本(ben)非臨時申(shen)請案依據(ju)美國專(zhuan)(zhuan)利法35U.S.C.§119(a)主張優(you)先(xian)權(quan)，主張美國專(zhuan)(zhuan)利申(shen)請號No(s).[61/977,322]，申(shen)請日為(wei)[4月9日,2014年]，本(ben)案所有的(de)(de)專(zhuan)(zhuan)利內容(rong)與優(you)先(xian)權(quan)的(de)(de)參考專(zhuan)(zhuan)利內容(rong)相(xiang)附(fu)合。

技術領域

本發明提供一(yi)種黃芪多糖萃取物用(yong)于腦損(sun)(sun)傷(shang)(shang)(shang)與腦中(zhong)風(feng)(feng)預防、治療及(ji)預后的用(yong)途。腦損(sun)(sun)傷(shang)(shang)(shang)包含(han)創(chuang)傷(shang)(shang)(shang)性(xing)(xing)(xing)腦損(sun)(sun)傷(shang)(shang)(shang)和后天(tian)性(xing)(xing)(xing)腦損(sun)(sun)傷(shang)(shang)(shang)。腦中(zhong)風(feng)(feng)包含(han)缺血性(xing)(xing)(xing)腦中(zhong)風(feng)(feng)或出血性(xing)(xing)(xing)腦中(zhong)風(feng)(feng)。

背景技術：

腦部為人(ren)類身體(ti)最重要(yao)的(de)部分之(zhi)一，并同樣(yang)為各種認知、情(qing)感以(yi)及活動的(de)中心，然而不論外力(li)或(huo)非(fei)外力(li)對腦部所(suo)造成的(de)傷害，通常(chang)都將帶給人(ren)類腦部重大(da)的(de)影(ying)響或(huo)難以(yi)恢復的(de)傷害。

腦(nao)損(sun)傷(shang)(shang)(shang)(shang)的發生是(shi)由(you)于一個非常(chang)廣泛的條件下(xia)，如(ru):疾(ji)病(bing)(bing)、傷(shang)(shang)(shang)(shang)害、或(huo)應為一廣泛的腦(nao)損(sun)傷(shang)(shang)(shang)(shang)醫源性疾(ji)病(bing)(bing)可能的原因，其包括(kuo)出生缺氧(yang)、長(chang)時間缺氧(yang)(氧(yang)氣(qi)不足)、致(zhi)畸胎(tai)物(teratogens)的毒(du)害(包括(kuo)酒精)、感染和(he)神經疾(ji)病(bing)(bing)。化(hua)(hua)學治療可導致(zhi)腦(nao)損(sun)傷(shang)(shang)(shang)(shang)對其神經干細胞和(he)和(he)突膠質細胞，使(shi)其產生髓磷脂。造(zao)成局部病(bing)(bing)灶腦(nao)損(sun)傷(shang)(shang)(shang)(shang)的常(chang)見原因是(shi)物理創(chuang)傷(shang)(shang)(shang)(shang)，例如(ru)：創(chuang)傷(shang)(shang)(shang)(shang)性腦(nao)損(sun)傷(shang)(shang)(shang)(shang)、中風、動脈瘤、手術、其他神經疾(ji)病(bing)(bing)，以及(ji)重金(jin)屬中毒(du)包括(kuo)汞和(he)鉛及(ji)其化(hua)(hua)合物。

腦(nao)損(sun)傷(shang)(shang)(BI)是腦(nao)細胞被(bei)破壞(huai)或退化(hua)，腦(nao)損(sun)傷(shang)(shang)可分為非(fei)外(wai)(wai)力和外(wai)(wai)力因素所(suo)造(zao)成(cheng)(cheng)，絕大部分創(chuang)傷(shang)(shang)性腦(nao)損(sun)傷(shang)(shang)(TBI)是從外(wai)(wai)部物理所(suo)造(zao)成(cheng)(cheng)的頭部損(sun)傷(shang)(shang)，而后天(tian)性腦(nao)損(sun)傷(shang)(shang)(ABI)是指(zhi)由(you)疾(ji)病(bing)或出生后因疾(ji)病(bing)產生造(zao)成(cheng)(cheng)的腦(nao)損(sun)傷(shang)(shang)。

中(zhong)(zhong)風(feng)(feng)(feng)，也(ye)被(bei)(bei)稱(cheng)(cheng)為(wei)腦(nao)(nao)(nao)(nao)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)管意外(CVA)，腦(nao)(nao)(nao)(nao)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)管損傷(shang)(CVI)，或(huo)腦(nao)(nao)(nao)(nao)中(zhong)(zhong)風(feng)(feng)(feng)，是(shi)指(zhi)由于(yu)腦(nao)(nao)(nao)(nao)部供血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)受阻而使得腦(nao)(nao)(nao)(nao)細胞死(si)亡(wang)。中(zhong)(zhong)風(feng)(feng)(feng)分為(wei)兩(liang)種(zhong)(zhong)類型：一(yi)種(zhong)(zhong)是(shi)由血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)栓(shuan)或(huo)栓(shuan)塞所(suo)造(zao)成(cheng)的缺(que)(que)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)(缺(que)(que)乏血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)液供應)，稱(cheng)(cheng)為(wei)缺(que)(que)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)性(xing)(xing)(xing)(xing)腦(nao)(nao)(nao)(nao)中(zhong)(zhong)風(feng)(feng)(feng)；一(yi)種(zhong)(zhong)是(shi)由出血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)所(suo)造(zao)成(cheng)的，稱(cheng)(cheng)為(wei)出血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)性(xing)(xing)(xing)(xing)腦(nao)(nao)(nao)(nao)中(zhong)(zhong)風(feng)(feng)(feng)。約87％的中(zhong)(zhong)風(feng)(feng)(feng)是(shi)缺(que)(que)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)性(xing)(xing)(xing)(xing)腦(nao)(nao)(nao)(nao)中(zhong)(zhong)風(feng)(feng)(feng)，其(qi)余(yu)屬于(yu)出血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)性(xing)(xing)(xing)(xing)腦(nao)(nao)(nao)(nao)中(zhong)(zhong)風(feng)(feng)(feng)。有些腦(nao)(nao)(nao)(nao)內(nei)(nei)出血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)的病患(huan)會(hui)并發(fa)(fa)缺(que)(que)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)性(xing)(xing)(xing)(xing)中(zhong)(zhong)風(feng)(feng)(feng)，此狀(zhuang)況被(bei)(bei)稱(cheng)(cheng)為(wei)“出血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)性(xing)(xing)(xing)(xing)轉化”，然(ran)而目前尚無法厘清有多少(shao)出血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)性(xing)(xing)(xing)(xing)中(zhong)(zhong)風(feng)(feng)(feng)為(wei)缺(que)(que)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)性(xing)(xing)(xing)(xing)中(zhong)(zhong)風(feng)(feng)(feng)所(suo)造(zao)成(cheng)。中(zhong)(zhong)風(feng)(feng)(feng)導致大腦(nao)(nao)(nao)(nao)失(shi)去部分正常功能(neng)，其(qi)癥狀(zhuang)包(bao)括肢(zhi)體一(yi)側麻木偏癱、理解力喪失(shi)、講話困難、暈眩(xuan)、或(huo)視野缺(que)(que)損等等，而這些急性(xing)(xing)(xing)(xing)癥狀(zhuang)通常于(yu)短時間內(nei)(nei)可(ke)察覺，如果癥狀(zhuang)持續(xu)不到一(yi)兩(liang)個(ge)小時，它被(bei)(bei)稱(cheng)(cheng)為(wei)一(yi)個(ge)短暫(zan)性(xing)(xing)(xing)(xing)腦(nao)(nao)(nao)(nao)缺(que)(que)血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)發(fa)(fa)作(TIA)。出血(xue)(xue)(xue)(xue)(xue)性(xing)(xing)(xing)(xing)中(zhong)(zhong)風(feng)(feng)(feng)也(ye)與造(zao)成(cheng)劇烈頭痛有關(guan)。中(zhong)(zhong)風(feng)(feng)(feng)的癥狀(zhuang)可(ke)能(neng)是(shi)永久性(xing)(xing)(xing)(xing)的，長期并發(fa)(fa)癥可(ke)包(bao)括肺部疾病或(huo)喪失(shi)控制膀胱(guang)的能(neng)力。

中(zhong)風(feng)的預后可以單獨或(huo)合并地影響人的生理、精神、情感層面。且(qie)依(yi)據中(zhong)風(feng)病灶的大(da)小和位置不同(tong)所(suo)造成(cheng)的后遺癥具(ju)有(you)很大(da)差異(yi)，而其(qi)失能區對應到(dao)已(yi)被損壞(huai)的腦部區域(yu)。

中風(feng)所(suo)造成的生(sheng)理失(shi)(shi)能包括肌肉無(wu)力(li)、麻木、壓瘡(褥瘡)、肺炎、尿失(shi)(shi)禁、失(shi)(shi)用癥(大腦(nao)認知(zhi)障礙(ai)，無(wu)法執(zhi)行(xing)先前所(suo)學過的技巧)、處理日常行(xing)為具有困難、食欲減退、言語(yu)喪失(shi)(shi)、視力(li)減退和疼(teng)痛，如果(guo)中風(feng)嚴重的話或(huo)發生(sheng)在特定的位置(如部(bu)分腦(nao)干)，將(jiang)會(hui)導(dao)致昏迷(mi)或(huo)死亡。

