用于治療癌癥的組合療法
【專利摘要】本發明涉及包括以下的藥物組合：(1)第一藥劑，其是CDK抑制劑或其藥學上可接受鹽和(2)第二藥劑，其是抗激素劑或其藥學上可接受鹽。本發明還涉及包括以下的藥物組合：(1)第一藥劑，其是CDK抑制劑或其藥學上可接受鹽，(2)第二藥劑，其是抗激素劑或其藥學上可接受鹽，和(3)第三藥劑，其是調節PI3K/Akt/mTOR通路的試劑或其藥學上可接受鹽。
【專利說明】
用于治療癌癥的組合療法
技術領域
[0001] 本發明涉及含CDK抑制劑和抗激素劑的藥物組合以用于治療癌癥;所述組合在治 療癌癥中的應用；治療包括人在內的患癌溫血動物的方法，包括向需要這類治療的所述動 物施用有效劑量的CDK抑制劑和抗激素劑。另外，所述組合可任選包括調節P13K/Akt/mT0R 通路的試劑。
【背景技術】
[0002] CDK抑制劑
[0003] 腫瘤發展與CDK以及其調節因子的基因改變和失調緊密相關，表明CDK抑制劑可能 是有用的抗癌療法。確實，早期結果表明轉化細胞和正常細胞的需求例如對細胞周期蛋白 D/CDK4/6的需求有差異，且可能開發出不具有使用常規細胞毒性和細胞抑制藥觀察到的普 遍宿主毒性的新型抗腫瘤劑。
[0004] CDK的功能是磷酸化并因此活化或滅活某些蛋白，包括例如成視網膜細胞瘤蛋白、 核纖層蛋白、組蛋白H1和有絲分裂紡錘體組分。CDK介導的催化步驟包括從ATP到大分子酶 底物的磷酸轉移反應。已發現數組化合物（綜述于例如Fischer，P. M. Curr . Opin . Drug Discovery Dev. 2001，4，623-634)由于CDK特異性ATP拮抗作用具有抗增殖特性。
[0005] 在分子水平調節CDK/細胞周期蛋白復合體活性需要一系列刺激性和抑制性的磷 酸化或去磷酸化事件。CDK磷酸化是通過一組⑶K活化激酶(CAK)和/或激酶例如weel、Mytl 和Mikl實現的。去磷酸化是通過磷酸酶例如cdc25(a&c)、pp2a或KAP實現的。
[0006] CDK/細胞周期蛋白復合體活性可通過2個內源細胞蛋白抑制劑:Kip/Cip家族或 INK家族進一步調節。INK蛋白特異性結合⑶K4和⑶1(6。？16丨他4(也稱為MTS1)是潛在腫瘤抑 制基因，在大量原發性癌中有突變或缺失。Kip/Cip家族包含蛋白如p21Cipl、Wafl、p27Kipl 和p57kip2,其中p21由p53誘導且能使CDK/細胞周期蛋白（E/A)復合體失活。在乳腺癌、結腸 癌和前列腺癌中觀察到非典型的低P27表達水平。相反，實體瘤中的細胞周期蛋白E過表達 顯示與較差的患者預后相關。細胞周期蛋白D1過表達與食管癌、乳腺癌、鱗狀癌和非小細胞 肺癌相關。
[0007] CDK和其相關蛋白在增殖態細胞內協調和推動細胞周期的關鍵作用如上所概括。 也已描述一些CDK在其中發揮關鍵作用的生化通路。因此，可能非常需要開發使用靶向一般 CDK或特異CDK的治療物來治療增生性疾病（如癌）的單一療法。因而，仍然需要發現新的治 療藥劑以治療人類疾病。
[0008] 抗激素劑
[0009] 抗激素劑以兩種方式發揮作用：（1)通過降低體內激素量或(2)通過阻斷激素對細 胞的作用。
[0010] 已知多種類型的抗激素劑。
[0011] -類抗激素劑稱為芳香酶抑制劑。芳香酶抑制劑通過抑制芳香酶作用而發揮功 能，芳香酶通過稱為芳構化的過程將雄激素轉化成雌激素。由于乳腺組織由雌激素刺激，減 少雌激素生成是抑制乳腺腫瘤組織復發的一種方法。在絕經前婦女中，雌激素主要來源是 卵巢，而絕經后婦女中大部分身體雌激素在外周組織(CNS外）以及腦內多個區域的一些CNS 位點中生成。雌激素生成并局部作用于這些組織，但在男性和女性中顯示全身性雌激素效 果的任何循環雌激素是雌激素離開局部代謝并擴散到循環系統的結果。有兩類芳香酶抑制 劑：（1)類固醇抑制劑，如與芳香酶形成永久且失活性鍵的依西美坦(阿諾新）；和(2)非類固 醇抑制劑，如阿那曲唑(瑞寧得)或來曲唑（弗隆），其通過可逆競爭芳香酶來抑制雌激素合 成。
[0012] 另一類抗激素劑是雌激素受體拮抗劑。一個雌激素受體拮抗劑示例是氟維司群 (法洛德）。雌激素受體發現于乳腺細胞。雌激素結合雌激素受體，如同鑰匙嵌入鎖。這能活 化受體并導致激素受體陽性腫瘤生長。氟維司群結合并阻斷雌激素受體，減少乳腺細胞中 的雌激素受體數量。
[0013] 另一類抗激素劑是選擇性雌激素受體調節劑(SERM)，這是作用于雌激素受體的一 類化合物。區分這些物質與單純的受體激動劑和拮抗劑的特征是其在不同組織中的作用不 同，從而產生在不同組織中選擇性抑制或刺激類雌激素作用的可能性。一個SERM示例是他 莫昔芬。他莫昔芬在骨和子宮中是雌激素受體激動劑，但在乳腺中是拮抗劑。
[0014] 調節PI3K/Akt/mT0R通路的試劑
[0015] PI3K/Akt/mT0R通路是正常細胞的重要、被嚴密調節的生存通路。磷脂酰肌醇3-激 酶(PI3K)是廣泛表達的脂質激酶，催化磷酸轉移制肌醇脂質D-3'位產生磷脂酰肌醇-3-磷 酸(PIP)、磷脂酰肌醇-3,4-二磷酸(PIP2)和磷脂酰肌醇_3,4,5_三磷酸(PIP3)。這些PI3K催 化反應的產物充當第二信使并在關鍵細胞過程中發揮重要作用，包括細胞生長、分化、運 動、增殖和存活。
[0016] 兩種1類PI3K中，1A類PI3K是由催化性plio亞基(α、β、δ亞型）構成的異二聚體，所 述亞基與調節亞基組成型連接，調節亞基可以是卩85€[、1)55€[、1)50€[、 1)850或？55丫。18類亞組 有一個家族成員，即由催化性Ρ110 γ亞基關聯調節亞基構成的異二聚體，所述調節亞基是 plOl 或 ρ84 兩者之 一（Fruman 等，Annu Rev.Biochem.67 :481(1998) ;Suire 等， Curr.Biol.l5：566(2005))0
[0017] 許多情況中，PIP2和PIP3將AKT募集到質膜，在該處其充當對生長和生存重要的許 多胞內信號通路的節點（Fantl等，Cell 69:413-423( 1992);Bader等，Nature Rev·Cancer 5:921 (2005);Vivanco和Sawyer，Nature Rev.03^^12:489(2002))4131(異常調節通常經 AKT活化來增加存活，這是人類癌癥中最普遍的事件之一且顯示在多個水平發生。腫瘤抑制 基因 PTEN在肌醇環3'位使磷脂酰肌醇脫磷酸并由此拮抗PI3K活性，該基因在多種腫瘤中功 能性缺失。在其它腫瘤中，ρΙΙΟα的同種型PIK3CA和Akt的基因得到擴增，數種人類癌癥中顯 示其基因產物的蛋白表達提高。此外，激活下游信號通路的PIK3CA體細胞錯義突變已在多 種人類癌癥中以顯著頻率被描述（Kang等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102:802(2005); Samuels等，Science 304:554(2004);Samuels等，Cancer Cell 7:561-573(2005))。因此， 已知ΡΙ3Κα抑制劑對治療癌癥和其他疾病有特殊價值。
[0018] mTOR是主要在細胞質中發現的激酶蛋白。其充當許多涉及細胞增殖、血管生成和 細胞代謝的生物過程的重要調節因子。mTOR主要通過打開和關閉細胞翻譯機制（包括核糖 體)來發揮作用，并負責蛋白合成。mTOR是一些細胞信號通路匯集的關鍵胞內點。mTOR響應 經這些通路傳遞的活化或抑制信號而行使其調節功能，這些通路在細胞中位于mTOR上游。 這些不同信號通路由以下活化:多種生長因子(包括血管內皮生長因子(VEGF)、血小板衍生 生長因子(PDGF)、表皮生長因子(EGF)、胰島素樣生長因子l(IGF-l))、激素（雌激素、黃體 酮）、以及營養物(葡萄糖、氨基酸)或氧是否存在。一個或多個這些信號通路可能在許多不 同類型癌癥患者中被異常激活，引起細胞增殖失調、腫瘤血管生成和異常細胞代謝。
[0019] 盡管癌癥患者有多種治療選擇，但仍需要有效且安全的治療劑和其在組合療法中 的優選應用。

【發明內容】

[0020] 本發明涉及包括以下的藥物組合：（1)第一藥劑，其是CDK抑制劑或其藥學上可接 受鹽，和(2)第二藥劑，其是抗激素劑或其藥學上可接受鹽。
[0021] 本發明還涉及包括以下的藥物組合：（1)第一藥劑，其是⑶K抑制劑或其藥學上可 接受鹽，（2)第二藥劑，其是抗激素劑或其藥學上可接受鹽，和(3)第三藥劑，其是調節PI3K/ Akt/mTOR通路的試劑或其藥學上可接受鹽。
[0022] 該組合可同時、分開或依序用于治療癌癥。
[0023] 在一個實施方式中，所述CDK抑制劑是CDK4/6抑制劑。
[0024] 所述CDK4/6抑制劑可以是例如
[0025]由下式A1所述的化合物A1:
[0027] ^[0028]由下式A2所述的化合物A2:
[0026]
[0029]
[0030] 或
[0031] 帕博西尼（下文稱為化合物A3，也稱為Η)-0332991)。
[0032] 化合物A1還由化學名7-環戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H-吡咯并[2， 3-d]嘧啶-6-羧酸二甲酰胺描述。
[0033] 化合物A2還由化學名7-環戊基-N，N-二甲基-2-(5-((lR，6S)-9-甲基-4-氧代-3， 9_二氮雜二環[4.2.1]壬烷-3-基）吡啶-2-基氨基）-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酰胺描 述。
[0034] 化合物A3還由化學名6-乙酰基-8-環戊基-5-甲基-2-{ [5-(1-哌嗪基)-2-吡啶基] 氨基}吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)_酮描述。
[0035] 在一個實施方式中，所述抗激素劑是芳香酶抑制劑。所述芳香酶抑制劑可以是非 類固醇芳香酶抑制劑或類固醇芳香酶抑制劑。
[0036] 來曲唑(下文稱為化合物B1)是非類固醇芳香酶抑制劑示例。
[0037] 依西美坦(下文稱為化合物B2)是類固醇芳香酶抑制劑示例。
[0038]在另一個實施方式中，所述抗激素劑是雌激素受體拮抗劑。
[0039] 氟維司群(下文稱為化合物B3)是雌激素受體拮抗劑示例。
[0040] 在另一個實施方式中，所述抗激素劑是選擇性雌激素受體調節劑。
[0041 ]他莫昔芬(下文稱為化合物B4)是選擇性雌激素受體調節劑示例。
[0042] 在一個實施方式中，調節PI3K/Akt/mT0R通路的試劑是PI3K抑制劑。
[0043] 所述PI3K抑制劑可以是例如
[0044] 由下式C1所述的化合物C1:
[0045]
[0046] 或
[0047]由下式C2所述的化合物C2:
[0048]
[0049] 化合物C1還由化學名（S)-吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺1-({4_甲基-5-[2-(2,2,2- 三氟-1，1 -二甲基-乙基)-吡啶-4-基]-噻唑-2-基}-酰胺)描述。
