肽在抗生素抗性中的用圖
【專利摘要】本發明涉及增加抗生素針對細菌、特別是抗生素抗性細菌的有效性的組合物和方法。
【專利說明】
肽在抗生素抗性中的用途
[0001 ] 相關專利申請案的交叉參考
[0002] 本申請案要求2013年10月31日提交的臨時申請案美國申請案61/898,183的優先 權，所述臨時申請案以全文引用的方式并入本文中。本申請案要求2013年11月18日提交的 臨時申請案US申請案61/905，440的優先權，所述臨時申請案以全文引用的方式并入本文 中。
技術領域
[0003] 本發明涉及增加抗生素針對細菌、特別是抗生素抗性細菌的有效性的組合物和方 法。
【背景技術】
[0004] 抗生素使用已變得普遍并且是藥物治療的基石，用于治療范圍介于嚴重危及生命 的疾病至較輕微并且常常非細菌性疾病的感染。這種恒定抗生素壓力與細菌并入其它菌株 和密切相關物種的DNA的能力組合已經導致抗性性狀的進化和獲得。多重抗生素抗性菌株 現在分布廣泛并且細菌已經出現至少一種針對每一單個抗生素類別的抗性機制(并且常常 更多）。舉例來說，甲氧西林抗性金黃色葡萄球菌（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)是主要多重抗藥性細菌病原體中的一個，引起嚴重的社區 和醫院獲得性感染，如皮膚和軟組織感染、骨骼、關節和植入物感染、呼吸機相關肺炎和敗 血癥。據估計，多重抗藥性金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)感染在美國每年導致 19，000例死亡，以及相關的30-40億美元額外每年醫療保健費用。盡管此死亡率高，但是醫 藥流水線中仍存在相對較少的新抗細菌劑。實際上，近十年間研發的大部分抗生素是由現 有抗生素類別再經工程改造的分子，其潛在抗性機制已經存在。因此，迫切需要有效治療所 引起的感染、特別是由多重抗藥性細菌所引起的感染的新治療選擇。
[0005] 此前，已經表明在橫跨動物界的廣泛范圍生物體中所發現的肽可以使得微生物從 表面和彼此脫離，由此防止生物膜的形成。這些蛋白質和肽不是殺細菌的并且不影響細菌 生長。
[0006] 本發明人已經發現當與抗生素組合使用時，相同肽可以增加抗生素針對細菌、特 別是抗生素抗性物種的效力。

【發明內容】

[0007] 本發明大體上涉及增加抗生素針對細菌的有效性的領域，包含使所述細菌與所述 抗生素和包含序列roYDWY的肽接觸。本發明還涉及增加抗生素針對抗生素抗性細菌的有效 性，包含使所述抗生素抗性細菌與包含序列FDYDWY的肽接觸。
[0008] 如本文所用，術語"包含"和"包括"或其語法變體將視為指定所陳述的特征、整數、 步驟或組分，但是不排除添加一或多個額外特征、整數、步驟、組分或其群組。這一術語涵蓋 術語"由……組成"和"基本上由……組成"。
[0009] 短語"基本上由……組成"或其語法變體在本文中使用時將視為指定所陳述的特 征、整數、步驟或組分，但是不排除添加一或多個額外特征、整數、步驟、組分或其群組，不過 僅在所述額外特征、整數、步驟、組分或其群組實質上不改變所要求的組合物、裝置或方法 的基礎和新穎特征時。
[0010] 術語"方法"是指用于實現給定任務的方式、手段、技術和程序，包括(但不限于)化 學、生物學和生物物理學領域從業者已知的或易于由已知方式、手段、技術和程序開發的那 些方式、手段、技術和程序。
[0011 ]如本文所用，術語"約"是指± 10 %。
[0012] 如本文所用，術語抗生素的"殺細菌濃度"是所處理的細菌培養物不產生在適當的 培養基和培育條件下可以培養的任何細菌菌落的最小抗生素濃度。如本文所用，術語抗生 素的"最小殺細菌濃度"（MBC)是殺死特定細菌所需的最小或最低抗生素濃度。
[0013] 如本文所用，術語"接觸"是指安置本發明的肽和抗生素以使其直接或間接與細菌 接觸。因此，本發明涵蓋將本發明的組合物施用于所需表面和/或直接施用于細菌細胞。可 以使用所屬領域中已知的任何方法實現所述組合物與表面接觸，包括噴霧、展布、濕潤、浸 沒、浸漬、涂刷、超聲波焊接、焊接、粘結或粘附。肽和抗生素與細菌接觸還可以包括向有需 要的個體投與肽和抗生素。
[0014] 本發明的其它特征和優勢將從以下【具體實施方式】以及權利要求書顯而易知。
【附圖說明】
[0015] 圖la展現不同濃度的苯唑西林(oxacillin)單獨或與10nM grZ14s_nvCyc-起針 對金黃色葡萄球菌ATCC 43300(MRSA)(5X105CFU/mL)的測試結果。圖lb展現不同濃度的苯 P坐西林單獨或與10nM grZ14s_nvCyc-起針對金黃色葡萄球菌ATCC 25923(MSSA)(5X 105CFU/mL)的測試結果。
[0016] 圖2展現不同濃度的苯唑西林單獨或與10nM grZ14s-nvCyc-起針對7X106CFU/ mL細菌濃度的金黃色葡萄球菌ATCC 43300(MRSA)和金黃色葡萄球菌ATCC25923(MSSA)的測 試結果。
[0017] 圖3展現不同濃度的苯唑西林單獨或與10nM grZ14s_nvCyc-起針對金黃色葡萄 球菌ATCC 33591 (MRSA菌株）（5 X 107CFU/mL)和1 X 108CFU/mL細菌濃度的金黃色葡萄球菌 ATCC 25923(MSSA)的測試結果。
[0018] 圖4a展現不同濃度的苯唑西林單獨或與10nM grZ14s_nvCyc-起針對金黃色葡萄 球菌ATCC 33591 (MRSA菌株）（5X 105CFU/mL)的測試結果和苯唑西林單獨對于1 X 106CFU/mL 細菌濃度的金黃色葡萄球菌ATCC 25923(MSSA)的活性。圖4b展現不同濃度的苯唑西林單獨 或與10nM grZ14s-nvCyc-起針對金黃色葡萄球菌ATCC 25923(1 X 106CFU/mL)的測試結 果。
[0019] 圖5展現不同濃度的萬古霉素（vancomycin)單獨或與10nM grZ14s_nvCyc-起針 對屎腸球菌(Enterococcus faecium)ATCC 700221(萬古霉素、替考拉寧（teicoplanin)和 四環素(tetracyclin)抗性菌株）（4X 102CFU/mL)的測試結果。
[0020] 圖6展現不同濃度的替考拉寧單獨或與10nM grZ14s-nvCyc-起針對屎腸球菌 ATCC 700221(萬古霉素、替考拉寧和四環素抗性菌株)（2X102CFU/mL)的測試結果。
[0021 ] 圖7展現不同濃度的氨節西林(ampicillin)單獨或與ΙΟηΜ grZ14s_nvCyc-起針 對肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)ATCC 700603(MDR抗性菌株:具氨節西林、氨 曲南（aztreonam)、頭抱西丁（cefoxitin)、頭抱泊 Η虧（cefpodoxime)、頭抱他啶 (ceftazidime)、氯胺苯醇（chloramphenicol )、哌拉西林(piperacillin)、四環素抗性）（3 X105CFU/mL)的測試結果。
[0022] 圖8展現不同濃度的氨節西林單獨或與10nM grZ14s-nvCyc-起針對肺炎克雷伯 氏菌ATCC 700603(MDR抗性菌株:具氨芐西林、氨曲南、頭孢西丁、頭孢泊肟、頭孢他啶、氯胺 苯醇、哌拉西林、四環素抗性）（2 X 103CFU/mL)的測試結果。
[0023]圖9展現不同濃度的頭孢西丁單獨或與10nM grZ14s-nvCyc-起針對肺炎克雷伯 氏菌ATCC 700603(MDR抗性菌株:具氨芐西林、氨曲南、頭孢西丁、頭孢泊肟、頭孢他啶、氯胺 苯醇、哌拉西林、四環素抗性）（2 X 106CFU/mL)的測試結果。
[0024] 圖10展現不同濃度的亞胺培南（imipenem)單獨或與10nM grZ14s_nvCyc-起針對 肺炎克雷伯氏菌ATCCBAA? 1705 (碳青霉烯（carbapenem)-亞胺培南和厄他培南 (ertapenem)、阿米卡星（amikacin)、氨曲南、左氧氟沙星（levofloxacin)和環丙沙星 (ciprofloxacin)抗性菌株）（3 X 102CFU/mL)的測試結果。
[0025]圖11展現不同濃度的亞胺培南單獨或與10nM grZ14s-nvCyc-起針對肺炎克雷伯 氏菌ATCCBAA?1705(碳青霉烯-亞胺培南和厄他培南、阿米卡星、氨曲南、左氧氟沙星和環 丙沙星抗性菌株)（lX106CFU/mL)的測試結果。
[0026] 圖12展現不同濃度的莫匹羅星(mupirocin)單獨或與10nM grZ14s_nvCyc-起針 對金黃色葡萄球菌ATCC B A A ? 1708 (MRSA-mupA陽性菌株）（1 X 105CFU/mL)的測試結果。
[0027] 圖13a展現不同濃度的四環素單獨或與10nM grZ14s_nvCyc-起針對屎腸球菌 ATCC 700221(萬古霉素、替考拉寧和四環素抗性菌株）（lX103CFU/mL)的測試結果。圖13b 展現不同濃度的四環素單獨或與10nM grZ14s-nvCyC-起針對屎腸球菌ATCC700221(萬古 霉素、替考拉寧和四環素抗性菌株)（2X105CFU/mL)的測試結果。
[0028]圖14展現不同濃度的環丙沙星單獨或與10nM grZ14s-nvCyc-起針對肺炎克雷伯 氏菌ATCCBAAK L705(碳青霉烯-亞胺培南和厄他培南、阿米卡星、氨曲南、左氧氟沙星和環 丙沙星抗性菌株)（1 X 105CFU/mL)的測試結果。
[0029]圖15展現不同濃度的氯胺苯醇單獨或與10nM grZ14s-nvCyc-起針對肺炎克雷伯 氏菌ATCC 700603(MDR抗性菌株:具氨芐西林、氨曲南、頭孢西丁、頭孢泊肟、頭孢他啶、氯胺 苯醇、哌拉西林、四環素抗性）（4 X 106CFU/mL)的測試結果。
