一種純化特拉萬星粗品的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于抗生素提取技術領域，特別是涉及一種純化特拉萬星粗品的方法。
【背景技術】
[0002]特拉萬星為親水性的萬古霉素衍生物，對MRSA，MRSE和VanA型腸球菌的活力均高于萬古霉素和替考拉寧，在第二代糖肽類抗生素中活力中等，但其作用機制有顯著特性:通過干擾細菌脂合成，同時使細胞膜破裂，破壞細胞膜的完整性來提高其對金葡菌、肺炎鏈球菌以及VanA型金葡菌或腸球菌的殺菌能力。
[0003]目前，國內有關于萬古霉素的提取、純化的的文獻報道，但沒有純化特拉萬星的文獻報道。

【發明內容】

[0004]本發明的目的就在于提供一種有效、安全純化特拉萬星粗品的方法。
[0005]為實現上述目的所采取的技術方案為:
一種純化特拉萬星粗品的方法，其特征在于所述工藝步驟為:首先將特拉萬星粗品酸化溶解，過濾，所得濾液用有機溶媒萃取，鹽酸溶液反萃取，之后采用離子交換法分離提取得到鹽酸特拉萬星溶液，然后將該鹽酸特拉萬星溶液超濾，結晶，水洗，干燥即可。
[0006]所述酸化溶解后的特拉萬星溶液，其pH5?6，濃度控制在60?70%。
[0007]所述酸化溶解采用體積濃度為20?30%的鹽酸溶液實現。
[0008]所述有機溶媒萃取過程為:首先將濾液和有機溶媒按照V#e75S:Ymmm =1:3?4的體積比混合，然后溫度降至5?15°C，再用15?25%的氨水調節pH9?10，充分攪拌20?30min，靜置60?lOOmin，靜置結束，進行液液分離，得到特拉萬星有機溶媒溶液，所述有機溶媒為甲基異丁基甲酮和航空煤油的混合物，其中航空煤油的比例控制在5?10%。
[0009]所述萃取次數至少2次，萃取總收率達到95%以上，停止萃取。
[0010]所述反萃取過程為:在特拉萬星萃取液中按照=1:4?5的體積比加入去離子水，溫度控制在10?15°C，在攪拌狀態下緩慢勻速加入20?30%鹽酸溶液，調節pH至4.5?5.5后繼續攪拌20?30min，靜置60?10min，靜置結束，進行液液分離，得到鹽酸特拉萬星溶液。
[0011]所述反萃取次數至少2次以上，反萃取總收率達到93%以上，停止反萃取。
[0012]所述離子交換法是采用聚苯乙烯型強酸性陽離子樹脂實現，鹽酸特拉萬星溶液溫度控制在30?40°C，以40?50ml/min的速度進入填充柱；以50?60%鹽酸為解吸劑，以20?30ml/min的速度將特拉萬星解吸下來，得到鹽酸特拉萬星溶液。
[0013]所述超濾采用多通道式陶瓷膜設備實現，膜孔徑控制在0.01或0.02 μ m，其過濾方式是錯流過濾，過濾過程中，溫度控制在40?50°C，壓力控制在0.2?0.3MPa。
[0014]所述結晶過程為:起晶溫度控制在40?45°C，然后在攪拌狀態下，以10?12°C /h的降溫速度進行冷卻結晶，至最終溫度O?5°C，之后養晶陳化180?360min ； 結晶過程中，采用20?30%氨水調節pH至9?10，其調節速度與冷卻降溫速度一致；連續慢速恒流導入反溶劑去離子水，加量為鹽酸特拉萬星溶液體積的5?10%，時間控制在120 ?180min。
[0015]所述干燥溫度控制在50?60°C，當水分含量低于6%，停止干燥。
[0016]所述聚苯乙烯型強酸性陽離子樹脂用量為特拉萬星粗品重量的3?5倍；所述填充柱高徑比為6?6.5:1。
[0017]所述陶瓷膜材質為氧化鋁或氧化鈦或氧化鋯。
[0018]本發明的技術優勢:
I本發明提供了一種有效純化特拉萬星的方法，并且其提取、純化的收率達到80%以上。
[0019]2本發明可以有效去除特拉萬星的熱源。
[0020]3本發明生產成本低，有利于增強產品的國內外市場的競爭力。
[0021]4本發明工藝簡單，省時省力。
[0022]5本發明可提高了成品質量，特拉萬星含量達到了 99%。
[0023]具體實施方法
下面用實例予以說明本發明，應該理解的是，實例是用于說明本發明而不是對本發明的限制。本發明的范圍與核心內容依據權利要求書加以確定。
[0024]下述實施例中的粗品來源:
新型脂糖肽類抗生素特拉萬星的合成方法:以癸胺、乙二醛二甲基縮醛為原料經還原胺化反應，用氯甲酸?9?芴甲酯保護亞氨基、鹽酸水解縮醛制得N?(9?芴基甲氧羰基)?癸基氨基乙醛(9)。鹽酸萬古霉素與9發生還原胺化反應、再脫9?芴甲氧羰基保護基、與氨甲基膦酸進行曼尼希反應合成目標產物特拉萬星粗品。
[0025]樹脂來源為河北利江生物科技有限公司。