[0050] 化合物C2還由化學名5-(2,6_二-4-嗎啉基-4-嘧啶基)-4-(三氟甲基)-2-嘧啶胺 描述。
[0051 ] 在另一個實施方式中，調節PI3K/Akt/mT0R通路的試劑是mTOR抑制劑。
[0052]依維莫司（下文稱為化合物C3)是mTOR抑制劑示例。
[0053]本發明還涉及上述藥物組合供使用于治療癌癥。
[0054]本發明還涉及治療癌癥的方法，包括向有需要的溫血動物(優選人)施用聯合治療 有效量的上述藥物組合。
[0055] 根據本發明，所述藥物組合中的化合物可作為單一藥物組合物、分開的組合物施 用或依序施用。
[0056] 在一個特定實施方式中，本發明涉及包括以下的藥物組合：（1)第一藥劑，其是由 下式A1所述的化合物A1或其藥學上可接受鹽：
[0057]
[0058]和(2)第二藥劑，其是來曲唑。
[0059] 在另一個特定實施方式中，本發明涉及包括以下的藥物組合：（1)第一藥劑，其是 由下式A1所述的化合物A1或其藥學上可接受鹽：
[0060]
[00611 (2)第二藥劑，其是來曲唑，和
[0062] (3)第三藥劑，其是由下式C1所述的化合物C1或其藥學上可接受鹽：
[0063]
[0064] 在另一個特定實施方式中，本發明涉及包括以下的藥物組合：（1)第一藥劑，其是 由下式A1所述的化合物A1或其藥學上可接受鹽：
[0065]
[0066] (2)第二藥劑，其是來曲唑，和
[0067] (3)第三藥劑，其是由下式C2所述的化合物C2或其藥學上可接受鹽：
[0068]
[0069]在另一個特定實施方式中，本發明涉及包括以下的藥物組合：（1)第一藥劑，其是 由下式A1所述的化合物A1或其藥學上可接受鹽：
[0070] "
U'U
[0071] 和(2)第二藥劑，其是氟維司群。
[0072] 在另一個特定實施方式中，本發明涉及包括以下的藥物組合：（1)第一藥劑，其是 由下式A1所述的化合物A1或其藥學上可接受鹽：
[0073]
[0074] (2)第二藥劑，其是氟維司群，和
[0075] (3)第三藥劑，其是由下式C1所述的化合物C1或其藥學上可接受鹽：
[0076]
[0077] 在另一個特定實施方式中，本發明涉及包括以下的藥物組合：（1)第一藥劑，其是 由下式A1所述的化合物A1或其藥學上可接受鹽：
[0078]
[0079] (2)第二藥劑，其是氟維司群，和
[0080] (3)第三藥劑，其是由下式C2所述的化合物C2或其藥學上可接受鹽：
[0081]
[0082]在另一個特定實施方式中，本發明涉及包括以下的藥物組合：（1)第一藥劑，其是 由下式A1所述的化合物A1或其藥學上可接受鹽：
[0083
[0084」（2)苐二藥刑，其是依維昊司，和 [0085] (3)第三藥劑，其是依西美坦。
[0086]在另一個特定實施方式中，本發明涉及治療HR+、HER2_乳腺癌的方法，包括向對象 施用包括以下的藥物組合：（1)第一藥劑，其是由下式A1所述的化合物A1或其藥學上可接受 鹽：
[0087]
[0088] 和(2)第二藥劑，其是來曲唑。
[0089]在另一個特定實施方式中，本發明涉及治療HR+、HER2-晚期乳腺癌的方法，包括向 對象施用包括以下的藥物組合：（1)第一藥劑，其是由下式A1所述的化合物A1或其藥學上可 接受鹽
[0090] " IA1；
[0091] 和(2)第二藥劑，其是來曲唑。
[0092] 在另一個特定實施方式中，本發明涉及治療ER+晚期乳腺癌的方法，包括向對象施 用包括以下的藥物組合：（1)第一藥劑，其是由下式A1所述的化合物A1或其藥學上可接受 鹽：
[0093
[0094] (2)第二藥劑，其是來曲唑，和
[0095] (3)第三藥劑，其是由下式C1所述的化合物C1或其藥學上可接受鹽：
[0096]

[0097] 在另一個特定實施方式中，本發明涉及治療ER+晚期乳腺癌的方法，包括向對象施 用包括以下的藥物組合：（1)第一藥劑，其是由下式A1所述的化合物A1或其藥學上可接受 鹽：
[0098]
[0099] (2)第二藥劑，其是來曲唑，和
[0100] (3)第三藥劑，其是由下式C2所述的化合物C2或其藥學上可接受鹽：
[0101]
[0102]在另一個特定實施方式中，本發明涉及治療患有ER+、HER2-乳腺癌的絕經后婦女 的方法，包括向對象施用包括以下的藥物組合：（1)第一藥劑，其是由下式A1所述的化合物 A1或其藥學上可接受鹽：
[0103]
[0104] 和(2)第二藥劑，其是氟維司群。
[0105]在另一個特定實施方式中，本發明涉及治療患有ER+、HER2-乳腺癌的絕經后婦女 的方法，包括向對象施用包括以下的藥物組合：（1)第一藥劑，其是由下式A1所述的化合物 A1或其藥學上可接受鹽：
[0106]
[0107] (2)第二藥劑，其是氟維司群，和
[0108] (3)第三藥劑，其是由下式C1所述的化合物C1或其藥學上可接受鹽：
[0109]
[0110] 在另一個特定實施方式中，本發明涉及治療患有ER+、HER2-乳腺癌的絕經后婦女 的方法，包括向對象施用包括以下的藥物組合：（1)第一藥劑，其是由下式A1所述的化合物 A1或其藥學上可接受鹽：
[0111]
[0112] (2)第二藥劑，其是氟維司群，和
[0113] (3)第三藥劑，其是由下式C2所述的化合物C2或其藥學上可接受鹽：
[0114]
[0115] 在另一個特定實施方式中，本發明涉及治療ER+乳腺癌的方法，包括向對象施用包 括以下的藥物組合:（1)第一藥劑，其是由下式A1所述的化合物A1或其藥學上可接受鹽：
[0116]
[0117] (2)第二藥劑，其是依維莫司，和
[0118] (3)第三藥劑，其是依西美坦。
[0119]本發明還涉及含藥物組合的藥盒。
【附圖說明】
[0120]圖1顯示擴展的劑量矩陣和等效線圖，證明聯合化合物A1和化合物B1的劑量對有 Δ 4A的MCF7/AR0人乳腺癌細胞增殖的效果。
[0121]圖2顯示擴展的劑量矩陣和等效線圖，證明聯合化合物A1和化合物B2的劑量對有 Δ 4A的MCF7/AR0人乳腺癌細胞增殖的效果。
[0122] 圖3顯示擴展的劑量矩陣和等效線圖，證明聯合化合物A1和化合物B3的劑量對有 Δ 4A的MCF7/AR0人乳腺癌細胞增殖的效果。
[0123] 圖4顯示擴展的劑量矩陣，證明有或沒有化合物C1、化合物C2或化合物C3存在下聯 合化合物A1和化合物B1對有△ 4A的MCF7/AR0人乳腺癌細胞增殖的效果。
[0124] 圖5顯示擴展的劑量矩陣，證明有或沒有化合物C1、化合物C2或化合物C3存在下聯 合化合物A1和化合物B2對有△ 4A的MCF7/AR0人乳腺癌細胞增殖的效果。
[0125] 圖6顯示擴展的劑量矩陣，證明有或沒有化合物C1、化合物C2或化合物C3存在下聯 合化合物A1和化合物B3對有△ 4A的MCF7/AR0人乳腺癌細胞增殖的效果。
[0126] 圖7顯示用CTG試驗時，6天含Δ 4A的MCF7/Aro細胞生長。
[0127] 圖8顯示擴展的劑量矩陣和等效線圖，證明聯合化合物A3和化合物B1劑量對有Δ 4A的MCF7/AR0人乳腺癌細胞增殖的效果。
[0128] 圖9顯示擴展的劑量矩陣和等效線圖，證明聯合化合物A2和化合物B1劑量對有Δ 4A的MCF7/AR0人乳腺癌細胞增殖的效果。
[0129] 圖10顯示擴展的劑量矩陣，證明有或沒有化合物C1或化合物C3存在下聯合化合物 A3和化合物B1對有△ 4A的MCF7/AR0人乳腺癌細胞增殖的效果。
[0130]圖11顯示擴展的劑量矩陣，證明有或沒有化合物C1或化合物C3存在下聯合化合物 A2和化合物B1對有△ 4A的MCF7/AR0人乳腺癌細胞增殖的效果。
[0131]圖12顯示擴展的劑量矩陣和等效線圖，證明聯合化合物A3和化合物B2劑量對有Δ 4A的MCF7/AR0人乳腺癌細胞增殖的效果。
[0132] 圖13顯示擴展的劑量矩陣和等效線圖，證明聯合化合物A2和化合物B2劑量對有Δ 4A的MCF7/AR0人乳腺癌細胞增殖的效果。
[0133] 圖14顯示擴展的劑量矩陣，證明有或沒有化合物C1或化合物C3存在下聯合化合物 A3和化合物B2對有△ 4A的MCF7/AR0人乳腺癌細胞增殖的效果。
[0134] 圖15顯示擴展的劑量矩陣，證明有或沒有化合物C1或化合物C3存在下聯合化合物 A2和化合物B2對有△ 4A的MCF7/AR0人乳腺癌細胞增殖的效果。
[0135] 圖16顯示擴展的劑量矩陣和等效線圖，證明聯合化合物A3和化合物B3劑量對有Δ 4A的MCF7/AR0人乳腺癌細胞增殖的效果。
[0136] 圖17顯示擴展的劑量矩陣和等效線圖，證明聯合化合物A2和化合物B3劑量對有Δ 4A的MCF7/AR0人乳腺癌細胞增殖的效果。
[0137] 圖18顯示擴展的劑量矩陣，證明有或沒有化合物C1或化合物C3存在下聯合化合物 A3和化合物B3對有△ 4A的MCF7/AR0人乳腺癌細胞增殖的效果。
[0138] 圖19顯示擴展的劑量矩陣，證明有或沒有化合物C1或化合物C3存在下聯合化合物 A2和化合物B3對有△ 4A的MCF7/AR0人乳腺癌細胞增殖的效果。
[0139] 圖20-22顯示在HBCx-34人乳腺癌患者源性異種移植模型中多種化合物作為單一 藥劑、雙重組合或三重組合使用的抗腫瘤功效。
[0140]圖23闡明實施例3所述臨床試驗的研究設計。
[0141] 圖24和25顯示實施例3所述臨床試驗的組1和組2的接觸治療的持續時間（中期結 果)。
[0142] 圖26顯示用化合物A1和來曲唑治療的轉移性乳腺癌患者觀察到的部分響應。
[0143] 圖27闡明實施例5所述臨床試驗的研究設計。
[0144] 圖28和29顯示在C1D15,用化合物A1+EVE+EXE治療的患者中化合物A1和EVE的平均 血漿濃度-時間曲線。
[0145] 圖30顯示實施例5所述臨床試驗的接觸治療的持續時間（中期結果）。
[0146] 圖31顯示有淋巴結、胸膜、肺和軟組織轉移的患者中的軟組織轉移改善，所述患者 在晚期/轉移背景下接受1個之前的阿那曲唑和1個之前的氟維司群。
【具體實施方式】
[0147] 提供下列一般定義以更好理解本發明：
[0148] 本文所用的"芳香酶抑制劑"涉及的化合物抑制雌激素生成，即底物雄烯二酮和睪 酮分別轉化成雌酮和雌二醇。這類化合物稱為"芳香酶抑制劑"。
[0149] "選擇性雌激素受體調節劑(SERM)"指作用于雌激素受體的化合物。區分SERM與單 純的受體激動劑和拮抗劑的特征是其在不同組織中的作用不同，從而產生在不同組織中選 擇性抑制或刺激類雌激素作用的可能性。
[0150] "PI3K抑制劑"在本文中定義成指靶向、減少或抑制磷脂酰肌醇-3-激酶的化合物。 磷脂酰肌醇-3-激酶活性顯示響應一些激素和生長因子刺激而增加且參與細胞生長和轉化 的過程，所述因子包括胰島素、血小板衍生生長因子、胰島素樣生長因子、表皮生長因子、集 落刺激因子和肝細胞生長因子。