[0030]圖16展現不同濃度的氯胺苯醇單獨或與10nM grZ14s-nvCyc-起針對肺炎克雷伯 氏菌ATCC 700603(MDR抗性菌株:具氨芐西林、氨曲南、頭孢西丁、頭孢泊肟、頭孢他啶、氯胺 苯醇、哌拉西林、四環素抗性）（1 X 1 〇3CFU/mL)的測試結果。
[0031]圖17展現不同濃度的阿米卡星單獨或與10nM grZ14s-nvCyc-起針對肺炎克雷伯 氏菌ATCCBAA? 1705 (碳青霉烯-亞胺培南和厄他培南、阿米卡星、氨曲南、左氧氟沙星和環 丙沙星抗性菌株)（lX106CFU/mL)的測試結果。
[0032]圖18展現不同濃度的左氧氟沙星單獨或與10nM grZ14s-nvCyc-起針對肺炎克雷 伯氏菌ATCCBAA(§) 1705 (碳青霉烯-亞胺培南和厄他培南、阿米卡星、氨曲南、左氧氟沙星和 環丙沙星抗性菌株)（2X106CFU/mL)的測試結果。
[0033]圖19a展現不同濃度的氨曲南單獨或與10nM grZ14s-nvCyc-起針對肺炎克雷伯 氏菌ATCCBAAt) 1705 (碳青霉烯-亞胺培南和厄他培南、阿米卡星、氨曲南、左氧氟沙星和環 丙沙星抗性菌株）（lX105CFU/mL)的測試結果。圖19b展現不同濃度的氨曲南單獨或與10nM grZ14s-nvCyc-起針對肺炎克雷伯氏菌ATCCBAA?1705(lX103CFU/mL)的測試結果。
【具體實施方式】
[0034] 本文所述的方法是關于增加抗生素針對細菌的有效性，包含使所述細菌與所述抗 生素和包含序列FDYDWY的肽接觸。
[0035] 在一些實施例中，本發明是一種增加抗生素針對細菌的效力的方法，包含使所述 細菌與所述抗生素和包含序列FDYDWY的肽接觸。
[0036] 在一些實施例中，抗生素的效力增加或有效性增加是通過分析抗生素針對細菌的 最小殺細菌濃度來測量。因此，在一些實施例中，本發明是一種增加抗生素針對細菌的有效 性的方法，其中所述抗生素針對所述細菌的最小殺細菌濃度降低至少約5%、約10%、約 15%、約 20%、約 25%、約 30%、約35%、約40%、約45%、約 50%、約 55%、約60%、約65%、約 70%、約75%、約80%、約85%或約90%。最小殺細菌濃度(MBC)的降低百分比是通過在本發 明的肽存在和不存在的情況下MBC之間的差值除以在本發明的肽不存在的情況下的MBC并 且結果乘以100來測量。
[0037] 在一些實施例中，抗生素針對細菌的最小殺細菌濃度降低約5-25%、約10-30%、 約 20-60 %、約 20-40 %、約20-50 %、約40-90 %、約5-90 %、約 10-80 %、20-70 %、約30-60 % 或約 30-50 %。
[0038] 在一些實施例中，抗生素的效力增加或有效性增加是通過分析抗生素針對細菌的 殺細菌濃度來測量。
[0039] 在一些實施例中，抗生素的效力增加或有效性增加是通過測量抗生素的殺細菌濃 度來測量。因此，在一些實施例中，本發明是一種增加抗生素針對細菌的有效性的方法，其 中所述抗生素針對所述細菌的殺細菌濃度降低至少約5%、約10%、約15%、約20%、約 25%、約 30%、約 35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約 70%、約 75%、約 80%、約85%或約90%。殺細菌濃度的降低百分比是通過在本發明的肽存在和不存在的情 況下殺細菌濃度之間的差值除以在本發明的肽不存在的情況下的殺細菌濃度并且結果乘 以1〇〇來測量。
[0040] 在一些實施例中，抗生素針對細菌的殺細菌濃度降低約5-25%、約10-30%、約20- 60%、約20-40 %、約20-50%、約40-90 %、約5-90%、約 10-80%、20-70%、約30-60%或約 30-50% 〇 [0041]肽
[0042]本文所述的方法包含使細菌與抗生素和包含序列FDYDWY的肽接觸。舉例來說，所 述肽可以包含 FDYDWY、SFDYDWY、SFDYDWYN、HSFDYDWYN、VHSFDYDWYN、SVHSFDYDWYN、 SVHSFDYDWYNV、SVHSFDYDWYNVS、KSVHSFDYDWYNVS、KSVHSFDYDWYNVSD、NKSVHSFDYDWYNVSD、 NKSVHSFDYDWYNVSDQ、QNKSVHSFDYDWYNVSDQ、QNKSVHSFDYDWYNVSDQA、SQNKSVHSFDYDWYNVSDQ、 SQNKSVHSFDYDWYNVSDQA、FSQNKSVHSFDYDWYNVSDQA、FSQNKSVHSFDYDWYNVSDQAD、 SFSQNKSVHSFDYDWYNVSDQAD、SFSQNKSVHSFDYDWYNVSDQADL、SFSQNKSVHSFDYDWYNVSDQADLK、 SFSQNKSVHSFDYDWYNVSDQADLKN 或 CSFSQNKSVHSFDYDWYNVSDQADLKNC 或其組合中的至少一個。 [0043] 根據一些實施例，所述肽包含具有至多約20個、至多約25個、至多約30個、至多約 40個或至多約50個氨基酸的序列的一部分。
[0044] 在一些實施例中，本發明的肽在序列中具有兩個半胱氨酸。在一些實施例中，所述 半胱氨酸處于C端和N端。
[0045] 在一些實施例中，本發明的肽可以環化（即，呈環狀形式)并且因此在本申請案中 用術語"eye"指出。在一個實施例中，每個肽用C端處的半胱氨酸和N端處的半胱氨酸修飾， 其中所述C端和N端經S-S橋接。在特定實施例中，一或多個肽用C端處的半胱氨酸和N端處的 半胱氨酸修飾，其中所述C端和N端經S-S橋接。在其它實施例中，例如當肽中不在N端或C端 處的一或多個氨基酸彼此連接時，所述肽經內部環化。這種連接可以借助兩個半胱氨酸之 間的S-S橋接或可以是化學合成的共價連接，例如酯或酰胺基。
[0046] 在一些實施例中，本發明的肽可以任選地包含由一些類型的連接子連接的至少兩 個序列，使得第一肽序列的N端連接至連接子的C端并且第二肽序列的C端連接至連接子的N 端。
[0047] 在一些實施例中，所述肽具有序列CSVHSFDYDWYNVC。在一些實施例中，肽 CSVHSFDYDWYNVC借助C端和N端處的兩個半胱氨酸環化。
[0048] 在一些實施例中，所述肽是非環化的。
[0049] 在一些實施例中，所述肽是可溶的。在其它實施例中，所述肽附接至連接子。在一 些實施例中，所述連接子是聚乙二醇或棕櫚酸。在一些實施例中，所述肽是合成的。
[0050] 細菌物種
[0051] 在本發明方法的一些實施例中，細菌是革蘭氏陽性物種（gram pos i tive species)。在一些實施例中，細菌是革蘭氏陰性物種(gram negative species)。
[0052] 如本文所用，術語"革蘭氏陽性細菌"是指具有以下特征的細菌:其具有肽聚糖以 及多糖和/或磷壁酸作為其細胞壁結構的一部分并且通過其在革蘭氏染色程序中的藍-紫 色反應表征。代表性革蘭氏陽性細菌包括：放線菌屬（Actinomyces spp.)、炭疽桿菌 (Bacillus anthracis)、雙歧桿菌屬（Bif idobacterium spp ·)、肉毒梭菌（Clostridium botulinum)、產氣莢膜梭菌（Clostridium perfringens)、梭菌屬（Clostridium spp.)、破 傷風梭菌（Clostridium tetani)、白喉桿菌（Corynebacterium diphtheriae)、杰氏棒狀桿 菌(Corynebacterium jeikeium)、奠腸球菌(Enterococcus faecalis)、屎腸球菌、紅斑丹 毒絲菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)、真桿菌屬(Eubacterium spp ·)、陰道加德納菌 (Gardnerella vaginalis)、麻疼孿生球菌（Gemella mo rbillorum)、明串珠菌屬 (Leuconostoc spp ·)、胺腫分枝桿菌(Mycobacterium abscessus)、鳥型分支桿菌復合體 (Mycobacterium avium complex)、龜分枝桿菌(Mycobacterium chelonae)、偶發分枝桿菌 (Mycobacterium fortuitum)、嗜血分枝桿菌(Mycobacterium haemophilium)、堪薩斯分支 桿菌(Mycobacterium kansasii )、麻風分枝桿菌(Mycobacterium leprae)、海洋分枝桿菌 (Mycobacterium marinum)、瘰疬分枝桿菌(Mycobacterium scrofulaceum)、恥垢分枝桿菌 (Mycobacterium smegmatis)、土地分枝桿菌(Mycobacterium terrae)、結核分枝桿菌 (Mycobacterium tuberculosis)、潰瘍分枝桿菌(Mycobacterium ulcerans)、諾卡菌屬 (Nocardia spp·)、黑色消化球菌（Peptococcus niger)、消化鏈球菌屬 (?6卩七08以6卩七0(30(3(3118 8卩卩.）、丙酸菌屬（？1'0卩1'；!_011；^&(^61'；!_111118卩卩.）