腦(nao)(nao)(nao)出(chu)(chu)(chu)血(xue)(xue)是(shi)屬于(yu)顱內(nei)出(chu)(chu)(chu)血(xue)(xue)的(de)(de)一種亞型，其(qi)(qi)出(chu)(chu)(chu)血(xue)(xue)位置(zhi)好(hao)發(fa)(fa)于(yu)腦(nao)(nao)(nao)組(zu)織。顱內(nei)出(chu)(chu)(chu)血(xue)(xue)(ICH)是(shi)由腦(nao)(nao)(nao)損傷(shang)引起(qi)的(de)(de)，或(huo)由自發(fa)(fa)性(xing)腦(nao)(nao)(nao)出(chu)(chu)(chu)血(xue)(xue)中風所導(dao)致(zhi)(zhi)。非(fei)創(chuang)傷(shang)性(xing)顱內(nei)出(chu)(chu)(chu)血(xue)(xue)是(shi)一種腦(nao)(nao)(nao)部自發(fa)(fa)出(chu)(chu)(chu)血(xue)(xue)并進入腦(nao)(nao)(nao)組(zu)織，其(qi)(qi)發(fa)(fa)生與異常腦(nao)(nao)(nao)壓(ya)(如:張力或(huo)壓(ya)力)的(de)(de)增加(jia)有(you)(you)(you)關。ICH占(zhan)所有(you)(you)(you)中風入院治(zhi)(zhi)療(liao)(liao)的(de)(de)10-30％，并導(dao)致(zhi)(zhi)重大的(de)(de)殘疾、發(fa)(fa)病(bing)率(lv)和(he)30-50％的(de)(de)6個月死亡率(lv)，其(qi)(qi)長期預(yu)后(hou)不(bu)佳(jia)，只有(you)(you)(you)20％的(de)(de)患者于(yu)6個月后(hou)能(neng)重新(xin)恢(hui)復日常生活功能(neng)獨立。雖然目前(qian)對動脈(mo)瘤的(de)(de)蜘蛛網膜(mo)下腔出(chu)(chu)(chu)血(xue)(xue)和(he)腦(nao)(nao)(nao)梗(geng)塞的(de)(de)治(zhi)(zhi)療(liao)(liao)已經有(you)(you)(you)進展(zhan)，但腦(nao)(nao)(nao)出(chu)(chu)(chu)血(xue)(xue)治(zhi)(zhi)療(liao)(liao)方(fang)式仍然有(you)(you)(you)限。根(gen)據腦(nao)(nao)(nao)內(nei)出(chu)(chu)(chu)血(xue)(xue)的(de)(de)原(yuan)因(yin)，腦(nao)(nao)(nao)出(chu)(chu)(chu)血(xue)(xue)可區分為原(yuan)發(fa)(fa)性(xing)或(huo)繼發(fa)(fa)性(xing)。原(yuan)發(fa)(fa)性(xing)腦(nao)(nao)(nao)出(chu)(chu)(chu)血(xue)(xue)是(shi)由慢(man)性(xing)高血(xue)(xue)壓(ya)或(huo)淀(dian)粉樣變性(xing)血(xue)(xue)管(guan)(guan)病(bing)損壞(huai)小(xiao)動脈(mo)或(huo)小(xiao)動脈(mo)自發(fa)(fa)破(po)裂(lie)(lie)發(fa)(fa)起(qi)，繼發(fa)(fa)性(xing)腦(nao)(nao)(nao)出(chu)(chu)(chu)血(xue)(xue)是(shi)由外傷(shang)、動脈(mo)瘤破(po)裂(lie)(lie)、血(xue)(xue)管(guan)(guan)畸形(xing)、凝血(xue)(xue)功能(neng)障礙、或(huo)其(qi)(qi)他原(yuan)因(yin)出(chu)(chu)(chu)血(xue)(xue)的(de)(de)結果(guo)。

腦(nao)(nao)(nao)缺(que)血(xue)(xue)(xue)(xue)是指大腦(nao)(nao)(nao)中血(xue)(xue)(xue)(xue)流量無法滿足(zu)(zu)代(dai)謝需求，導致腦(nao)(nao)(nao)部(bu)(bu)供氧不足(zu)(zu)或(huo)腦(nao)(nao)(nao)缺(que)氧，進(jin)而使(shi)腦(nao)(nao)(nao)組織死亡或(huo)腦(nao)(nao)(nao)梗塞/缺(que)血(xue)(xue)(xue)(xue)性(xing)(xing)中風。它是伴隨蜘(zhi)蛛網膜下(xia)腔出(chu)血(xue)(xue)(xue)(xue)和腦(nao)(nao)(nao)出(chu)血(xue)(xue)(xue)(xue)的(de)中風亞(ya)型(xing)。腦(nao)(nao)(nao)缺(que)血(xue)(xue)(xue)(xue)改(gai)變腦(nao)(nao)(nao)的(de)生理(li)代(dai)謝，代(dai)謝率的(de)降低和能(neng)量攝取不足(zu)(zu)。目(mu)前(qian)可分為兩種類型(xing)：局(ju)部(bu)(bu)性(xing)(xing)腦(nao)(nao)(nao)缺(que)血(xue)(xue)(xue)(xue)(這(zhe)僅限(xian)于腦(nao)(nao)(nao)的(de)特定區(qu)域)和區(qu)域性(xing)(xing)腦(nao)(nao)(nao)缺(que)血(xue)(xue)(xue)(xue)(其中涵(han)蓋腦(nao)(nao)(nao)組織的(de)大部(bu)(bu)分區(qu)域)。

缺血性中(zhong)風是由于腦部供血不足(zu)(zu)，導(dao)致腦組織功能障(zhang)礙及壞死(si)，有四個(ge)原因可導(dao)致缺血性中(zhong)風：(1)血栓(shuan)(shuan)(血塊(kuai)自血管(guan)(guan)壁脫落(luo)形(xing)(xing)成栓(shuan)(shuan)子(zi)，阻塞血管(guan)(guan))、(2)栓(shuan)(shuan)塞(身體其他(ta)部位形(xing)(xing)成之血塊(kuai)，阻塞血管(guan)(guan))，(3)系統(tong)性供血不足(zu)(zu)(一般性系統(tong)性供血不足(zu)(zu)，如休(xiu)克)和(4)靜脈(mo)血栓(shuan)(shuan)。

目(mu)(mu)前(qian)急性(xing)(xing)缺血(xue)性(xing)(xing)中(zhong)風的(de)治(zhi)療(liao)(liao)主要(yao)采用(yong)靜脈血(xue)栓溶解劑(rt-PA)來治(zhi)療(liao)(liao)。rt-PA于(yu)急性(xing)(xing)缺血(xue)性(xing)(xing)中(zhong)風癥狀(zhuang)出現(xian)(xian)后3小時內(nei)使用(yong)可改(gai)善10％的(de)重(zhong)殘程(cheng)度(du)，但(dan)無法改(gai)善死亡率；且(qie)愈(yu)早(zao)使用(yong)，治(zhi)療(liao)(liao)效果愈(yu)好(hao)。然(ran)于(yu)癥狀(zhuang)出現(xian)(xian)后3～4.5小時內(nei)使用(yong)rt-PA的(de)療(liao)(liao)效尚(shang)不清楚(chu)。文獻(xian)指出使用(yong)rt-PA治(zhi)療(liao)(liao)缺血(xue)性(xing)(xing)中(zhong)風于(yu)3-6個月后改(gai)善5％重(zhong)殘度(du)，但(dan)增加2％死亡機(ji)率。且(qie)于(yu)癥狀(zhuang)出現(xian)(xian)4.5小時后使用(yong)此血(xue)栓溶解劑，預后不佳(jia)。目(mu)(mu)前(qian)尚(shang)無可靠的(de)方式可以評(ping)估rt-PA治(zhi)療(liao)(liao)后是否造成顱內(nei)出血(xue)。

美(mei)國心臟協會(AHA)和(he)美(mei)國神經(jing)醫(yi)(yi)學會(AAN)建議應該(gai)在癥(zheng)狀出現后(hou)3小(xiao)時內(nei)使(shi)用，并且沒有(you)其他使(shi)用禁(jin)忌(如(ru)異常實驗室檢測值，高血(xue)壓或最近手術等(deng))才有(you)最佳的效果。臨床研究證實病人發病3個小(xiao)時內(nei)使(shi)用rt-PA，可降(jiang)低中(zhong)風(feng)后(hou)殘障等(deng)級，但不改變缺血(xue)性(xing)(xing)中(zhong)風(feng)死(si)亡率(lv)。同時結果顯示(shi)，6.4％使(shi)用rt-PA的中(zhong)風(feng)病人有(you)引發大(da)量腦出血(xue)并發癥(zheng)的可能，增加(jia)死(si)亡率(lv)。此(ci)外，美(mei)國急(ji)診(zhen)醫(yi)(yi)學學會(AAEM)認為(wei)，對于rt-PA應用于急(ji)性(xing)(xing)缺血(xue)性(xing)(xing)中(zhong)風(feng)的療效、安全性(xing)(xing)和(he)適用性(xing)(xing)的客觀證據不足以將其列入治療標準(zhun)。

中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)草(cao)藥(yao)(yao)方(fang)面已有(you)文(wen)獻揭(jie)(jie)露含(han)黃芪(qi)的中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)藥(yao)(yao)復(fu)方(fang)具(ju)有(you)治療(liao)腦中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)風(feng)的功效，例如：補陽還五(wu)湯(tang)(含(han)黃芪(qi)120克(ke)(ke)、當歸尾(wei)6克(ke)(ke)、赤芍5克(ke)(ke)、地龍3克(ke)(ke)、川芎3克(ke)(ke)、桃仁3克(ke)(ke)、以(yi)及紅花3克(ke)(ke))。然而(er)，未有(you)文(wen)獻揭(jie)(jie)露中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)藥(yao)(yao)單(dan)方(fang)或其萃(cui)取物可(ke)有(you)效治療(liao)腦中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)風(feng)。事(shi)實上，依據中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)草(cao)藥(yao)(yao)復(fu)方(fang)「君、臣、佐、使」的觀念，其復(fu)方(fang)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)所含(han)的中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)藥(yao)(yao)材并無法單(dan)獨對(dui)一病癥有(you)所治療(liao)效果，故含(han)黃芪(qi)的中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)藥(yao)(yao)復(fu)方(fang)并無法直接說明單(dan)獨使用(yong)黃芪(qi)便能夠對(dui)腦中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)風(feng)有(you)治療(liao)效果。