[0151] "組合"指用于聯合施用的采用一個劑量單位形式的固定組合或非固定組合(或成 套藥盒），其中化合物和組合伴侶(如下述另一藥物，也稱為"治療劑"或"合作劑"）可同時單 獨施用或在一定時間間隔內分開施用，特別是這些時間間隔使組合伴侶們能顯示協作（如 協同）效應。本文所用的術語"聯合施用"等意在涵蓋向有需要的單一對象（如患者)施用選 定的組合伴侶，意在包括多個藥劑不必通過相同施用途徑或同時施用的治療方案。術語"固 定組合"指活性成分如式A1的化合物和組合伴侶以單一實體或劑型同時施用于患者。術語 "非固定組合"或"成套藥盒"指多個活性成分(如式A1的化合物和組合伴侶）以單獨實體同 時、同步或依序而沒有特定時間限制地施用于患者，其中所述施用在患者體內提供治療有 效水平的兩種化合物。
[0152] "治療"包括癌癥疾病或病癥的預防性和治療性處理(包括但不限于減輕、治愈、緩 解癥狀、減少癥狀）以及進展延遲。術語"預防性"指防止癌癥發生或復發。本文所用的術語 "進展延遲"指將所述組合施用于處于待治療癌癥病前階段(pre-stage)或早期的患者，對 應癌癥的預形式(pre-form)已被診斷出和/或在被診斷出處于對應癌癥可能會發展的情況 的患者中。
[0153] "藥物制品"或"藥物組合物"指含至少一種待施用于溫血動物（如人）的治療劑的 混合物或溶液。
[0154] "共施用"、"共同施用"或"聯合施用"等意在涵蓋向單一患者施用選定治療劑，且 意在包括其中藥劑不必定通過相同施用途徑或同時施用的治療方案。
[0155] "藥學上可接受"指在合理醫學判斷范圍內適于接觸哺乳動物(尤其是人)組織的 那些化合物、材料、組合物和/或劑型，而沒有過度毒性、刺激、過敏反應和其它問題并發癥， 并具有合理的效益/風險比。
[0156] "治療有效"優選涉及治療劑的一定量，該量對于抵御癌癥進展在治療上或更廣義 地還在預防上有效。
[0157] "聯合治療有效"指多個治療劑可以它們偏好的一定時間間隔分開施用(采用按時 間順序交叉方式，特別是順序特異性方式），從而其在待治療的溫血動物尤其是人中仍顯示 (優選協同的）相互作用。情況是否如此能通過跟蹤血液水平等來測定，顯示兩種化合物在 至少某些時間間隔中都存在于待治療人的血液內。
[0158] "單一藥物組合物"指配制成向患者遞送有效量的兩種治療劑的單一載體或載劑。 所述單一載劑設計成遞送有效量的各藥劑，以及任何藥學上可接受的載體或賦形劑。在一 些實施方式中，所述載劑是片劑、膠囊、藥丸或貼片。在其它實施方式中，所述載劑是溶液或 懸液。
[0159] "劑量范圍"指特定治療劑的量可接受變化的上限和下限。通常，在指定范圍內任 意量的試劑劑量能施用于接受治療的患者。
[0160] "對象"、"患者"或"溫血動物"意在包括動物。對象示例包括哺乳動物，如人、狗、 牛、馬、豬、綿羊、山羊、貓、小鼠、兔、大鼠和轉基因非人動物。在某些實施方式中，所述對象 是人，如患有、有風險患有、或潛在能患有腦腫瘤疾病的人。尤其優選所述對象或溫血動物 是人。
[0161] 術語"約"或"大致"通常表示距給定值或范圍20%以內，更優選10%以內，最優選 5%以內。或者，特別是在生物系統中，術語"約"表示在給定值的大約一對數（即一個數量 級)范圍內，優選1 /2到2倍內。
[0162] 本發明涉及包括以下的藥物組合：（1)CDK抑制劑或其藥學上可接受鹽和（2)抗激 素劑或其藥學上可接受鹽。
[0163] 本發明涉及包括以下的藥物組合：（1)CDK抑制劑或其藥學上可接受鹽，（2)抗激素 劑或其藥學上可接受鹽，和(3)調節PI3K/Akt/mT0R通路的試劑或其藥學上可接受鹽。
[0164] 該組合可同時、分開或依序用于治療癌癥。
[0165] 在一個實施方式中，所述CDK抑制劑是CDK4/6抑制劑。
[0166] 所述CDK4/6抑制劑可以是例如
[0167] 由下式A1所述的化合物A1:
[0168]
[0169] 或
[0170] 由下式A2所述的化合物A2:
[0171]
[0172] 或
[0173] 帕博西尼（下文稱為化合物A3,也稱為Η)-0332991)。
[0174] 化合物A1還由化學名7-環戊基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-7H_吡咯并[2， 3-d]嘧啶-6-羧酸二甲酰胺描述。
[0175] 化合物A2還由化學名7-環戊基-N，N-二甲基-2-(5-((lR，6S)-9-甲基-4-氧代-3， 9_二氮雜二環[4.2.1]壬烷-3-基）吡啶-2-基氨基）-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-6-甲酰胺描 述。
[0176] 化合物A3還由化學名6-乙酰基-8-環戊基-5-甲基-2-{ [5-(1-哌嗪基)-2_吡啶基] 氨基}吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)_酮描述。
[0177] 在一個實施方式中，所述抗激素劑是芳香酶抑制劑。所述芳香酶抑制劑可以是非 類固醇芳香酶抑制劑或類固醇芳香酶抑制劑。
[0178] 來曲唑(下文稱為化合物B1)是非類固醇芳香酶抑制劑示例。
[0179] 依西美坦(下文稱為化合物B2)是類固醇芳香酶抑制劑示例。
[0180] 在另一個實施方式中，所述抗激素劑是雌激素受體拮抗劑。
[0181] 氟維司群(下文稱為化合物B3)是雌激素受體拮抗劑示例。
[0182] 在另一個實施方式中，所述抗激素劑是選擇性雌激素受體調節劑。
[0183] 他莫昔芬(下文稱為化合物B4)是選擇性雌激素受體調節劑示例。
[0184] 在一個實施方式中，調節PI3K/Akt/mT0R通路的試劑是PI3K抑制劑。
[0185] 所述PI3K抑制劑可以是例如
[0186] 由下式C1所述的化合物C1:
[0187]
[0188] 或
[0189] 由下式C2所述的化合物C2:
[0190]
[0191] 化合物Cl還由化學名（S)_吡咯烷-1,2-二羧酸2-酰胺l-({4-甲基-5-[2-(2,2,2- 三氟-1，1 -二甲基-乙基)-吡啶-4-基]-噻唑-2-基}-酰胺)描述。
[0192] 化合物C2還由化學名5-(2,6-二-4-嗎啉基-4-嘧啶基)-4-(三氟甲基)-2-嘧啶胺 描述。
[0193] 在另一個實施方式中，調節PI3K/Akt/mT0R通路的試劑是mTOR抑制劑。
[0194] 依維莫司（下文稱為化合物C3)是mTOR抑制劑示例。
[0195] 本發明的特定實施方式包括以下：
[0196] (1)含化合物A1與化合物B1的組合；
[0197] (2)含化合物A1與化合物B2的組合；
[0198] (3)含化合物A1與化合物B3的組合；
[0199] (4)含化合物A1與化合物Μ的組合；
[0200] (5)含化合物Α2與化合物Β1的組合；
[0201] (6)含化合物Α2與化合物Β2的組合；
[0202] (7)含化合物Α2與化合物Β3的組合；
[0203] (8)含化合物Α2與化合物Μ的組合；
[0204] (9)含化合物A3與化合物Β1的組合；
[0205] (10)含化合物A3與化合物Β2的組合；
[0206] (11)含化合物A3與化合物Β3的組合；
[0207] (12)含化合物A3與化合物Μ的組合；
[0208] (13)含化合物Α1、化合物Β1和化合物C1的組合；
[0209] (14)含化合物Α1、化合物Β1和化合物C2的組合；
[0210] (15)含化合物Α1、化合物Β1和化合物C3的組合；
[0211] (16)含化合物Α1、化合物Β2和化合物C1的組合；
[0212] (17)含化合物Α1、化合物Β2和化合物C2的組合；
[0213] (18)含化合物Α1、化合物Β2和化合物C3的組合；
[0214] (19)含化合物Α1、化合物Β3和化合物C1的組合；
[0215] (2〇)含化合物Α1、化合物Β3和化合物C2的組合；
[0216] (21)含化合物Α1、化合物Β3和化合物C3的組合；
[0217] (22)含化合物Α1、化合物Μ和化合物C1的組合；
[0218] (23)含化合物Α1、化合物Μ和化合物C2的組合；
[0219] (24)含化合物A1、化合物Μ和化合物C3的組合；
[0220] (25)含化合物A2、化合物B1和化合物C1的組合；
[0221 ] (26)含化合物A2、化合物B1和化合物C2的組合；
[0222] (27)含化合物42、化合物價和化合物03的組合；
[0223] (28)含化合物A2、化合物B2和化合物C1的組合；
[0224] (29)含化合物A2、化合物B2和化合物C2的組合；
[0225] (30)含化合物A2、化合物B2和化合物C3的組合；
[0226] (31)含化合物A2、化合物B3和化合物C1的組合；
[0227] (32)含化合物A2、化合物B3和化合物C2的組合；
[0228] (33)含化合物A2、化合物B3和化合物C3的組合；
[0229] (34)含化合物A2、化合物Μ和化合物C1的組合；
[0230] (35)含化合物Α2、化合物Μ和化合物C2的組合；
[0231 ] (36)含化合物Α2、化合物Μ和化合物C3的組合；
[0232] (37)含化合物A3、化合物Β1和化合物C1的組合；
[0233 ] (38)含化合物A3、化合物Β1和化合物C2的組合；
[0234] (39)含化合物A3、化合物Β1和化合物C3的組合；
[0235] (40)含化合物A3、化合物Β2和化合物C1的組合；
[0236] (41)含化合物A3、化合物Β2和化合物C2的組合；
[0237] (42)含化合物A3、化合物Β2和化合物C3的組合；
[0238] (43)含化合物A3、化合物Β3和化合物C1的組合；
[0239] (44)含化合物A3、化合物Β3和化合物C2的組合；
[0240] (45)含化合物A3、化合物Β3和化合物C3的組合；
[0241 ] (46)含化合物A3、化合物Μ和化合物C1的組合；
[0242 ] (47)含化合物A3、化合物Β4和化合物C2的組合;和
[0243 ] (48)含化合物A3、化合物Μ和化合物C3的組合。
[0244] 本發明還涉及上述藥物組合供使用于治療癌癥。
[0245] 本發明還涉及治療癌癥的方法，包括向有需要的溫血動物(優選人)施用聯合治療 有效量的上述藥物組合。
[0246] 根據本發明，所述藥物組合中的化合物可作為單一藥物組合物施用、分開的組合 物施用或依序施用。
[0247] 本發明還涉及含所述藥物組合的藥盒。
[0248] 化合物A1-A3、B1-B4、C1_C3可以其游離堿或其任何鹽的形式納入本發明的組合。 鹽能單獨存在或與游離化合物(如式A1化合物)混合，且優選是藥學上可接受鹽。式A1化合 物的所述鹽是從有堿性氮原子的式A1化合物形成例如作為酸加成鹽，優選用有機或無機 酸。例如，合適的無機酸是氫鹵酸如鹽酸，硫酸或磷酸。例如，合適的有機酸是琥珀酸、羧酸 或磺酸，如富馬酸或甲磺酸。出于分離或純化目的，還能使用藥學上無法接受的鹽，例如苦 味酸鹽或高氯酸鹽。對于治療應用，僅使用藥學上可接受鹽或游離化合物(適用時采用藥物 制品形式），因此也是優選的。