[0026]下述實施例中有機溶媒為甲基異丁基甲酮和航空煤油的混合物，其中航空煤油的比例控制在5?10%。
[0027]實施例1
特拉萬星粗品1kg用20%的鹽酸溶液溶解，pH至5，特拉萬星濃度控制在60%，然后過濾，得到特拉萬星溶液16.9L。加入有機溶媒50L，溫度降至5°C，再用15%的氨水調節pH9。攪拌20min，靜置60min。靜置結束，進行液液分離。萃取2次，得到特拉萬星有機溶媒溶液99.5L，萃取總收率達到95.8%。
[0028]特拉萬星萃取液加入去離子水400L，溫度控制在10°C，啟動攪拌系統，攪拌過程中緩慢勻速加入20%鹽酸溶液，調節pH至4.5后繼續攪拌20min，靜置60min。靜置結束，進行液液分離。反萃取2次，特拉萬星溶液體積為800L，反萃取總收率達到93.5%，停止反萃取。
[0029]樹脂柱中加入60kg聚苯乙烯型強酸性陽離子樹脂，鹽酸特拉萬星溶液溫度控制在30°C，以40ml/min的速度進入樹脂柱；以50%鹽酸為解吸劑，20ml/min的速度將特拉萬星解吸下來，得到鹽酸特拉萬星溶液276L。
[0030]選用多通道式陶瓷膜設備過濾鹽酸特拉萬星溶液，膜的孔徑控制在0.01 μπι，其過濾方式是錯流過濾。過濾過程中，溫度控制在40?50°C，壓力控制在0.2?0.3MPa。膜材質為氧化鋁。
[0031]鹽酸特拉萬星溶液起晶溫度控制在40 °C。結晶過程中，采用20%氨水調節pH至
9;其調節速度與冷卻降溫速度一致；連續慢速恒流導入反溶劑去離子水，加量為14L，時間控制在120min ;攪拌轉速控制在20r/min ;降溫速度為10°C /h。冷卻結晶的最終溫度控制在0°C ;冷卻結晶結束，養晶陳化時間控制在180min。
[0032]結晶結束后，用純化水淋洗特拉萬星固體，淋洗時間控制在5min。淋洗結束后進行干燥，溫度控制在50?60°C。干燥結束，水分含量為5.7%，得到純品特拉萬星8.1kg，收率為81%，含量為99.0%。
[0033]實施例2
特拉萬星粗品1kg用22%的鹽酸溶液溶解，pH至5.3，特拉萬星濃度控制在62%，然后過濾，得到特拉萬星溶液16.1L。加入有機溶媒53L，溫度降至7.5°C，再用18%的氨水調節PH9.3。攪拌23min，靜置70min。靜置結束，進行液液分離。萃取2次，得到特拉萬星有機溶媒溶液105.8L，萃取總收率達到96.0%。
[0034]特拉萬星萃取液加入去離子水455L，溫度控制在11°C，啟動攪拌系統，攪拌過程中緩慢勻速加入22%鹽酸溶液，調節pH至4.8后繼續攪拌22min，靜置70min。靜置結束，進行液液分離。反萃取2次，特拉萬星溶液體積為905L，反萃取總收率達到93.9%，停止反萃取。
[0035]樹脂柱中加入70kg聚苯乙烯型強酸性陽離子樹脂，鹽酸特拉萬星溶液溫度控制在33°C，以42ml/min的速度進入樹脂柱；以53%鹽酸為解吸劑，23ml/min的速度將特拉萬星解吸下來，得到鹽酸特拉萬星溶液265L。
[0036]選用多通道式陶瓷膜設備過濾鹽酸特拉萬星溶液，膜的孔徑控制在0.02 μ m，其過濾方式是錯流過濾。過濾過程中，溫度控制在40?50°C，壓力控制在0.2?0.3MPa。膜材質為氧化鋯。
[0037]鹽酸特拉萬星溶液起晶溫度控制在42°C。結晶過程中，采用25%氨水調節pH至9.5 ;其調節速度與冷卻降溫速度一致；連續慢速恒流導入反溶劑去離子水，加量為16L，時間控制在135min ;攪拌轉速控制在22r/min ;降溫速度為11°C /h。冷卻結晶的最終溫度控制在1°C ;冷卻結晶結束，養晶陳化時間控制在230min。
[0038]結晶結束后，用純化水淋洗特拉萬星固體，淋洗時間控制在6min。淋洗結束后進行干燥，溫度控制在50?60°C。干燥結束，水分含量為5%，得到純品特拉萬星8.2kg，收率為82%，含量為 99.1%。
[0039]實施例3
特拉萬星粗品1kg用25%的鹽酸溶液溶解，pH至5.5，特拉萬星濃度控制在65%，然后過濾，得到特拉萬星溶液15.4L。加入有機溶媒54L，溫度降至10°C，再用20%的氨水調節PH9.5。攪拌25min，靜置80min。靜置結束，進行液液分離。萃取2次，得到特拉萬星有機溶媒溶液107.7L，萃取總收率達到96.2%。
[0040]特拉萬星萃取液加入去離子水484L，溫度控制在12°C，啟動攪拌系統，攪拌過程中緩慢勻速加入25%鹽酸溶液，調節pH至5后繼續攪拌25min，靜置80min。靜置結束，進行液液分離。反萃取2次，特拉萬星溶液體積為967L，反萃