專利名稱：取代的雜環及其作為chk1、pdk1和pak抑制劑的應用的制作方法
專利說明取代的雜環及其作為CHK1、PDK1和PAK抑制劑的應用 發明領域 本發明涉及新的取代的雜環、它們的藥用組合物和使用方法。另外，本發明涉及治療和預防癌癥的的治療方法。

背景技術：
化療和放射照射是當今治療癌癥的主要選擇，但是這兩種手段的應用由于其對于正常組織的嚴重的副作用和頻繁發生的腫瘤細胞抗性而受到嚴格限制。因此，非常需要在不增加與它們相關的毒性情況下改善這樣的治療的功效。達到此目的的一種方法是使用諸如那些在本文描述的特異性敏感藥物。
個體細胞通過使其染色體精確拷貝，然后將這些分離(segregating)至分開的各細胞中而復制。DNA復制、染色體分離和分開的循環由維持各步驟有序和確保每一步驟精確進行的細胞內機制調節。這些過程的關鍵在于細胞周期檢查點(Hartwell等，Science，Nov 3，1989，246(4930)629-34)，在這些檢查點中，細胞可以停滯以保證DNA修復機制在持續通過循環進入有絲分裂之前有時間進行。細胞周期中有兩個這樣的檢查點——由p53調節的G1/S檢查點和由Ser/Thr激酶檢查點激酶1(CHK1)監測的G2/M檢查點。另外，最近Chk1還被鑒定為在S相期檢查點中很重要(Zhao等PNAS，2002年11月12日，99(23)14795-14800；Sorsensen等，Cancer Cell，2003年3月，卷3247-258和Senggupta等，Journal of Cell Biology，卷166，6，801-813)。
因為由這些檢查點導致的細胞周期停滯是極其重要的機制，通過該機制細胞可克服由放射治療或化療導致的損傷，所以它們被新的藥物的消除將增加腫瘤細胞對DNA損傷性治療的敏感性。另外，大多數腫瘤中的腫瘤的由p53突變的G1/S檢查點的特異性消除，可被開發以提供腫瘤選擇性藥物。設計消除G2/M檢查點的化療敏感劑或放療敏感劑的一條途徑是，開發關鍵G2/M調節激酶CHK1的抑制劑，并且此途徑已經顯示在許多概念研究的試驗中有效。(Koniaras等，Oncogene，2001，207453；Luo等，Neoplasia，2001，3411；Busby等，Cancer Res.，2000，602108；Jackson等，Cancer Res.，2000，60566)。
某些激酶屬于絲氨酸/蘇氨酸激酶家族并且位于細胞內和與諸如那些影響腫瘤細胞生長的生物化學信號傳遞有關。這樣的絲氨酸/蘇氨酸激酶信號傳遞通路包括Raf-MEK-ERK級聯反應和那些PI3K的下游諸如PDK-1、AKT和mTOR(Blume-Jensen和Hunter，Nature，2001，411，355)。這些絲氨酸/蘇氨酸激酶通路也已經顯示調節其它絲氨酸/蘇氨酸激酶及被所述其它的絲氨酸/蘇氨酸激酶所調節，而所述其它絲氨酸/蘇氨酸激酶也調節腫瘤生長和入侵的其它的絲氨酸/蘇氨酸激酶以及被所述其它的絲氨酸/蘇氨酸激酶所調節。一個這樣的激酶家族是細胞內絲氨酸/蘇氨酸激酶的p21-激活的蛋白質激酶(Pak)家族。
Pak激酶家族作為小p21 Rho GTP酶、Rac和Cdc42的下游效應器起作用(Bokoch，Annual Review of Biochemistry，2003，72，741-781)。已經鑒定出正好分入兩個亞家族的六種人Pak激酶。第一個亞家族(組I)包括Pak1(Pakα)、Pak2(Pakγ、hPak65)和Pak3(Pakβ)。另一個亞家族(組II)包括Pak4、Pak5和Pak6。組I家族Paks在它們的激酶域中共享93％的同一性，而組II Paks激酶域與組I激酶域更區別地表現54％的同一性。組1 Pak激酶可被多種GTP酶-依賴的和-不依賴的機制激活。組1 Pak激酶與激活的(GTP-結合的)p21(Rac/Cdc42)相互作用，抑制p21的GTP酶活性并導致激酶自動磷酸化和激活。調節GTP酶的Rho家族的GTP-GDP結合狀態的鳥嘌呤核苷酸交換因子(GEFs)和GTP酶-激活蛋白(GAPs)，是由Pak激活的下游信號傳遞的重要的決定簇。
Pak激酶家族已經涉及細胞存活、轉化、增殖和細胞運動的調節(Bokoch，Annual Review of Biochemistry，2003，72，741-781；Kumar和Hung，Cancer Research，2005，65，2511-2515)。Ras通路的Pak1信號下游和Pak的激活已經顯示在細胞轉化中起作用。如在比較簡單的真核細胞中的那樣，Paks在哺乳動物細胞中調節MAPK信號通路，例如，Pak1使Raf1和Mek1兩者磷酸化。Paks在導致影響生長因子介導的轉移和侵襲的細胞骨架重建的生長因子信號傳遞中起重要作用。Pak1激活還通過使Bad失活來促進細胞存活，提示Pak1可涉及癌癥細胞存活和演進(progression)。
有新的資料指出Pak激酶家族對很多種人類癌癥的腫瘤發生直接或間接地產生作用(Vadlamudi和Kumar，2003，Cancer and MetastasisReviews，2003，22，385-393；Kumar和Hung，Cancer Research，2005，65，2511-2515)。例如，已有報告在卵巢乳腺腫瘤中Pak1基因擴增和相應的Pak 1蛋白質向上-調節(Schraml等，American Journal of Pathology，2003，163，985-992)。已有報告Pak1表達增加結腸直腸癌的惡化轉移(Carter等，Clinical Cancer Research，2004，10，3448-3456)。此外，已經確定在結腸直腸激酶中Pak4基因擴增和突變(Parsons等，Nature，2005，436，792)。新的資料提示Pak1涉及乳腺癌的演進。例如，小鼠乳腺中的組成性激活(constitutively active)Pak1轉基因的表達誘發乳腺上皮增生(Wang等，The EMBO Journal，2002，21，5437-5447)。最后，由Rac/Cdc42和鳥嘌呤交換因子(GEFs)對Pak活性的調節還可參與癌癥中Pak信號級聯反應的過度激活。例如，有關GEF Vav1在胰腺癌癥的腫瘤發生中的關鍵作用的新的資料已經揭示，在治療胰腺腫瘤中以Rac-Pak信號通路為標靶，存在可能的機會(Fernandez-Zapico等，CancerCell，2005，7，39-49)。
這些結果提示，藥理學上的Pak抑制劑對于治療多種形式的癌癥疾病應該具有治療價值。
還有證據顯示，Pak在調節神經細胞突起和正常腦發育中起作用(Hofmann等，Journal of Cell Science，2004，117，4343-4354；Nikolic，TheInternational Journal of Biochemistry，2002，34，731-745)。Pak抑制劑可用于治療神經退行性疾病和與神經再生缺陷相關的疾病。此外，Pak抑制劑還可在治療關節疾病或關節疼痛中具有潛在的用途。
磷脂酰肌醇3’OH激酶(PI3K)通路已知在本質上涉及調節細胞存活和凋亡(Yao和Cooper，Oncogene，1996，13，343-351；Franke等，Oncogene，2003，22，8983-8998)。作為該通路的部分，磷酸肌醇依賴的蛋白質激酶-1(PDK1)和Akt在信號傳導中起關鍵作用(Vanhaesebroeck和Alessi，Biochem.J.，2000，346，561-576)。PI3K的激活導致產生結合于PDK1和Akt的PH結構域(pleckstrin homology)上以作用于膜聯合(membrane association)和Akt的激活的(3，4，5)三磷酸磷脂酰肌醇。PI3K通路激酶諸如PI3K、Akt、mTOR的基因突變與包括結腸癌、乳腺癌和前列腺癌的許多人癌癥密切相關(Philp等，Cancer Res.，2001，61，7426-7429；Bellacosa等，Int.J.Cancer，1995，64，280-285)。由還原細胞PIP3的脂質磷酸酶PTEN的突變或缺失造成的該通路的混亂，與多種人腫瘤包括乳腺癌、前列腺癌、子宮內膜癌以及黑色素瘤和神經膠質母細胞瘤相關(Steck等，Nat.Genetics，1997，15，356-362)。
得自亞等位基因PDK1敲除的具PTEN缺乏背景的小鼠的在體證據強烈暗示，PDK存在于很多腫瘤類型中(Bayascas等，Curr.Biol.，2005，15，1839-1846)。再有，使用PDK1抑制劑，7-羥基斯托斯波林(stauro-sporine)的在體研究與這些結果相一致(Sato等，Oncogene，2002，21，1727-1738)。因此可以期望，磷酸肌醇依賴的蛋白質激酶-1(PDK1)的抑制劑將用于治療諸如癌癥，例如結腸癌、乳腺癌或前列腺癌的疾病。
發明簡述 依據本發明，本申請人在此公開新的化合物，所述化合物為有效的激酶CHK1抑制劑并因此具有預防細胞周期在對DNA損傷的應答中在G2/M檢查點停滯的能力。本發明的某些化合物還是PDK1抑制劑。因此本發明化合物由于其抗增殖(諸如抗癌癥)活性而是有用的，并且因此用于治療人或動物體的方法中。
本發明的某些化合物還是Pak激酶抑制劑，例如一個或多個Pak1、Pak 2、Pak 3、Pak 4、Pak 5和Pak 6激酶，特別是Pak 1、Pak 2或Pak 4激酶的抑制劑。具有Pak激酶活性的化合物也期望例如通過抑制細胞存活、細胞轉化或細胞運動，用于抑制腫瘤發生。
本發明還涉及用于制備所述化合物的方法，涉及包含所述化合物的藥用組合物以及涉及它們在制備藥物中的應用，所述藥物用于在溫血動物諸如人中產生抗癌效應，例如抗增殖效應。
本發明包括這樣的化合物的藥學上可接受的鹽。另外依據本發明，本申請人提供藥用組合物和在癌癥治療中應用這樣的化合物的方法。
這樣的特性期望在治療與細胞周期停滯、細胞增殖、細胞存活、細胞轉化或細胞運動相關的疾病狀態中具有價值，所述疾病狀態有諸如癌癥(實體腫瘤和白血病)、纖維增殖性和分化性疾患、銀屑病、類風濕性類關節炎、卡波濟氏肉瘤、血管瘤、急性和慢性腎病、粉瘤、動脈粥樣硬化、動脈再狹窄、自身免疫性疾病、神經退化性疾病和與神經再生缺陷相關的疾病諸如帕金森氏病和阿爾茨海默氏病、急性和慢性炎癥諸如骨關節炎、類風濕性類關節炎或關節疼痛、骨病和伴視網膜血管增生的眼睛疾病。
發明詳述 因此，本發明提供式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽，
(I) 其中 A和D各自獨立選自N、CH、S、O和NR4； L選自NR5、O和S； X和Y各自獨立選自N和CH； R1選自氰基、鹵代；C1-6烷基、-NR11R12、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、環烷基、環烯基、芳基、雜環基、OR6；-CO碳環基、-CO雜環基、-CO(C1-6烷基)、-CONR28R29、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳環基、-S(O)x雜環基、S(O)yNR28R29和-(C1-6烷基)S(O)yNR28R29，其中x獨立為0-2和y獨立為1或2；和其中R1可在一個或多個碳原子上被一個或多個R9任選取代；和其中如果雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R10的基團任選取代； R2選自(C1-3烷基)NR7R8、含至少一個氮原子的4-至7-元雜環、-CO碳環基、-CO雜環基、-CO(C1-6烷基)、-CONR28R29、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳環基、-CO2雜環基、-CO2NR28R29、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x環烷基、-S(O)x環烯基、-S(O)x雜環基、S(O)yNR28R29和-(C1-6烷基)S(O)yNR28R29，其中x獨立為0-2和y獨立為1或2和其中R2可在一個或多個碳原子上被一個或多個R13任選取代；和其中如果雜環基還含有-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R14的基團任選取代； R3選自H、芐基、C1-6烷基、環烷基、環烯基、芳基、雜環基、OR6、CHO、-CO碳環基、-CO(C1-6烷基)、-CONR28R29、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳環基、-S(O)x雜環基、S(O)yNR28R29和-(C1-6烷基)S(O)yNR28R29，其中x獨立為0-2，y獨立為1或2和其中R3可在一個或多個碳原子上被一個或多個R15任選取代；和其中如果雜環基含-NH-部分，則所述氮可被選自R16的基團任選取代； R4選自H、C1-3烷基、環丙基和CF3； R5選自H、C1-6烷基、環烷基、環烯基、雜環基和OR6；其中R5可在碳上被一個或多個R17任選取代；和其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R18的基團任選取代； R6選自H、C1-6烷基、環烷基、環烯基、芳基和雜環基；其中R6可在碳上被一個或多個R19任選取代；和其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R24的基團任選取代； R7和R8獨立選自H、C1-6烷基、