[0249] 化合物A1-A3、B1-B4、C1-C3能由本領域技術人員合成。具體地，W02010/020675的 實施例74公開化合物41;102011/101409公開化合物42;102010/029082的實施例15公開化 合物Cl;W02007/084786的實施例10公開化合物C2。
[0250] 合適的芳香酶抑制劑包括但不限于
[0251] (a)類固醇，如依西美坦和福美司坦;和
[0252] (b)非類固醇，如氨魯米特、伏氯唑、法倔唑、阿那曲唑，尤其是來曲唑。
[0253] 依西美坦能以例如市售形式（如商標AROMAS丨N?)施用。福美司坦能以例如市 售形式（如商標LENTARON?)施用。法倔唑能以例如市售形式（如商標AFEMLA*)施用。 阿那曲唑能以例如市售形式(如商標ARIMIDEX6)施用。來曲唑能以例如市售形式(如商 標FEMARA &或FEMAR?)施用。來曲唑具體描述于以下都以本
【申請人】名義公開的專利： 1987年9月16日公開的歐洲專利號0 236940以及1990年12月18日公開的美國專利號4,978， 672和日本專利號2018112。氨魯米特能以例如市售形式(如商標ORIMETEN?)施用。
[0254] 由編號、通用名或商品名確定的活性藥劑結構可獲自標準綱要《默克索引》（"The Merck Index")的現行版本或獲自數據庫，如國際專利(Patents International)(如IMS世 界出版物（MS World Publications))。其對應內容通過引用納入本文。
[0255] 同樣地，也包括其藥學上可接受鹽、對應外消旋物、非對映異構體、對映異構體、互 變異構體以及上面所公開化合物的對應晶體變體(存在時），例如其中公開的溶劑合物、水 合物和多晶型物。用作本發明組合活性成分的化合物能分別如所引用文獻所述制備和施 用。本發明范圍還包括大于兩種的上述單獨活性成分的組合，即本發明范圍內的藥物組合 能包括三種或更多活性成分。
[0256] 認為本發明組合具有有益的治療特性，如協同相互作用、強的體外或體內抗增殖 活性和/或強的體外或體內抗腫瘤反應，使其特別適于治療癌癥。
[0257] 能用本發明組合治療的合適癌癥包括但不限于肉瘤、淋巴瘤、肺癌、支氣管癌、前 列腺癌、乳腺癌(包括散發性乳腺癌和Cowden病患者）、胰腺癌、胃腸癌、結腸癌、直腸癌、結 腸癌、結直腸腺瘤、甲狀腺癌、肝癌、肝內膽管癌、肝細胞癌、腎上腺癌、胃癌、胃腫瘤、膠質 瘤、成膠質細胞瘤、子宮內膜癌、黑素瘤、腎癌、腎盂癌、膀胱癌、子宮體癌、宮頸癌、陰道癌、 卵巢癌、多發性骨髓瘤、食管癌、白血病、急性髓細胞性白血病、慢性髓細胞性白血病、淋巴 細胞性白血病、骨髓性白血病、腦腫瘤、腦癌、口腔及咽部癌、喉癌、小腸癌、非霍奇金淋巴 瘤、黑素瘤、結腸絨毛腺瘤、贅生物、上皮癌、乳腺癌、基底細胞癌、鱗狀細胞癌、光化性角化 病、腫瘤疾病(包括實體瘤）、頸部或頭部腫瘤、真性紅細胞增多、原發性血小板增多癥、髓樣 化生性骨髓纖維化和華氏巨球蛋白血癥。當提及癌、腫瘤、腫瘤疾病、肉瘤或癌癥時，還替代 或補充地意指原始器官或組織和/或任何其它位置的轉移，無論腫瘤和/或轉移的位置如 何。
[0258]本發明組合特別用于治療磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)尤其是ΡΙ3Κα亞基介導的癌 癥。增生性疾病可包括顯示ΡΙ3Κα過表達或擴增、PIK3CA體細胞突變或者ΡΤΕΝ種系突變或體 細胞突變或者用于上調ρ85_ρ110復合體的ρ85α的突變和易位。在一個優選實施方式中，所 述癌癥是由ΡΙ3Κα同種型介導的腫瘤和/或癌性增生。疾病可包括顯示ΡΙ3Κα同種型過表達 或擴增和/或PIK3CA體細胞突變的那些。
[0259]本發明組合還特別用于治療激素敏感性和/或激素受體陽性癌。激素敏感性癌可 包括但不限于乳腺癌、子宮內膜癌、卵巢癌和/或宮頸癌。激素受體陽性癌可包括雌激素受 體陽性癌（即響應雌激素而生長的癌）或黃體酮受體陽性癌（即響應激素黃體酮而生長的 癌）。所述激素受體陽性癌優選是雌激素受體陽性乳腺癌。
[0260] 在一個實施方式中，所述癌是實體瘤。
[0261] 在另一個實施方式中，所述癌選自乳腺癌、子宮內膜癌、卵巢癌和宮頸癌。
[0262] 在另一個實施方式中，所述癌是顯示(a)PI3Ka同種型過表達或擴增和/或PIK3CA 體細胞突變和(b)激素受體陽性狀態的癌。
[0263] 在另一個實施方式中，所述癌是乳腺癌。所述癌優選是具有激素受體陽性、PIK3CA 突變或其組合的乳腺癌。所述癌更優選是雌激素受體陽性(+ )乳腺癌。
[0264] 在另一個實施方式中，所述癌是耐受激素療法(如雌激素或黃體酮)的激素受體陽 性(+ )乳腺癌。"耐受激素療法"的癌指不能良性響應現有激素療法治療，或者在良性響應激 素療法后重現或復發的癌或腫瘤。所述激素療法應理解為缺乏PI3K抑制劑。所述癌或腫瘤 可在治療開始時是抗性或難治的，或可在治療中變成抗性或難治的。
[0265] 本發明的一個目的是提供含一定量的本發明各治療劑的藥物組合物，所述量聯合 治療有效于靶向或預防癌癥。
[0266] 根據本發明，本發明組合物中的藥劑可在單一藥物組合物中一起施用、在兩個或 更多個分開的單位劑型中單獨施用或依序施用。所述單位劑型還可以是固定組合。
[0267] 本發明所述用于分開施用藥劑或以固定組合(即含至少兩種治療劑的單一蓋侖組 合物)施用的藥物組合物可以本身已知的方式制備，且適合腸部施用（如經口或直腸）、局部 施用和胃腸外施用于包括哺乳動物(溫血動物）（如人)在內的對象，所述藥物組合物包括治 療有效量的至少一種(例如上述的)單獨藥物活性組合伴侶，或聯合一種或多種藥學上可接 受載體或稀釋劑，尤其適合腸部或胃腸外施用。例如，合適的藥物組合物包含約〇 . 1 % -約 99.9 %、優選約1 % -約60 %的活性成分。
[0268] 用于聯合治療的腸部施用或胃腸外施用的藥物組合物是例如采用單位劑型的那 些，如糖衣片劑、片劑、膠囊或栓劑、安瓿、注射溶液或注射懸液。局部施用是例如施用于皮 膚或眼睛，如采用洗液、凝膠、油膏或乳膏形式，或鼻用型或栓劑形式。除非另有說明，其以 本身已知的方式制備，例如通過常規混合、造粒、包糖衣、溶解或凍干工藝。應理解各劑型個 體劑量所含各藥劑的單位內容物本身不需構成有效量，因為必需的有效量可通過施用多個 劑量單位來達到。
[0269] 藥物組合物可包括一種或多種藥學上可接受載體或稀釋劑，并能以常規方式通過 混合組合伴侶之一或兩者與藥學上可接受載體或稀釋劑來生產。藥學上可接受稀釋劑的示 例包括但不限于乳糖、右旋糖、甘露醇、和/或甘油、和/或潤滑劑和/或聚乙二醇。藥學上可 接受粘合劑的示例包括但不限于硅酸鎂鋁、淀粉(如玉米淀粉、小麥淀粉或米淀粉）、明膠、 甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮，以及若需要，藥學上可接受崩解劑包 括但不限于淀粉、瓊脂、藻酸或其鹽(如藻酸鈉)和/或泡騰合劑、或吸附劑、染料、調味劑和 甜味劑。本發明化合物也能采用胃腸外可施用組合物形式或輸液形式。所述藥物組合物可 無菌和/或可包括賦形劑，例如防腐劑、穩定劑、潤濕劑和/或乳化劑、增溶劑、調節滲透壓的 鹽和/或緩沖劑。
[0270] 具體地，本發明組合中各組合伴侶的治療有效量可同時施用或以任何順序依序施 用，這些組分可分開或作為固定組合施用。例如，本發明所述防止或治療癌癥的方法可包 括:同時或以任何順序依序(i)施用游離或藥學上可接受鹽形式的第一藥劑;和(ii)施用游 離或藥學上可接受鹽形式的第二藥劑，采用聯合治療有效量，優選協同有效量，例如對應于 本文所述量的每日劑量或間歇性劑量。本發明組合的個體組合伴侶可在治療進程中的不同 時間分開施用或者以分開或單個組合形式同步施用。此外，術語"施用"還包括使用體內轉 化成組合伴侶本身的組合伴侶前藥。因此，本發明應理解成涵蓋所有這類同時或交替治療 的方案且術語"施用"也進行相應解釋。
[0271] 本發明組合所用各組合伴侶藥劑的有效劑量可根據所用特定化合物或藥物組合 物、施用模式、所治療病癥、所治療病癥的嚴重性而變化。因此，本發明組合的劑量方案根據 多種因素選擇，包括患者的類型、物種、年齡、體重、性別和醫療狀況;待治療病癥的嚴重性； 施用途徑；患者的腎及肝功能；以及所用特定化合物。掌握普通技術的醫師、臨床醫生或獸 醫能容易確定并處方預防、抵消或阻滯病癥進展所需的有效量的藥物。達到產生功效范圍 內的藥物濃度的最優精度需要基于藥物對靶位點的可及性動力學的方案。這包括考慮藥物 的分布、平衡和消除。
[0272] 另一益處是能使用更低劑量的本發明組合的活性成分，例如劑量不僅通常更小， 而且施用頻率更低，或能用于減少副作用發生。這符合待治療患者的愿望和需求。
[0273] 所述藥劑組合能合并于同一藥物制品或采用聯合制劑的"成套藥盒"形式，在此意 義上所述組合伴侶可獨立施用或使用有不同量組合伴侶的不同固定組合，即同時或在不同 時間點。隨后，成套藥盒部分能同時或按時間順序交叉施用，即就成套藥盒任何部分而言在 不同時間點且時間間隔相等或不等。
[0274] 本發明還涉及包括以下的藥盒:選自化合物A1-A3的第一化合物或其藥學上可接 受鹽，選自化合物B1-B4的第二化合物或其藥學上可接受鹽，以及包括癌癥治療指南的藥品 說明書(package insert)或其它標簽。
[0275] 本發明還涉及包括以下的藥盒:選自化合物A1-A3的第一化合物或其藥學上可接 受鹽，選自化合物B1-B4的第二化合物或其藥學上可接受鹽，選自化合物C1-C3的第三化合 物或其藥學上可接受鹽，以及包括癌癥治療指南的藥品說明書或其它標簽。
[0276] 下列實施例闡明上述發明；但不意在以任何方式限制發明范圍。本發明藥物組合 的有益效果也能由相關領域技術人員已知的其它測試模型確定。
[0277] 實施例1
[0278] 進行下列實驗步驟以證明化合物A1在雙重或三重組合形式中治療乳腺癌中的功 效和抗增殖活性。
[0279] 制備化合物/試劑溶液
[0280] 化合物六1(001(4/6抑制劑，10111]\〇、化合物81(來曲唑，西格瑪（5丨81^)，10111]\〇、化合 物B3(氟維司群，西格瑪，10mM)、化合物B2(依西美坦，西格瑪，10mM)、化合物C1(PI3K抑制 劑，10mM)、化合物C3(mTor抑制劑，10mM)和化合物C2(PI3K抑制劑，10mM)溶于DMS0。Δ 4A(前 體雄烯二酮1 OmM)溶于乙醇。所有這些試劑于-20°C等分保存。
[0281] 細胞培養