、藤黃八疊球菌 (Sarcina lutea)、金黃色葡萄球菌、耳葡萄球菌(Staphylococcus auricularis)、頭葡萄 球菌(Staphylococcus capitis)、科氏葡萄球菌(Staphylococcus cohnii)、表皮葡萄球菌 (Staphylococcus epidermidis)、溶血葡萄球菌（Staphylococcus haemolyticus)、人葡萄 球菌（Staphylococcus hominis)、路鄧葡萄球菌（Staphylococcus lugdanensis)、解糖葡 萄球菌（Staphylococcus saccharolyticus)、腐生葡萄球菌（Staphylococcus saprophyticus)、施氏葡萄球菌（Staphylococcus schleiferi)、模擬葡萄球菌 (Staphylococcus simiIans)、瓦氏葡萄球菌（Staphylococcus warneri)、木糖葡萄球菌 (Staphylococcus xylosus)、無乳鏈球菌（Streptococcus agalactiae，B族鏈球菌）、咽峽 炎鏈球菌（Streptococcus anginosus)、牛鏈球菌（Streptococcus bovis)、犬鏈球菌 (Streptococcus canis)、馬鏈球菌（Streptococcus equi)、米勒鏈球菌（Streptococcus mi 11 eri )、輕型鏈球菌（Streptococcus mitior)、變形鏈球菌（Streptococcus mutans)、肺 炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae)、釀胺鏈球菌（Streptococcus pyogenes，A族鏈球 菌）、唾液鏈球菌（Streptococcus salivarius)、血液鏈球菌（Streptococcus sanguis)。 [0053]如本文所用，術語"革蘭氏陰性細菌"是指特征在于存在雙重膜包圍每個細菌細胞 的細菌代表性革蘭氏陰性細菌包括乙酸鈣不動桿菌(Acinetobacter calcoaceticus)、鮑 氏不動桿菌（Acinetobacter baumannii)、伴放線放線桿菌（Actinobacillus actinomycetemcomitans)、嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila)、木糖氧化產喊菌 (Alcaligenes xylosoxidans)、擬桿菌屬（Bacteroides)、脆弱擬桿菌（Bacteroides 作&8；1118)、桿菌狀巴通體（831^0116113匕3(3；!_111：[>01'11118)、博特氏桿菌屬（80『(16七611& spp.)、伯氏疏螺旋體（Borrelia burgdorferi)、卡他布蘭漢菌（Branhamella catarrhal is )、布魯氏菌屬(Brucella spp ·)、彎曲桿菌屬（Campylobacter spp ·)、肺炎衣 原體（Chalmydia pneumoniae)、嬰4鵡熱衣原體（Chlamydia psittaci )、沙眼衣原體 (Chlamydia trachomatis)、紫色色桿菌（Chromobacterium violaceum)、梓檬酸桿菌屬 (Citrobacter spp.)、卩齒蝕艾肯菌（Eikenella corrodens)、產氣腸桿菌（Enterobacter aerogenes)、大腸桿菌（Escherichia col i)、腦膜胺毒性黃桿菌（Flavobacterium meningosept icum)、梭桿菌屬（Fusobacterium spp·)、流感嗜血桿菌（Haemophi lus influenzae)、嗜血桿菌屬（Haemophilus spp.)、幽門螺桿菌（Helicobacter pylori)、肺炎 克雷伯氏菌、克雷伯氏菌屬(Klebsiella spp.)、軍團菌屬(Legionella spp.)、鉤端螺旋體 屬（Leptospira spp ·)、卡他莫拉菌(Moraxe 11a catarrhal is)、摩氏摩根菌(Morgane 11a morganii)、肺炎支原體（My coplasma pneumoniae)、淋病奈瑟氏菌（Neisseria gonorrhoeae)、腦膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitidis)、多殺巴斯德菌(Pasteurella multocida)、類志賀鄰單胞菌(Plesiomonas shigelloides)、普氏菌屬(Prevotellaspp.)、 變形菌屬（Proteus spp.)、雷氏普羅威登斯菌(Providencia rettgeri)、銅綠假單胞菌 (Pseudomonas aeruginosa)、假單胞菌屬（Pseudomonas spp·)、普氏立克次體(Rickettsia prowazekii )、立氏立克次體（Rickettsia rickettsii )、羅克利馬體屬（Rochalimaea spp.)、沙門氏菌屬（Salmonella spp.)、傷寒沙門氏菌(Salmonella typhi)、粘質沙雷氏菌 (Serratia marcescens )、志賀氏菌屬（Shigella spp.)、索氏志賀氏菌（Shigella sonnei)、斑點密螺旋體（Treponema carateum)、蒼白密螺旋體（Treponema pallidum)、地 方性蒼白密螺旋體（Treponema pallidum endemicum)、細弱密螺旋體（Treponema 卩61^611116)、韋榮氏球菌屬(￥6；[11011611&8。。.）、霍亂弧菌(￥；[131'；[0(311016抑6)、創傷弧菌 (Vibrio vulnificus)、小腸結腸炎耶爾森氏菌(Yersinia enterocolitica)、鼠疫耶爾森 氏菌（Yersinia pestis)。
[0054] 在一些實施例中，所述細菌例如通過形成生物膜而呈現對抗生素的非特異性抗 性。在一些實施例中，所述細菌呈現對特定抗生素的特異性抗性。所述細菌中的特異性抗性 可以是先天性或獲得性的。在一些實施例中，所述細菌呈現對抗生素的特異性和非特異性 抗性。在一些實施例中，所述細菌以極低濃度存在并且因此不形成生物膜。在不限制本發明 的情況下，假設不在生物膜中的細菌呈現對抗生素的特異性抗性機制。在不限制本發明的 情況下，還假設本發明的肽在對抗這些特異性非生物膜相關抗性機制方面起作用。
[0055] 在一些實施例中，所述細菌是金黃色葡萄球菌。在特定實施例中，所述金黃色葡萄 球菌是甲氧西林抗性物種(MRSA)。
[0056] 在一些實施例中，所述細菌是屎腸球菌。在一些實施例中，所述屎腸球菌是萬古霉 素抗性物種。在其它實施例中，所述屎腸球菌是替考拉寧抗性物種。在一些實施例中，所述 屎腸球菌是萬古霉素和替考拉寧抗性物種。在一些實施例中，所述屎腸球菌具四環素類抗 生素抗性。
[0057]在一些實施例中，所述細菌是肺炎克雷伯氏菌。在一些實施例中，所述肺炎克雷伯 氏菌是抗生素抗性物種。在特定實施例中，所述肺炎克雷伯氏菌具青霉素(penicillin)類 抗生素抗性。在特定實施例中，所述肺炎克雷伯氏菌具頭孢菌素(cephalosporin)類抗生素 抗性。在特定實施例中，所述肺炎克雷伯氏菌具碳青霉烯類抗生素抗性。在特定實施例中， 所述肺炎克雷伯氏菌具氟喹諾酮(fluoroquinolone)類抗生素抗性。在特定實施例中，所述 肺炎克雷伯氏菌具蛋白質合成抑制劑抗生素抗性。在特定實施例中，所述肺炎克雷伯氏菌 具氨芐西林、氨曲南、頭孢西丁、頭孢泊肟、頭孢他啶、氯胺苯醇、哌拉西林和四環素抗性。在 特定實施例中，所述肺炎克雷伯氏菌具碳青霉烯-亞胺培南和厄他培南、阿米卡星、氨曲南、 左氧氟沙星和環丙沙星抗性。
[0058]抗生素
[0059] 在一些實施例中，本發明是一種增加抗生素針對細菌的效力的方法，包含使所述 細菌與所述抗生素和包含序列FDYDWY的肽接觸。
[0060] 在一些實施例中，所述抗生素是胞外被膜抗生素、核酸抑制劑或蛋白質合成抑制 劑。
[0061] 在一些實施例中，所述抗生素是胞外被膜抗生素，選自由青霉素、頭胞菌素、糖肽 和碳青霉烯組成的群組。在一些實施例中，所述抗生素是青霉素，選自由以下組成的群組： 苯挫西林、甲氧西林、阿莫西林(amoxicillin)、氨節西林、氯唑西林(cloxaci 11 in)、雙氯西 林(dicloxacillin)、卡本西林(carbenicillin)、替卡西林(ticarcillin)和哌拉西林。在 一些實施例中，所述抗生素是頭孢菌素，選自由以下組成的群組:頭孢乙腈(cefacetrile)、 頭孢輕氨節（〇6€8(11'(?；[1)、頭孢力新（06。1^161；[11)、頭孢來星（06€310815^；[11)、頭孢洛寧 (061^1011；[11111)、頭抱噻啶（06€&101^(1；[116)、頭抱噻吩（06€&101：；[11)、頭抱匹林(06€&。；[1'；[11)、 頭抱曲秦（cefatrizine)、頭抱氮氣（cefazaflur)、頭抱西酮（cefazedone)、頭抱唑林 (cefazolin)、頭抱拉定(cefradine)、頭抱沙定(cefroxadine)、頭抱替唑（ceftezole)、頭 孢克洛（cefaclor)、頭孢尼西（cefonicid)、頭孢丙稀（cefprozil)、頭孢咲辛 (cefuroxime)、頭抱唑喃（cefuzonam)、頭抱美唑（cefmetazole)、頭抱替坦（cefotetan)、氯 碳頭抱（loracarbef)、頭抱拉宗（cef buperazone)、頭抱美唑（cefmetazole)、頭抱米諾 (cefminox)、頭抱替坦（cefotetan)、頭抱西丁（cefoxitin)、頭抱替安（cefotiam)、頭抱克 定（cefclidine)、頭孢吡聘(cefepime)、頭孢瑞南（cef luprenam)、頭孢噻利（cefoselis)、 頭孢唑蘭（cefozopran)、頭孢匹羅（cefpirome)、頭孢喹Η虧（cefquinome)、氟氧頭孢 (flomoxef )、頭抱吡普(ceftobiprole)和頭抱洛林(ceftaroline)。在一些實施例中，所述 所述抗生素是糖肽，選自由萬古霉素和替考拉寧組成的群組。在一些實施例中，所述抗生素 是碳青霉烯，選自由以下組成的群組:亞胺培南、莫若培南(morepenem)、厄他培南、多尼培 南(doripenem)、帕尼培南(panipenem)和比阿培南(biapenem)。在特定實施例中，所述抗生 素是氨曲南。
