一種基于金屬彈簧圈栓塞后動脈瘤組織切片方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬生物材料檢測領域，涉及脈瘤瘤組織材料的切片方法，具體涉及一種金 屬彈簧圈栓塞后動脈瘤組織的切片方法。
【背景技術】
[0002] 報道公開，顱內動脈瘤是一種威脅公眾健康的較為嚴重的疾病。國外多宗尸檢研 究結果顯示，普通人群中未破裂動脈瘤的發病率差異較大（〇. 2%~9. 9% )。近年的一些前 瞻性尸檢和動脈造影研究顯示，普通人群中的發病率約在2%~4%之間，且顱內動脈瘤已 經成為自發性蛛網膜下腔出血的首位原因。研究顯示，動脈瘤的發病率隨著人群年齡的增 大而增高。近年來隨著神經影像學的發展及介入神經外科的興起，改變了顱內動脈瘤治療 單純依賴開顱手術的局面。血管內彈簧圈栓塞治療不僅同樣有效，而且具有更加微創、快速 的優點。"國際蛛網膜下腔動脈瘤臨床研究（international subarachnoid aneurysm trial, ISAT)"顯示：從I年無殘疾生存方面考慮，血管內介入治療的確優于開顱夾閉術，然而介 入治療方案中也存在弊端，主要包括復雜動脈瘤彈簧致密填塞圈困難，以及高遠期復發率 等問題；其中，部分動脈瘤栓塞后，因瘤體填塞大量栓塞材料，占位效應仍然存在甚至加重； 另外，由于介入治療所需的栓塞材料價格昂貴，常使患者經濟上難以承受；寬頸動脈瘤常規 栓塞無法致密填塞瘤頸，即使采用支架或球囊輔助（如Remodeling技術等），其復發率仍然 很高。
[0003] 關于彈簧圈栓塞后腦動脈瘤復發這一難題，有關領域學者們做了大量的研究和工 作，期望探究其發生機制，找到解決這一問題的方法。但受限于彈簧圈屬于金屬材料，使得 學者們的研究多采用掃描電鏡和樹脂包埋組織HE染色硬切片來觀察彈簧圈栓塞后動脈瘤 的閉合、載瘤動脈的狹窄、動脈瘤復發或子瘤形成的相關現象，但無法探究其發生機制，以 及參與細胞的亞群分型分析。上述問題的存在，使得彈簧圈栓塞后動脈瘤的復發相關研究 進展變得異常緩慢。
[0004] 鑒于現有技術存在的問題，本申請的發明人擬提供提供一種有助于對金屬彈簧圈 栓塞后的動脈瘤進行免疫組化等常規研究的簡易、穩定的切片方法。

【發明內容】

[0005] 本發明的目的是提供一種脈瘤瘤組織材料的切片方法，具體涉及一種金屬彈簧圈 栓塞后動脈瘤組織的切片方法。本方法簡易、穩定、易操作，尤其適用于對金屬彈簧圈栓塞 后的動脈瘤進行5 μ m石錯切片,進而進行免疫組化、免疫熒光等常規研究。
[0006] 本發明采用結合慢速金剛鋸切割的二次包埋雙切割技術，對石蠟包埋的栓塞后動 脈瘤標本進行處理，能明顯提高含金屬彈簧圈血管組織切片的可行性和穩定性，并降低對 實驗機構及器械和技術的要求。
[0007] 具體而言，本發明的一種金屬彈簧圈栓塞后動脈瘤組織的切片方法，其特征在于， 其包括步驟：
[0008] 1)離體的栓塞后動脈瘤血管標本取材和處理：
[0009] 將離體的栓塞后動脈瘤組織標本浸泡福爾馬林溶液中固定；
[0010] 2)動脈瘤標本的包埋：
[0011] 取步驟1)固定的標本，分別經酒精福爾馬林、以及不同濃度酒精浸泡后；再經過 二甲苯透明，石蠟浸潤；最后用石蠟包埋標本置矩形模具盒內；
[0012] 3)動脈瘤遠端切除：
[0013] 使用低速金鋼鋸，將上述包埋的動脈瘤瘤體標本其遠端切除"帽端"；
[0014] 4)金屬彈簧圈抽取：
[0015] 將步驟3)的切除掉帽端的動脈瘤側暴露，在手術顯微鏡下使用顯微鑷抽取其中 的彈簧圈；
[0016] 5)修飾后動脈瘤標本再包埋：
[0017] 將抽取過彈簧圈的標本石蠟塊再次融化，再用石蠟將標本包埋在矩形模具盒內；
[0018] 6)石蠟組織薄切片：
[0019] 使用常規石錯切片機（Leica Microsystems, Nussloch, Germany)將二次包埋的動 脈瘤標本切片為5 μ m石蠟切片。
[0020] 本發明中，所述的離體的栓塞后動脈瘤組織標本為從載瘤動脈瘤頸的兩端切除獲 得；本發明的一個實施例中，將從載瘤動脈瘤頸兩端切除離體的栓塞后動脈瘤組織標本浸 泡于10%福爾馬林溶液中固定至少24小時；
[0021] 本發明步驟2)中，將步驟1)固定的標本，分別經2h酒精福爾馬林、70%酒精 3〇111；[11，80%酒精30111；[11，95%酒精30111；[1112遍，和100%酒精55111；[1112遍 ；然后經過二甲苯透 明55minx2遍，石錯浸潤40minx3遍；最后用石錯包埋標本置矩形模具盒內；
[0022] 本發明中，對低速金鋼鋸的精度無特定限制，可使用價格低廉的工業產品替 代；本發明的一個實施例中，使用低速金鋼鍋（SYJ_150Kejing automation equipment co.，Shenyang，China)，將所述包埋的含有彈簧圈的動脈瘤瘤體標本其遠端切除"帽端 "（含部分彈簧圈）；
[0023] 本發明中，將二次包埋的動脈瘤標本切片，優選為5 μ m石蠟切片。
[0024] 本發明中，所需的操作器械、實驗器材均較為簡單易用，價格低廉，普通實驗室可 以常規配備，成本較低。同時，本方法操作簡便，無需長時間的經驗積累。
[0025] 本發明方法的優點為：
[0026] 1.聯合慢速金剛鋸切割與二次包埋進行雙切割技術能實現對帶有金屬彈簧圈栓 塞的動脈瘤石蠟組織進行薄切片（5 μ m)，使得通過免疫組化等方法對動脈瘤瘤頸處內皮化 的進程以及動脈瘤復發的原因的研究成為了可能。
[0027] 2.本方法從動脈瘤遠端抽去彈簧圈，可以保護瘤頸，不破壞瘤頸結構，易使動脈瘤 瘤頸處保持原有狀態。
[0028] 3.本方法對低速金鋼鋸的精度要求不高，可使用價格低廉的工業產品替代。
[0029] 4.本方法所需操作器械、實驗器材均較為簡單易用，價格低廉，普通實驗室可以常 規配備。
[0030] 5.操作簡便，無需長時間經驗積累。
[0031] 6.成本低。
[0032] 為了便于理解，以下將通過具體的附圖和實施例對本發明的方法進行詳細地描 述。需要特別指出的是，具體實例和附圖僅是為了說明，顯然本領域的普通技術人員可以根 據本文說明，在本發明