[0282] MCF7人乳腺癌細胞由Chen Shiuan博士提供(美國加州的希望之城國家醫療中心 (City of Hope National Medical Center))，所述細胞穩定轉染有攜帶新霉素(G418)抗 性基因的芳香酶表達載體(也稱為MCF7/Aro)。芳香酶將前體雄烯二酮（△ 4A)轉化成宿主細 胞系增殖所需的17β-雌二醇（E2)。除非另有說明，所有細胞培養試劑獲自英杰 (Invitrogen)。細胞在37°C、5%C02濕潤培養箱中維持于ΜΕΜ(#11095-080)，所述MEM補充有 1〇%v/v胎牛血清(FBS，#10099-141)、lmM丙酮酸鈉(#11360-070)、1%v/v非必需氨基酸（# 11140-050)和G418(遺傳霉素，#10131)。細胞每周傳代兩次，培養基每2-3天更換。為評價雌 激素推動的細胞增殖，需要耗盡培養基的類固醇。為此，使用類固醇耗盡（SD)的培養基MEM (#51200-038,無酚紅&無谷氨酰胺），所述培養基補充有活性炭處理FBS(#12676-029)和 Glutamax(#35050-061)。需要無酚紅(pH指示劑）的培養基，因為它是雌激素的結構同源物。 此外，正常FBS需要換成活性炭處理的FBS以移除類固醇。TryPLE Express(12604-013,無酚 紅）用于SD處理中的細胞解離。
[0283] 細胞活力檢測和細胞增殖檢測
[0284] MCF7/Aro細胞去除類固醇3天，然后用TryPLE Express(12604-013,無酚紅）胰蛋 白酶消化，1500細胞/孔用30μ1/孔生長培養基一式三份接種于透明底384孔黑板（葛萊娜 (Greiner)，#781091)，使細胞能貼壁過夜且之后用10ηΜΔ4Α和不同濃度藥物或藥物組合 (1〇μ1/孔)孵育6天。細胞活力通過使用CellTiter-Gl〇?(CTG)發光法細胞活力檢測（普洛 麥格(Promega))測量細胞ATP含量來測定。各單一藥劑和組合處理的細胞與對照（用等體積 培養基處理的細胞)作比較。化合物處理結束時向各孔加入30ul/孔CTG試劑，用Envision酶 標儀(?金埃爾默(Perkin Elmer))記錄發光。相對于未處理(對照)細胞，計算減少和提高 的發光信號值(反應）。
[0285] 測試組合
[0286] 測試了以下組合：
[0287] (a)化合物A1/化合物Bl(來曲唑）；
[0288] (b)化合物A1/化合物Bl(來曲唑)/化合物Cl(luM或500nM);
[0289] (c)化合物A1/化合物Bl(來曲唑)/化合物C3(20nM或2nM);
[0290] (d)化合物A1/化合物Bl(來曲唑)/化合物C2(333nM);
[0291] (e)化合物A1 /化合物B3(氟維司群）；
[0292] (f)化合物A1/化合物B3(氟維司群)/化合物Cl(luM或500nM);
[0293] (g)化合物A1/化合物B3(氟維司群)/化合物C3(20nM或2nM);
[0294] (h)化合物A1/化合物B3(氟維司群)/化合物C2(333nM);
[0295] (i)化合物A1/化合物B2(依西美坦）；
[0296] (j)化合物A1/化合物B2(依西美坦)/化合物Cl(luM或500nM);
[0297] (k)化合物A1/化合物B2(依西美坦)/化合物C3(20nM或2nM);和
[0298] (1)化合物A1 /化合物B2(依西美坦)/化合物C2(333nM)。
[0299] 在所有三重組合中，化合物A1、化合物B1 (來曲唑）、化合物B2(依西美坦)和化合物 B3(氟維司群)采用多個劑量，化合物C1、化合物C2和化合物C3采用單一劑量作為背景化合 物(如上標記的劑量）。
[0300] 為以無偏方式評估所有組合的抗增殖活性以及鑒定所有可能濃度下的協同效應， 用"劑量矩陣"進行研究。其采用連續稀釋的化合物A1/化合物B1 (來曲唑）、化合物A1/化合 物B3 (氟維司群)和化合物A1/化合物B2 (依西美坦）（有單一劑量背景化合物）的所有可能排 列。所有組合試驗中，同時施用藥劑。
[0301] "劑量矩陣化合物A1/化合物B1、化合物A1/化合物B3和化合物A1/化合物B2"由以 下組成：
[0302] (a)化合物Al(化合物A1/化合物B1和化合物A1/化合物B2組合中），進行6劑量3X連 續稀釋，高劑量為10uM且低劑量約為41nM
[0303] (b)化合物Al(化合物A1/化合物B3組合中），進行5或6劑量3X連續稀釋，高劑量為1 或3uM且低劑量為約12nM
[0304] (c)化合物B1，進行7劑量3X連續稀釋，高劑量為5uM且低劑量為約7nM
[0305] (d)化合物B3,進行6劑量3X連續稀釋，高劑量為800nM高劑量且低劑量為約3nM
[0306] (e)化合物B2,進行7劑量3X連續稀釋，高劑量為10uM且低劑量為約14nM
[0307] 計算組合效果
[0308] 協同相互作用（用Chalice軟件[CombinatoRx，馬薩諸塞州劍橋]分析）如下計算： 針對藥物自身劑量疊加參照模型，比較來自組合的反應與藥劑單獨作用的反應。相比劑量 疊加的偏差能用定量組合效果的總強度的組合指數(CI)進行數值評估。此計算(本質是容 積分數)如下：
[0309] VHSA= Σχ,γΙη?Χ lnfY(I麵-IHSA)。另外，CI是在數據與最高單一藥劑表面之間計 算，就單一藥劑稀釋因子標準化(Lehar等，2009)。
[0310] 數據分析
[0311] 數據評估和圖形生成用Microsoft Excel軟件和Chalice軟件實施。
[0312]
[0313] 為研究化合物A1與抗雌激素治療劑如氟維司群(化合物B3)、來曲唑(化合物B1)和 依西美坦(化合物B2)、有或沒有PI3K或mTOR抑制劑化合物C1、化合物C2或化合物C3這些雙 重或三重組合對細胞增殖的活性，在雄烯二酮驅動、芳香酶過表達MCF7細胞中測試方法部 分所述的多種組合。在7x8劑量矩陣組合設定下于化合物A1和所有3種抗激素治療之間觀察 到協同性，就來曲唑(化合物B1)、依西美坦(化合物B2)和氟維司群(化合物B3)而言，各協同 得分分別為4.12、2.41和1.43。向同一 7X8劑量矩陣設定加入不同劑量PI3K和mTOR抑制劑作 為背景化合物以測試三重組合的功效，在所有情況中該三重組合都顯著提高單一或雙重試 劑達到的最高抑制水平，且大幅降低實現同一抑制水平所需的劑量。這些結果有力支持組 合兩種或三種試劑在ER陽性乳腺癌中靶向細胞周期、mT0R/PI3K和雌激素通路的概念。
[0314] 圖1-7顯示實施例1的結果。
[0315] 實施例2
[0316] 進行下列實驗步驟以證明化合物A2或化合物A3在雙重或三重組合中治療乳腺癌 的功效和抗增殖活性：
[0317] 制備化合物/試劑溶液
[0318] 化合物A2(CDK4/6抑制劑，10mM)、化合物A3(CDK4/6抑制劑，10mM)、化合物B1 (來曲 唑，西格瑪，10mM)、化合物B3 (氟維司群，西格瑪，10mM)、化合物B2(依西美坦，西格瑪， 10mM)、化合物C1(PI3K抑制劑，10mM)和化合物C3(mTor抑制劑，10mM)溶于DMS0。Δ4Α(前體 雄烯二酮，1 OmM)溶于乙醇。所有這些試劑于-20°C等分保存。
[0319] 細胞培養
[0320] MCF7人乳腺癌細胞由Chen Shiuan博士提供（美國加州的希望之城國家醫療中 心），所述細胞穩定轉染有攜帶新霉素(G418)抗性基因的芳香酶表達載體（也稱為MCF7/ Aro)。芳香酶將前體雄烯二酮（Δ4Α)轉化成宿主細胞系增殖所需的17β-雌二醇(E2)。除非 另有說明，所有細胞培養試劑獲自英杰。細胞在37 °C、5 % C02濕潤培養箱中維持于ΜΕΜ( # 11095-080)，所述腿]?補充有10%￥八胎牛血清卬85，#10099-141)、1111]\1丙酮酸鈉（#11360- 070)、1%v/v非必需氨基酸(#11140-050)和G418(遺傳霉素，#10131)。細胞每周傳代兩次， 培養基每2-3天更換。為評價雌激素推動的細胞增殖，需要耗盡培養基的類固醇。為此，使用 類固醇耗盡（SD)的培養基MEM( #51200-038，無酚紅&無谷氨酰胺），所述培養基補充有活性 炭處理的FBS(#12676-029)和Glutamax(#35050-061)。需要無酚紅(pH指示劑）的培養基，因 為它是雌激素的結構同源物。此外，正常FBS需要換成活性炭處理的FBS以移除類固醇。 TryPLE Express(12604-013，無酚紅）用于SD處理中的細胞解離。
[0321] 細胞活力檢測和細胞增殖檢測
[0322] MCF7/Aro細胞去除類固醇3天，然后用TryPLE Express(12604-013,無酚紅）胰蛋 白酶消化，1500細胞/孔用30μ1/孔生長培養基一式三份接種于透明底384孔黑板(葛萊娜，# 781091)，使細胞貼壁過夜且之后用10ηΜΔ4Α和不同濃度藥物或藥物組合（10μ1/孔)孵育6 天。細胞活力通過使用〇6111'^6廣(}丨〇@((^6)發光法細胞活力檢測（普洛麥格(？仰11^^&)) 測量細胞ΑΤΡ含量來測定。各單一藥劑和組合處理的細胞與對照（用等體積培養基處理的細 胞)作比較。化合物處理結束時向各孔加入30ul/孔CTG試劑，用Envision酶標儀(珀金埃爾 默)記錄發光。相對于未處理(對照)細胞，計算減少和提高的發光信號值(反應）。
[0323] 測試組合
[0324] 測試了以下組合：
[0325] (a)化合物A2/化合物Bl(來曲唑）；
[0326] (b)化合物A2/化合物Bl(來曲唑)/化合物C1;
[0327] (c)化合物A2/化合物B1 (來曲唑)/化合物C3;
[0328] (d)化合物A2/化合物B3(氟維司群）；
[0329] (e)化合物A2/化合物B3(氟維司群)/化合物C1;
[0330] (f)化合物A2/化合物B3 (氟維司群)/化合物C3;
[0331] (g)化合物A2/化合物B3(依西美坦）；
[0332] (h)化合物A2/化合物B3(依西美坦)/化合物C1;
[0333] (i)化合物A2/化合物B3(依西美坦)/化合物C3;
[0334] (j)化合物A3/化合物Bl(來曲唑）；
[0335] (k)化合物A3/化合物Bl(來曲唑)/化合物C1;
[0336] (1)化合物A3/化合物B1 (來曲唑)/化合物C3;
[0337] (m)化合物A3/化合物B3(氟維司群）；
[0338] (η)化合物A3/化合物B3(氟維司群)/化合物C1;
[0339] (〇)化合物A3/化合物B3 (氟維司群)/化合物C3;
[0340] (p)化合物A3/化合物B3(依西美坦）；
[0341 ] (q)化合物A3/化合物B3 (依西美坦)/化合物C1;和
[0342] (r)化合物A3/化合物B3 (依西美坦)/化合物C3。
[0343] 在所有三重組合中，化合物A2、化合物A3、來曲唑（化合物B1)、依西美坦(化合物 B2)和氟維司群(化合物B3)采用多個劑量，化合物Cl(luM)和化合物C2(20nM)采用單一劑量 作為背景化合物。