[0062] 在一些實施例中，所述抗生素是核酸抑制劑，選自由氟喹諾酮組成的群組。在一些 實施例中，所述氟喹諾酮是環丙沙星、依諾沙星(enoxacin)、氟羅沙星(fleroxacin)、洛美 沙星（lomef loxacin)、那氟沙星（nadif loxacin)、諾氟沙星(norf loxacin)、氧氟沙星 (ofloxacin)、培氣沙星(pefloxacin)、蘆氣沙星(rufloxacin)、巴洛沙星(balofloxacin)、 格帕沙星（gr e p a f 1 ο Xa c i η )、左氧氟沙星、替馬沙星（t ema f 1 ο Xa c i η )、妥舒沙星 (tosufloxacin)、克林沙星（clinafloxacin)、加替沙星（gatifloxacin)、吉米沙星 (gemifloxacin)、莫西沙星（moxifloxacin)、西他沙星（sitafloxacin)、曲伐沙星 (1：1'0￥3；1^1(^3(3；[11)、博氟沙星（卩1'0111；1^1(^3(3；[11)、德拉沙星（(1613；1^1(^3(3；[11)、達氟沙星 (danofloxacin)、二氣沙星（difloxacin)、恩氣沙星（enrofloxacin)、依巴沙星 (ibafloxacin)、馬波沙星（marbofloxacin)、奧比沙星（orbifloxacin)或沙氣沙星 (sarafloxacin)。在特定實施例中，所述氟喹諾酮是環丙沙星或左氧氟沙星。
[0063] 在一些實施例中，所述抗生素是蛋白質合成抑制劑，選自由氯胺苯醇和阿米卡星 組成的群組。在其它實施例中，所述抗生素是蛋白質合成抑制劑，選自大環內酯類抗生素。 大環內酯抗生素包括阿奇霉素（azithromycin)、克拉霉素（clarithromycin)、紅霉素 (erythromycin)、泰利霉素（telithromycin)、碳霉素 A(carbomycin A)、交沙霉素 (josamycin)、吉他霉素（kitasamycin)、麥迪霉素（midecamycin)、竹桃霉素 (oleandomycin)、索利霉素（solithromycin)、螺旋霉素 （spiramycin)、醋竹桃霉素 (troleandomycin)、羅紅霉素(roxithromycin)、泰利霉素、喹紅霉素（cethromycin)、索利 霉素、螺旋霉素或袢霉素(ansamycin)。在一些實施例中，所述蛋白質合成抑制劑抗生素是 莫匹羅星。
[0064] 在一些實施例中，所述抗生素是具有未知作用機制的抗生素。
[0065] 在特定實施例中，所述抗生素因特定細菌物種針對所述抗生素的特異性或非特異 性抗性而針對所述細菌呈現減小的活性。
[0066] 投藥
[0067] 在一些實施例中，本發明是一種增加抗生素針對細菌的效力的方法，包含使所述 細菌與所述抗生素和包含序列FDYDWY的肽接觸。
[0068] 在一些實施例中，所述細菌與所述抗生素和所述肽同時（即，在同一時間）接觸。所 述抗生素和所述肽的這種同時接觸可以例如通過使用含有所述抗生素和所述肽的單一組 合物實現。在其它實施例中，所述抗生素和所述肽的同時接觸可以通過使所述細菌與所述 抗生素和所述肽在兩個獨立組合物中接觸來實現。
[0069] 在一些實施例中，所述細菌與所述抗生素和所述肽在不同時間接觸。在特定實施 例中，所述抗生素和所述肽與所述細菌接觸相隔約15分鐘、相隔約30分鐘、相隔約45分鐘、 相隔約1小時、相隔約1.5小時或相隔約2小時。在所述細菌與所述抗生素和所述肽在不同時 間接觸的一些實施例中，所述細菌可以在所述細菌與所述抗生素接觸之前或之后與所述肽 接觸。
[0070] 在一些實施例中，本發明是一種增加抗生素針對細菌的效力的方法，包含向有需 要的個體投與所述抗生素和包含序列n)YDWY的肽。在一些實施例中，所述個體是非人類哺 乳動物，例如犬、貓、馬、豬、牛。在其它實施例中，哺乳動物是人類。
[0071] 在一些實施例中，向所述個體投與的肽可以包含以下中的至少一者：FDYDWY、 SFDYDWY、SFDYDWYN、HSFDYDWYN、VHSFDYDWYN、SVHSFDYDWYN、SVHSFDYDWYNV、SVHSFDYDWYNVS、 KSVHSFDYDWYNVS^KSVHSFDYDWYNVSD^NKSVHSFDYDffYNVSD^NKSVHSFDYDffYNVSDQ^ QNKSVHSFDYDWYNVSDQ、QNKSVHSFDYDWYNVSDQA、SQNKSVHSFDYDWYNVSDQ、 SQNKSVHSFDYDWYNVSDQA、FSQNKSVHSFDYDWYNVSDQA、FSQNKSVHSFDYDWYNVSDQAD、 SFSQNKSVHSFDYDWYNVSDQAD、SFSQNKSVHSFDYDWYNVSDQADL、SFSQNKSVHSFDYDWYNVSDQADLK、 SFSQNKSVHSFDYDWYNVSDQADLKN 或 CSFSQNKSVHSFDYDWYNVSDQADLKNC 或其組合。在特定實施例 中，所述肽具有序列CSVHSFDYDWYNVC。
[0072] 根據一些實施例，所述肽包含具有至多約20個、至多約25個、至多約30個、至多約 40個或至多約50個氨基酸的序列的一部分。
[0073] 在一些實施例中，本發明的肽在序列中具有兩個半胱氨酸。在一些實施例中，所述 半胱氨酸處于C端和N端。
[0074] 在一些實施例中，本發明的肽可以環化（即，呈環狀形式)并且因此在本申請案中 用術語"eye"指出。在一個實施例中，每個肽用C端處的半胱氨酸和N端處的半胱氨酸修飾， 其中所述C端和N端經S-S橋接。在特定實施例中，一或多個肽用C端處的半胱氨酸和N端處的 半胱氨酸修飾，其中所述C端和N端經S-S橋接。在其它實施例中，例如當肽中不在N端或C端 處的一或多個氨基酸彼此鏈接時，所述肽經內部環化。這種鏈接可以借助兩個半胱氨酸之 間的S-S橋接或可以是化學合成的共價鏈接，例如酯或酰胺基。
[0075] 在一些實施例中，本發明的肽可以任選地包含由一些類型的鏈接子連接的至少兩 個序列，使得第一肽序列的N端連接至鏈接子的C端并且第二肽序列的C端連接至鏈接子的N 端。
[0076] 在一些實施例中，所述肽具有序列CSVHSFDYDWYNVC。在一些實施例中，肽 CSVHSFDYDWYNVC借助C端和N端處的兩個半胱氨酸環化。
[0077] 在一些實施例中，所述肽是非環化的。
[0078] 在一些實施例中，所述肽是可溶的。在其它實施例中，所述肽附接至鏈接子。在一 些實施例中，所述鏈接子是聚乙二醇或棕櫚酸。在一些實施例中，所述肽是合成的。
[0079] 在一些實施例中，所述抗生素是胞外被膜抗生素、核酸抑制劑或蛋白質合成抑制 劑。在一些實施例中，所述抗生素是一種如上所述的抗生素。在特定實施例中，所述抗生素 是氨芐西林、苯唑西林、頭孢西丁、萬古霉素、替考拉寧、亞胺培南、厄他培南、莫匹羅星、四 環素、環丙沙星、左氧氟沙星、氯胺苯醇、阿米卡星或氨曲南。
[0080] 在特定實施例中，所述抗生素因特定細菌物種針對所述抗生素的特異性或非特異 性抗性而針對所述細菌呈現減小的活性。
[0081] 在一些實施例中，哺乳動物具有需要治療的細菌感染。在特定實施例中，所述細菌 感染是由抗生素抗性細菌引起。在一些實施例中，所述細菌例如通過形成生物膜而呈現對 抗生素的非特異性抗性。在一些實施例中，所述細菌呈現對特定抗生素的特異性抗性。所述 細菌中的特異性抗性可以是先天性或獲得性的。在一些實施例中，所述細菌呈現對抗生素 的特異性和非特異性抗性。
[0082] 在一些實施例中，所述細菌是革蘭氏陽性物種。在一些實施例中，所述細菌是革蘭 氏陰性物種。革蘭氏陽性和革蘭氏陰性物種的實例如上文所定義。
[0083]在一些實施例中，所述細菌是金黃色葡萄球菌。在特定實施例中，所述金黃色葡萄 球菌是甲氧西林抗性物種(MRSA)。
[0084] 在一些實施例中，所述細菌是屎腸球菌。在一些實施例中，所述屎腸球菌是萬古霉 素抗性物種。在其它實施例中，所述屎腸球菌是替考拉寧抗性物種。在一些實施例中，所述 屎腸球菌是萬古霉素和替考拉寧抗性物種。在一些實施例中，所述屎腸球菌具四環素類抗 生素抗性。
[0085] 在一些實施例中，所述細菌是肺炎克雷伯氏菌。在一些實施例中，所述肺炎克雷伯 氏菌是抗生素抗性物種。在特定實施例中，所述肺炎克雷伯氏菌具青霉素類抗生素抗性。在 特定實施例中，所述肺炎克雷伯氏菌具頭孢菌素類抗生素抗性。在特定實施例中，所述肺炎 克雷伯氏菌具碳青霉烯類抗生素抗性。在特定實施例中，所述肺炎克雷伯氏菌具氟喹諾酮 類抗生素抗性。在特定實施例中，所述肺炎克雷伯氏菌具蛋白質合成抑制劑抗生素抗性。在 特定實施例中，所述肺炎克雷伯氏菌具氨芐西林、氨曲南、頭孢西丁、頭孢泊肟、頭孢他啶、 氯胺苯醇、哌拉西林和四環素抗性。在特定實施例中，所述肺炎克雷伯氏菌具碳青霉烯-亞 胺培南和厄他培南、阿米卡星、氨曲南、左氧氟沙星和環丙沙星抗性。
[0086] 在一些實施例中，所述抗生素和所述肽同時（即，在相同時間）投與個體。所述抗生 素和所述肽的這種同時投與可以例如通過使用含有所述抗生素和所述肽的單一組合物實 現。在其它實施例中，所述抗生素和所述肽的同時投與可以通過以兩個獨立組合物投與所 述抗生素和所述肽來實現。
[0087] 在一些實施例中，所述抗生素和所述肽在不同時間投與個體。在特定實施例中，所 述抗生素和所述肽相隔約15分鐘、相隔約30分鐘、相隔約45分鐘、相隔約1小時、相隔約1.5 小時或相隔約2小時投與。在所述抗生素和所述肽在不同時間投與的一些實施例中，所述肽 可以在所述抗生素之前或之后投與。
[0088] 組合物
[0089] 在一些實施例中，本發明是一種組合物，包含抗生素和包含序列roYDWY的肽。
