顱內動脈瘤標志物odam及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明設及腫瘤標志物，具體設及煩內動脈瘤標志物0DAM及其應用，更具體的設 及標志物0DAM基因及其表達產物在制備煩內動脈瘤診療制劑中的應用。
【背景技術】
[0002] 煩內動脈瘤（intracranialaneu巧sm，IA)是指多種因素造成的煩內動脈壁結 構破壞，進而導致的動脈壁異常膨出。煩內動脈瘤發病率較高，調查結果顯示，W先天性動 脈瘤占大部分人群，40-66歲最為常見，約有10%的病人入院前死亡，尸體解剖檢出率約為 1-5%，煩內動脈瘤破裂出血后30天的死亡率達45%，存活者中30%存在不同程度的殘疾， 此外仍約有500萬W上的隱匿性煩內動脈瘤未被發現和診斷，因此該疾病極為兇險，嚴重 威脅人類的生命健康。我國屬煩內動脈瘤的高發地區，人群發病率達0. 1-4%。
[0003] 煩內動脈瘤的主要的治療手段包括開煩手術夾閉、血管內介入治療、動脈瘤包裹 及載瘤血管的閉塞或結扎，傳統的手術夾閉和血管內介入治療是煩內動脈瘤的主要治療方 法。隨著介入醫學和材料學的發展，傳統的手術逐漸轉變為血管內介入治療，并成為煩內動 脈瘤的首選治療手段。動脈瘤的血管介入治療主要包括單純彈黃圈栓塞、球囊輔助劑支架 輔助的彈黃圈栓塞。隨著材料學和治療理念的更新，血管介入治療從簡單的彈黃圈栓塞轉 變為血流重建治療。通過在載瘤動脈內放置一血流重建裝置，為新生內膜生長提供支撐，隨 后通過新生內膜完全隔絕動脈瘤。雖然血流重建裝置能夠很好地治療煩內動脈瘤，特別是 巨大動脈瘤，但是目前仍面臨一些問題，如動脈瘤的復發和再次破裂等。
[0004] 盡管煩內動脈瘤的治療有了長足的發展，但病人的預后仍然很差，其致死率高達 30-40 %。究其原因，除了疾病本身的臨床癥狀兇險，治療風險大W外，疾病致病機制的不確 定是其主要原因。煩內動脈瘤的發病機制已經爭論了許多年，但仍無定論，其可能與遺傳、。 由于疾病能使患者直接面對死亡的威脅，所W，弄清其病因和發展規律對于合理的選擇治 療方式至關重要。
[0005] 發明人對5例煩內動脈瘤病例組和3例對照組組織樣本進行高通量測序，結合生 物信息學方法進行基因篩選，在差異表達明顯的基因中挑選出低表達的候選基因0DAM，進 一步，發明人進行了分子驗證，證實了 0DAM在煩內動脈瘤組中低表達。本發明提供了新的 煩內動脈瘤的監測治療祀點，具有重要的臨床應用價值。

【發明內容】

[0006] 本發明的目的在于提供一種煩內動脈瘤診斷制劑，所述煩內動脈瘤診斷制劑檢測 0DAM基因和/或基因的表達產物。進一步的，所述的0DAM基因和/或基因的表達產物在煩 內動脈瘤組織中低表達。
[0007] 進一步，所述煩內動脈瘤診斷制劑采用巧光定量PCR試劑盒、基因忍片、免疫方法 檢測煩內動脈瘤組織中0DAM基因的表達。優選的，所述的巧光定量PCR試劑盒中含有一對 特異性擴增0DAM基因的引物；所述的基因忍片中包括與0DAM基因的核酸序列雜交的探針。 更優選的，巧光定量PCR試劑盒內含有特異性檢測ODAM基因的上游引物和下游引物，上游 引物序列為SEQIDNO. 1，下游引物序列為SEQIDNO. 2。
[0008] 進一步，所述的煩內動脈瘤的診斷制劑采用免疫方法檢測煩內動脈瘤組織中ODAM基因的表達產物。優選的，所述免疫方法為化ISA檢測和/或膠體金檢測。進一步，所述 檢測0DAM蛋白的化ISA法為使用ELISA檢測試劑盒。所述試劑盒中的抗體可采用市售的 0DAM單克隆抗體或多克隆抗體。進一步，所述的試劑盒包括：包被0DAM抗體的固相載體， 酶標抗體，酶的底物，蛋白標準品，陰性對照品，稀釋液，洗涂液，酶反應終止液等。
[0009] 進一步，所述檢測0DAM蛋白的膠體金法為使用檢測試劑盒，所述的抗體可采用市 售的0DAM單克隆抗體或多克隆抗體。進一步，所述的膠體金檢測試劑盒采用膠體金免疫層 析技術或膠體金滲濾法。進一步，所述的膠體金檢測試劑盒硝酸纖維素膜上的檢測區燈） 噴點有抗0DAM抗體、質控區（C)噴點有免疫球蛋白IgG。
[0010] 優選的，檢測樣本為動脈瘤壁組織和/或外周血。
[0011] 本發明的目的在于提供上述煩內動脈瘤診斷制劑在制備煩內動脈瘤診斷工具中 的應用。
[0012] 本發明的目的在于提供一種治療煩內動脈瘤的制劑，所述制劑中含有促進0DAM 基因的轉錄或表達的試劑或化合物。優選的，制劑中含有藥劑學可接受的載體。
[0013] 進一步的，所述的0DAM基因和/或基因的表達產物在煩內動脈瘤組織中低表達。