環烷基、環烯基、芳基和雜環基；其中R7和R8各自獨立地可在碳上被一個或多個R20任選取代；和其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R21的基團任選取代； R11和R12獨立選自H、C1-6烷基、環烷基、環烯基、芳基、雜環基，其中R11和R12各自獨立地可在碳上被一個或多個R32任選取代；和其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R33的基團任選取代； R9、R13、R15、R17、R19、R20、R32和R34各自獨立選自鹵代、硝基、-NR28R29、氰基、異氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、環烷基、環烯基、雜環基、羥基、酮基(＝O)、-O(C1-6烷基)、-O碳環基、-O雜環基、-O芳基、-OC(O)C1-6烷基、-NHCHO、-N(C1-6烷基)CHO、-NHCONR28R29、-N(C1-6烷基)CONR28R29、-NHCO(C1-6烷基)、-NHCO碳環基、-NHCO(雜環基)、-NHCO2(C1-6烷基)；-NHCO2H、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-NHSO2(C1-6烷基)、羧基、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO雜環基、-CO環烷基、-CO環烯基、-CO芳基、-CO2H、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳環基、-CO2雜環基、-OC(O)(NR28R29)、巰基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳環基、-S(O)x雜環基和-S(O)xNR28R29；其中x獨立為0-2，其中R9、R13、R15、R17、R19、R20、R32和R34各自獨立地可在碳上被一個或多個R22任選取代和其中如果雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R23的基團任選取代； R10、R14、R16、R18、R21、R24、R33和R35各自獨立選自氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、環烷基、環烯基、雜環基、羥基、-O(C1-6烷基)、-O碳環基、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO雜環基、-CO碳環基-CO芳基、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳環基、-CO2雜環基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳環基、-S(O)x雜環基和-S(O)yNR28R29；其中x獨立為0-2和y獨立為1或2；其中R10、R14、R16、R18、R21、R24、R33和R35各自獨立地可在碳上被一個或多個R25任選取代和其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R26的基團任選取代； R22和R25各自獨立選自鹵代、硝基、-NR28R29、氰基、異氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、環烷基、環烯基、雜環基、羥基、酮基(＝O)、-O(C1-6烷基)、-O碳環基、-O雜環基、-O芳基、-OC(O)C1-6烷基、-NHCHO、-N(C1-6烷基)CHO、-NHCONR28R29、-N(C1-6烷基)CONR28R29、-NHCO(C1-6烷基)、-NHCO碳環基、-NHCO(雜環基)、-NHCO2(C1-6烷基)；-NHCO2H、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-NHSO2(C1-6烷基)、羧基、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO雜環基、-CO環烷基、-CO環烯基、-CO2H、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳環基、-OC(O)(NR28R29)、巰基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳環基、-S(O)x雜環基和-S(O)xNR28R29；其中x獨立為0-2，其中R22和R25可在碳上被一個或多個R36任選取代和其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R27的基團任選取代； R23和R26各自獨立選自氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、環烷基、環烯基、雜環基、羥基、-O(C1-6烷基)、-O碳環基、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO雜環基、-CO環烷基、-CO環烯基、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳環基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳環基、-S(O)x雜環基和-S(O)yNR28R29；其中x獨立為0-2和y獨立為1或2；其中R23和R26各自獨立地可在碳上被一個或多個R30任選取代和其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R31的基團任選取代； R28和R29各自獨立選自H、氨基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、環烷基、環烯基、雜環基、羥基、-O(C1-6烷基)、-O芳基、-OCO烷基、-脒基、-CHO、-CO(C1-6烷基)、-CO雜環基、-CO環烷基、-CO環烯基、-SO(C1-6烷基)、-SO2(C1-6烷基)，其中R28和R29各自獨立地可在碳上被一個或多個R34任選取代；和其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R35的基團任選取代； R30和R36各自獨立選自鹵代、硝基、-NR28R29、氰基、異氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、環烷基、環烯基、雜環基、羥基、酮基(＝O)、-O(C1-6烷基)、-O碳環基、-OC(O)C1-6烷基、-NHCHO、-N(C1-6烷基)CHO、-NHCONR28R29、-N(C1-6烷基)CONR28R29、-NHCO(C1-6烷基)、-NHCO碳環基、-NHCO(雜環基)、-NHCO2(C1-6烷基)；-NHCO2H、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-NHSO2(C1-6烷基)、羧基、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO雜環基、-CO環烷基、-CO環烯基、-CO2H、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳環基、-OC(O)(NR28R29)、巰基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳環基、-S(O)x雜環基和-S(O)xNR28R29；其中x獨立為0-2； R27和R31各自獨立選自氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、環烷基、環烯基、雜環基、羥基、-O(C1-6烷基)、-O碳環基、-(C1-6烷基)-O-(C1-6烷基)、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO雜環基、-CO環烷基、-CO環烯基、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳環基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳環基、-S(O)x雜環基和-S(O)yNR28R29；其中x獨立為0-2和y獨立為1或2； 如在本申請中所用的術語“任選取代”，意指取代是任選的并且因此，有可能指定的原子未被取代。一旦取代是必需的，則這樣的取代意指指定的原子上的任何數量的氫被選自指定的基團所置換，條件是不超過指定的原子的正常價并且取代導致穩定的化合物。
當環顯示在環結構中，其是指環系統是芳族的。
術語“烴”單獨使用或作為前綴或后綴使用，指的是任何僅含碳和氫原子的最多至14個碳原子的結構。
術語“烴基團”或“烴基(hydrocarbyl)”單獨使用或作為前綴或后綴使用，指的是任何由烴去除一個或多個氫而形成的結構。
術語“烷基”單獨使用或作為前綴或后綴使用，除非另有特指，指的是含1個至約12個碳原子的單價直鏈或支鏈烴基且包括直鏈和支鏈烷基。當提及單個烷基諸如“丙基”時則僅特指直鏈形式，而當提及單個支鏈烷基諸如“異丙基”時則僅特指支鏈形式。例如，“C1-6烷基”包括C1-4烷基、C1-3烷基、丙基、異丙基和叔-丁基。類似的慣例適用于其它基團，例如“苯基C1-6烷基”包括苯基C1-4烷基、芐基、1-苯基乙基和2-苯基乙基。
術語“烯基”單獨使用或作為前綴或后綴使用，除非另有特指，指的是具有至少一個碳-碳雙健和含至少2個至最多約12個碳原子的單價直鏈或支鏈烴基。
術語“炔基”單獨使用或作為前綴或后綴使用，除非另有特指，指的是具有至少一個碳-碳叁健和含至少2個至最多約12個碳原子的單價直鏈或支鏈烴基。
術語“環烷基”單獨使用或作為前綴或后綴使用，指的是飽和的、包含含至少3個至最多約12個碳原子的烴基單價環。當環烷基包含多于一個環，則環可為稠合的或未稠合的并包括雙環基。稠合的環一般指的是之間共享兩個原子的至少兩個環。作為實例的環烷基包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基和降冰片基(norboranyl)。
術語“環烯基”單獨使用或作為前綴或后綴使用，指的是包含含至少3個至最多約12個碳原子的烴基單價環，但不包括芳族環系統。當環烯基含多于一個環時，則環可為稠合的或未稠合的并包括雙環基。作為實例的環烯基包括環己烯基和環庚烯基。
術語“芳基”單獨使用或作為前綴或后綴使用，指的是具有芳族特征(如，4n+2個離域電子)和包含6個至最多約14個碳原子的一個或多個多不飽和碳環的烴基，其中該基團位于芳環的碳上。作為實例的芳基包括苯基、萘基和茚基。
術語“烷氧基”單獨使用或作為前綴或后綴使用，指的是通式為-O-R的基團，其中-R選自烴基。作為實例的烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、叔-丁氧基、異丁氧基、環丙基甲氧基、烯丙氧基和炔丙基氧基。
術語“碳環基”指的是飽和的、部分飽和的和不飽和的、單環、雙環或多環碳環。這些可包括稠合的或橋連的雙環或多環系統。碳環基在其環結構中可具有3-12個碳原子，即C3-12碳環基和在具體的實施方案中為在其環結構中具有3-7個碳原子的單環或具有7-10個碳原子的雙環。適合的碳環基實例包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環己烯基、環戊二烯基、茚滿基、苯基和萘基。