[0090] 在一些實施例中，所述包含序列roYDWY的肽可以具有如上所述序列中的任一個。 在特定實施例中，所述肽具有序列CSVHSFDYDWYNVC。在一些實施例中，肽CSVHSFDYDWYNVC借 助C端和N端處的兩個半胱氨酸環化。
[0091] 在一些實施例中，所述肽是非環化的。
[0092] 在一些實施例中，所述抗生素是胞外被膜抗生素、核酸抑制劑或蛋白質合成抑制 劑。在一些實施例中，所述抗生素是一種如上所述的抗生素。在特定實施例中，所述抗生素 是氨芐西林、苯唑西林、頭孢西丁、萬古霉素、替考拉寧、亞胺培南、厄他培南、莫匹羅星、四 環素、環丙沙星、左氧氟沙星、氯胺苯醇、阿米卡星或氨曲南。
[0093] 在一些實施例中，所述肽和抗生素在單一組合物中與細菌接觸。在一些實施例中， 所述肽和抗生素與細菌或在兩個獨立組合物中接觸。
[0094] 本發明的組合物包括涂有如上所述的肽和抗生素的裝置。由本發明涵蓋的示例性 裝置包括(但不限于)船身、機動車表面、飛機表面、膜、過濾器和工業設備。所述表面還可以 包含在醫療裝置、儀器和植入物中。
[0095] 此類醫療裝置、儀器和植入物的實例包括能夠暫時或永久植入哺乳動物生物體 (如人類）中的任何物體。根據本發明可以使用的代表性醫療裝置、儀器和植入物包括例如 中心靜脈導管、泌尿導管、氣管插管、機械心臟瓣膜、起搏器、血管移植物、支架和假體關節。
[0096] 根據本發明的教示內容可以涂布的醫療裝置包括(但不限于)人造血管、導管和用 于去除或傳遞流體至患者的其它裝置、人造心臟、人造腎臟、矯形針、假體關節、板和植入 物；導管和其它管(包括泌尿管和膽管、氣管插管、外周可插入中心靜脈導管、透析導管、長 期隧道式中心靜脈導管、外周靜脈導管、短期中心靜脈導管、動脈導管、肺部導管、斯旺-甘 茲氏導管（Swan-Ganz catheter)、泌尿導管、腹膜導管）、泌尿裝置(包括長期泌尿裝置、組 織結合泌尿裝置、人造泌尿括約肌、泌尿擴張肌）、分流器(包括心室或動靜脈分流器）；假體 (包括乳房植入物、陰莖假體、血管移植假體、動脈瘤修復裝置、機械心臟瓣膜、人造關節、人 造喉、耳科植入物）、吻合裝置、血管導管端口、血管支架、夾具、栓塞裝置、傷口引流管、眼晶 體、牙齒植入物、腦積水分流器、起搏器和可植入除顫器、無針連接器、發音假體等。本發明 的另一種可能的應用是醫療和牙科環境中所發現的表面涂布。此類表面包括不論一次性或 打算重復使用的各種儀器和裝置的內部和外部方面。此類表面包括適用于醫療用途的全部 范圍的物品，包括(但不限于)解剖刀、針、剪刀和用于侵入性手術、療法或診斷程序的其它 裝置;血液過濾器。其它實例將對于這些領域的從業者顯而易知。
[0097] 醫療環境中所發現得表面還包括醫學設備零件、保健機構人員佩戴或攜帶的醫療 工具的內部和外部方面。此類表面可以包括預期作為醫療機構中感染性生物體的生物屏障 的表面，如手套、工作裙和面罩。生物屏障的常用材料是熱塑性或聚合材料，如聚乙烯、滌綸 (dacron)、尼龍(nylon)、聚酯、聚四氟乙稀、聚氨基甲酸酯、乳膠、娃酮和乙稀。其它表面可 以包括用于醫療程序或用于制備醫療器具的區域中的工作臺面和固定裝置、用于呼吸道治 療(包括投與氧氣、噴霧器中溶解的藥物和麻醉劑）的管和罐。其它此類表面可以包括并不 打算無菌的醫療或牙科設備的手柄和線纜。另外，此類表面可以包括那些通常遇到血液或 體液或其它有害生物材料的區域中所發現的管和其它設備的非無菌外表面。本發明的組合 物可以用于這些醫療裝置的表面或內部以提供避免單電池生物體定殖的長期保護并且降 低裝置相關感染的發生率。
[0098] 本發明的組合物可以在聚合物合成階段或在裝置制造階段直接并入醫療裝置的 聚合物基質中。所述組合物還可以共價連接到醫療裝置聚合物。這些和許多其它涂布醫療 裝置的方法對于所屬領域的一般技術人員是明顯的。
[0099] 根據本發明的教示內容可以處理的額外表面包括那些參與水純化、水儲存和水傳 遞的物品和那些參與食品加工的物品的內部和外部方面。因此，本發明設想涂布食品或飲 料容器的固體表面以延長其內含物的存放期。
[0100]與健康相關的表面還可以包括那些參與提供營養、衛生或疾病預防的家用物品的 內部和外部方面。因此，本發明的組合物可以用于從外表面去除致病微生物。這些可以包括 例如家用食品加工設備、嬰兒護理材料、棉塞、肥皂、清潔劑、健康和皮膚護理產品、家用清 潔劑和抽水馬桶。
[0101]所述表面還可以是實驗室物品，包括(但不限于)顯微鏡載玻片、培養罩、皮氏培養 皿(Petri dish)或所屬領域中已知的任何其它合適類型的組織培養器皿或容器。
[0102] 水下表面包括任何水浸沒的表面，包括船身/艇身（即，船舶或小艇的身體或框 架）、潛艇、助航設施、篩網、網、建筑物、漂浮或布設的海上平臺（例如，船塢）、浮標、發信設 備和與海水或鹽水接觸的物品。其它水下表面包括暴露于海水的結構，包括粧、船舶標記、 海底輸送器(如電纜線和管道）、釣魚網、艙壁、冷卻塔和水下操作的任何裝置或結構。
[0103] 本發明的組合物可以并入至船舶涂層中以限制不合需要的船舶生物附著。因此， 可以配制本發明的防生物附著劑以便不含毒性材料(如重金屬)并且仍保留其功效。本發明 的防生物附著涂料可以另外含有粘合劑、顏料、溶劑和添加劑。
[0104] 可以使用的溶劑的實例包括芳香族烴，如二甲苯和甲苯；脂肪族烴，如己烷和庚 烷;酯，如乙酸乙酯和乙酸丁酯；酰胺，如N-甲基吡咯烷酮和N，N_二甲基甲酰胺;醇，如異丙 醇和丁醇；醚，如二噁烷、THF和乙醚；以及酮，如甲基乙基酮、甲基異丁基酮和甲基異戊基 酮。溶劑可以單獨或以其組合形式使用。
[0105]可以使用的粘合劑的實例包括醇酸樹脂、丙烯酸或乙烯乳液、聚氨基甲酸酯樹脂、 環氧樹脂、基于硅酮的樹脂、丙烯酸樹脂、基于無機硅酸酯的樹脂、乙烯樹脂（特別是氯乙 烯/乙酸乙烯酯共聚物）和松香。可以使用的顏料的實例包括二氧化鈦、氧化亞銅、鐵氧化 物、滑石、鋁薄片、云母薄片、三氧化二鐵、硫氰酸亞銅、氧化鋅、乙酸間砷酸銅、鉻酸鋅、二甲 基二硫代氨基甲酸鋅、乙烯雙(二硫代氨基甲酸)鋅和二乙基二硫代氨基甲酸鋅。
[0106]可以并入涂布組合物中的添加劑的實例包括除濕劑、濕潤/分散劑、抗沉降劑、防 結皮劑、干燥/固化劑、抗磨損劑和通常在涂布組合物中用作穩定劑和消泡劑的添加劑。 [0107]制備船舶防生物附著涂料的方法詳細闡述于美國專利第4,678,512號；美國專利 第4,286,988號；美國專利第4,675,051號；美國專利第4,865,909號和美國專利第5，143， 545號中。
[0108] 本發明的組合物還可以用于在化妝品中提供抗細菌特性以防止產品變質。
[0109] 所述組合物可以另外用于向口腔、牙齒和牙齦提供抗細菌作用，如通過并入牙膏、 漱口劑或口香糖中。
[0110] 本發明的醫藥組合物可以通過任何適合的途徑投與，例如包括經口、經直腸、經粘 膜(尤其經鼻）、腸道或非經腸傳遞，包括肌肉內、皮下和髓內注射，以及鞘內、直接心室內、 靜脈內、腹膜內、鼻內或眼內注射。 或者，有人可以用局部而非全身性方式投與本發明組合物，例如借助將所述組合 物直接注射至患者的組織區域中。
[0112]本發明的醫藥組合物可以通過所屬領域中熟知的工藝來制造，例如借助于常規混 合、溶解、粒化、糖衣藥丸制造、水磨、乳化、囊封、覆埋或凍干工藝。根據本發明使用的醫藥 組合物因此可以按常規方式使用一或多種生理學上可接受的載劑來配制，所述載劑包含賦 形劑和助劑，其有助于活性成分加工成可以在醫藥學上使用的制劑。適當配制品取決于所 選投與途徑。
[0113] 關于注射，醫藥組合物的活性成分可以配制在水溶液中，優選在生理上相容的緩 沖液中，如漢克氏溶液(Hank's solution)、林格氏溶液(Ringer's solution)或生理鹽緩 沖液。關于經粘膜投與，在配制品中使用適于待滲透屏障的滲透劑。此類滲透劑一般是所屬 領域中已知的。
[0114] 關于局部投與，本發明的組合物可以配制為凝膠、乳膏、洗液、清洗劑或噴霧劑。
[0115] 關于經口投與，醫藥組合物可以易于通過使活性化合物與所屬領域中熟知的醫藥 學上可接受的載劑組合來配制。此類載劑使得醫藥組合物能夠配制為片劑、丸劑、糖衣藥 丸、膠囊、液體、凝膠、糖漿、漿液、懸浮液等以便患者口服攝取。用于經口使用的藥物制劑可 以使用固體賦形劑，任選地研磨所得混合物并且在視需要添加適合的助劑之后加工顆粒混 合物獲得片劑或糖衣藥丸核心而制得。具體來說，適合的賦形劑是填充劑，如糖，包括乳糖、 蔗糖、甘露醇或山梨醇;纖維素制劑，如玉米淀粉、小麥淀粉、大米淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、 黃芪膠、甲基纖維素、羥丙基甲基-纖維素和羧甲基纖維素鈉;和/或生理學上可接受的聚合 物，如聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。必要時，可以添加崩解劑，如交聯聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或海 藻酸或其鹽，如海藻酸鈉。
[0116] 糖衣藥丸核心具有適合的包衣。出于此目的，可以使用濃縮糖溶液，其可以任選地 含有阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝膠（carbopol gel)、聚乙二醇、二氧化鈦、 漆溶液和適合的有機溶劑或溶劑混合物。染料或顏料可以添加至片劑或糖衣藥丸包衣中以 鑒別或表征活性化合物劑量的不同組合。可以經口使用的醫藥組合物包括由明膠制成的配 合插入膠囊(push-fit capsule)以及由明膠和如丙三醇或山梨醇的塑化劑制成的軟密封 膠囊。配合插入膠囊可以含有活性成分與如乳糖的填充劑、如淀粉的粘合劑、如滑石或硬脂 酸鎂的潤滑劑和任選地穩定劑的混合物。在軟膠囊中，活性成分可以溶解或懸浮于適合的 液體中，如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇。另外，可以添加穩定劑。用于口服的所有調配 物的劑量應適于所選投與途徑。