[0344] 為以無偏方式評估所有組合的抗增殖活性以及鑒定所有可能濃度下的協同效應， 用"劑量矩陣"進行研究。其采用連續稀釋的化合物A2/化合物B1 (來曲唑）、化合物A2/化合 物B3(氟維司群）、化合物A2/化合物B2(依西美坦）、化合物A3/化合物B1 (來曲唑）、化合物 A3/化合物B3(氟維司群)和化合物A3/化合物B2(依西美坦）（有單一劑量背景化合物）的所 有可能排列。所有組合試驗中，同時施用藥劑。
[0345] "劑量矩陣，化合物A2/化合物B1、化合物A2/化合物B3、化合物A2/化合物B2、化合 物A3/化合物B1、化合物A3/化合物B3和化合物A3/化合物B2"由以下組成：
[0346] (a)化合物A2,進行7劑量3X連續稀釋，高劑量為3uM且低劑量為約4. InM
[0347] (b)化合物A3,進行7劑量3X連續稀釋，高劑量為3uM且低劑量為約4. InM
[0348] (c)化合物B1，進行6劑量3X連續稀釋，高劑量為5uM且低劑量為約20.6nM
[0349] (d)化合物B3，進行6劑量3X連續稀釋，高劑量為ΙΟΟηΜ且低劑量為約0.4nM
[0350] (e)化合物B2,進行6劑量3X連續稀釋，高劑量為10uM且低劑量為約41.2nM
[0351] 計算組合效果
[0352] 協同相互作用（用Chalice軟件[CombinatoRx，馬薩諸塞州劍橋]分析）如下計算： 針對藥物自身劑量疊加參照模型，比較來自組合的反應與藥劑單獨作用的反應。相比劑量 疊加的偏差能用定量組合效果的總強度的組合指數(CI)進行數值評估。此計算(本質是容 積分數)如下：
[0353] VHSA=Xx,YlnfX lnfY(I麵-IHSA)。另外，CI是在數據與最高單一藥劑表面之間計 算，就單一藥劑稀釋因子標準化(Lehar等，2009)。
[0354] 數據分析
[0355] 數據評估和圖形生成用Microsoft Excel軟件和Chalice軟件實施。
[0356] 莖里
[0357] 為研究化合物A2和化合物A3與抗雌激素治療劑如氟維司群（化合物B3)、來曲唑 (化合物B1)和依西美坦(化合物B2)、有或沒有PI3K或mTOR抑制劑化合物C1或化合物C3這些 雙重或三重組合對細胞增殖的活性，在雄烯二酮驅動、芳香酶過表達MCF7細胞中測試方法 部分所述的多種組合。在7x8劑量矩陣組合設定下于化合物A3和所有三種抗激素治療之間 觀察到協同性，就來曲唑、依西美坦和氟維司群而言，各得分分別為3.7、1.2和1.7。化合物 A2/來曲唑和化合物A2/氟維司群組合中也觀察到協同性，得分各為3.2和1.4。向同一 7X8劑 量矩陣設定加入單劑量PI3K和mTOR抑制劑作為背景化合物以測試三重組合的功效，在所有 情況中該三重組合都顯著提高單一或雙重試劑達到的最高抑制水平，且大幅降低實現同一 抑制水平所需的劑量。這些結果有力支持組合兩種或三種試劑在ER陽性乳腺癌中靶向細胞 周期、mT0R/P 13K和雌激素通路的概念。
[0358] 圖8-19顯示實施例2的結果。
[0359] 下表概括實施例2所測試不同組合的協同得分。
[0360] L0362J 買施例3
[0363]目前正在進行臨床試驗以進一步臨床開發ER+乳腺癌中的兩種研究藥劑:化合物 A1 (⑶K4/6抑制劑)和化合物C1(PI3K抑制劑）。這是多中心、開放標簽、劑量確定Ib/II期試 驗。lb期部分是三部分劑量遞增研究以評估兩種雙重組合的MTD和/或RP2D:化合物A1與來 曲唑和化合物C1與來曲唑，然后是評估三重組合化合物A1+化合物C1與來曲唑的MTD和/或 RP2D。
[0364] 三部分lb期之后是隨機II期研究以評價兩種雙重組合方案(化合物A1+來曲唑和 化合物C1+來曲唑）相比三重組合(化合物A1 +化合物C1與來曲唑）的初步抗腫瘤活性，并進 一步評估其在ER+/HER2-局部晚期或轉移性乳腺癌患者中的安全性。
[0365] 招募約290個患有ER+/HER2-局部晚期或轉移性乳腺癌的成年女性。
[0366] 雙重和三重研究藥物組合的起始劑量如下所述。本研究中都使用來曲唑標準劑量 (2.5mg/天）。
[0367] 各組起始劑量：
[0368]
[0370]研究lb期部分的目的是：
[0371] 主要目的
[0372] 為評估下列組合的最大耐受劑量(MTD)和/或推薦II期劑量(RP2D):
[0373] --組1:化合物A1+來曲唑（2.5mg)
[0374] --組2:化合物C1+來曲唑（2.5mg)
[0375] --組3:化合物A1+化合物C1+來曲唑（2 · 5mg)
[0376] 次要目的
[0377] ?為鑒定化合物A1、化合物C1和來曲唑在聯用時的藥代動力學(PK)分布。
[0378] ?為鑒定組1、2和3中的安全性和耐受性。
[0379] ?為評價組1、2和3中的初步臨床抗腫瘤活性。
[0380] 研究設計(圖23)
[0381] ?在此多中心、開放標簽研究的lb期部分中，有ER+/人表皮生長因子受體陰性 (HER2-)晚期BC的絕經后婦女用每日一次劑量的化合物Al(3周服用/1周停藥）+來曲唑 (2 · 5mg)或化合物C1+來曲唑（2 · 5mg)治療。
[0382] ?劑量遞增由自適應貝葉斯邏輯回歸模型（BLRM)以及控制過量用藥的劑量遞增 方法指導。
[0383] ?在研究期間作出劑量遞增決定前進行PK評價以監控暴露和評估細胞色素 P450 介導藥物-藥物相互作用的可能性。
[0384] ?確定組1和2的MTD/RP2D后，用來自組1和2的劑量遞增最新數據更新BLRM，這會 被用于確定組3的起始劑量。
[0385] 關鍵納入標準
[0386] ?有轉移性或局部晚期ER+/HER2-BC的絕經后婦女。
[0387] ?任意數量的先前激素治療。
[0388] ?在轉移性或局部晚期情況下至多有一個先前的細胞毒性方案。
[0389] ?有可用于分子測試的代表性腫瘤樣本(存檔的或新的）（除非另有約定）。
[0390] ?新獲得的、匹配的治療前和治療中的腫瘤樣品在研究lb期劑量遞增部分是必須 的。
[0391] 關鍵排除標準
[0392] ?先前用CDK4/6、AKT、mT0R或PI3K抑制劑治療且未能受益。
[0393] ?當前有腦轉移癥狀。
[0394] ?臨床表現糖尿病，妊娠期糖尿病史，或有記錄的類固醇誘導糖尿病。
[0395] ?用 Fridericia 公式校正 QT(QTcF)>470ms〇
[0396]
[0397] ?常規安全評價在基線以及研究中定期進行，根據不良事件通用術語標準4.03版 持續評價不良事件(AE)
[0398] ?腫瘤反應由研究者實地評估，根據實體瘤應答評價標準1.1版，用計算機X射線 斷層掃描和核磁共振成像。評估在基線、每8周一次直到周期6、之后每12周（或如果有疾病 進展的臨床證據，會更早)和治療結束時進行。
[0399] ?用于PK評估的樣品在周期1的第1、2、8、15、21和22天以及周期2-6的第15天收 集。進行實時PK評價以指導劑量遞增(聯合BLRM)。
[0400] 中期結果
[0401] 患者特征和處置
[0402] · 10名患者用化合物A1和來曲唑（組1)治療，7名患者用化合物C1和來曲唑（組2) 治療。患者詳情如表1所示。
[0403] 表1.患者特征和處置
[0404]
[0405]
[0406] mTOR，哺乳動物類雷帕霉素靶蛋白；PI3K，磷脂酰肌醇3-激酶;pts，患者;WHO，世界 衛生組織。
[0407] ?研究開始時，所有患者具有IV期ER+/HER2-BC。
[0408] ?由于疾病發展，組1中的2名（20%)患者中斷治療。在截止日，組2中的所有7名 (100% )患者持續進行治療。
[0409] 安全性
[0410] · 12名可評價部分劑量確定組(每組6名）的患者中，觀察到3個劑量限制性毒性 (DLT):組1中的一例4級嗜中性白血球減少癥和組2中的兩例2級高血糖癥。
[0411] ?疑似與研究藥物相關的最常見(>30%患者)所有級別不良事件是(見表2):
[0412]--組1:嗜中性白血球減少癥(90% )和惡心（40% )
[0413] --組2:高血糖癥(57 % )、惡心(43 % )、食欲減退(43 % )和腹瀉(43 % )。
[0414] 表2.所有級別2 10%和所有3/4級不良事件
[0415]
[0416] ?組1中未觀察到QTcF延長(>470ms)。
[0417] ?疑似與研究藥物相關的3/4級不良事件包括(表2):
[0418] --組1:嗜中性白血球減少癥(50% )
[0419] --組2:淋巴球減少癥(14%)、疲勞（14%)和高血糖癥(14%)。
[0420] · 5名患者中發生劑量降低:組1的1名患者和組2的4名患者。
[0421] 藥代動力學
[0422] ?化合物A1、化合物C1和來曲唑的初步PK數據如下(表3):
[0423] 化合物A1和化合物C1在第1天和第21天的PK與歷史單一藥劑數據相當。
[0424] --來曲唑在第1天的PK與單一藥劑研究觀察到的相當。
[0425] 從試驗當前招募的患者中收集額外數據以進一步評估與化合物A1聯合的來曲 唑PK
[0426] 表3.化合物A1、化合物C1和來曲唑的藥代動力學參數
[0427]
[0428] AUC，曲線下面積;C，周期;Cmax，最大濃度;D，天;Tmax，達到最大濃度的時間。 [0429]臨床活性
[0430] ?圖24和25顯示接觸治療的持續時間。
[0431] ?組1中，1名患者有確認的部分響應（圖26)，2名患者有穩定疾病(SD)，1名無可測 量疾病的患者既沒有完全響應，也沒有進行性疾病(NCRNPD;圖24)。
[0432] ?組2中，2名患者有SD且3名患者有NCRNPD(圖25)。
[0433] 結論(基于中期結果)
[0434] 研究的兩組都顯示可接受的安全性概況和在患有ER+/HER2-晚期BC的絕經后婦女 中臨床活性的初步征兆。
[0435] ?嗜中性白血球減少癥是化合物A1的預期副作用，可能是因為通過⑶K4/6抑制而 抑制增殖。
[0436] ?組2(化合物C1+來曲唑）中觀察到的高血糖癥可能是PI3K抑制的目標效果。
[0437] ?繼續劑量遞增以確定MTD/RP2D。
[0438] ?確定組1和2的MTD/RP2D后，開始招募組3。研究的lb期部分后，隨機II期部分將 比較化合物A1+來曲唑和化合物C1+來曲唑與化合物A1+化合物C1+來曲唑。
[0439] 實施例4
[0440] 計劃一項多中心、術前、隨機、II期研究，以評價相較每日使用單一藥劑來曲唑，在 絕經后患者中每日400mg或600mg化合物A1與每日2.5mg來曲唑聯用的生物活性，所述患者 新診斷患有HR+、HER2-陰性早期乳腺癌。總共約120名患者隨機化。患者會接受14天（±3天） 的試驗治療，然后進行手術。患者隨機分配治療：
[0441 ] a.來曲唑(2.5mg，每天一次）；或
[0442] b.來曲唑(2.5mg，每天一次)+每日400mg化合物A1;或
[0443] c ·來曲唑（2 · 5mg，每天一次)+每日600mg化合物A1。
