專利名稱：一種制備不同分子量玻璃酸鈉的方法
技術領域：
本發明涉及一種制備不同分子量玻璃酸鈉的方法。
背景技術：
玻璃酸((Hyaluronic Acid簡稱HA)是由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰葡萄糖胺雙糖單位反復交替而形成的一種均聚物，其重均分子量一般為10萬 1000萬Da，玻璃酸鈉 (sodium hyaluronate)為玻璃酸的鈉鹽形式，不同分子量的玻璃酸鈉具有不同的生物活性。目前臨床上應用的玻璃酸鈉制劑，如眼科手術用黏彈劑、治療關節炎的關節腔注射液、術后防粘連制劑、滴眼液等，所用HA的平均分子量般為50萬 500萬。低分子量HA(LMW-HA)的分子量范圍尚無統一標準，一般為1萬 50萬，而HA寡聚糖 (oligosaccharides of HA，簡稱o_HA)為分子量在1萬以下，單糖殘基數量為2 40 (般為4 16)的HA分子片段。LMW-HA還屬于大分子多糖范疇，在物理性質和生物活性方面與普通HA接近，而O-HA屬于小分子多糖，其性質與普通HA有很大不同，甚至具有完個相反的作用。研究表明，HA的多種生物活性具有分子量依賴性，LMW-HA或o_HA的某些生物活性，(高分子)HA就沒有或具有相反的作用。West等發現3 16個雙糖單位的HA片段在體內具有促血管生成作用，在體外可促進內皮細胞的增生。而高分子量HA在體外抑制內皮細胞的增生，在體內抑制新血管的生成。Deed等的體外實驗表明，具有促血管生成OligO-HA(O-HA)可快速誘導動脈內皮細胞相關基因表達水平的提高。oligo-HA與細胞表面受體的結合，并通過信號傳遞，誘導相關的表達，從而促進內皮細胞的增生。oligo-HA可促進內皮細胞合成I型和VIII型膠原， 這兩種膠原在血管生成過程中具有重要作用。Termeer等試驗表明，只有HA小分子片段G糖和6糖)可誘導具有免疫作用的樹突細胞的成熟化，并促進樹突細胞產生白介素、腫瘤壞死因子等細胞因子，而分子量在8 萬 20萬或更高的HA則無此作用。oligo-HA的這種作用具有專屬性，其他糖胺聚糖如硫酸軟骨素或硫酸乙酰肝素或其降解產物沒有這種作用。在炎癥過程中，內源性HA被降解成的小分子片段，對樹突細胞和巨噬細胞等免疫活性細胞具有強力活化作用。這種作用是通過鐘狀受體4-(TLR-4)介導的，而不是⑶44受體。有專利報通分子量為2萬 6萬的LMW-HA可刺激體外培養的骨細胞的增生，增加培養基中骨細胞集落的數目和單個集落的面積。由此可見關節腔注射HA，不但可以起潤滑作用，HA經過一段時間被降解成LMW-HA，還具有促進細胞生長的作用。
發明內容
本發明的目的是提供一種制備不同分子量玻璃酸鈉的方法，該方法采用酸堿水解結合法制備了不同小分子量的玻璃酸鈉。為實現本發明的目的，本發明的技術方案是一種制備不同分子量玻璃酸鈉的方法，其特征在于，包括以下步驟(1)向玻璃酸鈉溶液中加入氫氧化鈉進行堿水解得堿水解液，其中堿水解液中氫氧化鈉的濃度為0. 05-2mol/L，堿水解溫度為60°C _85°C，堿水解時間110_180min ；(2)向步驟(1)所得的水解液中加入氯化鈉進行酸水解得酸水解液，其中酸水解液中氯化鈉的質量含量為0. 5-4%，用鹽酸調pH值為2. 0-4. 0，酸水解溫度為70-100°C，酸水解時間為180-300min ；(3)向酸水解液中加乙醇使玻璃酸鈉沉淀，脫水干燥，得不同分子量玻璃酸鈉。在本發明的一優選實施例中，所述步驟(1)中，玻璃酸鈉溶液中玻璃酸鈉的質量含量為0. 1-1%。在本發明的一更優選實施例中，所述步驟(1)中，玻璃酸鈉溶液中玻璃酸鈉的質量含量為0.5%。在本發明的一更優選實施例中，所述步驟(1)中，堿水解液中氫氧化鈉的濃度為 0.15-0. 20mol/L。在本發明的另一更優選實施例中，所述步驟(1)中，堿水解液中氫氧化鈉的濃度為 0. 18mol/L。在本發明的一更優選實施例中，所述步驟(1)中，堿水解溫度為60_75°C，堿水解時間 120-180min ；在本發明的另一更優選實施例中，所述步驟(1)中，堿水解溫度為75°C，堿水解時間 180min ；在本發明的一更優選實施例中，步驟O)中，酸水解液中氯化鈉的質量含量為