根據中(zhong)(zhong)國草藥(yao)的(de)原(yuan)則，單一藥(yao)材的(de)治(zhi)療效(xiao)果(guo)和混合物的(de)治(zhi)療效(xiao)果(guo)是大不相(xiang)同。因此現有的(de)含有黃(huang)芪混合物的(de)中(zhong)(zhong)國草藥(yao)相(xiang)關(guan)文獻(xian)不能直(zhi)接解釋黃(huang)芪提取物對于中(zhong)(zhong)風是有治(zhi)療效(xiao)果(guo)。

因此，腦(nao)損傷和腦(nao)中風(feng)的病人，臨(lin)床上仍(reng)極需一種安全、低副(fu)作用、無使用時間限(xian)制的治(zhi)療藥物。

技術實現要素：

本發明所述黃芪萃取(qu)物(wu)總糖類(lei)含(han)量為60％-120％.多糖的特性是由傅(fu)里(li)葉變換紅外光譜(FTIR)和(he)(he)(he)核(he)磁共(gong)振(zhen)光譜(NMR)中獲(huo)得。其(qi)多糖苷(gan)鍵(jian)連(lian)接(jie)(jie)包(bao)含(han)α-1,4糖苷(gan)鍵(jian)連(lian)接(jie)(jie)和(he)(he)(he)α-1,6糖苷(gan)鍵(jian)連(lian)接(jie)(jie)，其(qi)中阿拉伯糖連(lian)結(jie)于(yu)碳(tan)端(duan)的C3和(he)(he)(he)C5位(wei)置，葡聚糖鏈接(jie)(jie)于(yu)碳(tan)端(duan)的C4和(he)(he)(he)C6位(wei)置，半乳糖鏈接(jie)(jie)于(yu)碳(tan)端(duan)的C3和(he)(he)(he)C6位(wei)置，半乳糖醛酸(suan)連(lian)結(jie)于(yu)碳(tan)端(duan)的C4位(wei)置，以及鼠(shu)李糖鏈接(jie)(jie)于(yu)C2位(wei)置。該組合物(wu)還包(bao)含(han)第一(yi)活性劑。

本(ben)發明透過(guo)新制(zhi)程(cheng)的(de)制(zhi)備(bei)方法，使含黃芪(qi)多(duo)糖萃(cui)(cui)取物(wu)有效(xiao)的(de)可用(yong)于腦損(sun)(sun)傷(shang)與腦中(zhong)風(feng)預(yu)(yu)防(fang)(fang)、治療及預(yu)(yu)后的(de)用(yong)途。腦損(sun)(sun)傷(shang)包(bao)括外(wai)傷(shang)性(xing)(xing)腦損(sun)(sun)傷(shang)(TBI)和獲(huo)得(de)性(xing)(xing)腦損(sun)(sun)傷(shang)(ABI)。本(ben)發明之黃芪(qi)提取物(wu)使用(yong)于腦損(sun)(sun)傷(shang)患者(zhe)的(de)預(yu)(yu)防(fang)(fang)，治療和預(yu)(yu)后。在一實施例中(zhong)，該(gai)黃芪(qi)萃(cui)(cui)取物(wu)的(de)有效(xiao)劑量為每日125mg～2000mg/天。

本發(fa)明(ming)提供一種(zhong)用(yong)于(yu)(yu)(yu)制備治(zhi)療腦損傷的(de)(de)黃芪(qi)萃(cui)取(qu)物的(de)(de)組合物的(de)(de)應(ying)用(yong)，所述組合物包含(han)黃芪(qi)萃(cui)取(qu)物含(han)量為60％-120％，其多糖(tang)(tang)苷鍵連接(jie)包含(han)α-1,4糖(tang)(tang)苷鍵連接(jie)和(he)α-1,6糖(tang)(tang)苷鍵連接(jie)，其中阿拉伯糖(tang)(tang)連結于(yu)(yu)(yu)碳(tan)(tan)端的(de)(de)C3和(he)C5位(wei)(wei)置(zhi)，葡聚糖(tang)(tang)鏈接(jie)于(yu)(yu)(yu)碳(tan)(tan)端的(de)(de)C4和(he)C6位(wei)(wei)置(zhi)，半乳糖(tang)(tang)鏈接(jie)于(yu)(yu)(yu)碳(tan)(tan)端的(de)(de)C3和(he)C6位(wei)(wei)置(zhi)，半乳糖(tang)(tang)醛酸連結于(yu)(yu)(yu)碳(tan)(tan)端的(de)(de)C4位(wei)(wei)置(zhi)，以及鼠李糖(tang)(tang)鏈接(jie)于(yu)(yu)(yu)C2位(wei)(wei)置(zhi)。

一(yi)種用于制備(bei)治療(liao)腦(nao)中(zhong)(zhong)風(feng)(feng)的(de)(de)(de)黃芪(qi)萃(cui)取物(wu)(wu)的(de)(de)(de)組(zu)合物(wu)(wu)的(de)(de)(de)應用，其特征(zheng)是，所述組(zu)合物(wu)(wu)包含一(yi)黃芪(qi)萃(cui)取物(wu)(wu)和藥(yao)物(wu)(wu)可接受的(de)(de)(de)載(zai)體(ti)、賦形劑(ji)或鹽(yan)。腦(nao)中(zhong)(zhong)風(feng)(feng)包含缺血性腦(nao)中(zhong)(zhong)風(feng)(feng)或出血性腦(nao)中(zhong)(zhong)風(feng)(feng)的(de)(de)(de)預防、治療(liao)及預后(hou)。在一(yi)實(shi)施例中(zhong)(zhong)，該黃芪(qi)萃(cui)取物(wu)(wu)的(de)(de)(de)有效劑(ji)量(liang)為每日125mg～2000mg/天(tian)。

本(ben)發明提供一種治療(liao)腦損傷的(de)(de)藥(yao)物組(zu)合物黃(huang)(huang)(huang)芪(qi)萃(cui)取(qu)物的(de)(de)制備方(fang)法(fa)(fa)，包含:(1)將(jiang)黃(huang)(huang)(huang)芪(qi)清洗干凈(jing)后(hou)，將(jiang)黃(huang)(huang)(huang)芪(qi)處理為飲片(pian)或粉末；(2)將(jiang)該(gai)黃(huang)(huang)(huang)芪(qi)飲片(pian)或粉末，置入(ru)(ru)80-100℃的(de)(de)含水萃(cui)取(qu)溶劑中(zhong)(zhong)2～3小時(shi)，取(qu)得第一萃(cui)取(qu)溶液，然后(hou)在相同溫度中(zhong)(zhong)重復2次1.5～3小時(shi)；(3)將(jiang)所有濃縮后(hou)的(de)(de)萃(cui)取(qu)液在低溫環(huan)境中(zhong)(zhong)加入(ru)(ru)乙(yi)醇或低鏈烷醇類進(jin)行(xing)沉(chen)淀步驟取(qu)得粗萃(cui)取(qu)物；以及(4)進(jin)行(xing)純化(hua)步驟，將(jiang)該(gai)粗萃(cui)取(qu)物再經由離心、過濾(lv)和/或離子交換層析法(fa)(fa)，進(jin)一步再通過超微過濾(lv)膜(mo)，取(qu)得黃(huang)(huang)(huang)芪(qi)萃(cui)取(qu)物。

本發明的(de)(de)(de)(de)一個或多(duo)個實(shi)施(shi)例的(de)(de)(de)(de)細節描述在下(xia)面。本發明的(de)(de)(de)(de)其它特征或優點將從以(yi)(yi)下(xia)的(de)(de)(de)(de)實(shi)施(shi)例詳細描述以(yi)(yi)及從所請(qing)的(de)(de)(de)(de)權利要求范(fan)圍是顯而易(yi)見的(de)(de)(de)(de)。

附圖說明

圖1為黃(huang)芪(qi)萃(cui)取物的NMR分析結果。

圖2為顯示顱內出血腦(nao)中(zhong)風(feng)病(bing)人使(shi)用(yong)黃(huang)芪萃取物治(zhi)療與對(dui)照(zhao)組的(de)病(bing)人在(zai)中(zhong)風(feng)后第84天有明顯的(de)差異,使(shi)用(yong)格拉斯哥預后量表(GOS)評(ping)估(gu)。

圖3為顯(xian)示顱內(nei)出血腦(nao)中風病(bing)人使(shi)用黃(huang)芪萃取物治(zhi)療與(yu)對照組的病(bing)人在中風后第84天(tian)有明顯(xian)的差異，使(shi)用mRS量表評估。

圖4為在OGD誘發(fa)神經(jing)毒(du)性的(de)條(tiao)件(jian)下使用(yong)各種劑量黃芪萃取物(wu)治療(liao)來測試初(chu)代皮質細胞的(de)乳(ru)酸(suan)脫氫酶(LDH)活(huo)性。

圖5A和圖5B為黃芪萃取物治療缺血性腦(nao)中風模式(shi)下的大鼠腦(nao)梗塞體積(ji)明顯(xian)縮小。

圖5C為核磁共振成(cheng)像的影像，顯(xian)示(shi)使用50mg/kg黃芪萃(cui)取(qu)物治療的缺血性腦(nao)(nao)中風模式下大鼠腦(nao)(nao)梗塞體積(ji)相較于(yu)對照組明顯(xian)變小。

圖(tu)5D和(he)圖(tu)5E為核磁共振(zhen)成像(xiang)的(de)影像(xiang)，定量結(jie)果顯(xian)示使用50mg/kg黃(huang)芪萃(cui)取物治療的(de)缺血性腦(nao)(nao)中(zhong)風模式(shi)下大鼠腦(nao)(nao)梗塞體積(ji)和(he)最大梗塞切片的(de)面積(ji)相較于對照組(zu)顯(xian)著(zhu)減少。

圖6A為黃芪萃取物(wu)治療缺(que)血性腦中(zhong)風模式下大(da)鼠身(shen)體擺動不(bu)平衡測試結果(guo)相(xiang)較于對(dui)照組顯著減少。