[0014] 本領域人員熟知促進基因及其表達產物的表達通常可W采用下述方法中的一種 和/或幾種：激活分子標志物的啟動子、激活分子標志物表達的蛋白或因子、導入促進分子 標志物轉錄或表達的載體。
[0015]優選的，所述治療煩內動脈瘤的制劑中含有促進0DAM基因的轉錄或表達的載體 和/或激活0DAM基因的啟動子和/或激活0DAM基因表達的蛋白或因子。
[0016] 本發明的目的在于提供上述治療煩內動脈瘤的制劑在制備煩內動脈瘤治療藥物 或試劑中的應用。
[0017]為實現上述目的，本發明首先通過高通量測序結合生物信息學方法篩選到候選基 因0DAM基因，進而通過分子生物學方法驗證了 0DAM基因與煩內動脈瘤的關系：0DAM基因 與煩內動脈瘤具有很好的相關性，可用于制備煩內動脈瘤輔助診斷制劑，具有重要的臨床 應用價值。
[0018] 巧光定量PCR法是通過巧光染料或巧光標記的特異性的探針，對PCR產物進行標 記跟蹤，實時在線監控反應過程，結合相應的軟件可W對產物進行分析，計算待測樣品模板 的初始濃度。巧光定量PCR的出現，極大地簡化了定量檢測的過程，而且真正實現了絕對定 量。多種檢測系統的出現，使實驗的選擇性更強。自動化操作提高了工作效率，反應快速、 重復性好、靈敏度高、特異性強、結果清晰。
[0019] 基因忍片又稱為DNA微陣列值NAmicroarray)，可分為Ξ種主要類型：1)固定在 聚合物基片（尼龍膜，硝酸纖維膜等）表面上的核酸探針或cDNA片段，通常用同位素標記 的祀基因與其雜交，通過放射顯影技術進行檢測。2)用點樣法固定在玻璃板上的DNA探針 陣列，通過與巧光標記的祀基因雜交進行檢測。3)在玻璃等硬質表面上直接合成的寡核巧 酸探針陣列，與巧光標記的祀基因雜交進行檢測。基因忍片作為一種先進的、大規模、高通 量檢測技術，應用于疾病的診斷，其優點有W下幾個方面：一是高度的靈敏性和準確性；二 是快速簡便；Ξ是可同時檢測多種疾病。
[0020] 酶聯免疫吸附實驗巧LISA)即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標 記的抗原抗體反應在固相表面進行的技術。該技術可用于檢測大分子抗原和特異性抗體 等，具有快速、靈敏、簡便、載體易于標準化等優點。ELISA檢測試劑盒根據檢測目的和操作 步驟可分為間接法、雙抗夾屯、法、競爭法、雙位點一步法、捕獲法測IgM抗體、應用親和素和 生物素的化ISA。ELISA檢測試劑盒中生色底物可選擇辣根過氧化物酶（HR巧或者堿性憐 酸酶（AF0。
[0021] 常用的免疫膠體金檢測技術：（1)免疫膠體金光鏡染色法細胞懸液涂片或組織切 片，可用膠體金標記的抗體進行染色，也可在膠體金標記的基礎上，W銀顯影液增強標記， 使被還原的銀原子沉積于已標記的金顆粒表面，可明顯增強膠體金標記的敏感性。（2)免疫 膠體金電鏡染色法可用膠體金標記的抗體或抗抗體與負染病毒樣本或組織超薄切片結合， 然后進行負染。可用于病毒形態的觀察和病毒檢測。（3)斑點免疫金滲濾法應用微孔濾膜 作載體，先將抗原或抗體點于膜上，封閉后加待檢樣本，洗涂后用膠體金標記的抗體檢測相 應的抗原或抗體。（4)膠體金免疫層析法將特異性的抗原或抗體W條帶狀固定在膜上，膠 體金標記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結合墊上，當待檢樣本加到試紙條一端的樣本 墊上后，通過毛細作用向前移動，溶解結合墊上的膠體金標記試劑后相互反應，當移動至固 定的抗原或抗體的區域時，待檢物與金標試劑的結合物又與之發生特異性結合而被截留， 聚集在檢測帶上，可通過肉眼觀察到顯色結果。該法現已發展成為診斷試紙條，使用十分方 便。
[0022] 本發明的藥劑學上可接受的載體為在制劑時通常利用的載體，該載體包含乳糖 (lactose)、右旋糖（dextrose)、薦糖（sucrose)、山梨醇（sorbitol)、甘露醇（mannitol)、 淀粉、阿拉伯橡膠、憐酸巧、藻酸鹽（alginate)、凝膠（gelatin)、娃酸巧、微晶纖維素、聚乙 締R比咯燒酬（polyvinylpyrrolidone)、纖維素（cellulose)、水、糖漿、甲基纖維素（methyl cellulose)、徑基苯甲酸甲醋（methylhy化oxybenzoate)、丙基徑基苯甲酸丙醋（propyl hy化oxybenzoate)、滑石、硬脂酸儀（stearicacidma即esium)及礦物油（mineraloil) 等，但并非局限于此。
[0023]本發明的藥劑學可接