“雜環基”是含4-12個原子(其中至少一個原子選自氮、硫或氧)的飽和的、部分飽和的或不飽和的單環或雙環，除非另有特指，其可為碳或氮連接的，其中-CH2-基團可被-C(O)-任選置換和環硫原子可被任選氧化形成S-氧化物。雜環基可包含多于一個環。當雜環基包含多于一個環時，該環可為稠合的。稠合的環一般指的是之間共享兩個原子的至少兩個環。雜環基可為芳族的。雜環基的實例包括，但不限于，1H-吲唑基、2-吡咯酮基、2H，6H-1，5，2-二噻嗪基、2H-吡咯基、3H-吲哚基、4-哌啶酮基、4aH-咔唑基、4H-喹嗪基、6H-1，2，5-噻二嗪基、吖啶基、氮雜環庚烷基(azepanyl)、氮雜環丁烷基、環乙亞胺基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋喃基、苯并硫代呋喃基、苯并噻吩基(benzothiophenyl)、苯并二氧雜環戊烯基、苯并嗪基、二氫苯并嗪基、3，4-二氫-1，4-苯并嗪基、苯并唑基、苯并硫代苯基(benzthiophenyl)、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并異唑基、苯并噻唑、苯并異噻唑基、苯并咪唑基、苯并咪唑啉酮基(benzimidazalonyl)、咔唑基、4aH-咔唑基、b-咔啉基、苯并二氫吡喃基、苯并吡喃基、噌啉基、十氫喹啉基、2H，6H-1，5，2-二噻嗪基、二氧雜環戊烷基、呋喃基、2，3-二氫呋喃基、2，5-二氫呋喃基、二氫呋喃并[2，3-b]四氫呋喃基、呋喃基、呋咱基、高哌啶基、咪唑基、咪唑烷基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、indolenyl、二氫吲哚基、中氮茚基、吲哚基、異苯并呋喃基、異苯并二氫吡喃基、異吲唑基、異二氫吲哚基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異唑基、嗎啉基、萘啶基、八氫異喹啉基、二唑基、1，2，3-二唑基、1，2，4-二唑基、1，2，5-二唑基、1，3，4-二唑基、唑烷基、唑基、環氧乙烷基、唑烷基萘嵌二氮雜苯基、菲啶基、菲咯啉、吩吡嗪基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噻基(phenoxathiinyl)、吩嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶基、蝶啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、嘌呤基、吡喃基、吡咯烷基、吡咯啉基、吡咯烷基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、噠嗪基、吡啶并唑基、吡啶并咪唑基、吡啶并噻唑基、吡啶基、N-氧化物-吡啶基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、吡咯基、吡啶基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎寧環基、咔啉基、四氫呋喃基、四氫異喹啉基、四氫噻吩基、硫代四氫喹啉基、6H-1，2，5-噻二嗪基、1，2，3-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并唑基、噻吩并咪唑基、苯硫基、硫雜丙環基、三嗪基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、1，2，5-三唑基、1，3，4-三唑基和氧雜蒽基(xanthenyl)。在本發明的一個方面， “雜環基”是含5、6或7個原子(其中至少一個原子選自氮、硫或氧)的飽和的、部分飽和的或不飽和的單環，除非另有特指，其可為碳或氮連接的，其中-CH2-基團可被-C(O)-任選置換和環硫原子可被任選氧化形成S-氧化物。雜環基的具體實例包括氮雜環庚烷基、1H-吲唑基、哌啶基、1H-吡唑基、嘧啶基、吡咯烷基、吡啶基和噻吩基。
如用于本文的“含至少一個氮原子的4-至7-元雜環”意指含至少一個氮原子的4-、5-、6-或7-元雜環。作為實例的含至少一個氮原子的4-至7-元雜環包括，但不限于哌啶基、氮雜環丁烷基、氮雜環庚烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌嗪基、咪唑基、嗎啉基、二氫吲哚基和硫代嗎啉基。
術語“鹵代”意指氟代、氯代、溴代和碘代。
當任何變量(如，R28、R29等)不只一次在化合物的任何式中出現時，其在每一次出現時的定義均獨立于其在其它每一次出現時的定義。
某些式(I)化合物可具有手性中心和/或幾何異構中心(E-和Z-異構體)并因此這些化合物可以具體的立體異構形式或幾何的形式存在。應該理解，本發明包含所有這樣的擁有CHK1、Pak或PDK1激酶抑制活性的光學異構體、非對映異構體和幾何異構體及其混合物。本發明還包括所有擁有CHK1、Pak或PDK1激酶抑制活性的的式(I)化合物的互變異構形式。如何例如通過拆分外消旋的形式或通過從光學性起始原料合成制備光學活性形式，為本領域所熟悉。當需要時，可通過本領域已知的方法實現外消旋的原料的分離。除非具體指明特殊的立體化學或異構形式，所有手性形式的、非對映異構形式的、外消旋形式的和所有幾何異構形式的結構都是想要的。
以下對于包含在式(I)中的可變基團的取代基為本發明的更進一步的實施方案。這樣的特別的取代基在適當時可與在上文或下文定義的任何定義、權利要求書或實施方案一起使用。
X為N。
Y為CH。
X為CH和Y為CH。
D為S。
A為S。
A為N。
A為NR5 D為N。
D為NR5 A為O。
D為O。
A為N和D為O。
A為S和D為N。
X為N和A為S。
X為N和D為S。
X為N和A為O。
X為N和D為O。
X為N；A為S；和Y為CH。
X為N；D為S；和Y為CH。
X為N；A為S；D為CH和Y為CH。
X為N；D為S；A為CH和Y為CH。
至少一個A或D為S。
X為N；A為S；D為N和Y為CH。
X為N；D為S；A為N和Y為CH。
A為CH；D為NR4；X為CH；和Y為CH。
A為CH；D為NH；X為CH；和Y為CH。
L為NR5。
L為NR5和R5為H。
L為NR5和R5為環丙基，其中R5可在碳上被一個或多個R17任選取代。
L為NR5和R5為H或C1-3烷基，其中R5可在碳上被一個或多個R17任選取代。
L為NH。
L為O。
L為S。
R1選自C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基和雜環基，其中R1可在一個或多個碳原子上被一個或多個R9任選取代；和其中如果雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R10的基團任選取代。
R1為芳基，其中R1可在一個或多個碳原子上被一個或多個R9任選取代。
R1為芳基，其中R1可在一個或多個碳原子上被一個或多個R9任選取代，其中R9選自鹵代、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、雜環基、-O(C1-6烷基)、-CO(C1-6烷基)、-CONR28R29和-NHCO(雜環基)其中R9可在碳上被一個或多個R22任選取代和其中如果雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R23的基團任選取代。
R1為雜環基，其中R1可在一個或多個碳原子上被一個或多個R9任選取代；和其中如果雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R10的基團任選取代。
R1為芳基，其中R1可在一個或多個碳原子上被一個或多個R9任選取代，其中R9選自鹵代和C1-6烷基和其中R9可在碳上被一個或多個R22任選取代，其中R22選自鹵代、-NR28R29、氰基、異氰基、芳基、環烷基、環烯基，和其中R22可在碳上被一個或多個R36任選取代和其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R27的基團任選取代。
R1為芳族雜環基，其中R1可在一個或多個碳原子上被一個或多個R9任選取代；和其中如果雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R10的基團任選取代。
R1選自苯并咪唑基、苯并嗪基、二氫苯并嗪基、咪唑啉基、噻吩基、吡唑基；pyradinyl和嘧啶基，其中R1可在一個或多個碳原子上被一個或多個R9任選取代；和其中如果雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R10的基團任選取代。
R2為含至少一個氮原子的4-至7-元雜環，其中所述雜環基可在一個或多個碳原子上被一個或多個R13任選取代；和另外其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R14的基團任選取代。
R2為含至少一個氮原子的4-至7-元飽和雜環，其中所述雜環基可在一個或多個碳原子上被一個或多個R13任選取代；和另外其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R14的基團任選取代。
R2為含至少一個氮原子的4-元雜環，其中所述雜環基可在一個或多個碳原子上被一個或多個R13任選取代；和另外其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R14的基團任選取代。
R2為含至少一個氮原子的5-元雜環，其中所述雜環基可在一個或多個碳原子上被一個或多個R13任選取代；和另外其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R14的基團任選取代。
R2為含至少一個氮原子的6-元雜環，其中所述雜環基可在一個或多個碳原子上被一個或多個R13任選取代；和另外其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R14的基團任選取代。
R2為含至少一個氮原子的7-元雜環，其中所述雜環基可在一個或多個碳原子上被一個或多個R13任選取代；和另外其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R14的基團任選取代。
R2選自哌啶基、氮雜環丁烷基、氮雜環庚烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌嗪基、咪唑基、嗎啉基、二氫吲哚基和硫代嗎啉基，其中所述哌啶基、氮雜環丁烷基、氮雜環庚烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌嗪基、咪唑基、嗎啉基、二氫吲哚基和硫代嗎啉基可在一個或多個碳原子上被一個或多個R13任選取代；和另外其中所述哌啶基、氮雜環庚烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、哌嗪基、咪唑基、嗎啉基、二氫吲哚基和硫代嗎啉基可在N上被選自R14的基團任選取代。
R2選自吡咯烷-3-基、哌啶-3-基和氮雜環庚烷-3-基，其中所述吡咯烷-3-基、哌啶-3-基和氮雜環庚烷-3-基可在一個或多個碳原子上被一個或多個R13任選取代；和另外其中所述吡咯烷-3-基、哌啶-3-基，或氮雜環庚烷-3-基可在N上被選自R14的基團任選取代。
R3選自H、芐基、C1-6烷基、環烷基、環烯基、芳基、雜環基和OR6，其中R3可在一個或多個碳原子上被一個或多個R15任選取代；和其中如果雜環基含-NH-部分，則所述氮可被選自R16的基團任選取代。
R3為在一個或多個碳原子上被一個或多個R15任選取代的吡嗪基。
R3為H。
R3為甲基。
R4為H。
本發明的另一方面，提供式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽，其中 A為CH； D為S； L為NR5； X為N； Y為CH； R1選自C1-6烷基、芳基和雜環基，其中R1可在一個或多個碳原子上被一個或多個R9任選取代；和其中如果雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R10的基團任選取代； R2為含至少一個氮原子的4-至7-元雜環，其中R2可在一個或多個碳原子上被一個或多個R13任選取代；和其中如果雜環基還含有-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R14的基團任選取代； R3為H； R5為H或C1-3烷基。
本發明的另一方面，提供式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽，其中 A為CH； D為S； L為NR5； X為N； Y為CH； R1選自芳基和雜環基，其中R1可在一個或多個碳原子上被一個或多個R9任選取代；和其中如果雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R10的基團任選取代； R2為(C1-3烷基)NR7R8，其中R2可在一個或多個碳原子上被一個或多個R13任選取代； R3為H； R5為H或C1-3烷基； R7和R8獨立選自H、C1-6烷基、環烷基、環烯基、芳基和雜環基；其中R7和R8各自獨立地可在碳上被一個或多個R20任選取代；和其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R21的基團任選取代。
在本發明的又一方面，提供式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽，其中 A為CH； D為S； L為NR5； X為N； Y為CH； R1選自芳基和雜環基，其中R1可在一個或多個碳原子上被一個或多個R9任選取代；和其中如果雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R10的基團任選取代； R2為含至少一個氮原子的4-至7-元雜環，其中R2可在一個或多個碳原子上被一個或多個R13任選取代；和如果雜環基還含有-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R14的基團任選取代； R3為H； R5為H或C1-3烷基。
本發明的再一方面，提供式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽，其中 A為CH； D為NR4； L為NR5； X為CH； Y為CH； R1選自C1-6烷基、芳基和雜環基，其中R1可在一個或多個碳原子上被一個或多個R9任選取代；和其中如果雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R10的基團任選取代； R2為含至少一個氮原子的4-至7-元雜環，其中R2可在一個或多個碳原子上被一個或多個R13任選取代；和其中如果雜環基還含有-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R14的基團任選取代； R3為H； R4為H、C1-3烷基、環丙基和CF3； R5為H或C1-3烷基。