圖(tu)6B～圖(tu)6D為(wei)黃芪萃(cui)取物治療缺血(xue)性(xing)腦中風模式下大鼠活(huo)動能力測(ce)試(如(ru)垂(chui)直活(huo)性(xing),垂(chui)直移動,移動次(ci)數)結(jie)果相較于對照組顯著增加。

圖6E為黃芪萃取物(wu)治療缺血(xue)性腦中風(feng)模式(shi)下大鼠前(qian)肢握(wo)力(li)測(ce)試結果相較(jiao)于對(dui)照組顯著增加。

實施方式

實施例1:

制備黃芪萃取物

黃(huang)(huang)(huang)(huang)芪(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)萃取、分(fen)離和(he)純(chun)化步驟分(fen)別如(ru)下，黃(huang)(huang)(huang)(huang)芪(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)萃取最佳來源是(shi)來自(zi)于兩(liang)年生的黃(huang)(huang)(huang)(huang)芪(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)根部，黃(huang)(huang)(huang)(huang)芪(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)的品種可取自(zi)蒙古黃(huang)(huang)(huang)(huang)芪(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)(A.membranaceus Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao)或(huo)(huo)莢膜黃(huang)(huang)(huang)(huang)芪(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)(A.membranaceus(Fisch.)Bge)或(huo)(huo)黃(huang)(huang)(huang)(huang)芪(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)生長于中華人民(min)共(gong)和(he)國(guo)的內蒙古或(huo)(huo)山西(xi)省。

該黃芪萃(cui)取物一般是(shi)來自于滅菌處理(li)飲片或(huo)切(qie)片的(de)干燥根(gen)，所述調配(pei)包括修(xiu)剪(jian)干燥根(gen)，以超濾(UF)水(shui)洗(xi)(xi)滌(di)它(ta)們(men)，并以消毒(du)溶液清洗(xi)(xi)它(ta)們(men)，如70％至75％的(de)酒精，該根(gen)被切(qie)成薄片并在滅菌條件下產(chan)生干燥“飲片”，在本文中也稱(cheng)為“清潔飲片”。

該萃(cui)取物(wu)包含(han)多糖體是產自該黃芪(qi)潔(jie)凈飲片或微粉(fen)末(mo)，使用至少(shao)80-100℃的含(han)水萃(cui)取溶劑所分離出。

該萃取溶劑可為水，且可選擇性地包括共萃取物，如堿土金屬鹽或堿金屬鹽類，即還可以是堿土金屬鹽或堿金屬鹽類水溶液。該堿金屬鹽類包括如氧化鈣、二氫磷酸鉀或二氫磷酸鈉，該共萃取物可為如緩沖液0.5M KH₂PO₄，pH為4.5。

萃(cui)取(qu)步(bu)驟是將萃(cui)取(qu)溶(rong)(rong)液(ye)加入飲片(pian)或(huo)(huo)微粉(fen)末分在一(yi)定(ding)的(de)溫(wen)度(du)下進(jin)行一(yi)段時間，大(da)(da)多(duo)(duo)數需要進(jin)行多(duo)(duo)次的(de)循(xun)環(huan)才能有效完成萃(cui)取(qu)程序。典(dian)型的(de)流(liu)程包括三個萃(cui)取(qu)循(xun)環(huan)，每一(yi)循(xun)環(huan)持(chi)續大(da)(da)約1.5小時至3小時，并施(shi)加溫(wen)度(du)約80-100℃的(de)萃(cui)取(qu)溶(rong)(rong)液(ye)，在某(mou)些實(shi)施(shi)例(li)中該飲片(pian)一(yi)開(kai)始是以熱(re)鹽水溶(rong)(rong)液(ye)清洗，如0.5M KH2PO4，pH為4.5，溫(wen)度(du)為約90-100℃，清洗約30分鐘，在某(mou)些實(shi)施(shi)例(li)中，所有制(zhi)備飲片(pian)或(huo)(huo)微粉(fen)末的(de)步(bu)驟皆于滅菌狀態下進(jin)行，包括使用滅菌裝備與試劑(ji)。

然后將該萃取溶劑濃縮(suo)，且此流程能(neng)在真空下約(yue)(yue)60-70℃溫度下進行(xing)，使每(mei)1公斤(jin)的飲片(pian)或(huo)微(wei)粉末達到約(yue)(yue)0.8-1.1升的濃度，該濃縮(suo)也(ye)可以用超微(wei)過濾(lv)法制備，如使用具100千道耳頓排除過濾(lv)器(qi)的超微(wei)過濾(lv)。

之后該(gai)濃(nong)(nong)(nong)縮溶(rong)液是使用低鏈烷(wan)醇(chun)(chun)類(lei)自該(gai)濃(nong)(nong)(nong)縮萃取(qu)溶(rong)劑中(zhong)(zhong)沉(chen)(chen)(chen)淀(dian)處理(li)，取(qu)得沉(chen)(chen)(chen)淀(dian)產物。該(gai)低鏈烷(wan)醇(chun)(chun)類(lei)可為如(ru)乙醇(chun)(chun)。在(zai)某些實施例中(zhong)(zhong)，該(gai)乙醇(chun)(chun)可加至該(gai)溶(rong)液中(zhong)(zhong)而(er)成濃(nong)(nong)(nong)度(du)(du)(du)約(yue)70％的乙醇(chun)(chun)，于(yu)室溫下產生(sheng)沉(chen)(chen)(chen)淀(dian)。在(zai)某些實施例中(zhong)(zhong)，該(gai)沉(chen)(chen)(chen)淀(dian)物首先是使用較低濃(nong)(nong)(nong)度(du)(du)(du)約(yue)35％-40％的乙醇(chun)(chun)于(yu)第一沉(chen)(chen)(chen)淀(dian)步驟中(zhong)(zhong)，之后使用較高濃(nong)(nong)(nong)度(du)(du)(du)約(yue)65％-80％的乙醇(chun)(chun)于(yu)第二沉(chen)(chen)(chen)淀(dian)步驟中(zhong)(zhong)，用于(yu)沉(chen)(chen)(chen)淀(dian)步驟中(zhong)(zhong)的低鏈烷(wan)醇(chun)(chun)類(lei)濃(nong)(nong)(nong)度(du)(du)(du)范圍可為20％-30％、30％-40％、40％-50％、50％-60％、60％-70％、70％-80％、80％-90％，或其中(zhong)(zhong)的任一濃(nong)(nong)(nong)度(du)(du)(du)。

該(gai)(gai)醇(chun)(chun)類清(qing)洗步驟可(ke)(ke)重復以(yi)更(geng)(geng)進一步純化(hua)。例如該(gai)(gai)沉(chen)(chen)淀(dian)(dian)(dian)物可(ke)(ke)用更(geng)(geng)多低鏈(lian)烷(wan)(wan)(wan)醇(chun)(chun)類清(qing)洗，其(qi)(qi)中(zhong)典型的(de)(de)(de)(de)(de)清(qing)洗包(bao)括如采用95％乙醇(chun)(chun)或99％乙醇(chun)(chun)清(qing)洗三次(ci)或四次(ci)，之后將該(gai)(gai)沉(chen)(chen)淀(dian)(dian)(dian)物懸浮于水(shui)中(zhong)，其(qi)(qi)濃度(du)適用于下一步處理(li)，如約(yue)18％至20％重量/體積，可(ke)(ke)再次(ci)加入溶(rong)于水(shui)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)低鏈(lian)烷(wan)(wan)(wan)醇(chun)(chun)類沉(chen)(chen)淀(dian)(dian)(dian)，以(yi)移(yi)除非水(shui)溶(rong)性(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)其(qi)(qi)他材料，上清(qing)液可(ke)(ke)經較高濃度(du)的(de)(de)(de)(de)(de)低鏈(lian)烷(wan)(wan)(wan)醇(chun)(chun)沉(chen)(chen)淀(dian)(dian)(dian)析出，該(gai)(gai)較高濃度(du)的(de)(de)(de)(de)(de)低鏈(lian)烷(wan)(wan)(wan)醇(chun)(chun)可(ke)(ke)為(wei)如40％-80％的(de)(de)(de)(de)(de)乙醇(chun)(chun)，且在某(mou)些實施(shi)例中(zhong)，60％-70％的(de)(de)(de)(de)(de)乙醇(chun)(chun)，以(yi)產生包(bao)含(han)阿拉(la)伯(bo)糖(tang)、半(ban)乳聚糖(tang)、蛋白(bai)質和相關的(de)(de)(de)(de)(de)多糖(tang)粗萃取沉(chen)(chen)淀(dian)(dian)(dian)物。

該(gai)(gai)粗萃(cui)取(qu)物再(zai)次溶(rong)(rong)于水中并干(gan)燥(zao)。適當(dang)的(de)(de)干(gan)燥(zao)過(guo)程可(ke)包(bao)括此技術領域者所(suo)熟(shu)知(zhi)的(de)(de)步驟，其(qi)可(ke)預防過(guo)度(du)(du)加熱，可(ke)包(bao)括如噴霧干(gan)燥(zao)、真空(kong)干(gan)燥(zao)、冷(leng)凍干(gan)燥(zao)、臨界點干(gan)燥(zao)、溶(rong)(rong)劑(ji)交(jiao)換(huan)，以及類似方法。該(gai)(gai)粗萃(cui)取(qu)物亦可(ke)再(zai)溶(rong)(rong)于水或(huo)水性溶(rong)(rong)液中，所(suo)述粗萃(cui)取(qu)物進行適當(dang)超(chao)微(wei)過(guo)濾來(lai)濃縮。在(zai)某些實(shi)施例中，該(gai)(gai)適當(dang)的(de)(de)超(chao)微(wei)過(guo)濾液濃度(du)(du)為約2％至(zhi)5％，之后將該(gai)(gai)粗萃(cui)取(qu)物經(jing)超(chao)微(wei)過(guo)濾，以進一(yi)步移(yi)除低分子量(liang)之的(de)(de)物質(zhi)和減少(shao)溶(rong)(rong)液體積(ji)，所(suo)述超(chao)微(wei)過(guo)濾系統(tong)可(ke)具有5千(qian)至(zhi)6千(qian)道耳頓分子量(liang)排除值(zhi)(即超(chao)微(wei)過(guo)濾系統(tong)的(de)(de)截留分子量(liang)為5千(qian)至(zhi)6千(qian)道耳頓)。