[0117] 關于經頰投與，組合物可以呈以常規方式調配的片劑或口含錠形式。
[0118] 關于通過經鼻吸入投與，根據本發明使用的活性成分常規地借助于使用適合的推 進劑(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯-四氟乙烷或二氧化碳），以從加壓包裝或噴霧 器呈現的氣霧劑噴霧形式傳遞。在加壓氣霧劑的情況下，可以通過提供用于傳遞定量數量 的閥門來確定劑量。可以調配含有化合物和適合粉末基劑(如乳糖或淀粉)的粉末混合物的 用于分配器中的(例如）明膠的膠囊和藥筒。
[0119] 可以調配本文所述的醫藥組合物用于非經腸投與，例如通過快速注射或連續輸 注。注射用調配物可以呈現為單位劑型，例如任選地添加防腐劑的安瓿或多劑量容器。所述 組合物可以是在油性或水性媒劑中的懸浮液、溶液或乳液，并且可以含有如懸浮劑、穩定劑 和/或分散劑的調配物。
[0120] 用于非經腸投與的醫藥組合物包括呈水溶性形式的活性制劑的水溶液。另外，活 性成分的懸浮液可以制備為適當的油性或基于水的注射懸浮液。
[0121 ]適合的親脂性溶劑或媒劑包括脂肪油，如芝麻油；或合成脂肪酸酯，如油酸乙酯、 甘油三酯；或脂質體。水性注射懸浮液可以含有增加懸浮液粘度的物質，如羧甲基纖維素 鈉、山梨醇或葡聚糖。
[0122] 任選地，懸浮液還可以含有適合的穩定劑或增加活性成分溶解度的藥劑以允許制 備高度濃縮的溶液。或者，活性成分可以呈粉末形式，以便在使用之前用適合的媒劑，例如 無菌、無熱原質、基于水的溶液復原。
[0123] 在一些實施例中，本發明的組合物可以用立即釋放形式傳遞。在其它實施例中，本 發明的組合物可以用控制釋放系統或持續釋放系統傳遞。控制或持續釋放醫藥組合物的共 同目標可以是改善藥物療法超過由其非控制或非持續釋放對應部分所實現的結果。控制或 持續釋放組合物的優勢包括延長抗生素和肽的活性、降低給藥頻率和增加順應性。另外，控 制或持續釋放組合物可以有利地影響起始作用時間或其它特征，如抗生素和肽的血液含 量，并且可以因此減低不良副作用的發生率。
[0124] 控制或持續釋放組合物可以包含立即釋放部分和延長釋放部分。立即釋放部分最 初立即釋放迅速產生所要療法或預防作用的量的肽和/或抗生素，而延長釋放部分逐漸并 且持續釋放其它量的肽和/或抗生素以維持療法或預防作用水平歷時延長的時間段。活性 成分的控制或持續釋放可以通過各種條件來刺激，包括(但不限于)pH變化、溫度變化、酶的 濃度或利用率、水的濃度或利用率或其它生理條件或化合物。
[0125] 控制釋放和持續釋放劑型可以用于提供一或多種活性成分的控制或持續釋放，使 用例如變化比例的羥丙基甲基纖維素、其它聚合物基質、凝膠、可滲透膜、滲透系統、多層包 衣、微米粒子、多顆粒物、脂質體、微球體或其組合以提供所要釋放曲線。所屬領域中已知的 適合的控制或持續釋放配制品包括本文所述的那些，可以鑒于本公開內容而易于選擇以用 于本發明的活性成分。也參見古德森（Goodson)，控制釋放的醫療應用（Medical Applications of Controlled Re 1 ease )第2卷應用和評估（App 1 i cat ions and Evaluation)中的"牙科應用（Dental Applications)"（第115-138頁），蘭格（R. S.Langer) 和懷斯(D.L.Wise)編，CRC出版社（1984)。可以根據本發明的用途選擇蘭格，科學(Science) 249:1527-1533(1990)綜述中所論述的其它控制或持續釋放系統。在一個實施例中，可以使 用栗（蘭格，科學249 :1527-1533( 1990);塞夫頓（Sef ton)，CRC生物醫學工程評論（CRC Crit.Ref Biomed.Eng. )14:201(1987);布赫瓦爾德（Buchwald)等人，外科學（Surgery)88: 507(1980);和索德克（Saudek)等人，新英格蘭醫學雜志(N. Engl. J.Med)321:574(1989))。 在另一個實施例中，可以使用聚合材料（參見控制釋放申請案醫療應用（蘭格和懷斯編， 1974);受控藥物生物可用性、藥品設計和性能(Controlled Drug Bioavailability，Drug Product Design and Performance)(斯蒙倫（Smolen)和鮑爾（Ball)編，1984);羅杰爾 (R a n g e r )和派帕斯（P e p p a s )，高分子科學期刊-高分子化學評述 (J .Macromol · Sc i · Rev · Macromol · Chem. )23:61(1983);拉維（Levy)等人，科學 228:190 (1985);杜林格（During)等人，神經學年刊（Ann .Neurol · )25:351( 1989);和霍沃德 (Howard)等人，神經外科雜志(J.Neurosurg. )71:105(1989))。在又一個實施例中，控制或 持續釋放系統可以靠近感染目標(例如皮膚、肺、脊柱、腦或胃腸道)放置，因此僅需要一部 分全身性劑量。
[0126] 當呈片劑或丸劑形式時，本發明的醫藥組合物可以經包覆以延遲在胃腸道中的崩 解和吸收，由此提供歷時延長時間段的持續作用。包圍滲透活性驅動化合物的可選擇性滲 透膜也適用于經口投與的組合物。在后面的這些平臺中，來自包圍膠囊的環境的流體由驅 動化合物吸收，所述驅動化合物膨脹以使藥劑或藥劑組合物移位穿過開口。這些傳遞平臺 可以提供與立即釋放配制品的尖峰狀曲線相對的基本上零級傳遞曲線。還可以使用延時材 料，如單硬脂酸甘油酯或硬脂酸甘油酯。口服組合物可以包括標準賦形劑，如甘露醇、乳糖、 淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素和碳酸鎂。在一個實施例中，所述賦形劑是醫藥級的。
[0127] 還可以使用例如常規栓劑基質（如可可脂或其它甘油酯)將本發明的醫藥組合物 配制在如栓劑或保留灌腸劑的直腸組合物中。
[0128] 適于在本發明的情形下使用的醫藥組合物包括含有有效實現預期目的的量的活 性成分的組合物。更確切地說，"治療有效量"意思是有效預防、緩解或改善致病性感染的癥 狀(例如，發熱)或延長所治療個體的存活期的活性成分(例如，肽和抗生素）的量。治療有效 量的確定完全在所屬領域的技術人員的能力范圍內，尤其根據本文提供的詳細公開內容。
[0129] 對于本發明的方法中所用的任何制劑，最初可以由體外和細胞培養物分析來估計 劑量或治療有效量。舉例來說，可以在動物模型中配制劑量以達到所要濃度或效價。這類信 息可以用于更準確地確定人類適用劑量。
[0130] 本文所述的活性成分的毒性和療效可以通過體外、細胞培養物或實驗動物中的標 準醫藥程序來確定。從這些體外和細胞培養物分析以及動物研究獲得的數據可以用于配制 一系列適用于人類的劑量。劑量可以視所采用的劑型和所利用的投與途徑而變化。個別醫 師可以鑒于患者的病狀選擇準確的配制品、投與途徑和劑量。（參見例如芬格爾(Fingl，E.) 等人（1975)，"治療學的藥理學基礎(The Pharmacological Basis of Therapeutics)"，第 1章第1頁。）可以獨立地調節劑量和投與間隔以提供足夠的活性成分的血漿或腦含量，從而 誘導或抑制生物學作用（即，最小有效濃度MEC或最小殺細菌濃度MBChMEC將針對各個制劑 而變化，但是可以從體外數據估計。達到MEC所必需的劑量將取決于個體特征和投與途徑。 可以使用檢測分析測定血漿濃度。
[0131 ] 適合的有效劑量可以介于患者每天約0.01mg/kg體重至約3000mg/kg體重范圍內， 但是其通常是患者每天約0. 〇lmg/kg體重至約2500mg/kg體重或患者每天約0.01mg/kg體重 至約1000mg/kg體重。在一個實施例中，有效劑量是患者每天約100mg/kg體重或更少。在另 一個實施例中，有效劑量范圍介于每天患者約〇.〇lmg/kg體重至約100mg/kg體重的抗生素 或肽，在另一個實施例中，患者每天約0.02mg/kg體重至約50mg/kg體重，并且在另一個實施 例中，患者每天約0. 〇25mg/kg體重至約20mg/kg體重。
[0132] 可以單次劑量形式或以分次劑量形式投與。在一個實施例中，約每24小時投與有 效劑量或與細菌接觸，直到病狀減輕為止。在另一個實施例中，約每12小時投與有效劑量或 與細菌接觸，直到病狀減輕為止。在另一個實施例中，約每8小時投與有效劑量或與細菌接 觸，直到病狀減輕為止。在另一個實施例中，約每6小時投與有效劑量或與細菌接觸，直到病 狀減輕為止。在另一個實施例中，約每4小時投與有效劑量或與細菌接觸，直到病狀減輕為 止。本文所述的有效劑量是指所投與的各抗生素或肽的量。
[0133] 視待治療病狀的嚴重程度和反應性而定，給藥可以是單個或多個投與，療程持續 數天至數周或直到實現治愈或實現疾病病況減弱為止。
[0134] 待投與的組合物的量當然將取決于所治療的個體、病痛的嚴重程度、投藥方式、處 方醫師的判斷等。
[0135] 必要時，本發明的組合物可以呈現于包裝或分配裝置中，如FDA批準的試劑盒，其 可以含有一或多個含有活性成分的單位劑型。包裝可以例如包含金屬或塑料箱，如泡罩包 裝。包裝或分配裝置可以附有投藥說明書。包裝或分配裝置還可以附有注意事項，呈管理醫 藥的制造、使用或出售的政府機構規定的形式，所述注意事項反映了所述組合物的形式由 所述機構批準用于人類或獸醫投與。此類注意事項例如可以包括由美國食品和藥物管理局 (U.S.Food and Drug Administration)批準用于處方藥物的標簽或所批準的產品說明書。 還可以制備包含在醫藥學上可接受的載劑中配制的本發明制劑的組合物，放置在適當容器 中并且標注為用于治療指定病狀，如上文所進一步詳述。