本發明的再一方面，提供式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽，其中 A為CH； D為NR4； L為NR5； X為CH； Y為CH； R1選自芳基和雜環基，其中R1可在一個或多個碳原子上被一個或多個R9任選取代；和其中如果雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R10的基團任選取代； R2為(C1-3烷基)NR7R8，其中R2可在一個或多個碳原子上被一個或多個R13任選取代； R3為H； R4為H、C1-3烷基、環丙基和CF3； R5為H或C1-3烷基； R7和R8獨立選自H、C1-6烷基、環烷基、環烯基、芳基和雜環基；其中R7和R8各自獨立地可在碳上被一個或多個R20任選取代；和其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R21的基團任選取代。
在本發明的還一方面，提供式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽，其中 A為CH； D為NR4； L為NR5； X為CH； Y為CH； R1選自芳基和雜環基，其中R1可在一個或多個碳原子上被一個或多個R9任選取代；和其中如果雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R10的基團任選取代； R2為含至少一個氮原子的4-至7-元雜環，其中R2可在一個或多個碳原子上被一個或多個R13任選取代；和其中如果雜環基還含有-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R14的基團任選取代； R3為H； R4為H、C1-3烷基、環丙基和CF3； R5為H或C1-3烷基。
在本發明的進一步的實施方案中，特別有用的本發明化合物為任一實施例化合物或其藥學上可接受的鹽。
本發明另外的實施方案涉及制備其中X為N，Y為CH，A為CH，D為S，R3為H和L為NR5的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽的方法，該方法包括 a.使其中Z為鹵代，如溴代、氯代或碘代的式(II)化合物
與其中R2和R5如在式(I)中定義的式(III)胺在下面堿的存在下反應， NHR2R5 (III) 得到式(IV)化合物
b.使式(IV)化合物與其中R1如在式(I)中定義和R’為H或甲基的式(V)化合物或(V’)反應， R1B(OR’)2
(V) (V’) 得到式(VI)化合物
c.使式(VI)化合物水解，形成如式(IA)所示的式(I)化合物
d.和然后如果需要 i)將一種式(I)化合物轉化為另一種式(I)化合物； ii)去除任何保護基團； iii)形成藥學上可接受的鹽。
本發明另一個另外的實施方案涉及制備其中X為N，Y為CH，A為CH，D為S，R3為H和L為O的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽的方法，該方法包括 a.使其中Z為鹵代，如溴代、氯代或碘代的式(II)化合物
與其中R2如在式(I)中定義的式(III’)醇，在下面的堿如氫化鈉的存在下反應， R2OH (III’) 得到式(IV’)化合物
b.使式(IV’)化合物與其中R1如在式(I)中定義和R’為H或甲基的式(V)或(V’)化合物反應， R1B(OR’)2
(V) (V’) 得到式(VI’)化合物
c.使式(VI’)化合物水解形成依據式(I)顯示為式(IB)的化合物
d.和然后如果需要 i)將一種式(I)化合物轉化為另一種式(I)化合物； ii)去除任何保護基團； iii)形成藥學上可接受的鹽。
本發明的再一個另外的實施方案涉及制備其中X為CH，Y為CH，A為CH，D為NR4和L為NR5和R5為H的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽的方法，該方法包括 a.使其中R”為H、甲基、乙基或芐基的式(VII)化合物
與式(VIII)酮反應，其中R1如在式(I)中定義
得到式(IX)吲哚
b.使式(IX)吲哚與其中R3如在式(I)中定義的式(X)胺反應 R3NH2 (X) 得到式(XI)化合物
c.使式(XI)化合物還原，形成式(XII)胺
d.使式(XII)化合物與適當的R2的醛、酮、羧酸或磺酰基氯反應， 其中R2如在式(I)中定義，形成如式(IC)所示的式(I)化合物
或者作為選擇，使式(XII)化合物與亞硝酸鈉和鹵化銅反應，形成式(XIII)化合物，其中Z為鹵代，如溴代、氯代或碘代，
e.使式(XIII)化合物與其中R2和R5如在式(I)中定義的式(III)胺， NHR2R5 (III) 在催化劑，如鈀或銅衍生的催化劑的存在下反應，得到如式(ID)所示的式(I)化合物
d.和然后如果需要 i)將一種式(I)化合物轉化為另一種式(I)化合物； ii)去除任何保護基團； iii)形成式(IC)或(ID)化合物的藥學上可接受的鹽。
應該理解，在上文和下文提及的一些反應中，保護化合物中的任何敏感性基團是需要/想要的。需要或想要的保護的例子以及適合的保護方法為那些本領域技術人員所知。可依據標準操作方法應用常規保護基團(為了闡述參見T.W.Green和P.G.M.Wuts，ProtectiveGroups in Organic Synthesis，第3版，John Wiley和Sons，1999)。從而，如果反應劑中包含基團諸如氨基、羧基或羥基，則在本文提及的一些反應中該基團值得保護。
用于氨基或烷基氨基的適合的保護基團是，例如，酰基，例如烷酰基諸如乙酰基，烷氧基羰基，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基或叔-丁氧基羰基，芳基甲氧基羰基，例如芐氧基羰基，或芳酰基，例如苯甲酰基。以上保護基團的去保護條件將必要地因保護基團的選擇不同而異。這樣，例如，酰基諸如烷酰基或烷氧基羰基或芳酰基，可例如，通過用適合的堿諸如堿金屬氫氧化物，例如氫氧化鋰或氫氧化鋰鈉水解去除。或者，酰基諸如叔-丁氧基羰基，可例如，通過用適合的酸如鹽酸、硫酸或磷酸或三氟乙酸處理去除，和芳基甲氧基羰基諸如芐氧基羰基可例如，通過在催化劑諸如披鈀碳上氫化或用Lewis酸例如三(三氟乙酸)硼(boron tris(trifluoroacetate))處理去除。用于伯氨基的適合的備選保護基團是，例如，可用烷基胺，例如二甲基氨基丙基胺或用肼處理去除的鄰苯二甲酰基。
用于羥基的適合的保護基團是，例如酰基，例如烷酰基諸如乙酰基，芳酰基，例如苯甲酰基，或芳基甲基，例如芐基。以上保護基團的去保護條件將必要地因保護基團的選擇不同而異。從而，例如，酰基諸如烷酰基或芳酰基，可例如，通過用適合的堿諸如堿金屬氫氧化物，例如氫氧化鋰或氫氧化鋰鈉水解去除。或者，芳基甲基諸如芐基，可例如，通過在催化劑諸如披鈀碳上氫化去除。
用于羧基適合的保護基團是，例如，酯化基團，例如可通過用堿諸如氫氧化鈉水解去除的甲基或乙基，或例如可通過用酸例如有機酸諸如三氟乙酸處理去除的叔-丁基，或例如可例如，通過在催化劑諸如披鈀碳上氫化去除的芐基。
保護基團可在合成中的任何便利的階段，通過采用化學領域所熟悉的常規技術去除。
在另外的實施方案中，本發明涉及前述在制備用作依據式(I)化合物的中間體的式(IV)、(IV’)、(VI)、(VI’)、(IX)、(XI)、(XII)和(XIII)化合物。


其中R1、R2、R3和R5如在式(I)中定義和Z為鹵代，如溴代、氯代和碘代。
在再一個實施方案中，本發明涉及如式(IA)、(IB)、(IC)和(ID)所示的式(I)化合物及其藥學上可接受的鹽
其中變量基團如在式(I)中定義。
依據本發明的再一方面，提供包含式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽以及至少一種藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的藥用組合物。
本發明的另一方面，提供如用作藥物的前文定義的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。
在另一個實施方案中，本發明提供式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽在制備藥物中的應用。
在另一個實施方案中，本發明提供式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于治療或預防癌癥的藥物中的應用。
在另一個實施方案中，本發明提供式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于治療或預防腫瘤性疾病的藥物中的應用，所述腫瘤性疾病有諸如乳腺癌、卵巢癌、肺癌(包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌和支氣管肺泡性癌癥)、結腸癌、直腸癌、前列腺癌、膽道癌、骨癌、膀胱癌、頭頸部癌、腎癌、肝癌、胃腸組織癌、食管癌、胰腺癌、皮膚癌、睪丸癌、甲狀腺癌、子宮癌、宮頸癌、陰道癌或其它組織的癌癥，以及白血病和淋巴瘤包括CLL和CML，中樞和外周神經系統的腫瘤和其它腫瘤類型諸如黑色素瘤、多發性骨髓瘤、纖維肉瘤和骨肉瘤和惡性腦腫瘤。
在再一個實施方案中，本發明提供式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于治療或預防包括自身免疫性疾病、炎癥、神經性疾病和心血管疾病的增殖性疾病的藥物中的應用。
在另一個實施方案中，本發明提供式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于抑制CHK1激酶活性的藥物中的應用。
在另一個實施方案中，本發明提供式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于抑制Pak激酶活性，例如抑制Pak1、Pak2或Pak4激酶活性的藥物中的應用。
在另一個實施方案中，本發明提供式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于抑制PDK1激酶活性的藥物中的應用。
在另一個實施方案中，本發明提供式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于限制細胞增殖的藥物中的應用。
在另一個實施方案中，本發明提供式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于限制腫瘤發生的藥物中的應用。
在本發明的另一個方面，提供如前文定義的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽，其用于通過療法治療人或動物體的方法中。
在另一個實施方案中，本發明提供式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽，其用于治療或預防與癌癥相關的疾患。
在另一個實施方案中，本發明提供式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽，其用于治療或預防腫瘤性疾病，所述腫瘤性疾病有例如乳腺癌、卵巢癌、肺癌(包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌和支氣管肺泡性癌癥)、結腸癌、直腸癌、前列腺癌、膽道癌、骨癌、膀胱癌、頭頸部癌、腎癌、肝癌、胃腸組織癌、食管癌、胰腺癌、皮膚癌、睪丸癌、甲狀腺癌、子宮癌、宮頸癌、陰道癌或其它組織的癌癥，以及白血病和淋巴瘤包括CLL和CML，中樞和外周神經系統的腫瘤和其它腫瘤類型諸如黑色素瘤、多發性骨髓瘤、纖維肉瘤和骨肉瘤和惡性腦腫瘤。
在另一個實施方案中，本發明提供式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽，其用于治療或預防包括自身免疫性疾病、炎癥、神經性疾病和心血管疾病的增殖性疾病。
在本發明的再一方面，提供包含如前文定義的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽及藥學上可接受的稀釋劑或載體的藥用組合物，該組合物用于在溫血動物諸如人中產生CHK1激酶抑制作用。
在本發明的再一方面，提供包含如前文定義的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽及藥學上可接受的稀釋劑或載體的藥用組合物，該組合物用于在溫血動物諸如人中產生Pak激酶抑制作用(例如Pak1、Pak2或Pak4激酶抑制作用)。
在本發明的再一方面，提供包含如前文定義的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽及藥學上可接受的稀釋劑或載體的藥用組合物，該組合物用于在溫血動物諸如人中產生PDK1激酶抑制作用。
在本發明的再一方面，提供包含如前文定義的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽及藥學上可接受的稀釋劑或載體的藥用組合物，該組合物用于在溫血動物諸如人中產生抗癌作用。