在(zai)某(mou)些(xie)實(shi)施例中(zhong)，該(gai)粗萃取物可(ke)為白(bai)色至灰(hui)白(bai)色粉(fen)(fen)末(mo)(mo)，或淡(dan)黃色粉(fen)(fen)末(mo)(mo)，并可(ke)溶于水(shui)(shui)中(zhong)成至少約100毫(hao)克/毫(hao)升(sheng)。在(zai)某(mou)些(xie)實(shi)施例中(zhong)，該(gai)粉(fen)(fen)末(mo)(mo)為可(ke)溶于水(shui)(shui)中(zhong)，至少約200毫(hao)克/毫(hao)升(sheng)。該(gai)粉(fen)(fen)末(mo)(mo)顯(xian)示出干燥時重量損失小(xiao)(xiao)于約15％，具有內(nei)毒(du)素(su)含量小(xiao)(xiao)于約0.5EU/mg，以及(ji)在(zai)某(mou)些(xie)實(shi)施例中(zhong)，具有內(nei)毒(du)素(su)含量小(xiao)(xiao)于約0.3EU/mg。

該(gai)粗萃取物(wu)(wu)可經(jing)大孔吸(xi)附(fu)層析法或離子(zi)(zi)(zi)交(jiao)(jiao)(jiao)換層析法更進(jin)一(yi)步純化，該(gai)組成物(wu)(wu)再(zai)溶(rong)(rong)于水溶(rong)(rong)液(ye)(ye)中(zhong)，并進(jin)行適(shi)當(dang)的(de)(de)超(chao)(chao)(chao)微(wei)過濾(lv)濃縮(suo)，一(yi)般濃度為約0.5％至2％。再(zai)溶(rong)(rong)解的(de)(de)組合物(wu)(wu)之(zhi)后進(jin)行超(chao)(chao)(chao)微(wei)過濾(lv)，以進(jin)一(yi)步移除低分(fen)子(zi)(zi)(zi)量的(de)(de)物(wu)(wu)質和(he)降低溶(rong)(rong)液(ye)(ye)體積，可使(shi)用上述的(de)(de)5千(qian)道耳頓分(fen)子(zi)(zi)(zi)量移除超(chao)(chao)(chao)微(wei)過濾(lv)系統，超(chao)(chao)(chao)微(wei)過濾(lv)的(de)(de)滯(zhi)留物(wu)(wu)是(shi)經(jing)陽離子(zi)(zi)(zi)交(jiao)(jiao)(jiao)換管柱(zhu)洗(xi)脫(tuo)，如(ru)(ru)SP Sepharose陽離子(zi)(zi)(zi)交(jiao)(jiao)(jiao)換管柱(zhu)，平衡于20mM醋酸鈉緩沖液(ye)(ye)，pH 5.20中(zhong)，該(gai)陽離子(zi)(zi)(zi)交(jiao)(jiao)(jiao)換管柱(zhu)的(de)(de)洗(xi)脫(tuo)物(wu)(wu)再(zai)經(jing)陰(yin)(yin)離子(zi)(zi)(zi)交(jiao)(jiao)(jiao)換管柱(zhu)洗(xi)脫(tuo)，如(ru)(ru)Q Sepharose陰(yin)(yin)離子(zi)(zi)(zi)交(jiao)(jiao)(jiao)換管柱(zhu)，平衡于相同的(de)(de)醋酸鈉緩沖液(ye)(ye)中(zhong)。

該陰離子交換管柱的(de)洗脫物可(ke)以是(1)直(zhi)接使用(yong)于其(qi)他形式萃取(qu)(qu)物的(de)制備(bei)中；(2)經濃縮并干燥(zao)，以形成(cheng)粗萃取(qu)(qu)物，可(ke)做為制備(bei)純化(hua)萃取(qu)(qu)物的(de)中間物；(3)直(zhi)接用(yong)于純化(hua)萃取(qu)(qu)物的(de)制備(bei)。

其(qi)(qi)純(chun)化(hua)步驟(zou)，是將該(gai)(gai)(gai)粗(cu)萃取(qu)物經(jing)(jing)(jing)超(chao)微過(guo)(guo)濾，使(shi)用(yong)適當(dang)的除菌過(guo)(guo)濾器，如(ru)0.1微米(mi)過(guo)(guo)濾器，以(yi)去除溶液(ye)中(zhong)(zhong)的鹽類(lei)和(he)再次減少其(qi)(qi)體積，在某(mou)些實(shi)施(shi)例(li)中(zhong)(zhong)可(ke)(ke)使(shi)用(yong)8千道耳頓(dun)分子量(liang)移除超(chao)微過(guo)(guo)濾。超(chao)微過(guo)(guo)濾中(zhong)(zhong)的滯留(liu)液(ye)為濃(nong)(nong)(nong)(nong)縮液(ye)，百(bai)分比濃(nong)(nong)(nong)(nong)度(du)可(ke)(ke)使(shi)用(yong)折射計測量(liang)，在某(mou)些實(shi)施(shi)例(li)中(zhong)(zhong)，該(gai)(gai)(gai)滯留(liu)液(ye)是濃(nong)(nong)(nong)(nong)縮至(zhi)濃(nong)(nong)(nong)(nong)度(du)約20％至(zhi)26％在50-60℃。該(gai)(gai)(gai)經(jing)(jing)(jing)濃(nong)(nong)(nong)(nong)縮的滯留(liu)液(ye)之后再經(jing)(jing)(jing)低鏈烷醇(chun)類(lei)沉(chen)(chen)淀。在某(mou)些實(shi)施(shi)例(li)中(zhong)(zhong)，該(gai)(gai)(gai)低鏈烷醇(chun)類(lei)可(ke)(ke)為乙(yi)醇(chun)，其(qi)(qi)加(jia)入至(zhi)濃(nong)(nong)(nong)(nong)度(du)為約80％至(zhi)90％，沉(chen)(chen)淀物可(ke)(ke)經(jing)(jing)(jing)更進(jin)一步清洗(xi)，所(suo)述(shu)典型的清洗(xi)包括以(yi)無水乙(yi)醇(chun)清洗(xi)沉(chen)(chen)淀物三(san)次，之后將該(gai)(gai)(gai)沉(chen)(chen)淀物干燥，得(de)到經(jing)(jing)(jing)純(chun)化(hua)的萃取(qu)物。在某(mou)些實(shi)施(shi)例(li)中(zhong)(zhong)，該(gai)(gai)(gai)沉(chen)(chen)淀物的干燥可(ke)(ke)使(shi)用(yong)如(ru)真空烘(hong)箱或噴霧干燥法(fa)，溫度(du)為約60-70℃。.

實施例2:

使用核(he)磁(ci)共振光譜測定被純(chun)化的萃取物

使用核磁共振光譜儀(NMR)來測定被純化萃取物的組成。萃取物的檢測是使用¹H NMR光譜儀記錄，樣品使用99.9atom％D₂O以中間凍干交換兩次，最后溶解于D₂O之中。¹H的化學位移以內部參照組丙酮為基準且以ppm表示，并使用1D300-MHz的¹H NMR光譜記錄。甲基化分析也用于糖苷鍵。于此過程之中，分子可以被完全O-甲基化。該產品可以通過連續水解被轉化為得到的部分O-甲基化的單位，這是使用NaBH₄來還原，接著經乙酰(xian)化(hua)(hua)以(yi)提供部分O-甲基(ji)化(hua)(hua)的單位，這是在(zai)GC-MS(氣相(xiang)色(se)譜-質(zhi)譜)，具有典(dian)型的保留時間及電子沖擊光譜，此多糖(tang)萃取(qu)物從(cong)連續的純(chun)化(hua)(hua)步驟包(bao)括L-鼠(shu)李糖(tang)，L-阿(a)拉伯糖(tang)，D-葡萄糖(tang)和(he)(he)D-半乳(ru)糖(tang)與(yu)主鏈(lian)為1,6-和(he)(he)1,2,6-吡(bi)喃半乳(ru)糖(tang)基(ji)和(he)(he)1,5-和(he)(he)1,3,5-阿(a)拉伯呋喃糖(tang)基(ji)，以(yi)及次要鏈(lian)為1,4-和(he)(he)1,4,6-吡(bi)喃葡萄糖(tang)基(ji)和(he)(he)1,2-和(he)(he)1,2,4-鼠(shu)李吡(bi)喃糖(tang)基(ji)顯(xian)示出與(yu)下述的體內/體外(wai)神經保護相(xiang)關的生物學(xue)功能(neng)。(圖(tu)1)

顯然該黃芪萃取物由具有復雜的多糖異構結構所組成，使用系統地來分析黃芪萃取物，可以得出結論，在樣品中有兩種類型的多糖：一種α-1,4-鍵結和一種α-1,6-鍵結的形式，由¹H NMR光譜測定(α-1,4:α-1,6)的碳(tan)水化合(he)物部分的相對組成為(wei)4：1至8：1。

實施例3:

中風量(liang)表的臨床說明和使(shi)用(yong)