[0136] 本發明的醫藥組合物包括適于口服的單個單位劑型，如(但不限于)適用于控制或 持續釋放的片劑、膠囊、軟膠囊和囊片。
[0137] 以下實例說明但不限制本發明的組合物和方法。通常在細菌感染治療中所遇到并 且鑒于本公開內容而對所屬領域的技術人員明顯的多種條件和參數的適合修改和調適在 本發明的精神和范圍內。
[0138] 實例
[0139] 實例1-苯唑西林和包含FDYDWY的肽針對甲氧西林抗性和甲氧西林敏感性金黃色 葡萄球菌的活性
[0140] 金黃色葡萄球菌ATCC 43300(5X 105CFU/mL)(MRSA菌株)在具有僅苯唑西林或苯 唑西林與grZ14s-nvCyc肽（10nM)(環化CSVHSFDYDWYNVC)的1.5mL艾本德（Eppendorf)管中 在37°C下振蕩（250rpm)培育24小時。管中溶液通過連續稀釋用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)稀釋 十倍。接著將所稀釋的溶液接種于血液瓊脂板上并且在37°C下培育24小時。結果表示血液 瓊脂板上計數的菌落形成單位(CFU)的數目。
[0141 ] 結果呈現在圖la中。圖la展現苯唑西林與grZ14s_nvCyc-起的殺細菌濃度比僅苯 唑西林低得多，由此證實grZ14s-nvCyC增強所述抗生素的活性。
[0142] 作為比較，甲氧西林敏感性金黃色葡萄球菌ATCC 25923菌株(5X105CFU/mL)用僅 苯挫西林或苯唑西林與grZ14s_nvCyc( 10nM)處理。結果呈現在圖lb中。圖lb展現在有或無 grZHs-nvCyc的情況下苯唑西林活性之間不存在顯著差異。這證實本發明的肽的活性增強 抗生素針對抗生素抗性物種的活性。
[0143] 使用濃度為7 X106CFU/mL的金黃色葡萄球菌ATCC 43300進行類似分析。此分析中 的細菌濃度較高（~7X106CFU/mL)。結果呈現在圖2中。圖2展現苯唑西林與grZ14s-nvCyc 一起對金黃色葡萄球菌ATCC 43300MRSA菌株的殺細菌濃度比僅苯唑西林低得多。在 grZ14s-nvCyc存在下，殺死細菌所需的苯唑西林濃度(6.25yg/mL)甚至低于殺死相同細菌 濃度（~7 X106CFU/mL)的甲氧西林敏感性金黃色葡萄球菌ATCC 25923所需的苯唑西林濃 度（12.5yg/mL)。這一結果證實本發明的肽降低MRSA菌株ATCC43300的抗性并且使其與敏感 性金黃色葡萄球菌ATCC 25923菌株相比對苯唑西林更敏感。
[0144] 實例2-苯唑西林和包含FDYDWY的肽針對甲氧西林抗性和甲氧西林敏感性金黃色 葡萄球菌的活性
[0145] 金黃色葡萄球菌ATCC 33591(MRSA菌株）（5X107CFU/mL)和甲氧西林敏感性金黃 色葡萄球菌菌株(MSSA)ATCC 25923( 1 X 108CFU/mL)在具有僅苯唑西林或苯唑西林與 grZ14s-nvCyc(10nM)的1.5mL艾本德管中在37°C下振蕩（250rpm)培育24小時。管中溶液通 過連續稀釋用PBS稀釋十倍。接著將所稀釋的溶液接種于血液瓊脂板上并且在37°C下培育 24小時。
[0146] 結果呈現在圖3中。如圖3中所見，苯唑西林針對MRSA和MSSA的殺細菌濃度在本發 明的肽存在下降低至約一半。因此，圖3證實本發明的肽的活性通過減少抗生素特異性和非 特異性抗性機制而增強抗生素針對抗生素抗性物種和抗生素敏感性物種的活性。
[0147] 金黃色葡萄球菌ATCC 33591(5 X 105CFU/mL)(MRSA菌株)在具有僅苯唑西林或苯 唑西林與grZ14s-nvCyc肽（10nM)的1.5mL艾本德管中在37°C下振蕩（250rpm)培育24小時。 細菌在培養物中的較低濃度使得細菌可以保持在浮游狀態并且僅呈現特異性抗性機制。管 中溶液通過連續稀釋用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)稀釋十倍。接著將所稀釋的溶液接種于血液 瓊脂板上并且在37 °C下培育24小時。
[0148] 結果呈現在圖4a中。圖4a展現苯唑西林與grZ14s_nvCyc-起的殺細菌濃度比僅苯 唑西林低得多，由此證實grZHs-nvCyc增強所述抗生素的活性。所述活性證實本發明的肽 針對展現特異性抗性機制的細菌的活性。
[0149] 作為比較，細菌濃度與圖4a中的金黃色葡萄球菌ATCC 33591濃度(MRSA菌株(5 X 105CFU/mL)類似的甲氧西林敏感性金黃色葡萄球菌ATCC 25923菌株(1 X 106CFU/mL)用僅苯 P坐西林或苯唑西林與grZ14s_nvCyc( ΙΟηΜ)肽處理。結果呈現在圖4b中。圖4b展現在有或無 grZHs-nvCyc的情況下苯唑西林活性之間不存在顯著差異。這證實本發明的肽的活性通過 減少特異性抗生素抗性而增強抗生素針對抗生素抗性物種的活性。
[0150] 實例3-萬古霉素與包含n)YDWY的肽組合針對屎腸球菌抗性物種的活性
[0151] 屎腸球菌ATCC 700221(4X 102CFU/mL)(萬古霉素、替考拉寧和四環素抗性菌株） 在具有僅萬古霉素或萬古霉素與grZHs-nvCyc肽（ΙΟηΜ)的1.5mL艾本德管中在37°C下振蕩 (250rpm)培育24小時。管中溶液通過連續稀釋用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)稀釋十倍。接著將所 稀釋的溶液接種于血液瓊脂板上并且在37°C下培育24小時。
[0152]結果呈現在圖5中。圖5展現萬古霉素與grZHs-nvCyc-起的殺細菌濃度比僅萬古 霉素低得多（約50%)，由此證實grZ14s-nvCyc增強所述抗生素對萬古霉素抗性菌株的活 性。
[0153] 實例4-替考拉寧與包含roYDWY的肽組合針對屎腸球菌抗性物種的活性
[0154] 屎腸球菌ATCC 700221(2X 102CFU/mL)(萬古霉素、替考拉寧和四環素抗性菌株） 與僅替考拉寧或替考拉寧與grZHs-nvCyc肽（ΙΟηΜ)-起在37°C下振蕩（250rpm)培育24小 時。如上所述處理溶液。
[0155] 結果呈現在圖6中。圖6展現替考拉寧與grZHs-nvCyc-起的殺細菌濃度比僅替考 拉寧低得多(低約60%)，由此證實grZHs-nvCyc增強所述抗生素對替考拉寧抗性菌株的活 性。
[0156] 實例5-氨芐西林與包含n)YDWY的肽組合針對肺炎克雷伯氏菌抗性物種的活性
[0157] 肺炎克雷伯氏菌ATCC 700603(MDR抗性菌株:具氨芐西林、氨曲南、頭孢西丁、頭孢 泊肟、頭孢他啶、氯胺苯醇、哌拉西林、四環素抗性）（3X105CFU/mL)與僅氨芐西林或氨芐西 林與grZHs-nvCyc肽（ΙΟηΜ)-起在37°C下振蕩（250rpm)培育24小時。管中溶液通過連續稀 釋用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)稀釋十倍。接著將所稀釋的溶液接種于血液瓊脂板上并且在37 °C下培育24小時。
[0158] 結果呈現在圖7中。圖7展現即使極高濃度的僅氨芐西林仍不能在(3X105CFU/mL) 的細菌濃度下實現細菌殺死。然而，氨芐西林與grZHs-nvCyc的組合在顯著較低濃度(低~ 100%)下實現殺細菌活性。這一實驗證實grZ14s-nvCyc增強抗生素對氨芐西林抗性菌株的 活性。
[0159] 使用2 X103CFU/mL較低細菌濃度的肺炎克雷伯氏菌進行類似分析。結果呈現在圖 8中。如圖8中所見，在較低細菌濃度下，抗生素氨芐西林在僅抗生素存在下實現細菌殺死。 另外，圖8還展現氨節西林與grZ14s-nvCyc-起的殺細菌濃度比僅氨節西林低100yg/mL，由 此證實grZHs-nvCyc增強所述抗生素針對展現特異性抗性的抗生素抗性物種的活性。
[0160] 實例6-頭孢西丁與包含roYDWY的肽組合針對肺炎克雷伯氏菌抗性物種的活性
[0161] 肺炎克雷伯氏菌ATCC 700603(MDR抗性菌株:具氨芐西林、氨曲南、頭孢西丁、頭孢 泊肟、頭孢他啶、氯胺苯醇、哌拉西林、四環素抗性）（2X106CFU/mL)與僅頭孢西丁或頭孢西 丁與grZHs-nvCyc肽（10nM)-起在37°C下振蕩（250rpm)培育24小時。接著如以上實例中所 述處理溶液。
[0162] 結果呈現在圖9中。圖9展現頭孢西丁與grZHs-nvCyc-起的殺細菌濃度比僅頭孢 西丁低得多（低>80% )，由此證實grZHs-nvCyc增強所述抗生素針對抗生素抗性物種的活 性。
[0163] 實例7-碳青霉烯與包含n)YDWY的肽組合針對肺炎克雷伯氏菌抗性物種(低和高細 菌濃度)的活性
[0164] 肺炎克雷伯氏菌ATCCBAA? 1705(3 X 102CFU/mL)(碳青霉烯酶陽性菌株）（碳青霉 烯-亞胺培南和厄他培南、阿米卡星、氨曲南、左氧氟沙星和環丙沙星抗性菌株)與僅亞胺培 南或亞胺培南與grZHs-nvCyc肽（10nM)-起在37°C下振蕩（250rpm)培育24小時。接著如以 上實例中所述處理溶液。
[0165] 結果呈現在圖10中。圖10展現亞胺培南與grZHs-nvCyc-起的殺細菌濃度比僅亞 胺培南低得多（低>75% )，由此證實grZHs-nvCyc增強所述抗生素針對抗生素抗性物種的 活性。細菌濃度低表明所述細菌以其浮游狀態存在。因此，假定本發明的肽具有針對所述細 菌的特異性抗性機制的活性。
[0166] 類似地，肺炎克雷伯氏菌ATCCBAA」51705(lX106CFU/mL)與僅亞胺培南或亞胺培 南與grZ14s-nvCyc-起培育。結果呈現在圖11中。圖11展現亞胺培南與grZ14s-nvCyc-起 的殺細菌濃度比僅亞胺培南低得多（低>75% )，由此證實grZHs-nvCyc增強所述抗生素針 對抗生素抗性物種的活性。分析中的細菌濃度較高表明所述細菌可能處于浮游或生物膜階 段。結果證實本發明的肽即使在較高細菌負載下具有針對抗生素抗性物種的活性。