2 % O在本發明的一更優選實施例中，步驟O)中，酸水解溫度為86°C，酸水解時間為 240min。在本發明的一優選實施例中，制備所得的玻璃酸的分子量低于10萬Dalton。在本發明的一更優選實施例中，制備所得的玻璃酸的分子量低于1萬Dalton。本發明采用酸堿水解結合法制備得到了不同的小分子量的玻璃酸鈉。
具體實施例方式通過下面給出的本發明的具體實施例可以進一步清楚地了解本發明，但它們不是對本發明的限定。對比實施例1 取Ig玻璃酸鈉(分子量為115萬Da)溶解于200ml純化水中，待完全溶解后，加入氫氧化鈉，使其終濃度為0. 05mOl/L，50°C提取并水解60min，然后向該溶液中加入氯化鈉， 使其質量含量為2%，加乙醇沉淀出HA，經脫水干燥，得低分子量玻璃酸鈉樣品，采用HPGPC 法檢測檢測分子量。對比實施例2:取Ig玻璃酸鈉(分子量為115萬Da)溶解于200ml純化水中，待完全溶解后，加入氫氧化鈉，使其終濃度為0. 05mol/L，75°C提取并水解60min，然后向該溶液中加入氯化鈉， 使其質量含量為2%，加乙醇沉淀出HA，經脫水干燥，得低分子量玻璃酸鈉樣品，采用HPGPC 法檢測檢測分子量。對比實施例3:取Ig玻璃酸鈉(分子量為115萬Da)溶解于200ml純化水中，待完全溶解后，加入氫氧化鈉，使其濃度為0. 10mol/L，6(TC提取并水解120min，然后向該溶液中加入氯化鈉， 使其質量含量為2%，加乙醇沉淀出HA，經脫水干燥，得低分子量玻璃酸鈉樣品，采用HPGPC 法檢測檢測分子量。實施例4 取Ig玻璃酸鈉(分子量為115萬Da)溶解于200ml純化水中，待完全溶解后，加入氫氧化鈉，使其濃度為0. 10mol/L)，7(TC提取并水解150min，然后向該溶液中加入氯化鈉， 使其質量含量為2%，用鹽酸調溶液pH值為4.0，86°C加熱210min，加乙醇沉淀出HA，經脫水干燥，得低分子量HA樣品，采用HPGPC法檢測檢測分子量。實施例5 取Ig玻璃酸鈉(分子量為115萬Da)溶解于200ml純化水中，待完全溶解后，加入氫氧化鈉，使其濃度為0. 15mOl/L)，60°C提取并水解120min，然后向該溶液中加入氯化鈉， 使其質量含量為2%，用鹽酸調溶液pH值為2. 5，86°C加熱180min，加乙醇沉淀出HA，經脫水干燥，得低分子量HA樣品，采用HPGPC法檢測檢測分子量。實施例6 取Ig玻璃酸鈉(分子量為115萬Da)溶解于200ml純化水中，待完全溶解后，加入氫氧化鈉，使其濃度為0. 15mol/L，75°C提取并水解150min，然后向該溶液中加入氯化鈉， 使其質量含量為2%，用鹽酸調溶液pH值為3.0，861加熱2101^11，加乙醇沉淀出撤，經脫水干燥，得低分子量HA樣品，采用HPGPC法檢測檢測分子量。實施例7 取Ig玻璃酸鈉(分子量為115萬Da)溶解于200ml純化水中，待完全溶解后，加入氫氧化鈉，使其濃度為0. 18mol/L，75°C提取并水解150min，然后向該溶液中加入氯化鈉， 使其質量含量為2%，用鹽酸調溶液pH值為2. 5，86°C加熱210min，加乙醇沉淀出HA，經脫水干燥，得玻璃酸鈉寡糖樣品，采用HPGPC法檢測檢測分子量。