在本發明的再一方面，其提供包含如前文定義的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽及藥學上可接受的稀釋劑或載體的藥用組合物，該組合物用于在溫血動物諸如人中治療或預防包括自身免疫性疾病、炎癥、神經性疾病和心血管疾病的增殖性疾病。
在另一個實施方案中，本發明提供在人或動物中限制細胞增殖的方法，所述方法包括給予所述人或動物有效治療量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。
在另一個實施方案中，本發明提供在人或動物中限制腫瘤發生的方法，所述方法包括給予所述人或動物有效治療量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。
在再一個實施方案中，本發明提供抑制CHK1激酶的方法，所述方法包括給予需要所述抑制的動物或人有效治療量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。
在再一個實施方案中，本發明提供抑制Pak激酶(例如Pak1、Pak2或Pak4激酶)抑制作用的方法，所述方法包括給予需要所述抑制的動物或人有效治療量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。
在再一個實施方案中，本發明提供抑制PDK1激酶的方法，所述方法包括給予需要所述抑制的動物或人有效治療量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。
在另一個實施方案中，本發明提供治療罹患癌癥的人或動物的方法，所述方法包括給予所述人或動物有效治療量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。
在進一步的實施方案中，本發明提供預防性治療癌癥的方法，所述方法包括給予需要這樣的治療的人或動物有效治療量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。
在另一個實施方案中，本發明提供治療罹患腫瘤性疾病的人或動物的方法，所述腫瘤性疾病有例如乳腺癌、卵巢癌、肺癌(包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌和支氣管肺泡性癌癥)、結腸癌、直腸癌、前列腺癌、膽道癌、骨癌、膀胱癌、頭頸部癌、腎癌、肝癌、胃腸組織癌、食管癌、胰腺癌、皮膚癌、睪丸癌、甲狀腺癌、子宮癌、宮頸癌、陰道癌或其它組織的癌癥，以及白血病和淋巴瘤包括CLL和CML，中樞和外周神經系統的腫瘤和其它腫瘤類型諸如黑色素瘤、多發性骨髓瘤、纖維肉瘤和骨肉瘤和惡性腦腫瘤。
在另一個實施方案中，本發明提供治療罹患增殖性疾病諸如自身免疫性疾病、炎癥、神經性疾病和心血管疾病的人或動物的方法，所述方法包括給予所述人或動物有效治療量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。
本發明的一個實施方案提供通過給予人或動物式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽和抗腫瘤藥的治療癌癥的方法。
本發明的一個實施方案提供通過給予人或動物式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽和DNA損傷劑的治療癌癥的方法。
本發明的一個實施方案提供治療與癌癥相關的感染的方法，所述方法包括給予需要這樣的治療的人或動物有效治療量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。
本發明再一實施方案提供用于預防性治療與癌癥相關的感染的方法，所述方法包括給予需要這樣的治療的人或動物有效治療量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。
如在本文所用的，詞組“保護基團”意指保護潛在地反應性官能團不受不需要的化學轉化的暫時的取代基。這樣的保護基團的實例包括羧酸的酯類、醇的甲硅烷基醚和分別為醛和酮的縮醛和縮酮。保護基團化學領域已有綜述(Greene，T.W；Wuts，P.G.M.ProtectiveGroups in Organic Synthesis，第3版；WileyNew York，1999)。
如在本文所用的，“藥學上可接受的”用在本文指的是在可靠的醫學判斷范圍之內、適合于用在與人和動物組織接觸而沒有過多毒性、刺激性、過敏反應或其它問題或并發癥的、具有與合理的收益/風險比率相當的那些化合物、原料、組合物和/或劑型。
如在本文所用的，“藥學上可接受的鹽”指公開的化合物的衍生物，其中母體化合物通過形成酸鹽或堿鹽而被修飾。藥學上可接受的鹽的實例包括，但不限于堿性殘基諸如胺的礦物鹽或有機酸鹽；酸性殘基諸如羧酸的堿性鹽或有機鹽等。藥學上可接受的鹽包括例如，由無毒無機酸或有機酸形成的母體化合物的常規的無毒性鹽或季銨鹽。例如，這樣的常規的無毒性鹽包括那些衍生自無機酸諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等；和自有機酸諸如乙酸、丙酸、丁二酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、順丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、棕櫚酸、順丁烯二酸、羥基順丁烯二酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水楊酸、對氨基苯磺酸、2-乙氧基苯甲酸、反丁烯二酸、甲苯磺酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、草酸、羥乙磺酸等的鹽。
可從含堿性或酸性部分的母體化合物，通過常規的化學方法合成本發明的藥學上可接受的鹽。一般地，通過使這些化合物的游離酸或堿形式與按化學當量計算的量的適當的堿或酸在水中的或在有機溶劑中的或在水和有機溶劑的混合物中反應，可制備這樣的鹽；一般地，非水溶媒如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈是優選的。適合的鹽的名單在Remington′s Pharmaceutical Sciences，第17版，Mack出版公司，Easton，Pa.，1985，第1418頁中可找到，其公開內容通過引用結合于本文。
“穩定的化合物”和“穩定的結構”意指化合物足夠穩固以從反應混合物分離出有用的純度和制備成有效的治療劑。
本文定義的抗癌癥治療可應用作為單獨的療法或除了本發明化合物外，可包括常規的手術和/或放射療法和/或化療。這樣的化療可包括一個或多個下列種類的抗腫瘤藥 (i)抗增殖劑/抗腫瘤藥物及其組合，如在醫學腫瘤學中所用的，諸如烷化劑或鉑劑(例如順鉑、卡鉑、奧沙利鉑、環磷酰胺、氮芥、美法侖、苯丁酸氮芥、白消安和亞硝基脲)；抗代謝劑(例如吉西他濱和氟達拉濱，以及抗葉酸劑諸如氟代嘧啶類如5-氟尿嘧啶和替加氟、雷替曲塞、甲氨蝶呤、阿糖胞苷和羥基脲)；抗腫瘤抗生素(例如蒽環類藥如阿霉素、博來霉素、多柔比星、柔紅比星、表柔比星、伊達柔比星、絲裂霉素-C、放線菌素D和光神霉素)；抗有絲分裂劑(例如長春花生物堿如長春新堿、長春堿、長春地辛和長春瑞濱和紫杉類藥物如紫杉醇和泰索帝)；和拓撲異構酶抑制劑(例如表鬼臼素類(epipodophyllotoxins)如依托泊甙和替尼泊苷、安吖啶、拓撲替康、依立替康和喜樹堿)； (ii)細胞抑制劑諸如抗雌激素劑(例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和iodoxyfene)、雌激素受體向下調節劑(例如氟維司群)、抗雄激素藥(例如比卡魯胺、氟他胺、尼魯米特和乙酸環丙孕酮)、LHRH拮抗劑或LHRH激動劑(例如戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)、孕激素類(例如乙酸甲地孕酮)、芳香酶抑制劑(例如象阿那曲唑、來曲唑、vorazole和依西美坦)和5α-還原酶抑制劑諸如非那雄胺； (iii)抑制癌癥細胞侵襲的藥物(例如金屬蛋白酶抑制劑如馬立馬司他和尿激酶型血纖維蛋白溶酶原激活劑受體功能抑制劑)； (iv)生長因子功能抑制劑，例如這樣的抑制劑包括生長因子抗體、生長因子受體抗體(例如抗erbb2抗體曲妥珠單抗[HerceptinTM]和抗erbb1抗體西妥昔單抗[C225])、法尼基轉移酶抑制劑、酪氨酸激酶抑制劑和絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑，例如表皮生長因子家族的抑制劑(例如EGFR家族酪氨酸激酶抑制劑諸如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-嗎啉丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼)、N-(3-乙炔基苯基)-6，7-雙(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(埃羅替尼(erlotinib)、OSI-774)和6-丙烯酰氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-嗎啉丙氧基)喹唑啉-4-胺(CI 1033))，例如血小板衍化生長因子家族抑制劑和例如肝細胞生長因子家族抑制劑； (v)抗血管新生劑諸如那些抑制血管內皮生長因子的作用的藥物，(例如抗血管內皮細胞生長因子抗體貝伐單抗(bevacizumab)[AvastinTM]，諸如那些在國際專利申請WO 97/22596、WO 97/30035、WO 97/32856和WO 98/13354中公開的化合物)和通過其它機制產生作用的化合物(例如整聯蛋白αvβ3功能抑制劑利諾胺和血管生長抑素； (vi)血管損傷劑諸如考布他汀A4和在國際專利申請WO99/02166、WO 00/40529、WO 00/41669、WO 01/92224、WO 02/04434和WO 02/08213中公開的化合物； (vii)反義治療，例如那些涉及以上所列標靶的藥物，諸如反義寡核甘酸(antiras antisense)ISIS 2503； (viii)基因療法手段，包括例如置換異常基因諸如異常的p53或異常的BRCA1或BRCA2的手段、GDEPT(基因導向的酶前體-藥物療法)手段諸如那些使用胞嘧啶脫氨酶、胸腺嘧啶核苷激酶或細菌硝基還原酶和使患者對化療或放療耐受增強的手段諸如多重-藥物抗性基因療法；和 (ix)免疫療法手段，包括例如增強患者腫瘤細胞免疫原性的的體外和體內手段，諸如轉染細胞因子諸如白介素2、白介素4或粒細胞巨噬細胞集落刺激因子，使T-細胞無能減低的手段，使用轉染的免疫細胞諸如細胞因子轉染的樹突細胞的手段，使用細胞因子轉染的腫瘤細胞系的手段和使用抗獨特型抗體的手段。
這樣的聯合治療可通過同時、序貫或分開給予療法的單個成分達成。這樣的聯合產物使用其中本文之前描述的劑量范圍的本發明化合物和在其批準的劑量范圍內的其它藥物活性劑。
可通過口服、腸胃外、口含服、陰道內、直腸、吸入、吹入、舌下、肌肉內、皮下、局部、鼻內、腹膜內、胸膜內、靜脈內、硬腦膜外、鞘內、腦血管內和通過注射入關節內給予本發明化合物。
當決定最適于具體患者的單個治療方案和劑量水平時，劑量將取決于給藥途徑、疾病的嚴重程度、患者的年齡和體重以及由主治醫師通常考慮的其它因素。
用于治療感染的本發明化合物的有效量，是足以達成以下作用的量，即在溫血動物中特別是在人中癥狀性緩解感染癥狀、減緩感染的進展或降低患有感染癥狀的患者進一步惡化的風險。
為了從本發明化合物制備藥用組合物，惰性的、藥學上可接受的載體可或者為固體或者為液體。固體形式的制劑包括粉劑、片劑、可分散的顆粒劑、膠囊劑、扁膠劑和栓劑。
固體載體可為一個或多個物質，其也可作為稀釋劑、矯味劑、增溶劑、滑潤劑、助懸劑、粘合劑或片劑崩解劑；其也可為包囊材料。
在粉劑中，載體為經細粉碎的固體，其與經細粉碎的活性成分相混合。在片劑中，活性成分與具有必需的粘合特性的載體以適合的比例相混合，并被壓制成所需的形狀和大小。
為了制備栓劑組合物，首先使低熔點蠟諸如脂肪酸甘油酯和可可油的混合物熔化和通過例如，攪拌將活性成分分散其中。然后將熔化的均相混合物傾入方便(使用)的大小的模具中并任其冷卻和固化。
適合的載體包括碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑石粉、乳糖、糖粉、果膠、糊精、淀粉、黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、低熔點的蠟、可可油等。