[0167] 實例8-莫匹羅星與包含H3YDWY的肽組合針對MRSA的活性
[0168] 金黃色葡萄球菌ATCCBAA? 1708 (MRSA菌株，mupA陽性）（1 X 105CFU/mL)如以上實 例中所述與僅莫匹羅星或莫匹羅星與grZHs-nvCyc-起培育。結果呈現在圖12中。圖12展 現細菌負載在莫匹羅星與grZ14s-nvCyc的組合存在下減少至少一個數量級。
[0169] 實例9-蛋白質合成抑制劑與包含n)YDWY的肽組合的活性
[0170] 屎腸球菌ATCC 700221(lX103CFU/mL)(萬古霉素、替考拉寧和四環素抗性菌株） 如以上實例中所述與僅四環素或四環素與grZ14S-nvCyc(10mN)-起培育。結果呈現在圖 13a中。圖13a展現四環素與grZ14s-nvCyc-起針對抗生素抗性物種的殺細菌濃度比僅四環 素低得多（低60% )。類似地，屎腸球菌ATCC 700221 (2 X 105CFU/mL)(萬古霉素、替考拉寧和 四環素抗性菌株）如以上實例中所述與僅四環素或四環素與grZ14S-nvCyc(10mN)-起培 育。結果呈現在圖13b中。圖13b展現四環素與grZ14s-nvCyc-起針對抗生素抗性物種的殺 細菌濃度比僅四環素低得多(低~70% )。
[0171] 類似地，肺炎克雷伯氏菌ATCCBAA?1705(lX105CFU/mL)如以上實例中所述與僅 環丙沙星或環丙沙星與grZ14s-nvCyc-起培育。結果呈現在圖14中。圖14展現環丙沙星與 grZ14s-nvCyc-起針對抗生素抗性物種的殺細菌濃度比僅環丙沙星低得多(低80% )。
[0172] 類似地，肺炎克雷伯氏菌ATCC 700603(MDR抗性菌株:具氨芐西林、氨曲南、頭孢西 丁、頭孢泊肟、頭孢他啶、氯胺苯醇、哌拉西林、四環素抗性）（4X106CFU/mL)如以上實例中 所述與僅氯胺苯醇或氯胺苯醇與grZ14s-nvCyc-起培育。結果呈現在圖15中。圖15展現氯 胺苯醇與grZHs-nvCyc在僅氯胺苯醇未實現細菌殺死的濃度下實現細菌殺死。
[0173] 類似地，肺炎克雷伯氏菌ATCC 700603(MDR抗性菌株:具氨芐西林、氨曲南、頭孢西 丁、頭孢泊肟、頭孢他啶、氯胺苯醇、哌拉西林、四環素抗性）（IX 103CFU/mL)如以上實例中 所述與僅氯胺苯醇或氯胺苯醇與grZ14s-nvCyc-起培育。結果呈現在圖16中。在此實例中， 細菌濃度較低，因此僅抗生素可以實現殺細菌活性。圖16展現氯胺苯醇與grZHs-nvCyc- 起針對抗生素抗性物種的殺細菌濃度比僅氯胺苯醇低得多(20% )。
[0174] 類似地，肺炎克雷伯氏菌ATCCBAAK1705(1 X 106CFU/mL)(碳青霉烯-亞胺培南和 厄他培南、阿米卡星、氨曲南、左氧氟沙星和環丙沙星抗性菌株)如以上實例中所述與僅阿 米卡星或阿米卡星與grZ14s-nvCyc-起培育。結果呈現在圖17中。圖17展現氯胺苯醇與 grZ14s-nvCyc-起針對抗生素抗性物種的殺細菌濃度比僅氯胺苯醇低得多(75% )。
[0175] 實例10-左氧氟沙星與包含roYDWY的肽組合的活性
[0176] 肺炎克雷伯氏菌ATCCBAA'iil705(2 X 106CFU/mL)(碳青霉烯-亞胺培南和厄他培 南、阿米卡星、氨曲南、左氧氟沙星和環丙沙星抗性菌株)如以上實例中所述與僅左氧氟沙 星或左氧氟沙星與grZ14s-nvCyc-起培育。結果呈現在圖18中。圖18展現左氧氟沙星與 grZ14s-nvCyc-起針對抗生素抗性物種的殺細菌濃度比僅左氧氟沙星低得多(30% )。
[0177] 實例11-氨曲南與包含roYDWY的肽組合的活性
[0178] 肺炎克雷伯氏菌ATCCBAA?1705(lX105CFU/mL)(碳青霉烯-亞胺培南和厄他培 南、阿米卡星、氨曲南、左氧氟沙星和環丙沙星抗性菌株)如以上實例中所述與僅氨曲南或 氨曲南與grZ14s-nvCyc-起培育。結果呈現在圖19中。圖19展現氨曲南與grZ14s-nvCyc在 僅氨曲南未實現細菌殺死的濃度(1 〇〇〇μg/ml)下實現細菌殺死。
[0179] 類似地，肺炎克雷伯氏菌ATCCBAA?1705(lX103CFU/mL)如以上實例中所述與僅 氨曲南或氨曲南與grZHs-nvCyc-起培育。在此實例中，細菌濃度較低，因此僅抗生素能夠 實現殺細菌活性。結果呈現在19b中。圖19b展現氨曲南與grZ14s-nvCyc-起針對抗生素抗 性物種的殺細菌濃度比僅氯胺苯醇低得多(80% )。
【主權項】
1. 一種增加抗生素針對細菌的有效性的方法，其包含使所述細菌與所述抗生素和包含 序列FDYDWY的肽接觸。2. 根據權利要求1所述的方法，其中所述抗生素針對所述細菌的最小殺細菌濃度降低 至少10%。3. 根據權利要求1所述的方法，其中所述細菌是抗生素抗性物種。4. 根據權利要求1所述的方法，其中所述肽包含至多50個氨基酸。5. 根據權利要求1所述的方法，其中所述抗生素選自由胞外被膜抗生素、核酸抑制劑和 蛋白質合成抑制劑組成的群組。6. 根據權利要求5所述的方法，其中所述抗生素是選自由以下組成的群組的胞外被膜 抗生素:青霉素(penicillin)、頭胞菌素(cephalosporin)、糖肽和碳青霉稀(carbapenem)。7. 根據權利要求6所述的方法，其中所述抗生素是選自由以下組成的群組的青霉素:苯 P坐西林（oxacillin)、甲氧西林（methicillin)、阿莫西林（amoxi ci llin)、氨節西林 (ampicillin)、氯挫西林（cloxacillin)、雙氯西林（dicloxacillin)、卡本西林 (carbenici 11 in)、替卡西林(ticarci 11 in)和哌拉西林(piperacillin) 〇8. 根據權利要求6所述的方法，其中所述抗生素是選自由以下組成的群組的頭孢菌素： 頭孢乙腈（〇6€8061：1'；[16)、頭孢輕氨節（06€3(11'(?；[1)、頭孢力新（06。1^161；[11)、頭孢來星 (cefaloglycin)、頭抱洛寧（cefalonium)、頭抱噻啶（cefaloridine)、頭抱噻吩 (cefalotin)、頭抱匹林(cefapirin)、頭抱曲秦(cefatrizine)、頭抱氮氣(cefazaf lur)、頭 抱西酮（cefazedone)、頭抱唑林（cefazolin)、頭抱拉定（cefradine)、頭抱沙定 (。6；^(?&(1；[116)、頭抱替唑(06；1^62〇16)、頭抱克洛(06€&(31〇1')、頭抱尼西(06；1^011；[(^(1)、頭抱 丙稀（cefprozil)、頭抱咲辛（cefuroxime)、頭抱唑喃（cefuzonam)、頭抱美挫 (06^116七&2〇16)、頭抱替坦(06；1^(^6七&11)、碳頭抱稀(0&1^&06。116111):氯碳頭抱（1〇抑0&1^6；〇、 頭抱拉宗（cef buperazone )、頭抱美唑（cefmetazole)、頭抱米諾（cefminox)、頭抱替坦 (06；1^(^6七311)、頭孢西丁（06；1^(?；[1：；[11)、頭孢替安（06；1^01：13111)、頭孢克定（06；1^11(1；[116)、頭孢 P比月虧（cefepime)、頭孢瑞南（cefluprenam)、頭孢噻利（cefoselis)、頭孢唑蘭 (cefozopran)、頭孢匹羅（cefpirome)、頭孢喹Η虧(cefquinome)、氟氧頭孢(f lomoxef)、頭孢 P比普（ceftobiprole)和頭抱洛林(ceftaroline)。9. 根據權利要求6所述的方法，其中所述抗生素是選自由萬古霉素(vancomycin)和替 考拉寧(te i cop lanin)組成的群組的糖肽。10. 根據權利要求6所述的方法，其中所述抗生素是選自由以下組成的群組的碳青霉 稀：亞胺培南（imipenem)、莫若培南（morepenem)、厄他培南（ertapenem)、多尼培南 (doripenem)、帕尼培南(panipenem)和比阿培南(biapenem) 〇11. 根據權利要求5所述的方法，其中所述抗生素是選自由氟喹諾酮 (f luoroqu ino 1 one)組成的群組的核酸抑制劑。12. 根據權利要求11所述的方法，其中所述氟喹諾酮是環丙沙星(ciprofloxacin)。13. 根據權利要求5所述的方法，其中所述抗生素是選自由氯胺苯醇 (chloramphenicol)和阿米卡星(amikacin)組成的群組的蛋白質合成抑制劑。14. 根據前述權利要求中任一權利要求所述的方法，其中所述肽具有序列 CSVHSFDYDWYNVCo15. 根據權利要求14所述的方法，其中所述肽經環化。16. 根據權利要求14所述的方法，其中所述肽借助羧基端和氨基端處的兩個半胱氨酸 環化。17. 根據權利要求1所述的方法，其中所述抗生素和所述肽投與有需要的個體。18. 根據權利要求17所述的方法，其中所述個體是具有細菌感染的哺乳動物。19. 根據權利要求18所述的方法，其中所述細菌感染是由抗生素抗性物種引起。20. 根據權利要求18所述的方法，其中所述哺乳動物是人類。21. -種組合物，其包含抗生素和包含序列FDYDWY的肽。22. 根據權利要求21所述的組合物，其中所述肽包含至多50個氨基酸。23. 根據權利要求22所述的組合物，其中所述肽具有序列CSVHSFDYDWYNVC。24. 根據權利要求21所述的組合物，其中所述抗生素因特定細菌物種針對所述抗生素 的特異性或非特異性抗性而針對所述細菌呈現減小的活性。25. 根據權利要求23所述的組合物，其中所述肽借助羧基端和氨基端處的兩個半胱氨 酸環化。
【文檔編號】C07K7/06GK105828828SQ201480066565
【公開日】2016年8月3日
【申請日】2014年10月31日
【發明人】阿米爾·茲洛特金
【申請人】和黃生物膜醫療解決方案有限公司