實施例8:取Ig玻璃酸鈉(分子量為115萬Da)溶解于200ml純化水中，待完全溶解后，加入氫氧化鈉，使其濃度為0. 18mol/L，75°C提取并水解180min，然后向該溶液中加入氯化鈉， 使其質量含量為2%，用鹽酸調溶液pH值為2. 0，86°C加熱MOmin，加乙醇沉淀出HA，經脫水干燥，得玻璃酸鈉寡糖樣品，采用HPGPC法檢測檢測分子量。實施例9 取Ig玻璃酸鈉(分子量為115萬Da)溶解于200ml純化水中，待完全溶解后，加入氫氧化鈉，使其濃度為0. 20mol/L，7(TC提取并水解120min，然后向該溶液中加入氯化鈉， 使其質量含量為2%，用鹽酸調溶液pH值為3. 0，86°C加熱180min，加乙醇沉淀出HA，經脫水干燥，得低分子量HA樣品，采用HPGPC法檢測檢測分子量。9個實施例檢驗數據匯總見表1
表 權利要求
1.一種制備不同分子量玻璃酸鈉的方法，其特征在于，包括以下步驟(1)向玻璃酸鈉溶液中加入氫氧化鈉進行堿水解得堿水解液，其中堿水解液中氫氧化鈉的濃度為0. 05-2mol/L，堿水解溫度為60°C _85°C，堿水解時間110_180min ；(2)向步驟(1)所得的水解液中加入氯化鈉進行酸水解得酸水解液，其中酸水解液中氯化鈉的質量含量為0. 5-4%，用鹽酸調pH值為2. 0-4. 0，酸水解溫度為70-100°C，酸水解時間為 180-300min ；(3)向酸水解液中加乙醇使玻璃酸鈉沉淀，脫水干燥，得不同分子量玻璃酸鈉。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，玻璃酸鈉溶液中玻璃酸鈉的質量含量為0. 1-1%。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，玻璃酸鈉溶液中玻璃酸鈉的質量含量為0.5%。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，堿水解液中氫氧化鈉的濃度為 0. 15-0. 20mol/L。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，堿水解液中氫氧化鈉的濃度為 0. 18mol/L。
6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，堿水解溫度為60-75°C，堿水解時間120-180min ；
7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，堿水解溫度為75°C，堿水解時間180min ；
8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟O)中，酸水解液中氯化鈉的質量含量為2%。
9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟O)中，酸水解溫度為86°C，酸水解時間為 240min。
10.如權利要求1所述的方法，其特征在于，制備所得的玻璃酸的分子量低于10萬 Dalton0
11.如權利要求1所述的方法，其特征在于，制備所得的玻璃酸的分子量低于1萬 Dalton0
全文摘要
本發明涉及一種制備不同分子量玻璃酸鈉的方法，首先向玻璃酸鈉溶液中加入氫氧化鈉，進行堿水解，然后向溶液中加入氯化鈉，并用鹽酸調pH值為2.0-4.0，進行酸水解，最后用乙醇使玻璃酸鈉沉淀，脫水干燥，得不同分子量玻璃酸鈉。該方法制備所得的玻璃酸鈉的分子量比較小。
文檔編號C08J3/00GK102516410SQ20111038910
公開日2012年6月27日 申請日期2011年11月30日 優先權日2011年11月30日
發明者周寧輝, 顧其勝 申請人:上海景峰制藥有限公司