一些本發明化合物可與各種無機和有機酸和堿形成鹽，并且這樣的鹽也在本發明范圍之內。這樣的酸加成鹽的實例包括乙酸鹽、己二酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、膽堿、檸檬酸鹽、環己基氨基磺酸鹽、二乙二胺、乙烷磺酸鹽、反丁烯二酸鹽、谷氨酸鹽、乙醇酸鹽、半硫酸鹽、2-羥基乙基磺酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、羥基順丁烯二酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、甲烷磺酸鹽、葡甲胺、2-萘磺酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、過硫酸鹽、苯乙酸鹽、磷酸鹽、二磷酸鹽、苦味酸鹽、三甲基乙酸鹽、丙酸鹽、奎尼酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、氨基磺酸鹽、磺胺酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽(對-甲苯磺酸鹽)、三氟乙酸鹽和十一烷酸鹽。堿鹽包括銨鹽、堿金屬鹽諸如鈉鹽、鋰鹽和鉀鹽、堿土金屬鹽諸如鋁鹽、鈣鹽和鎂鹽、與有機堿所成的鹽諸如二環己基胺鹽、N-甲基-D-葡糖胺形成的鹽和與氨基酸諸如精氨酸、賴氨酸、鳥氨酸形成的鹽等。同樣，可用以下試劑使含堿性氮的基團季銨化低級烷基鹵化物，諸如甲基、乙基、丙基和丁基的鹵化物；二烷基硫酸鹽如二甲基、二乙基、二丁基；二戊基的硫酸鹽；長鏈(烷基)鹵化物諸如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基鹵化物；芳基烷基鹵化物如芐基溴化物及其它。盡管諸如在分離或純化產物時，其它鹽也是有用的，但優選無毒的、生理學是可接受的鹽。
可用常規方法形成鹽，所述方法為例如通過使游離堿形式的產物與一個或多個當量的適當的酸，在鹽不溶解的溶劑或溶媒中，或在溶劑諸如水中反應，所述溶劑在真空中去除，或通過冷凍干燥去除或通過在適合的離子交換樹脂上用另一個陰離子交換存在于鹽中的陰離子而去除。
為了使式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽應用于治療性治療(包括預防性治療)哺乳動物包括人，通常依據標準制藥規范將其配制成藥用組合物。
除了本發明化合物外，本發明藥用組合物還可包含一個或多個在治療本文涉及的一種或多種疾病病癥上有價值的藥物，或與所述藥物共同給予(同時或序貫)。
術語組合物意欲包含活性成分或藥學上可接受的鹽與藥學上可接受的載體的制劑。例如可通過本領域已知方法將本發明配制成以下形式，例如，片劑、膠囊劑、水性或油性溶液劑、懸浮劑、乳劑、乳膏劑、油膏劑、凝膠劑、鼻噴霧劑、栓劑、細微粉碎的粉劑或用于吸入的氣霧劑或噴霧劑和胃腸外應用的(包括靜脈內、肌肉內或輸注)滅菌水性或油性溶液劑或懸浮劑或滅菌乳劑。
液體形式的組合物包括溶液劑、懸浮劑和乳劑。活性化合物的滅菌水或水-丙二醇溶液可被提及作為適合于胃腸外給藥的液體制劑的實例。還可將液體組合物配制成于聚乙二醇水溶液中的溶液劑。通過將活性成分溶解于水中并在需要時添加適合的著色劑、矯味劑、穩定劑和增稠劑，可制備用于口服給藥的水溶液劑。通過將細微粉碎的活性成分分散于水中同時加入粘性材料諸如天然合成樹膠、樹脂、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和其它藥學制劑領域已知的助懸劑，可制備用于口服的水性懸浮劑。
藥用組合物可以單位劑型形式存在。在這樣的形式中，組合物被分成含適當量的活性成分的單位劑量。單位劑型可為包裝好的制劑，包裝含不連續的量的制劑，例如，包裝的片劑、膠囊劑和裝在小瓶或安瓿中的粉劑。單位劑型還可為膠囊劑、扁膠劑或片劑本身，或者其可為適當的數量的任何這些包裝的形式。
式(I)化合物已經顯示在體外抑制檢查點激酶活性。檢查點激酶的抑制劑已經顯示使細胞不適當地演進成有絲分裂中期，導致受影響的細胞凋亡，并且因此，具有抗增殖作用。式(I)化合物還已經顯示在體外抑制Pak激酶和PDK1激酶活性。因此，相信式(I)化合物及其藥學上可接受的鹽可用于治療如上描述的腫瘤性疾病。另外，式(I)化合物及其藥學上可接受的鹽還預期用于治療其它增殖性疾病和如上描述的其它疾病。預期式(I)化合物將最有可能與寬泛的DNA損傷劑聯合應用，但還可作為單個藥物應用或與如上描述的另一個抗腫瘤藥物聯合應用。
總之，由一個或多個以下描述的分析法確定式(I)化合物具有為100微摩爾或更低的IC50或EC50值。例如，在以下描述的檢查點激酶1分析中，實施例5化合物的IC50值為0.016μM、實施例16化合物的IC50值為0.55μM和實施例157化合物的IC50值為0.15μM。作為更進一步的實施例，實施例10化合物在Pak 1酶分析中的IC50值為0.73μM以及在Pak 4酶分析中的IC50值為0.14μM；同樣的化合物在PDK1酶分析中的IC50值為0.35μM。實施例14化合物在Pak 1酶分析中的IC50值為0.60μM以及在Pak 4酶分析中的IC50值為0.10μM；同樣的化合物在PDK1酶分析中的IC50值為0.16μM。
檢測檢查點激酶1抑制和效應的分析 檢查點激酶1分析該體外分析檢測化合物對CHK1激酶的抑制作用。激酶域在桿狀病毒中表達并經GST標簽純化。然后將純化的蛋白質和生物素化的肽底物(Cdc25C)應用于384孔自動親近閃爍檢測法(Scintillation Proximity Assay)(SPA)中。特別地，將肽、酶和反應緩沖液混合并等分加入到含系列化合物和對照物稀釋液的384孔板中。然后加入冷的和熱的ATP啟動反應。2個小時后，加入SPA珠漿液、CsCl2和EDTA終止反應和捕獲生物素化的肽。然后在Topcount上對板計數。分析數據并測定各單個化合物的IC50。
消除(Abrogation)分析該細胞分析檢測CHK1抑制劑消除引致DNA-損傷的G2/M檢查點的能力。在細胞分析中試驗有效對抗酶(＜2μM)的化合物。簡要地說，在第1天將HT29細胞(結腸癌細胞系、p53 null)鋪陳在96孔板中。次日，用喜樹堿處理細胞2小時以引起DNA損傷。2小時后，去除喜樹堿并用試驗化合物和使細胞固定在有絲分裂階段的紡錘體毒素(spindle poison)諾考達唑(nocodazole)再處理細胞18個小時，消除檢查點。然后用甲醛固定細胞、染色以呈現有絲分裂的特有標志phosphohistone H3并用Hoechst染料標記，這樣可檢測細胞數。采用有絲分裂指數規程(Mitotic Index protocol)在Array Scan(Cellomics)上掃描板。作為消除的陽性對照，使用4mM咖啡因。在12個點測試化合物(一式三份)劑量反應關系。分析數據并測定各化合物的EC50。
檢測Pak激酶抑制作用的分析 (a)體外Pak1酶分析 該分析應用親近閃爍檢測分析(SPA)技術(Antonsson等，AnalyticalBiochemistry，1999，267294-299)測定試驗化合物抑制由重組Pak1的磷酸化的能力。全長度的Pak1蛋白質在大腸桿菌(E.coli)中表達為GST融合和采用標準純化技術應用GST標簽純化。
將試驗化合物制備為10mM在DMSO中的貯備液并在需要時在水中稀釋得到序列終分析濃度。將每一化合物稀釋液的等分試樣(5μl)鋪陳在矩陣(Matrix)384-孔平底白色聚苯乙烯板(目錄號4316)的每個孔中。將20μl的重組純化Pak1酶(30nM)、3μM生物素化的肽底物(生物素-Ahx-Lys-Lys-Glu-Gln-Ser-Lys-Arg-Ser-Thr-Met-Val-Gly-Thr-Pro-Tyr-Trp-Met-Ala-Pro-Glu-NH2；Bachem UK Ltd)、三磷酸腺苷(ATP；3μM)、33P-標記的三磷酸腺苷(33P-ATP；33 nCi/孔)和緩沖溶液[包含Tris-HCl pH 7.5緩沖液(50mM)、EGTA(0.1mM)、小牛血清白蛋白(0.1mg/ml)、二硫蘇糖醇(DTT；5mM)和乙酸鎂(10mM)]的混合物于室溫孵育120分鐘。
通過使用5％DMSO替代試驗化合物，建立相應于最大酶活性而產生最大信號的對照孔。通過加入在5％DMSO中的EDTA(62.5mM)替代試驗化合物，建立相應于全部抑制酶而產生最小信號的對照孔。這些分析溶液也在室溫下孵育120分鐘。
通過加入30μl的鏈霉親和素包被的PVT SPA珠漿液(AmershamBiosciences，目錄號RPQ0205；250μg/孔)于含0.05％疊氮化鈉的50mM Tris-HCl pH7.5緩沖液中的混合物，隨后加入30μl的2.83M氯化銫(最終分析濃度為1M)，使每一反應終止并捕獲生物素化的肽。然后將板在工作臺放置2個小時，然后在Topcount上計數。
由于Pak1介導的磷酸化，原位形成放射標記的磷酸化的生物素化的肽。SPA珠含可被刺激發射光的閃爍劑。該刺激僅在放射標記的磷酸化的肽與包被在SPA珠上的鏈霉親和素表面結合引起可在閃爍計數儀上檢測的藍光發射時發生。因此，Pak1激酶活性的存在產生分析信號。在Pak1激酶抑制劑的存在下，信號強度減弱。
對于給定的試驗化合物的Pak1酶抑制用IC50值表示。
(b)體外Pak2酶分析 該分析應用親近閃爍檢測分析(SPA)技術(Antonsson等，AnalyticalBiochemistry，1999，267294-299)測定試驗化合物抑制由重組Pak2的磷酸化的能力。N-末端和C-末端His6標記的全長度的Pak2蛋白質在大腸桿菌(E.coli)中表達和采用Ni2+/NTA-瓊脂糖純化。
將試驗化合物制備為10 mM的DMSO的貯備液并在需要時在水中稀釋得到序列終分析濃度。將每一化合物稀釋液的等分試樣(5μl)鋪陳在矩陣(Matrix)384-孔平底白色聚苯乙烯板(目錄號4316)的每個孔中。將20μl的重組純化Pak2酶(15ng)、1μM生物素化的肽底物(生物素-Ahx-Lys-Lys-Glu-Gln-Ser-Lys-Arg-Ser-Thr-Met-Val-Gly-Thr-Pro-Tyr-Trp-Met-Ala-Pro-Glu-NH2；Bachem UK Ltd)、三磷酸腺苷(ATP；2μM)、33P-標記的三磷酸腺苷(33P-ATP；33 nCi/孔)和緩沖溶液[包含Tris-HCl pH 7.5緩沖液(50mM)、EGTA(0.1mM)、小牛血清白蛋白(0.1mg/ml)、二硫蘇糖醇(DTT；5mM)和乙酸鎂(10mM)]的混合物于室溫孵育120分鐘。
通過使用5％DMSO替代試驗化合物，建立相應于最大酶活性而產生最大信號的對照孔。通過加入在5％DMSO中的EDTA(62.5mM)替代試驗化合物，建立相應于全部抑制酶而產生最小信號的對照孔。這些分析溶液也在室溫下孵育120分鐘。
通過加入30μl的鏈霉親和素包被的PVT SPA珠漿液(AmershamBiosciences，目錄號RPQ0205；250μg/孔)于含0.05％疊氮化鈉的50mM Tris-HCl pH7.5緩沖液中的混合物，隨后加入30μl的2.83M氯化銫(最終分析濃度為1M)，使每一反應終止并捕獲生物素化的肽。然后將板在工作臺放置2個小時，然后在Topcount上計數。
作為Pak2介導的磷酸化的結果，原位形成放射標記的磷酸化的生物素化的肽。SPA珠含可被刺激發射光的閃爍劑。該刺激僅在放射標記的磷酸化的肽與包被在SPA珠上的鏈霉親和素表面結合引起可在閃爍計數儀上檢測的藍光發射時發生。因此，Pak2激酶活性的存在產生分析信號。在Pak2激酶抑制劑的存在下，信號強度減弱。對于給定的試驗化合物的Pak2酶抑制用IC50值表示。
(c)體外Pak4酶分析 該分析應用親近閃爍檢測分析(SPA)技術(Antonsson等，AnalyticalBiochemistry，1999，267294-299)測定試驗化合物抑制由重組Pak4的磷酸化的能力。Pak4的激酶域(氨基酸291-591)在大腸桿菌(E.coli)中表達為GST融合和采用標準純化技術應用GST標簽純化。
將試驗化合物制備為10mM的DMSO的貯備液并在需要時在水中稀釋得到序列終分析濃度。將每一化合物稀釋液的等分試樣(5μl)鋪陳在矩陣(Matrix)384-孔平底白色聚苯乙烯板(目錄號4316)的每個孔中。將20μl的重組純化Pak4酶(10nM)、1μM生物素化的肽底物(生物素-Ahx-Lys-Lys-Glu-Val-Pro-Arg-Arg-Lys-Ser-Leu-Val-Gly-Thr-Pro-Tyr-Trp-Met-Ala-Pro-Glu-NH2；Bachem UK Ltd)、三磷酸腺苷(ATP；2μM)、33P-標記的三磷酸腺苷(33P-ATP；33 nCi/孔)和緩沖溶液[包含Tris-HCl pH 7.5緩沖液(50mM)、EGTA(0.1mM)、小牛血清白蛋白(0.1mg/ml)、二硫蘇糖醇(DTT；5mM)和乙酸鎂(10mM)]的混合物于室溫孵育120分鐘。
通過使用5％DMSO替代試驗化合物，建立相應于最大酶活性而產生最大信號的對照孔。通過加入在5％DMSO中的EDTA(62.5mM)替代試驗化合物，建立相應于全部抑制酶而產生最小信號的對照孔。這些分析溶液也在室溫下孵育120分鐘。
通過加入30μl的鏈霉親和素包被的PVT SPA珠漿液(AmershamBiosciences，目錄號RPQ0205；250μg/孔)于含0.05％疊氮化鈉的50mM Tris-HCl pH7.5緩沖液中的混合物，隨后加入30μl的2.83M氯化銫(最終分析濃度為1M)，使每一反應終止并捕獲生物素化的肽。然后將板在工作臺放置2個小時，然后在Topcount上計數。
由于Pak4介導的磷酸化，原位形成放射標記的磷酸化的生物素化的肽。SPA珠含可被刺激發射光的閃爍劑。該刺激僅在放射標記的磷酸化的肽與包被在SPA珠上的鏈霉親和素表面結合引起可在閃爍計數儀上檢測的藍光發射時發生。因此，Pak4激酶活性的存在產生分析信號。在Pak4激酶抑制劑的存在下，信號強度減弱。
對于給定的試驗化合物的Pak4酶抑制用IC50值表示。該化合物的具體活性范圍在10nM-20μM。
檢測PDK1激酶抑制的分析 (a)PDK1酶分析 該該分析利用阿爾法掃描(Alphascreen)技術(Ullman，EF，等Proc.Natl.Acad.Sci.USA，卷91，第5426-5430頁，1994)測定試驗化合物抑制PDK1酶活性的能力。6His標記的PDK1酶在昆蟲細胞中表達并采用NiNTA珠和常規蛋白質純化方法純化。