[0444]研究的主要目的是評價細胞周期應答率，其定義為實現Ki67表達降低到陽性Ki67 百分比的自然對數小于1的患者百分數(Baselga 2009)。盡管該試驗設計成開放標簽，所有 藥效學和臨床藥理學終點由對隨機治療盲的專家評價。
[0445] 實施例5
[0446] 化合物A1與依維莫司和依西美坦治療ER+Her2-晚期乳腺癌的Ib/II期試驗正在進 行中。試驗目的是評估化合物A1與依維莫司+依西美坦組合、化合物A1與依西美坦組合的 MTD和/或RP2D，以及鑒定依維莫司+依西美坦土化合物A1和化合物A1+依西美坦的組合在ER +HER2-晚期乳腺癌患者中的安全性和耐受性。研究由3組組成：
[0447]
Lu44bj 化甘籾A11史用bumg和kiuumg肷襄。訛四關S1史用umg斤介|」。訛維旲司便用2： · bmg、 5mg和7.5mg片劑。
[0449] 本研究lb期部分的目的是
[0450] 主要目的
[0451 ] ?確定ER+/人表皮生長因子受體2陰性(HER2-)晚期BC患者中化合物A1+依維莫司 (EVE)+依西美坦(ΕΧΕ)的最大耐受劑量(MTD)/推薦II期劑量(RP2D)。
[0452] 次要目的
[0453] ?確定化合物A1+EVE+EXE和化合物Α1+ΕΧΕ的安全性和耐受性。
[0454] ?鑒定化合物Α1和/或EVE在與ΕΧΕ聯合施用時的藥代動力學(ΡΚ)。
[0455] ?評價化合物A1+EVE+EXE和化合物Α1+ΕΧΕ的初步抗腫瘤活性。
[0456] ?評估細胞周期蛋白D-CDK4/6-INK-Rb、PI3K/AKT/mT0R和其他癌相關通路中抗腫 瘤活性與分子異常之間的關系。
[0457] 研究設計：
[0458] ?此Ib/II期多中心、開放標簽研究的lb期部分中，耐受來曲唑或阿那曲唑的患有 ER+/HER2-晚期BC的絕經后婦女用遞增劑量的化合物Al+EVE+EXE(25mg/天）治療或在安全 性試驗中接受化合物A1 (600mg/天)+EXE(25mg/天；圖27)。
[0459] ?劑量遞增由自適應貝葉斯邏輯回歸模型以及控制過量用藥的劑量遞增方法指 導，在作出劑量遞增決定前評價PK。
[0460] ?確定MTD/RP2D后，研究II期部分將三重化合物A1+EVE+EXE和化合物A1+EXE(雙 重）與EVE+EXE進行比較。
[0461 ] 關鍵納入標準
[0462] ?患有ER+/HER2-BC局部晚期或轉移性的絕經后婦女。
[0463] ?就局部晚期或轉移性BC而言，用來曲唑或阿那曲唑輔助治療時或在結束12個月 內復發，或用來曲唑或阿那曲唑治療時或在治療結束1個月內發展。來曲唑或阿那曲唑無須 是研究開始前的最后治療。
[0464] ?先前用允許的CDK4/6抑制劑、ΕΧΕ或mTOR抑制劑治療(用于lb期而不是II期）。
[0465] ?有可用于分子測試的代表性腫瘤樣本(存檔的或新的）。
[0466] 關鍵排除標準
[0467] ?就晚期BC而言有>2個化療。
[0468] ?絕對中性粒細胞計數< 1.5x 109/L。
[0469] ?用 Fridericia 公式校正的 QT>470ms〇
[0470] 評價
[0471] ?常規安全評價在基線以及研究中定期進行。根據不良事件通用術語標準4.03版 持續評價不良事件(AE)。
[0472] ?腫瘤反應由研究者實地評估，根據實體瘤應答評價標準1.1版，用計算機X射線 斷層掃描和核磁共振成像，評估在基線和周期(C)3、5和7的第1天(D1)以及后續每第4個周 期的D1(或如果有疾病進展的臨床證據，會更早)和治療結束時進行。
[0473] ?在C1的D1、2、8、15、16和21以及各后續周期直至C6(含）的D1，在用化合物A1+EVE +EXE治療的患者中進行化合物A1和EVE的PK評估。
[0474] ?通過下一代測序分析腫瘤樣品以確定任何感興趣的基因改變。
[0475] 中期結果
[0476] 患者特征和處置
[0477] ?自中期報告的截止日期，已治療16名患者：3名患者用化合物A1 600mg+EXE 25mg治療，13名患者用化合物A1 (200mg [ 6名患者];300mg [ 6名患者];250mg [ 1名患者])+EVE 2.5mg+EXE 25mg治療。
[0478] · 5名（31%)患者中斷治療。中斷的主要原因是:疾病發展(4名患者）和死亡（1名 患者）。
[0479] ?晚期/轉移情況下，在10名(63%)和5名（31%)患者中分別報告了先前用來曲唑 或阿那曲唑治療，而6名（38 % )和3名（19 % )患者分別接受在先ΕΧΕ和EVE(表4)。
[0480] 表4.患者和疾病特征
[0482]
[0483] PI3K，磷脂酰肌醇3-激酶;mTOR，哺乳動物類雷帕霉素靶蛋白。
[0484] 安全性
[0485] · 13名可評價劑量限制性毒性(DLT)的患者中，觀察到3個DLT，所有都使用化合物 A1 300mg+EVE 2.5mg+EXE 25mg:l例3級發熱性中性粒細胞減少和2例3級丙氨酸轉氨酶 (ALT)升尚。
[0486] ?血液學AE是所有組中最常見的毒性(表5)。
[0487] ?最常見的U 10% )3/4級研究藥物相關AE是嗜中性白血球減少癥(50%)、白血 球減少癥(31 % )、ALT升高（13 % )和低磷酸鹽血癥(13 % )
[0488] 表5.疑似治療相關的不良事件(所有級別的所有患者中>15%)
[0489]
[0490]
[0491 ] ALT，丙氨酸轉氨酶;AST，天冬氨酸轉氨酶;EVE，依維莫司；ΕΧΕ，依西美坦;pt，患 者;Comp A1，化合物A1。
[0492] *劑量限制毒性包括1例3級發熱性中性粒細胞減少和2例3級ALT升高。
[0493] 藥代動力學：
[0494] ?圖28和29顯示在C1D15,用化合物A1+EVE+EXE治療的患者中化合物A1和EVE的平 均血漿濃度-時間分布圖。
[0495] --化合物A1和EVE在穩態(C1D15)都迅速吸收，化合物A1和EVE在劑量范圍內的中 值Tmax分別為2和1小時。
[0496] --在穩態，用化合物Al(200和300mg)+EVE 2.5mg+EXE 25mg治療引起的化合物A1 暴露與單一藥劑化合物A1類似，而EVE暴露在聯合200和300mg化合物A1施用時分別是歷史 單一藥劑數據的約1.5到2倍和2到3倍。
[0497] 臨床活性
[0498] ?在可評價響應的13名患者中，1名患者有確認的部分響應(化合物A1 300mg+EVE 2.5mg+EXE 25mg)，7名患者有穩定疾病（SD;化合物A1 600mg+EXE 25mg:l名患者；化合物A1 200mg+EVE 2.5mg+EXE 25mg:2名患者；化合物A1 300mg+EVE 2.5mg+EXE 25mg:4名患者），1 名患者既沒有完全響應，也沒有進行性疾病（化合物A1 300mg+EVE 2.5mg+EXE 25mg;圖30 和圖31)。
[0499] · 1名用化合物A1 200mg+EVE 2.5mg+EXE治療的具有pl6(CDKN2A)缺失和細胞周 期蛋白Dl(CCNDl)與胰島素樣生長因子受體l(IGFRl)擴增的患者，其SD>6個月（圖30)。
[0500] 結論(基于中期結果）
[0501 ] ?初步數據表明化合物A1+EXE和化合物A1+EVE+EXE的組合可行，研究的兩組中都 觀察到活性的臨床征兆。
[0502] ?初步PK分析表明300-mg劑量化合物A1引起穩態的EVE暴露增加，但EVE不影響化 合物A1暴露。
[0503] ?最常見AE是如用CDK4/6抑制劑所預計到的血液學AE，并且為輕至中度。
[0504] 實施例6
[0505]計劃一項Ib/II試驗。該試驗具有下述三組：
[0506]
[0508] 實施例7
[0509]此進行中的研究旨在HBCx-34人乳腺癌患者源性異種移植模型中確定用作單一藥 劑、雙重或三重組合的不同化合物的抗腫瘤功效。
[0510]此研究中建議的異種移植模型是HBCx-34 JBCx-34是有野生型P53的導管癌，無 HER2過表達和PR及ERa過表達。所述腫瘤高度響應阿霉素/環磷酰胺且響應多西他賽和卡培 他濱。HBCx-34沒有惡病質特性，但荷HBCx-34小鼠觀察到沒有體重增加。
[0511]荷HBCx-34乳腺瘤小鼠從腫瘤移植日到入組日接受以飲用水稀釋的雌激素(β-雌 二醇，8.5mg/l)。研究剩余期間不加入雌激素。
[°512]實驗期開始時6-9周齡的雌性無胸腺裸小鼠（Hsd:無胸腺裸-Foxlnu)獲自哈倫實 驗室(Har 1 an Laboratories)(法國加納）。動物處于探索和實驗功能研究中心(CERFE，法國 埃夫里)動物設施的專用無病原體動物房。
[0513] 動物在實驗前至少7天送到實驗室，在此其間其適應實驗室條件。小鼠在馴化期間 以每組最多7只動物飼養，在實驗期間以每組最多5只動物飼養。小鼠飼養在帶有無菌無塵 床芯墊料的聚砜(PSU)塑料獨立通氣籠（IVC)(mm 213Wx 362D X 185H，美國阿倫敦）內。食 物和水是無菌的。動物在光暗循環(14小時人工光照周期)和受控室溫及濕度下飼養。
[0514] 化合物A1:75mg/kg游離堿，口服
[0515] 施用體積：5ml/kg(即125μ1用于25g小鼠）
[0516] 施用途徑：口服
[0517] 形式:溶液
[0518] 載劑:含0.5%甲基纖維素的水 [0519] 濃度：15mg/ml游離堿
[0520] 化合物C2:30和20mg/kg游離堿，口服 [0521 ] 施用體積：5ml/kg(即125μ1用于25g小鼠）
[0522] 施用途徑：口服
[0523] 形式:溶液
[0524] 載劑：10%NMP/90%PEG300
[0525]濃度:6mg/ml 游離堿= 6.534mg/ml 鹽堿
[0526] 4mg/ml 游離堿=4.356mg/ml 鹽堿
[0527] 化合物Cl:35mg/kg，口服
[0528] 施用體積：5ml/kg(即125μ1用于25g小鼠）
[0529] 施用途徑：口服 [0530] 形式:懸液
[0531] 載劑:含0.5%甲基纖維素的水
[0532] 濃度：7mg/ml
[0533] 載劑:NaCl 0.9%
[0534] 施用體積：5ml/kg(即125μ1用于25g小鼠）
[0535] 施用途徑：口服
[0536] 比較化合物:標準治療
[0537] 來曲挫(化合物Bl)2.5mg/kg(F emara?? 諾華(Novartis))
[0538] 施用體積：5ml/kg(即125μ1用于25g小鼠）
[0539] 施用途徑：口服
[0540] 形式:懸液
[0541] 載劑：〇.9%NaCl
[0542] 濃度:〇.5mg/ml
[0543] 依西美坦 25mg/kg (化合物 B2，Arom.asing?，法瑪西亞(Pharmac ia))
[0544] 劑量:25mg/kg
[0545] 施用體積：5ml/kg(即125μ1用于25g小鼠）
