給藥作(zuo)為藥物(wu)學(xue)上(shang)可(ke)(ke)接受組(zu)合(he)物(wu)的成(cheng)像探針。嵌合(he)蛋白(bai)(bai)質與靶(ba)(ba)細胞(bao)的結合(he)位點可(ke)(ke)以是通過附著(zhu)的靶(ba)(ba)向(xiang)部分(fen)，細胞(bao)表(biao)面上(shang)的受體。

本(ben)公開的另一方(fang)面涉及用(yong)于誘導細(xi)胞(bao)(bao)的細(xi)胞(bao)(bao)程序(xu)死亡的方(fang)法，該細(xi)胞(bao)(bao)表達根據本(ben)公開的嵌合蛋白質(zhi)。該方(fang)法包括編碼能(neng)夠誘導細(xi)胞(bao)(bao)的細(xi)胞(bao)(bao)程序(xu)死亡的嵌合蛋白質(zhi)的DNA的轉(zhuan)染(ran)。

這里所公(gong)(gong)開的(de)(de)特定(ding)的(de)(de)實(shi)施例將被解釋為(wei)僅僅示(shi)例性(xing)的(de)(de)，并且不(bu)是以(yi)無論(lun)任何方式限制本(ben)(ben)公(gong)(gong)開的(de)(de)其余部分(fen)。沒有進一(yi)步的(de)(de)詳(xiang)細(xi)說明(ming)(ming)，認為(wei)本(ben)(ben)領域技術人員可以(yi)基于(yu)這里的(de)(de)說明(ming)(ming)，最大(da)程度地利用本(ben)(ben)公(gong)(gong)開。

提出(chu)所公開(kai)(kai)的實施例是(shi)(shi)為(wei)(wei)了(le)給(gei)本領域技術人員提供如(ru)何進行本方法和使用(yong)這(zhe)里(li)所公開(kai)(kai)和要求保護的組合物(wu)(wu)和化合物(wu)(wu)的完整的公開(kai)(kai)和描述。已經進行了(le)努(nu)力以(yi)確(que)保關于數(shu)(shu)字，例如(ru)量、溫(wen)度等的精確(que)性(xing)，但是(shi)(shi)應該考慮一些(xie)誤(wu)差和偏(pian)差。除非另(ling)外說(shuo)明，份(fen)數(shu)(shu)是(shi)(shi)重量份(fen)數(shu)(shu)，溫(wen)度是(shi)(shi)℃，并(bing)且壓力是(shi)(shi)大氣(qi)壓或(huo)其附(fu)近。標準(zhun)溫(wen)度和壓力定位為(wei)(wei)20℃和1個(ge)大氣(qi)壓。

應(ying)(ying)該(gai)(gai)注意(yi)到這里可以通(tong)過(guo)范(fan)(fan)圍(wei)(wei)(wei)形(xing)(xing)式(shi)表示比率、濃(nong)度、量(liang)和(he)其它數(shu)據。要(yao)理(li)解使用這種(zhong)范(fan)(fan)圍(wei)(wei)(wei)形(xing)(xing)式(shi)為(wei)了(le)(le)(le)方便和(he)簡(jian)短(duan)，因此應(ying)(ying)該(gai)(gai)通(tong)過(guo)靈活方式(shi)解釋以包(bao)括(kuo)不僅范(fan)(fan)圍(wei)(wei)(wei)限值(zhi)所(suo)明(ming)確(que)地敘(xu)(xu)述的(de)數(shu)值(zhi)，還(huan)包(bao)括(kuo)范(fan)(fan)圍(wei)(wei)(wei)內(nei)所(suo)包(bao)括(kuo)的(de)所(suo)有單(dan)獨(du)的(de)數(shu)值(zhi)或(huo)子范(fan)(fan)圍(wei)(wei)(wei)，就好像明(ming)確(que)地敘(xu)(xu)述過(guo)了(le)(le)(le)每個數(shu)值(zhi)和(he)子范(fan)(fan)圍(wei)(wei)(wei)。為(wei)了(le)(le)(le)示例(li)，濃(nong)度范(fan)(fan)圍(wei)(wei)(wei)“約(yue)0.1％到約(yue)5％”應(ying)(ying)該(gai)(gai)被(bei)解釋為(wei)不僅包(bao)括(kuo)明(ming)確(que)地敘(xu)(xu)述過(guo)的(de)約(yue)0.1wt％到約(yue)0.5wt％的(de)濃(nong)度，還(huan)包(bao)括(kuo)該(gai)(gai)標明(ming)范(fan)(fan)圍(wei)(wei)(wei)內(nei)的(de)單(dan)獨(du)的(de)濃(nong)度，例(li)如，1％、2％、3％、4％和(he)子范(fan)(fan)圍(wei)(wei)(wei)，例(li)如0.5％、1.1％、2.2％、3.3％和(he)4.4％。術(shu)語(yu)“約(yue)”可以包(bao)括(kuo)被(bei)修改的(de)數(shu)值(zhi)的(de)±1％、±2％、±3％、±4％、±5％、±6％、±7％、±8％、±9％或(huo)±10％或(huo)者更多。