1.格拉斯(si)哥(ge)(ge)預(yu)后量表(GOS，Glasgow outcome scale)：格拉斯(si)哥(ge)(ge)預(yu)后量表被開(kai)發(fa)來(lai)廣泛(fan)定(ding)義因頭部(bu)外傷(shang)(shang)或非外傷(shang)(shang)性腦損(sun)傷(shang)(shang)造(zao)成(cheng)的嚴(yan)重腦損(sun)傷(shang)(shang)結果(guo)分(fen)類，此量表反映了殘疾(ji)(ji)和障礙，而不是(shi)(shi)損(sun)傷(shang)(shang)，也就(jiu)是(shi)(shi)說，它(ta)的重點是(shi)(shi)在(zai)損(sun)傷(shang)(shang)如何(he)影響到正(zheng)常生活的主要領域，而不是(shi)(shi)傷(shang)(shang)害(hai)造(zao)成(cheng)特(te)定(ding)缺陷和癥狀，它(ta)不適(shi)合在(zai)提供關于(yu)個別病人的困難的詳(xiang)細(xi)狀況(kuang)，主要是(shi)(shi)提供整(zheng)體結果(guo)的一般指(zhi)標(biao)，該格拉斯(si)哥(ge)(ge)預(yu)后量表分(fen)為5等評(ping)級(死(si)亡，植物人，重度殘疾(ji)(ji)，中度殘疾(ji)(ji)，和恢復良(liang)好)

2.雷(lei)氏修正量表(mRS，Modified Rankin scale)：雷(lei)氏修正量表是一種常(chang)(chang)用的量表來(lai)評估腦中風(feng)(feng)或(huo)神(shen)經殘疾患(huan)者等原因造(zao)成的日常(chang)(chang)生活(huo)活(huo)動依賴狀況，它已成為最廣泛使(shi)用在(zai)中風(feng)(feng)臨(lin)床試驗的臨(lin)床測量結果。

3.巴(ba)氏(shi)(shi)量表(BI，Barthel Index)：巴(ba)氏(shi)(shi)量表是一種日常生活(huo)(huo)功(gong)(gong)能評(ping)(ping)估(gu)量表，每(mei)個(ge)日常生活(huo)(huo)功(gong)(gong)能項目(mu)(mu)具有一個(ge)分數(shu)區間(jian)，依(yi)據病(bing)人狀況(kuang)給定(ding)一個(ge)分數(shu)，再依(yi)被評(ping)(ping)分數(shu)評(ping)(ping)估(gu)該病(bing)人等級，采用(yong)10個(ge)評(ping)(ping)估(gu)變項說明(ming)日常生活(huo)(huo)功(gong)(gong)能和(he)移動力。評(ping)(ping)估(gu)分數(shu)越高，表示出院(yuan)后于家里的生活(huo)(huo)獨立性程度高。各項目(mu)(mu)的給分是依(yi)據該項目(mu)(mu)活(huo)(huo)動障礙需(xu)要多少時間(jian)、物(wu)理(li)協(xie)助而定(ding)。

4.功能(neng)獨立量(liang)表(biao)(FIM，Functional independencemeasure)：功能(neng)獨立量(liang)表(biao)(FIM)是(shi)一個(ge)評估工(gong)具(ju)，目的(de)(de)(de)是(shi)在中風(feng)，腦外傷，脊髓損傷或(huo)癌癥整(zheng)個(ge)康復(fu)過程評估患者的(de)(de)(de)功能(neng)狀態。它(ta)(ta)的(de)(de)(de)使用(yong)范(fan)圍包括嚴重(zhong)，亞急性和康復(fu)護(hu)(hu)理(li)的(de)(de)(de)技術護(hu)(hu)理(li)機構和醫院。它(ta)(ta)作(zuo)為一個(ge)用(yong)于比(bi)較連續健康照護(hu)(hu)康復(fu)成果一致(zhi)性的(de)(de)(de)數據(ju)收集工(gong)具(ju)。

實施例4:

使(shi)用(yong)黃(huang)芪萃取物治療出血性中(zhong)風患者的有利臨床結果

1.實驗設計

該試驗(yan)(yan)納入經臨床診斷為急性(xing)(xing)出(chu)血(xue)性(xing)(xing)腦出(chu)血(xue)病人，包含男性(xing)(xing)和女(nv)性(xing)(xing)患(huan)者，平均(jun)年齡42-70歲(sui)，總共有47名患(huan)者(實驗(yan)(yan)組(zu)22例，對照組(zu)25例)。

每一組(zu)除了常(chang)規(gui)治療之外，治療方式如下：1)對(dui)照組(zu)接受(shou)安慰劑(生理鹽(yan)水溶液(ye))；2)實驗組(zu)接受(shou)黃(huang)芪萃(cui)取(qu)物，從住院(yuan)第二天起每周三次，連(lian)續(xu)2周。

實驗組(zu)使用本(ben)發明的黃芪萃取物的組(zu)合物(包含(han)22例(li))，對照(zhao)組(zu)使用生(sheng)理鹽水溶液(包含(han)25例(li))。

比(bi)較實驗(yan)組(zu)和(he)對照組(zu)中(zhong)(zhong)風(feng)后(hou)(hou)(hou)(hou)(hou)格拉(la)斯哥預后(hou)(hou)(hou)(hou)(hou)量表(biao)(GOS)分(fen)數(shu)(4-5)(4-5:中(zhong)(zhong)度(du)殘疾(ji)至(zhi)恢復(fu)良好(后(hou)(hou)(hou)(hou)(hou)遺癥(zheng)程度(du)低(di)者)；分(fen)數(shu)(0-3)(0-3:死亡至(zhi)嚴重(zhong)殘疾(ji))的(de)(de)(de)人數(shu)比(bi)例(li)(li)(li)。結(jie)果(guo)顯(xian)示使用本發明(ming)組(zu)合物(黃芪萃(cui)取物)的(de)(de)(de)治療(liao)(liao)組(zu)于(yu)中(zhong)(zhong)風(feng)后(hou)(hou)(hou)(hou)(hou)3個(ge)月期間，不論是治療(liao)(liao)期間(中(zhong)(zhong)風(feng)后(hou)(hou)(hou)(hou)(hou)第7天)或(huo)治療(liao)(liao)后(hou)(hou)(hou)(hou)(hou)(中(zhong)(zhong)風(feng)后(hou)(hou)(hou)(hou)(hou)第28及84天)的(de)(de)(de)GOS分(fen)數(shu)(4-5)的(de)(de)(de)人數(shu)比(bi)例(li)(li)(li)皆高于(yu)安(an)慰(wei)劑對照組(zu)(如圖(tu)2所示)，于(yu)中(zhong)(zhong)風(feng)后(hou)(hou)(hou)(hou)(hou)84天觀察，差(cha)異(yi)達30％，且隨(sui)時間增加人數(shu)比(bi)例(li)(li)(li)的(de)(de)(de)幅度(du)較安(an)慰(wei)劑對照組(zu)更趨明(ming)顯(xian)，顯(xian)示本發明(ming)組(zu)合物具可治療(liao)(liao)腦中(zhong)(zhong)風(feng)后(hou)(hou)(hou)(hou)(hou)遺癥(zheng)，加速病患復(fu)原的(de)(de)(de)療(liao)(liao)效(xiao)(如圖(tu)2所示)，在第84天的(de)(de)(de)功能結(jie)果(guo)測量，安(an)慰(wei)劑對照組(zu)的(de)(de)(de)GOS分(fen)數(shu)(4-5)人數(shu)比(bi)例(li)(li)(li)為(wei)56％，而實驗(yan)組(zu)的(de)(de)(de)GOS分(fen)數(shu)(4-5)人數(shu)比(bi)例(li)(li)(li)為(wei)86.4％。

2.改良(liang)雷氏修正量表(mRS)測試

比(bi)較(jiao)實(shi)驗組(zu)(zu)和對照(zhao)組(zu)(zu)的(de)中(zhong)(zhong)風(feng)(feng)后發(fa)生mRS分(fen)(fen)數(0-2)(0-2:無殘疾(ji)至輕度殘疾(ji)(后遺癥程度低者)；分(fen)(fen)數(3-5)(3-5:中(zhong)(zhong)度至嚴(yan)重殘疾(ji))的(de)人(ren)數比(bi)例(li)(li)。結果顯示(shi)(shi)使(shi)用本(ben)發(fa)明組(zu)(zu)合物的(de)治(zhi)(zhi)療(liao)組(zu)(zu)的(de)mRS分(fen)(fen)數(0-2)的(de)人(ren)數比(bi)例(li)(li)皆(jie)高(gao)(gao)于安慰(wei)劑對照(zhao)組(zu)(zu)(如圖3所示(shi)(shi))，中(zhong)(zhong)風(feng)(feng)后第84天觀察的(de)mRS分(fen)(fen)數(0-2)的(de)人(ren)數比(bi)例(li)(li)高(gao)(gao)于安慰(wei)劑治(zhi)(zhi)療(liao)組(zu)(zu)，差異(yi)達(da)26％，顯示(shi)(shi)本(ben)發(fa)明組(zu)(zu)成物具可治(zhi)(zhi)療(liao)腦(nao)中(zhong)(zhong)風(feng)(feng)后遺癥，加速病患復原的(de)療(liao)效如圖3所示(shi)(shi)，在中(zhong)(zhong)風(feng)(feng)后第84天，安慰(wei)劑組(zu)(zu)的(de)mRS分(fen)(fen)數(0-2)人(ren)數比(bi)例(li)(li)為(wei)56％，而(er)治(zhi)(zhi)療(liao)組(zu)(zu)的(de)mRS分(fen)(fen)數(0-2)人(ren)數比(bi)例(li)(li)為(wei)81.8％。

3.腫瘤(liu)壞死因子(TNF)量測

實(shi)驗(yan)組使用(yong)(yong)(yong)本(ben)發(fa)(fa)明(ming)的(de)(de)黃(huang)芪萃(cui)取物(wu)的(de)(de)組合物(wu)(包(bao)含(han)22例(li))，對(dui)照組使用(yong)(yong)(yong)生(sheng)理鹽水(shui)溶(rong)液(包(bao)含(han)25患(huan)者(zhe))。相對(dui)于(yu)ICH(顱內出血)發(fa)(fa)生(sheng)的(de)(de)第一天，治療組的(de)(de)腫(zhong)瘤壞死因(yin)子(TNF)在(zai)第7天和(he)第14天數值(zhi)顯著比安慰劑組降(jiang)低，TNF在(zai)中風進展扮(ban)演關鍵角色(se)，起關鍵性作(zuo)用(yong)(yong)(yong)，在(zai)本(ben)研究中，結果表(biao)明(ming)本(ben)發(fa)(fa)明(ming)的(de)(de)黃(huang)芪萃(cui)取物(wu)可治腦(nao)中風的(de)(de)后遺癥，提高患(huan)者(zhe)的(de)(de)恢復(fu)(表(biao)1)。