[0546] 施用途徑：口服 [0547]形式:懸液
[0548] 載劑：〇.9%NaCl
[0549] 濃度:5mg/ml
[0550] 研究組和方案
[0551]
[0552] (*)qd x56:從DO到D55
[0553] (**)qd X26-30:從DO到D25,30mg/kg，然后從D26到D56,20mg/kg
[0554] 在組合組中，2或3種化合物的施用沒有延遲。
[0555] 劑量體積根據體重單獨調整。各實驗組中，所示劑量應用于所有小鼠。
[0556] 腫瘤移植模型誘導
[0557] 同代的腫瘤皮下植入5-10只小鼠（供體小鼠，傳代（n-1))。這些腫瘤達到1000- 2000mm3時，通過頸椎脫位處死供體小鼠，無菌切下腫瘤并解剖。移除壞死區后，將腫瘤切成 測量約為20mm3的小塊并在移植前轉至培養基。
[0558] 小鼠用氯胺酮/賽拉嗪麻醉，然后用氯己定溶液對皮膚消毒，在肩胛間區域切入， 將20_3腫瘤小塊置入皮下組織。皮膚用夾子閉合。
[0559] 來自同一實驗的所有小鼠在同一天移植。
[0560] 納入標準
[0561] 6-9周齡且重至少20g的健康小鼠納入研究。小鼠根據其腫瘤體積分入不同組，以 在各治療組中形成均勻的均值和中值腫瘤體積。治療被隨機指向飼養至多5只小鼠的籠子。
[0562] 對于各組，有確定腫瘤且平均腫瘤體積范圍為108(6X6)-288(9x8)mm 3的10只小鼠 納入研究。在腫瘤生長不均勻的情況中，組大小可降低（至多8只小鼠/組）和/或納入可交 錯。
[0563] 動物觀察
[0564] 從移植日到研究終止，每天觀察動物的體態、行為和臨床變化。
[0565] 腫瘤測量和體重監控
[0566] 通過用卡尺測量腫瘤直徑來評估腫瘤體積，治療期中每兩周一次，隨訪期中每周 一次。使用式TV(mm3) =[長度(mm)x寬度(mm)2]/2,其中長度和寬度分別是腫瘤的最長和最 短直徑。
[0567] 在實驗期結束時不稱重腫瘤。
[0568] 所有動物在治療期中每兩周一次稱重，隨訪期中每周一次稱重。
[0569] 除非贊助人另有規定，在相較治療第1天的體重減輕達到15%時，向觀察到體重減 輕的整個組施用DietGelRecovery %
[0570] 道德處死的標準
[0571] 如果符合以下條件之一，處死各動物：
[0572] -就3次連續測量(2天或48小時)而言，體重減輕(BWL)相較治療第1天2 20%。
[0573]-行為或臨床征兆的普遍改變。
[0574] -腫瘤體積 2 2000mm3。
[0575] 除非另有規定，處死時不進行解剖。
[0576] 終點（以先發生為準)
[0577] 如果符合以下2個條件，處死各組動物：
[0578] -至少1只動物達到2000mm3腫瘤體積 [0579 ]-以及初始腫瘤體積中值增加3-5倍。
[0580]實驗的終點是：
[0581 ] -8周治療期*
[0582]-以及57天隨訪期。
[0583] (*)如果未觀察到毒性且如果需要，根據"腫瘤移植模型誘導"治療期能延長2或3 周。
[0584] 數據分析
[0585] 第0天總是被視作治療首日。實驗天數根據此定義進行后續編號。記錄表示為均值 +/-均值標準誤差(均值+/-s em)和中值+/-四分差(均值+/-1QR)。
[0586] 通過曼-惠特尼非參數比較檢驗用GraphPad Prism軟件對各測量進行統計分析。 將各治療組與對照組進行比較。
[0587]圖20-22說明此研究的一些結果。
【主權項】
1. 一種藥物組合，所述組合包括（1)第一藥劑，其是⑶K抑制劑或其藥學上可接受鹽和 (2)第二藥劑，其是抗激素劑或其藥學上可接受鹽。2. -種藥物組合，所述組合包括（1)第一藥劑，其是⑶Κ抑制劑或其藥學上可接受鹽， (2)第二藥劑，其是抗激素劑或其藥學上可接受鹽，和（3)第三藥劑，其是調節PI3K/Akt/ mTOR通路的試劑或其藥學上可接受鹽。3. 如權利要求1或2所述的組合，其特征在于，所述藥劑同時、分開或依序施用。4. 如權利要求1或2所述的組合，其特征在于，所述CDK抑制劑是CDK4/6抑制劑。5. 如權利要求4所述的組合，其特征在于，所述CDK4/6抑制劑是由下式A1所述的化合物 A1：6. 如權利要求4所述的組合，其特征在于，所述CDK4/6抑制劑是由下式A2所述的化合物 A2：7. 如權利要求4所述的組合，其特征在于，所述CDK4/6抑制劑是帕博西尼。8. 如權利要求1或2所述的組合，其特征在于，所述抗激素劑是芳香酶抑制劑。9. 如權利要求8所述的組合，其特征在于，所述芳香酶抑制劑是非類固醇。10. 如權利要求8所述的組合，其特征在于，所述芳香酶抑制劑是類固醇。11. 如權利要求8所述的組合，其特征在于，所述芳香酶抑制劑是來曲唑。12. 如權利要求8所述的組合，其特征在于，所述芳香酶抑制劑是依西美坦。13. 如權利要求1或2所述的組合，其特征在于，所述抗激素劑是雌激素受體拮杭劑。14. 如權利要求13所述的組合，其特征在于，所述雌激素受體拮杭劑是氟維司群。15. 如權利要求1或2所述的組合，其特征在于，所述抗激素劑是選擇性雌激素受體調節 劑。16. 如權利要求15所述的組合，其特征在于，所述選擇性雌激素受體調節劑是他莫昔 芬。17. 如權利要求2所述的組合，其特征在于，所述調節PI3K/Akt/mT0R通路的試劑是PI3K 抑制劑。18. 如權利要求17所述的組合，其特征在于，所述PI3K抑制劑是由下式C1所述的化合物 C1：19. 如權利要求17所述的組合，其特征在于，所述P13K抑制劑是由下式C2所述的化合物 C2：20. 如權利要求2所述的組合，其特征在于，所述調節PI3K/Akt/mT0R通路的試劑是mTOR 抑制劑。21. 如權利要求20所述的組合，其特征在于，所述mTOR抑制劑是依維莫司。22. -種治療癌癥的方法，所述方法包括向對象施用如權利要求1-21所述的藥物組合。23. 如權利要求22所述的方法，其特征在于，所述癌癥選自肉瘤、淋巴瘤、肺癌、支氣管 癌、前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃腸癌、結腸癌、直腸癌、結腸癌、結直腸腺瘤、甲狀腺癌、肝 癌、肝內膽管癌、肝細胞癌、腎上腺癌、胃癌、胃腫瘤、膠質瘤、成膠質細胞瘤、子宮內膜癌、黑 素瘤、腎癌、腎盂癌、膀胱癌、子宮體癌、宮頸癌、陰道癌、卵巢癌、多發性骨髓瘤、食管癌、白 血病、急性髓細胞性白血病、慢性髓細胞性白血病、淋巴細胞性白血病、骨髓性白血病、腦腫 瘤、腦癌、口腔及咽部癌、喉癌、小腸癌、非霍奇金淋巴瘤、黑素瘤、結腸絨毛腺瘤、贅生物、上 皮癌、乳腺癌、基底細胞癌、鱗狀細胞癌、光化性角化病、腫瘤疾病、頸部或頭部腫瘤、真性紅 細胞增多、原發性血小板增多癥、髓樣化生性骨髓纖維化和巨球蛋白血癥。24. 如權利要求23所述的方法，其特征在于，所述癌是乳腺癌。25. 如權利要求22所述的方法，其特征在于，所述癌是雌激素受體陽性癌。26. 如權利要求23所述的方法，其特征在于，所述乳腺癌是雌激素受體陽性乳腺癌。27. -種藥物組合，所述組合包括（1)第一藥劑，其是由下式A1所述的化合物A1或其藥 學上可接受鹽：和(2)第二藥劑，其是來曲唑。28. -種藥物組合，所述組合包括（1)第一藥劑，其是由下式A1所述的化合物A1或其藥 學上可接受鹽：(2) 第二藥劑，其是來曲唑，和 (3) 第三藥劑，其是由下式C1所述的化合物C1或其藥學上可接受鹽：29. -種藥物組合，所述組合包括（1)第一藥劑，其是由下式A1所述的化合物A1或其藥 學上可接受鹽：(2) 第二藥劑，其是來曲唑，和 (3) 第三藥劑，其是由下式C2所述的化合物C2或其藥學上可接受鹽：30. -種藥物組合，所述組合包括（1)第一藥劑，其是由下式A1所述的化合物A1或其藥 學上可接受鹽：和(2)第二藥劑，其是氟維司群。31. -種藥物組合，所述組合包括（1)第一藥劑，其是由下式A1所述的化合物A1或其藥 學上可接受鹽：(2) 第二藥劑，其是氟維司群，和 (3) 第三藥劑，其是由下式C1所述的化合物C1或其藥學上可接受鹽：32.-種藥物組合，所述組合包括（1)第一藥劑，其是由下式A1所述的化合物A1或其藥 學上可接受鹽：(2) 第二藥劑，其是氟維司群，和 (3) 第三藥劑，其是由下式C2所述的化合物C2或其藥學上可接受鹽：33. -種藥物組合，所述組合包括（1)第一藥劑，其是由下式A1所述的化合物A1或其藥 學上可接受鹽：(2) 第二藥劑，其是依維莫司，和 (3) 第三藥劑，其是依西美坦。34. -種治療乳腺癌的方法，所述方法包括向對象施用如權利要求27-33所述的藥物組 合。35. -種治療HR+、HER2-乳腺癌的方法，所述方法包括向對象施用包括以下的藥物組 合:（1)第一藥劑，其是由下式A1所述的化合物A1或其藥學上可接受鹽：和(2)第二藥劑，其是來曲唑。36. -種治療HR+、HER2-晚期乳腺癌的方法，所述方法包括向對象施用包括以下的藥物 組合:（1)第一藥劑，其是由下式A1所述的化合物A1或其藥學上可接受鹽：和(2)第二藥劑，其是來曲唑。37. -種治療ER+晚期乳腺癌的方法，所述方法包括向對象施用包括以下的藥物組合： (1)第一藥劑，其是由下式A1所述的化合物A1或其藥學上可接受鹽：(2) 第二藥劑，其是來曲唑，和 (3) 第三藥劑，其是由下式C1所述的化合物C1或其藥學上可接受鹽：38. -種治療ER+晚期乳腺癌的方法，所述方法包括向對象施用包括以下的藥物組合： (1)第一藥劑，其是由下式A1所述的化合物A1或其藥學上可接受鹽：(2) 第二藥劑，其是來曲唑，和 (3) 第三藥劑，其是由下式C2所述的化合物C2或其藥學上可接受鹽：39. -種治療患有ER+、HER2-乳腺癌的絕經后婦女的方法，所述方法包括向對象施用包 括以下的藥物組合:（1)第一藥劑，其是由下式A1所述的化合物A1或其藥學上可接受鹽：和(2)第二藥劑，其是氟維司群。40. -種治療患有ER+、HER2-乳腺癌的絕經后婦女的方法，所述方法包括向對象施用包 括以下的藥物組合:（1)第一藥劑，其是由下式A1所述的化合物A1或其藥學上可接受鹽：(2) 第二藥劑，其是氟維司群，和 (3) 第三藥劑，其是由下式C1所述的化合物C1或其藥學上可接受鹽：41. 一種治療患有ER+、HER2-乳腺癌的絕經后婦女的方法，所述方法包括向對象施用包 括以下的藥物組合:（1)第一藥劑，其是由下式A1所述的化合物A1或其藥學上可接受鹽：(2) 第二藥劑，其是氟維司群，和 (3) 第三藥劑，其是由下式C2所述的化合物C2或其藥學上可接受鹽：42. -種治療ER+乳腺癌的方法，所述方法包括向對象施用包括以下的藥物組合：（1)第 一藥劑，其是由下式A1所述的化合物A1或其藥學上可接受鹽：(2) 第二藥劑，其是依維莫司，和 (3) 第三藥劑，其是依西美坦。
【文檔編號】A61K31/519GK105828822SQ201480056526
【公開日】2016年8月3日
【申請日】2014年8月7日
【發明人】陳彥, 黃西中, S·金
【申請人】諾華股份有限公司