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同源伴侶元件及其在提高PET塑料降解酶可溶性表達中的應用

文檔序號:39427171發布日期:2024-09-20 22:25閱讀:來源(yuan):國知(zhi)局

技術特征:

1.一種同源伴(ban)侶元(yuan)件,其(qi)特征在于,所述(shu)同源伴(ban)侶元(yuan)件來源于大阪伊德氏桿菌菌株,包含如下任意一種或(huo)者組(zu)合的分(fen)子(zi)伴(ban)侶:

2.一種工(gong)程質粒(li),所述工(gong)程質粒(li)攜(xie)帶權(quan)利要求1中同源伴侶元件。

3.含有權(quan)利要求1中同源伴侶元件的表達載體。

4.根據權(quan)利要(yao)求(qiu)3所述的表(biao)達載體,其特征在于,所述同(tong)源伴侶元件的上游(you)為(wei)啟動子、下游(you)為(wei)目的蛋白基(ji)因(yin)。

5.根據權利(li)要求4所述(shu)的表達(da)載體(ti),其特征在于(yu),所述(shu)的目的蛋白(bai)為來源于(yu)大阪伊(yi)德氏桿菌ideonella?sakaiensis?201-f6塑料降(jiang)解酶(mei)petase或者其突變(bian)體(ti)fast-petase。

6.一(yi)種宿主細(xi)胞,其特征在于,所(suo)述(shu)(shu)(shu)宿主細(xi)胞包(bao)(bao)含權利要(yao)求1所(suo)述(shu)(shu)(shu)的同源伴侶(lv)元件;或(huo)者(zhe),包(bao)(bao)含權利要(yao)求2所(suo)述(shu)(shu)(shu)的工程質粒;或(huo)者(zhe),包(bao)(bao)含權利要(yao)求3所(suo)述(shu)(shu)(shu)的表達載體。

7.權(quan)利要求1所述的(de)(de)同源(yuan)伴侶元件或權(quan)利要求2所述的(de)(de)工程質粒或權(quan)利要求3所述的(de)(de)表達載體或權(quan)利要求6所述的(de)(de)宿主細(xi)胞在(zai)生產重組蛋(dan)白及高效重組表達目的(de)(de)蛋(dan)白的(de)(de)應(ying)用。

8.權利要求1所(suo)(suo)述(shu)的同源伴侶元(yuan)件或權利要求2所(suo)(suo)述(shu)的工程質粒或權利要求3所(suo)(suo)述(shu)的表(biao)達載體或權利要求6所(suo)(suo)述(shu)的宿主細胞在提(ti)高pet塑(su)料降解酶可溶(rong)性(xing)表(biao)達中的應用。

9.一種(zhong)重組蛋(dan)白制備的方(fang)法,其特征在(zai)于,所述方(fang)法包括:將權利要(yao)求6所述的宿主細胞接種(zhong)至(zhi)液體(ti)(ti)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基中(zhong)37°c過夜培(pei)(pei)養(yang)(yang)種(zhong)子液體(ti)(ti),種(zhong)子液體(ti)(ti)再(zai)接種(zhong)至(zhi)搖(yao)瓶進(jin)行放大培(pei)(pei)養(yang)(yang),37°c培(pei)(pei)養(yang)(yang)3-4個小時(shi);然后在(zai)od=0.6-0.8時(shi)加(jia)入合(he)適濃度的誘導(dao)(dao)劑,在(zai)18°c誘導(dao)(dao)產酶培(pei)(pei)養(yang)(yang)24小時(shi);培(pei)(pei)養(yang)(yang)結(jie)束后,從培(pei)(pei)養(yang)(yang)液中(zhong)分(fen)離(li)純(chun)化得(de)到目的蛋(dan)白。


技術總結
本發明涉及了一種同源伴侶元件及其在提高PET塑料降解酶可溶性表達中的應用。此分子伴侶元件包含五類,其核苷酸序列分別為SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5,其對應的氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO.6、SEQ?ID?NO.7、SEQ?ID?NO.8、SEQ?ID?NO.9、SEQ?ID?NO.10所示。此同源分子伴侶元件能夠有效提高PET塑料降解酶FAST?PETase在大腸桿菌細胞中的表達水平,有助于異源表達過程中強疏水性目的蛋白的正確折疊,促進其可溶性表達,為解決塑料降解酶的高效重組表達與制備提供新的表達策略,在表達生產強疏水性目的蛋白以及構建高效PET降解菌株中均具有潛在的應用前景。

技術研發人員:周杰,吳婷,姜岷,謝彬,董維亮
受保護的技術使用者:南京工業大學
技術研發日:
技術公布日:2024/9/19
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