表1.腫瘤(liu)壞死因(yin)子(TNF)量測(ce)

資料為平均值±標準偏差.*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001為配對測試(paired test)；&:獨立測試(independent test for continuous data)；$:Wilcoxon rank sum test

腫瘤壞死因子(zi)(TNF)和中風預后(hou)指數(GOS and mRS)的相關性

根(gen)據該實(shi)驗結(jie)果(guo)，腫瘤壞死(si)因(yin)子(TNF)數值和(he)GOS評分值的分析(xi)呈負相(xiang)關，但TNF數值和(he)mRS分數為(wei)直接相(xiang)關(表(biao)2)。人們已經知(zhi)道了(le)在急性中(zhong)風患者血(xue)漿中(zhong)腫瘤壞死(si)因(yin)子(TNF)提升(sheng)，這(zhe)些結(jie)果(guo)表(biao)明，本發明的黃芪(qi)萃(cui)取物可以治療(liao)腦中(zhong)風的后(hou)遺癥，并增加患者的恢(hui)復。

表2.腫瘤(liu)壞死因子(TNF)和中風預后指數(GOS and mRS)的關(guan)系

實施例5

黃芪萃取物治(zhi)療腦部缺血性中風(feng)的體外模型

在體外的初代皮質細胞(Primary cortical cells,PCC)治療模型中，初代皮質細胞是從懷孕第17天的Sprague-Dawley大鼠胚胎的大腦皮層所制備，如先前描述修正。分離后四天，使用MEM培養基(MEM，GIBCO-BRL)再加入0.5g/L的牛血清白蛋白、2％B27補充劑、0.5mM的丙酮酸和抗生素于MEM培養基中。最后，該培養基在第七天被改為無牛血清的Neurobasal培養基，此培養基包含有1mM丙酮酸、1mM的谷氨酸、0.5g/L的牛血清白蛋白和2％B27添加劑和抗生素。針對缺氧缺糖模型(OGD)治療，細胞培養在無葡萄糖的Earle’s balanced鹽溶液(Earle’s平衡鹽溶液)，并培養于37℃低氧室中6-8小時(Bug Box,Ruskinn Technology)，培養環境持續提供95％N₂和5％CO₂并保持氣(qi)相中的氧(yang)分壓(ya)小于1毫米汞柱(使用(yong)OM-14的氧(yang)監(jian)測(ce)系統，SensorMedics公(gong)司(si))。在(zai)同一(yi)期間(jian)對照組(zu)細胞(bao)培(pei)養在(zai)無葡萄糖的Earle’s balanced鹽溶液，并在(zai)含氧(yang)量正常的培(pei)養箱(xiang)做培(pei)養。

乳酸脫氫酶(LDH)的測試方法(fa)

為了(le)證明本發明黃芪(qi)(qi)萃取(qu)(qu)物具有神經保護能力，先(xian)將初代皮質細胞先(xian)培(pei)養在24孔盤(pan)，并且預先(xian)加入各(ge)種濃度(du)(du)的(de)黃芪(qi)(qi)萃取(qu)(qu)物(濃度(du)(du)分(fen)別(bie)為0.1μM、1μM和10μM)，黃芪(qi)(qi)萃取(qu)(qu)物預處理的(de)20分(fen)鐘后(hou)，初代皮質細胞經受OGD在低氧室中培(pei)養6-8小時(shi)，然后(hou)如(ru)所述的(de)培(pei)養基(ji)中收集乳酸脫氫酶(mei)(LDH)活性測定(J Neurosci Methods 1987；20:83-90)。

評估黃(huang)(huang)芪(qi)(qi)萃取(qu)物在(zai)(zai)體外(wai)的神(shen)經保護作用結果，在(zai)(zai)OGD誘發(fa)神(shen)經毒性(xing)的條件下使用各種劑量黃(huang)(huang)芪(qi)(qi)萃取(qu)物進行治療(0.1μM,1μM和10μM)，測試初(chu)代皮質(zhi)細(xi)胞的乳酸脫氫酶(LDH)活性(xing)(如(ru)圖(tu)4所示)。結果顯(xian)示10μM的黃(huang)(huang)芪(qi)(qi)萃取(qu)物治療組相較于對照組顯(xian)著降低乳酸脫氫酶(LDH)活性(xing)。(如(ru)圖(tu)4所示)。

黃芪(qi)萃取物治療(liao)腦缺血(xue)中風的腦缺血(xue)動物模(mo)型

體內腦(nao)(nao)缺血(xue)動物模型測(ce)試步驟如(ru)下(xia)，使(shi)用(yong)(yong)(yong)成年雄性Sprague-Dawley大(da)(da)鼠(shu)(體重250-300克)，將大(da)(da)鼠(shu)先用(yong)(yong)(yong)水合(he)氯醛(0.4克/公(gong)斤，IP)麻(ma)醉(zui)，并進行(xing)結扎(zha)右(you)(you)(you)大(da)(da)腦(nao)(nao)中(zhong)(zhong)(zhong)動脈(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(MCA)和夾(jia)(jia)緊雙側(ce)(ce)頸總(zong)動脈(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(CCA)如(ru)期刊所述(shu)(Stroke 1986；17:738-743)，以及使(shi)用(yong)(yong)(yong)非創傷(shang)性動脈(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)修剪來夾(jia)(jia)緊雙側(ce)(ce)頸總(zong)動脈(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(CCA)。使(shi)用(yong)(yong)(yong)顯微(wei)鏡手(shou)術，在(zai)顴骨融合(he)鱗(lin)骨處鉆(zhan)探2cm×2cm的開顱(lu)手(shou)術，然后將右(you)(you)(you)大(da)(da)腦(nao)(nao)中(zhong)(zhong)(zhong)動脈(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(MCA)用(yong)(yong)(yong)10-0尼龍(long)縫(feng)線(xian)結扎(zha)，使(shi)用(yong)(yong)(yong)激光多普勒(le)流(liu)量(liang)(liang)計(PF-5010,Periflux system,Perimed AB,Stockholm,Sweden)連續測(ce)量(liang)(liang)被麻(ma)醉(zui)動物的大(da)(da)腦(nao)(nao)皮(pi)層血(xue)流(liu)量(liang)(liang)。光電檢測(ce)器的探針(直徑(jing)0.45毫(hao)(hao)米(mi)(mi))立體定位放置在(zai)通過顱(lu)骨鉆(zhan)的孔洞(直徑(jing)1毫(hao)(hao)米(mi)(mi))在(zai)額頂葉皮(pi)質(l.3毫(hao)(hao)米(mi)(mi)后部，2.8毫(hao)(hao)米(mi)(mi)外側(ce)(ce)到前(qian)囟(xin)門，和硬腦(nao)(nao)膜以下(xia)1.0毫(hao)(hao)米(mi)(mi))。然后，再使(shi)用(yong)(yong)(yong)26號注(zhu)射器插入(ru)實驗大(da)(da)鼠(shu)右(you)(you)(you)股靜脈(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)注(zhu)射，右(you)(you)(you)大(da)(da)腦(nao)(nao)中(zhong)(zhong)(zhong)動脈(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(MCA)結扎(zha)30分鐘后，將實驗大(da)(da)鼠(shu)靜脈(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)注(zhu)射不同濃度(du)黃(huang)芪萃取物(在(zai)生理食(shi)鹽水中(zhong)(zhong)(zhong)1、10、25和50毫(hao)(hao)克/公(gong)斤的濃度(du))或僅模擬(ni)操(cao)作無(wu)治(zhi)療連續三天。在(zai)局(ju)部缺血(xue)中(zhong)(zhong)(zhong)風90分鐘后，移除右(you)(you)(you)大(da)(da)腦(nao)(nao)中(zhong)(zhong)(zhong)動脈(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(MCA)的10-0縫(feng)合(he)線(xian)和在(zai)雙側(ce)(ce)頸總(zong)動脈(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)(CCA)的動脈(mo)(mo)(mo)(mo)(mo)夾(jia)(jia)以允許再灌注(zhu)。在(zai)麻(ma)醉(zui)恢復期間進一步使(shi)用(yong)(yong)(yong)熱燈來維持37℃的體溫。

1.神經(jing)行(xing)為的測量.