將試驗化合物制備為10mM的DMSO的貯備液并在需要時在水中稀釋得到序列終分析濃度。將2μl整數倍的化合物分配在GreinerBio-One低容量的384孔板(目錄號784075)中。為了活性分析，向每一孔中加入5μl的下列物質的混合物，48nM天然肽(生物素-Ahx-Ile-Lys-Asp-Gly-Ala-Thr-Met-Lys-Thr-Phe-Cys-Gly-Thr-Pro-Glu-Tyr-Leu-Ala-Pro-Glu-Val-Arg-Arg-Glu-Pro-Arg-Ile-Leu-Ser-Glu-Glu-Glu-Gln-Glu-Met-Phe-Arg-Asp-Phe-Asp-Tyr-Ile-Ala-Asp-Trp-NH2，BachemUK Ltd)和12μM三磷酸腺苷(ATP)的含Tris-HCl pH7.4(60 mM)、乙酸鎂(12mM)、EGTA(120μM)、DTT(1.2mM)和小牛血清白蛋白(0.12mg/ml)的反應緩沖液。通過加入5μl新鮮制備的含20ng/ml純化重組PDK1蛋白的反應緩沖液的溶液啟動反應，在室溫下孵育45分鐘。
通過加入5μl的含Tris-HCl pH 7.4(50mM)、小牛血清白蛋白(1mg/ml)、EDTA(90mM)、抗磷脂Akt T308抗體，R&D系統，目錄號RF8871，(200ng/ml)、阿爾法掃描鏈霉親和素供體珠，Perkin Elmer目錄號6760002B(30μg/ml)和阿爾法掃描蛋白A受體珠，Perkin Elmer目錄號6760137R(30μg/ml)的溶液，終止每一反應。然后密封諸板并于低光照條件下孵育過夜，之后在Envision讀板器(Perkin Elmer)上讀板。
也可在使用與活性分析類似的條件下人工分析檢測化合物，但不同的是在2nM磷酸化的肽[生物素-Ahx-Ile-Lys-Asp-Gly-Ala-Thr-Met-Lys-(p)Thr-Phe-Cys-Gly-Thr-Pro-Glu-Tyr-Leu-Ala-Pro-Glu-Val-Arg-Arg-Glu-Pro-Arg-Ile-Leu-Ser-Glu-Glu-Glu-Gln-Glu-Met-Phe-Arg-Asp-Phe-Asp-Tyr-Ile-Ala-Asp-Trp-NH2，Bachem UK Ltd)和18nM天然肽的存在下進行。
通過使用6％DMSO替代試驗化合物，建立相應于最大酶活性而產生最大信號的對照孔。通過加入EDTA(0.5M)建立產生最小信號的對照孔用于活性分析或通過加入1.008mM考馬斯亮藍(Coomassieblue)替代試驗化合物用于人工分析。
在活性分析中，通過使PDK1活化，形成磷酸化的生物素化的肽，隨后與抗磷脂(phospho)Akt T308抗體結合。然后通過鏈霉親和素供體珠經由其與生物素的相互作用和蛋白蛋白A受體珠經由其與抗體的相互作用捕獲該混合物。供體珠和受體珠的親近現在已能夠使單線態氧從供體珠通過在680nm的激發，轉移至受體珠，在520-620nm產生發射。在分析的線性范圍內，信號強度與PDK1酶的活性成比例。因此，PDK1活性抑制劑的存在將使在520-620nm的發射減少。
PDK1抑制劑活性以一式兩份檢測的結果報告IC50值。
(b)PDK1細胞分析 作為PI3K通路的部分，Akt是PDK的PIF口袋獨立(pocketindependent)底物并且T308在Akt1上的磷酸化提供細胞PDK1活性的直接檢測。可在分析中使用具有PI3K通路(如PTEN，PI3K)突變的細胞類型，以或者避免需要刺激或者使通路流量最大化。細胞分析利用特異性磷酸化抗體，以探測Akt1對T308的磷酸化。
將乳腺癌細胞系MDA-MB-468細胞(PTEN null)接種于96孔板(Packard View板，Perkin Elmer目錄號1450-573)中，密度為每孔90μl中104個細胞，并且于37℃、5％CO2下生長過夜。將試驗化合物制備為10mM的DMSO的貯備液并在需要時在細胞培養基中稀釋得到序列終分析濃度。然后向每個孔中加入10μl的化合物并且使細胞于37℃、5％CO2下孵育2hrs。然后向每個孔中加入20μl 10％甲醛的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)使細胞固定，于室溫下孵育20分鐘。去除培養基和固定后，用100μl PBS、0.05％聚山梨醇酯洗滌細胞，然后通過加入100μl PBS、0.5％吐溫20滲透并于室溫下孵育10分鐘。去除滲透緩沖液后，將細胞染色用于顯現磷酸化(phospho)Akt1 T308、磷酸化Akt2 T309和磷酸化Akt3 T305。
簡要地，將細胞于100μl的封閉緩沖液(PBS，0.05％吐溫20，5％BSA)中、于室溫下孵育1hr，然后于4℃下，在每孔40μl用封閉緩沖液按1/1000稀釋的抗磷酸化Akt T308抗體(Cell SignallingTechnologies，目錄號4056)溶液染色過夜。用250μl的PBS、0.05％吐溫20洗滌3次后，于室溫下將細胞用40μl含用封閉緩沖液按1/1000稀釋的羊抗兔IgG(H+L)/Alexa Fluor 488綴合物(Molecular Probes，目錄號A11008)溶液染色1hr。在用250μl的PBS、0.05％吐溫20、100μl的PBS、0.05％聚山梨醇酯洗滌3次后，加入1μM碘化丙啶并在Acumen Explorer讀板器(TTP Labtech)上讀板。
所有檢測按一式兩份進行且定量信號用于評估化合物的IC50值。采用碘化丙啶染色監測對細胞數量的作用。
合成 可用有機合成領域中技術人員熟悉的許多方法制備本發明化合物。更特別地是，可采用本文描述的反應和技術制備本發明新的化合物。應該理解，在以下描述的合成方法中，所有提議的反應條件，包括溶劑選擇、反應氣氛、反應溫度、實驗持續時間和后續處理，均選擇適于該反應的標準條件。有機合成領域中技術人員應該理解，分子中不同位置上的存在的功能團必須與試劑和所提議的反應相適應。這樣的對于不與反應條件相適應的取代基的限制，對于本領域技術人員而言將是顯而易見的，因而必須使用備選的方法。
除非另有所指，包括在本文中的實施例的起始原料或者是商業上可獲得的或者用標準方法從已知原料容易地制備。合成本發明化合物的一般方法如下從可在以下流程1-10中描述的一般合成方法合成式(I)化合物。用于合成噻吩并吡啶式(I)化合物的一般方法在流程1中描述。用Knovenagel類型方法使由芳基取代的腈可與乙醛酸縮合得到不飽和羧酸酯。產生酰氯后與疊氮化鈉反應得到酰疊氮。酰疊氮經Curtius重排，隨后采用非常高的溫度進行噻吩環的親電子環化，得到噻吩并吡啶酮。然后通過選擇與N-溴-或碘代-琥珀酰亞胺反應，可選擇性地使噻吩環的5-位溴化或碘化。使用氧氯化磷脫水和芳構化得到氯代吡啶中間體，其可通過使胺與碳酸鉀在NMP中反應經歷親核置換。或者，氯代吡啶中間體可與氧或硫親核試劑反應得到相應的芳基醚或硫化物(流程2)。在Pd-介導的Suzuki反應中，可使得到的溴代-或碘代-噻吩并吡啶與硼酸或酯在標準偶聯條件下反應。通過用濃鹽酸或PPA使腈部分水解，可最終產生所需的噻吩并吡啶甲酰胺。在流程3中顯示的修改的合成允許在Suzuki偶聯之前水解。

流程1
流程3 流程1-3中的溴代、氯代或碘代-噻吩并吡啶也可用于其它Pd-介導的偶聯反應中，例如與芳基錫烷的Stille偶聯(流程4)、與炔類的Sonogashiri偶聯(流程5)和Buchwald胺化(流程6)，形成式(I)化合物。

流程4
流程5
流程6 采用在流程7概述的備選的合成途徑，可產生式(I)的其它雜環化合物。雜芳基醛可與丙二酸經歷羥醛(Aldol)類型縮合，得到不飽和羧酸。類似于流程1，產生酰氯后，形成酰疊氮和經由Curtius異氰酸鹽中間體環化，提供雜環5-6環稠合的吡啶。吡啶環溴化后用氰化銅置換，提供腈吡啶。如前使氧氯化磷和胺置換反應，提供腈前體。然后通過水解腈為所需的甲酰胺，形成目標式(I)化合物。

流程7 按照在流程8中概述的步驟，可合成取代的酰胺是必需的式(I)化合物。從以上流程1-7中任一項中產生的氨基腈，可通過交替使用6 N鹽酸水溶液替代濃酸而被完全水解為羧酸。然后可采用任何標準形成酰胺的方法諸如與混合的酸的酸酐反應使酸與胺偶聯，或使用酰胺偶聯劑/脫水劑諸如，但不限于1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDCI)、O-(1H-苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟代磷酸鹽(HBTU)或苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)六氟代磷酸鹽(BOP)。

流程8 使用在流程9和10中描述的合成轉化，可合成式(I)的非吡啶基化合物。流程9中顯示，回流下使用MeOH和無水鹽酸可使3-硝基鄰氨基苯甲酸鹽(anthranilate)衍生物酯化。然后可使氨基酯經歷采用在DMSO中的叔-丁氧化鉀的一釜法(one-pot)轉化，其包括通過與芳基酮反應產生烯胺、去質子化作用、在激活硝基的鄰位的親核芳族取代，隨后氧化成吲哚中間體。通過與氯甲酸酯形成混合酸酐，隨后與胺反應，可將該步驟的羧酸產物轉化為酰胺。使硝基氫化得到苯胺衍生物，其可通過與酮或醛進行還原性胺化轉化為式(I)吲哚化合物。或者，通過重氮化方法，可使苯胺轉化為鹵化物衍生物，然后通過Pd或Cu介導的用胺或醇的置換轉化為式(I)化合物。

流程9 合成式(I)的非吡啶基化合物的另一條途徑在流程10中概述。用胺、醇或硫醇進行氟的親核芳族取代，隨后產生苯胺，隨后用強酸進行縮醛的分子內親電子芳族取代，可得到不同的5-6稠環系統。使用之前在流程1-9中描述的轉化，可將得到的苯胺精制為非吡啶基化合物諸如式(I)的苯并噻吩或苯并呋喃。

流程10 實施例 本發明將在此引用下列說明性的實施例進一步描述，除非另有所指 (i) 給出的溫度以攝氏度(℃)計；除非另有所指，于室溫下或環境溫度下進行操作即是指在18-25℃范圍內進行； (ii) 溶液經無水硫酸鈉或硫酸鎂干燥；有機溶劑的蒸發在減壓下(4.5-30mmHg)、于最高至60℃的浴溫下使用旋轉蒸發器進行； (iii) 層析意指快速硅膠層析；薄層層析(TLC)在硅膠板上進行； (iv) 一般地，反應過程之后進行TLC或液相層析/質譜(LC/MS)和所給出的反應時間僅作說明用； (v) 終產物具有令人滿意的質子核磁共振(NMR)頻譜和/或質譜數據； (vi) 給出的得率僅作說明用且不必需通過復雜的方法開發可得到的那些得率；如果需要更多原料，可重復制備； (vii) 當給出核磁共振(NMR)數據時，其以德耳塔(δ)值的形式表示主要的診斷性質子，除非另有所指，以相對于四甲基硅烷(TMS)給出的每百萬(ppm)分之幾作為內標，在d6-DMSO的300MHz測定； (viii)化學符號具有其通常含義； (ix) 溶劑比率以體積∶體積(v/v)術語給出； (x) 羅謝爾鹽(Rochelle’s Salt)為酒石酸鈉鉀； (xi) Hunig’s堿為二異丙基乙基胺(DIEA)； (xii) 使用以下一種或更多種方法進行化合物的純化 a)常規硅膠上的快速層析； b)使用MPLC分離系統的硅膠快速層析預裝填的正相快速柱筒，流速，30-40ml/min； c)使用反相C18柱，100×20mm，5μM(或更大)并用水(0.1％TFA)和MeCN(0.1％TFA)組合作為流動相洗脫的制備型HPLC系統； d)使用手性柱，如Diacel柱(AD、OD、AS和/或OJ固定相)，250×20mm，10μM(或更大)和用己烷、異丙醇、EtOH和/或MeOH(含0.1％二異丙基乙胺)的組合作為流動相洗脫的手性制備型HPLC系統；和 (xiii)使用以下縮寫 CIV 真空下濃縮； RT和rt 室溫； BOC 叔-丁氧基羰基； BOP 苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)六氟磷酸鹽； Bu3N 三丁胺； CBZ 芐氧基羰基； DMF N，N-二甲基甲酰胺； DMSO 二甲亞砜； NMP N-甲基-2-吡咯烷酮； EtOAc乙酸乙酯； ether乙醚； EtOH 乙醇； THF 四氫呋喃； MeOH甲醇； MeCN乙腈； PPA 多聚磷酸； TFA 三氟乙酸；和 TEA 三乙胺。
在以下實施例中制備的大多數化合物基于用于制備化合物的方法被分離成鹽酸鹽并為NMR數據所證明，此對于本領域技術人員而言將是顯而易見的。
實施例1 2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 步驟1 (2Z)-3-氰基-3-(2-噻吩基)丙烯酸。向攪拌的2-噻吩基乙腈(24.8g，0.20mol)的MeOH(300mL)溶液中加入乙醛酸一水合物(18.5g，0.20mol)和碳酸鉀(25.5g，0.20mol)。將反應漿液置于氮氣氛下并加熱至回流。2h后使反應混合物冷卻至rt，經過濾得到產物。用大量的MeOH洗滌濾餅，然后在真空烘箱中干燥過夜，得到43.1g(99％)白色結晶的鉀鹽的標題化合物。1H NMR δ7.95(d，3H)，7.75(d，1H)，7.30(dd，1H)，7.05(s，1H)，3.0-4.0(br s，1H)。LCMS(ES，M+H＝180，M-H＝178)。