在(zai)腦(nao)缺(que)血之前(qian)3天和(he)之后72小(xiao)時進(jin)行評估(gu)，該(gai)測(ce)(ce)試測(ce)(ce)量(liang)身體不(bu)對稱性和(he)活(huo)動能力(li)(li)如前(qian)所述(Stroke 2003；34:558-564)，進(jin)一步(bu)用握(wo)(wo)力(li)(li)計(TSE-Systems)來分析抓(zhua)握(wo)(wo)力(li)(li)量(liang)，如先前(qian)描述修正(NeurosciLett 1998；246:1-4)。改善抓(zhua)握(wo)(wo)力(li)(li)量(liang)比(bi)例的量(liang)測(ce)(ce)，是先單獨(du)的對于(yu)每個前(qian)肢做測(ce)(ce)試，再計算(suan)每個同側的和(he)對側的拉力(li)(li)相對于(yu)腦(nao)缺(que)血的一邊，平均大(da)于(yu)20拉力(li)(li)的比(bi)例。此外(wai)，治療后及基底值的抓(zhua)握(wo)(wo)力(li)(li)量(liang)的比(bi)例及相對于(yu)基底值變化的百分比(bi)也會(hui)被計算(suan)。

2.氯化三苯基(ji)(TTC)染(ran)色

腦缺血手(shou)術后三(san)天(tian)，將動(dong)物進行心內灌注生理食鹽水，

再(zai)移(yi)除腦(nao)(nao)部組織，將(jiang)其(qi)浸入冷生理鹽水5分鐘，并切(qie)成2毫米厚的(de)(de)(de)切(qie)片(每只大(da)(da)(da)(da)鼠7片)，將(jiang)腦(nao)(nao)部切(qie)片培養在20克/升(sheng)的(de)(de)(de)TTC(Research Organics Inc)，溶解在食(shi)鹽水中設定溫度(du)為37度(du)進(jin)行30分鐘，然后再(zai)放至(zhi)5％的(de)(de)(de)甲醛(quan)溶液來固定腦(nao)(nao)部切(qie)片，使用(yong)電子顯(xian)微鏡(jing)測(ce)定每個(ge)切(qie)片的(de)(de)(de)梗(geng)塞(sai)(sai)(sai)(sai)面(mian)(mian)積(ji)(ji)，如先(xian)前(qian)期刊所描述(shu)方(fang)法(fa)(fa)(JNeurosci 1997；17:4341-4348)。切(qie)片體積(ji)(ji)的(de)(de)(de)大(da)(da)(da)(da)小(xiao)數據測(ce)量(liang)(liang)方(fang)法(fa)(fa)，先(xian)將(jiang)腦(nao)(nao)部組織進(jin)行切(qie)片，平均的(de)(de)(de)切(qie)片厚度(du)為2毫米再(zai)測(ce)量(liang)(liang)各(ge)切(qie)片的(de)(de)(de)梗(geng)塞(sai)(sai)(sai)(sai)面(mian)(mian)積(ji)(ji)。為了減少人為因素的(de)(de)(de)誤判，梗(geng)塞(sai)(sai)(sai)(sai)的(de)(de)(de)面(mian)(mian)積(ji)(ji)的(de)(de)(de)計算方(fang)式也(ye)使用(yong)先(xian)前(qian)所述(shu)的(de)(de)(de)方(fang)法(fa)(fa)(Stroke 1993；24:117-121)。為了測(ce)量(liang)(liang)右大(da)(da)(da)(da)腦(nao)(nao)皮(pi)層的(de)(de)(de)梗(geng)塞(sai)(sai)(sai)(sai)面(mian)(mian)積(ji)(ji)，我們(men)從(cong)左(zuo)半(ban)球(qiu)的(de)(de)(de)總大(da)(da)(da)(da)腦(nao)(nao)皮(pi)質面(mian)(mian)積(ji)(ji)減去在右大(da)(da)(da)(da)腦(nao)(nao)皮(pi)質的(de)(de)(de)非梗(geng)塞(sai)(sai)(sai)(sai)區域。

3.使用磁共振(zhen)成像(MRI)來測量腦梗塞體積(ji)

磁共振(zhen)成像(MRI)使用3.0T的(de)美(mei)國通用電(dian)氣的(de)影像系統(GE，R4).大(da)(da)鼠(shu)掃描的(de)腦(nao)(nao)組(zu)織約6至8張(zhang)冠狀圖(tu)像切(qie)片(pian)，每(mei)個切(qie)片(pian)為(wei)連(lian)續(xu)式的(de)2毫米切(qie)片(pian)，取得T2-weighted imaging(T2WI)脈沖(chong)序列與使用自旋回波(bo)技術(spin-echo technique)(重復時間:4000毫秒；回波(bo)時間:105毫秒)，取得每(mei)只動物在腦(nao)(nao)缺血后14天被拍攝記錄。為(wei)了測量在右(you)大(da)(da)腦(nao)(nao)皮(pi)質(zhi)的(de)腦(nao)(nao)梗(geng)塞面積(ji)(ji)，我們在從大(da)(da)腦(nao)(nao)左半(ban)球的(de)總皮(pi)質(zhi)區域(yu)中減去右(you)大(da)(da)腦(nao)(nao)皮(pi)質(zhi)非梗(geng)塞面積(ji)(ji)，腦(nao)(nao)梗(geng)塞的(de)面積(ji)(ji)被人工繪(hui)制(zhi)從切(qie)片(pian)到(dao)切(qie)片(pian)，然后體積(ji)(ji)透過內部體積(ji)(ji)分析軟件(Voxtool,General Electric)來計算。

參考所有(you)在說明書中的實施例，所有(you)結(jie)果(guo)顯示改良(liang)制程后生產出的黃芪萃(cui)取物效(xiao)果(guo)大于一(yi)般生產制備的黃芪萃(cui)取物。

根據(ju)此(ci)機制(zhi)，我們提出了外源(yuan)性的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)黃(huang)芪(qi)萃(cui)(cui)取(qu)物(wu)(wu)(wu)可當作治(zhi)療(liao)(liao)方法促進(jin)中風后(hou)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)功(gong)能(neng)恢復。為選擇黃(huang)芪(qi)萃(cui)(cui)取(qu)物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)最有(you)效(xiao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)治(zhi)療(liao)(liao)劑量(liang)，使(shi)用氯化三苯基(TTC)染色檢測(ce)分別(bie)經(jing)(jing)1、10、25和50毫克/公(gong)(gong)斤(jin)(jin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)黃(huang)芪(qi)萃(cui)(cui)取(qu)物(wu)(wu)(wu)處理(li)(li)(li)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)大(da)(da)(da)鼠(shu)(shu)來測(ce)定腦(nao)缺(que)(que)(que)血(xue)梗(geng)塞。在(zai)(zai)(zai)(zai)腦(nao)缺(que)(que)(que)血(xue)后(hou)3天(tian)，給(gei)予50毫克/公(gong)(gong)斤(jin)(jin)黃(huang)芪(qi)萃(cui)(cui)取(qu)物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)大(da)(da)(da)鼠(shu)(shu)腦(nao)梗(geng)塞體(ti)(ti)積遠(yuan)遠(yuan)小于在(zai)(zai)(zai)(zai)其(qi)他(ta)劑量(liang)組(zu)(zu)(如圖(tu)5A、5B)。在(zai)(zai)(zai)(zai)腦(nao)缺(que)(que)(que)血(xue)后(hou)7天(tian)，使(shi)用核(he)磁(ci)共(gong)振成像來評估腦(nao)梗(geng)塞體(ti)(ti)積和最大(da)(da)(da)梗(geng)塞切片(pian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)面積，50毫克/公(gong)(gong)斤(jin)(jin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)黃(huang)芪(qi)萃(cui)(cui)取(qu)物(wu)(wu)(wu)治(zhi)療(liao)(liao)大(da)(da)(da)鼠(shu)(shu)與對(dui)(dui)照組(zu)(zu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)大(da)(da)(da)鼠(shu)(shu)相比(bi)(bi)是顯(xian)著(zhu)減少，(見圖(tu)5C～5E)。接(jie)著(zhu)評估黃(huang)芪(qi)萃(cui)(cui)取(qu)物(wu)(wu)(wu)治(zhi)療(liao)(liao)組(zu)(zu)或生理(li)(li)(li)食鹽水(shui)處理(li)(li)(li)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)對(dui)(dui)照組(zu)(zu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)神經(jing)(jing)功(gong)能(neng)缺(que)(que)(que)損的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)恢復，包含身(shen)體(ti)(ti)不對(dui)(dui)稱、活(huo)動(dong)能(neng)力(li)(li)測(ce)試及(ji)握力(li)(li)測(ce)量(liang)，黃(huang)芪(qi)萃(cui)(cui)取(qu)物(wu)(wu)(wu)治(zhi)療(liao)(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)大(da)(da)(da)鼠(shu)(shu)表現在(zai)(zai)(zai)(zai)身(shen)體(ti)(ti)擺(bai)動(dong)測(ce)試比(bi)(bi)生理(li)(li)(li)食鹽水(shui)處理(li)(li)(li)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)對(dui)(dui)照組(zu)(zu)更(geng)(geng)好(hao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)恢復能(neng)力(li)(li)(圖(tu)6A)，在(zai)(zai)(zai)(zai)大(da)(da)(da)鼠(shu)(shu)腦(nao)缺(que)(que)(que)血(xue)后(hou)接(jie)受黃(huang)芪(qi)萃(cui)(cui)取(qu)物(wu)(wu)(wu)與對(dui)(dui)照組(zu)(zu)相比(bi)(bi)，前(qian)者運動(dong)活(huo)動(dong)能(neng)力(li)(li)是大(da)(da)(da)大(da)(da)(da)改善(shan)(圖(tu)6B～6D)，此(ci)外，比(bi)(bi)較腦(nao)缺(que)(que)(que)血(xue)前(qian)及(ji)缺(que)(que)(que)血(xue)后(hou)28天(tian)前(qian)肢(zhi)握力(li)(li)結(jie)果顯(xian)示黃(huang)芪(qi)萃(cui)(cui)取(qu)物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)治(zhi)療(liao)(liao)組(zu)(zu)比(bi)(bi)對(dui)(dui)照組(zu)(zu)有(you)一個更(geng)(geng)好(hao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)握力(li)(li)(圖(tu)6E)。

雖然本發明(ming)已(yi)經在(zai)具(ju)體的示例性實施方案(an)和例子進(jin)(jin)行了說明(ming)，但是應該理解的是，本文所(suo)揭露(lu)的實施例僅用(yong)于(yu)說明(ming)的目的，可(ke)由(you)本領(ling)域(yu)技術人員在(zai)不脫離本發明(ming)的精(jing)神和范圍如(ru)在(zai)下面權利進(jin)(jin)行各種變(bian)形和變(bian)更。

最重要(yao)的(de)是發(fa)(fa)現黃芪萃取物在(zai)動物和人體(ti)的(de)研究能(neng)有(you)效(xiao)地減(jian)少腦損傷(shang)和提高(gao)功(gong)能(neng)效(xiao)果，綜上所述，本(ben)發(fa)(fa)明所制造的(de)黃

芪萃取物(wu)是一種極好(hao)的候選藥物(wu)來預(yu)防和(he)治療腦損傷。