步驟2 (2Z)-3-氰基-3-(2-噻吩基)丙烯酰氯。向攪拌的草酰氯(2.6mL，30mmol)于10mL的CH2Cl2溶液中加入溶解于20mL的CH2Cl2的(2Z)-3-氰基-3-(2-噻吩基)丙烯酸鉀鹽(2.2g，12.3mmol)溶液中。加入額外量的CH2Cl2直至粘性非均質性的反應混合物可輕易攪拌。反應于rt下攪拌約1h。經過濾去除固體并用大量的CH2Cl2洗滌。將濾液和ishes合并，真空下濃縮得到用于下一步的2.0g標題化合物。
步驟3 (2Z)-3-氰基-3-(2-噻吩基)丙烯酰疊氮化物。于0℃，向快速攪拌的于50∶50二氧六環/水(20mL)中的疊氮化鈉(2.0g，30mmol)的懸浮液中，加入溶解于10mL的二氧六環的(2Z)-3-氰基-3-(2-噻吩基)丙烯酰氯(2.0g，12.3mmol)溶液。于0℃攪拌反應物30分鐘，然后再攪拌1-2h后使其達到rt。然后加入～100mL水至反應物中。形成的沉淀物經過濾，用水洗滌，在真空烘箱中干燥過夜，得到無須進一步純化即用于下一步的白色固體(2.0g)的標題疊氮化物。
步驟4 4-氧代-4，5-二氫噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。于氮氣流下，將二苯醚(260mL)和Bu3N(53mL)的混合物加熱至210℃。在2h內(劇烈產生N2氣)，逐滴加入(2Z)-3-氰基-3-(2-噻吩基)丙烯酰疊氮化物(15.0g，73.5mmol)于CH2Cl2(30mL)中的漿液。完成加入后，于210℃再攪拌反應物10min，然后使反應冷卻至rt，然后置于冰浴中。加入己烷(500mL)和抽氣下過濾沉淀物，用大量的己烷洗滌。將得到的固體在真空烘箱中干燥過夜(不加熱)得到淡棕色固體樣標題化合物(9.89g，76％)。1HNMRδ12.4(br s，1H)，8.29(d，1H)，7.82(d，1H)，7.58(d，1H)。LCMS(ES，M+H＝177，M-H＝175)。
步驟5 2-溴-4-氧代-4，5-二氫噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。將N-溴代琥珀酰亞胺(1.6g，9mmol)加入4-氧代-4，5-二氫噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(0.8 g，4.5mmol)在DMF/乙酸(20mL)以50∶50的混合物中的溶液中。將該黑色的反應混合物加熱至80℃計12h。冷卻到rt后，攪拌下將反應物加入到～100mL水中。用飽和NaHCO3調節混濁的溶液的pH至9-10。經過濾，用水洗滌，在真空烘箱中干燥得到產物(1.1g，100％)。1H NMRδ12.6(br s，1H)，8.38(d，1H)，7.77(s，1H)。LCMS(ES，M+H＝255，M-H＝253)。
步驟6 2-溴-4-氯代噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。將2-溴-4-氧代-4，5-二氫噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(1.1g，4.5mmol)溶解于POCl3(10mL)的溶液加熱至回流過夜。冷卻到rt后，真空下將反應物濃縮至干燥。緩慢和小心地將固體懸浮于～50-100mL水中。經過濾，隨后用水、飽和NaHCO3、水洗滌，在真空烘箱中干燥得到產物(1.0g，83％)。1H NMRδ9.10(s，1H)，8.20(s，1H)。LCMS(ES，M+H＝275)。
步驟7 (3S)-3-[(7-氰基-2-溴代噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。向攪拌的2-溴-4-氯代噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(0.48g，1.76mmol)和(3S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.40g，2.0mmol)于NMP(5mL)的溶液中加入碳酸鉀(0.5g，3.52mmol)。將非均質性的混合物加熱至80℃計2h，冷卻至rt，然后加至～50mL的水中。產物(880mg)經過濾分離和干燥。經使用MPLC(SiO2；30-50％EtOAc/己烷梯度)進一步純化得到0.54g，70％亮黃色結晶的固體樣標題化合物。1H NMRδ8.36(s，1H)，8.08(s，1H)，7.68(m，1H)，4.02(m，1H)，3.74(m，1H)，3.50(m，1H)，2.70-3.20(m，2H)，1.91(m，1H)，1.74(m，1H)，1.54(m，1H)，1.30-1.45(m，1H)，1.21(s，9H)。LCMS(ES，M+H＝437，439；M-H，435，437)。
步驟8 (3S)-3-{[7-氰基-2-(苯基)噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。將(3S)-3-[(7-氰基-2-溴代噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.18g.0.41mmol)、苯基硼酸(0.076g，0.62mmol)、四(三苯基膦)鈀(0)(Pd(PPh3)4)(0.10g，0.062mmol)的混合物和碳酸銫(0.41g，1.25mmol)溶解于水(1mL)和二氧六環(3mL)。將該反應混合物于80℃氮氣氛下攪拌1h，然后使其冷卻至rt。用吸液管去除水和真空下去除二氧六環。殘余物經MPLC(SiO2；30-60％EtOAc/己烷)純化得到標題化合物(140mg，78％)。1H NMRδ8.41(s，1H)，8.34(br s，1H)，7.74(s，1H)，7.73(d，2H)，7.52(dd，2H)，7.42(dd，1H)，4.12(m，1H)，3.81(m，1H)，3.60(m，1H)，2.6-3.2(m，2H)，2.01(m，1H)，1.82(m，1H)，1.62(m，1H)，1.40-1.50(m，1H)，1.24(s，9H)。LCMS(ES，M+H＝435；M-H，433)。
步驟9 2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。將(3S)-3-{[7-氰基-2-(苯基)噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(80mg，0.18mmol)溶液和12 N HCl(濃的，4mL)攪拌24小時。加入水(10-20mL)并用飽和NaHCO3調節溶液的pH至10-11。該原料經過濾分離并用少量冷水洗滌。該原料經干燥，然后經MPLC(SiO2；NH4OH/MeOH/CH2Cl2；2∶10∶88)純化得到標題化合物(24mg，38％)。1H NMRδ8.58(s，1H)，8.27(s，1H)，7.98(br s，1H)，7.79(d，2H)，7.55(dd，2H)，7.43(dd，1H)，7.34(br s，1H)，7.25(d，2H)，4.22(m，1H)，3.21(d，1H)，2.91(d，1H)，2.48(m，2H)，2.05(m，1H)，1.76(m，1H)，1.55(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝353)。
用與實施例1類似的方式，采用適當的起始原料制備實施例2-51。
實施例52 2-[1-(1，3-苯并噻唑-2-基甲基)-1H-吡唑-4-基]-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 以與實施例1類似的方式但使用2-{[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜戊環-2-基(dioxaborolan-2-yl))-1H-吡唑-1-基]甲基}-1，3-苯并噻唑(如以下描述的合成)作為在步驟8中的起始原料制備。1H NMRδ9.11(br，1H)，8.81(br，1H)，8.50(s，1H)，8.44(s，1H)，8.10(br，2H)，8.08(d，1H)，8.01(d，1H)，7.94(s，1H)，7.55-7.42(m，3H)，5.92(s，2H)，4.51(br，1H)，3.46(m，1H)，3.20(m，1H)，2.95(m，2H)，2.09-1.92(m，2H)，1.82-1.65(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝490)。
2-{[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜戊環-2-基)-1H-吡唑-1-基]甲基}-1，3-苯并噻唑。于23℃，向4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜戊環-2-基)-1H-吡唑(100mg，0.515mmol)和2-(溴代甲基)-1，3-苯并噻唑(118mg，0.515mmol)的DMF(1.7mL)的溶液中加入NaH(60％彌散于油中，23mg，0.567mmol)。將反應混合物攪拌過夜。通過加入NH4Cl猝滅反應并將產物用EtOAc提取。有機層用鹽水洗滌，經Na2SO4干燥和真空下濃縮。
用與實施例1類似的方式，采用適當的起始原料制備實施例53-57。
實施例58 4-{甲基[(3S)-哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 以與實施例1類似的方式，但使用(3S)-3-(甲基氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(如以下描述的合成)作為在步驟7中的起始原料制備。1H NMR δ9.26(br s，1H)，8.92(br s，1H)，8.59(s，1H)，8.18(br s，1H)，7.94(s，1H)，7.85(m，2H)，7.46(m，2H)，7.40(m，1H)，4.83(m，1H)，3.42(m，1H)，3.29(s，3H)，3.22(m，2H)，2.89(m，1H)，2.00-1.79(m，4H)。LCMS(ES，M+H＝367)。
(3S)-3-(甲基氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。向甲醛(37％，aq.；0.37ml 4.7mmol)于20ml含3分子篩的無水MeOH溶液中加入(3S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.0g，5mmol)。于N2、rt下攪拌反應物～30h，然后加入固體NaBH4(304mg，8mmol)。于rt下攪拌反應物過夜，然后用1N NaOH(～10ml)猝滅。分離各相并用乙醚(3x)提取剩余的水層。用水和鹽水洗滌合并的有機層，干燥和蒸發得到無色油(1.04g，100％)。LCMS(ES，M+H＝215)。
用與實施例58類似的方式，采用適當的起始原料制備實施例59-63。
實施例64 2-[2-(芐氧基)苯基]-4-{甲基[(3S)-哌啶-3-基]氨基}噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 (3S)-3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)(甲基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。于氮氣氛下，將(3S)-3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(240mg)溶解于NMP(10mL)。加入氫化鈉(63mg)并將反應放置20min。逐滴加入碘代甲烷(108μL)并將反應于rt下攪拌1個小時。一旦反應完成(LCMS 452.69 M+H)，將反應混合物傾入水(120mL)中并用EtOAc提取。有機層用水和鹽水洗滌，經MgSO4干燥，真空濃縮。殘余物經硅膠柱用30-50％EtOAc/異-己烷洗脫純化。合并產物流分并經真空濃縮得到黃色膠狀物(245mg，91％)。(3S)-3-[[7-(氨基羰基)-2-溴代噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基](甲基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。將(3S)-3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)(甲基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(245mg)溶解于叔-丁醇(10mL)，加入粉末的KOH(110mg)。將得到的反應混合物加熱至80℃計30min，LCMS確認完成反應(468.93 M+H)。反應混合物經真空濃縮和與MeOH共沸。將殘余物溶解于CH2Cl2，用水和鹽水洗滌并經MgSO4干燥，用MeOH稀釋，之后應用離子交換柱并用MeOH和MeOH/NH3先后洗脫。將產物在堿性流分中洗脫并在真空中濃縮至黃色固體(207mg)。(3S)-3-[ {7-(氨基羰基)-2-[2-(芐氧基)苯基]噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基}(甲基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯.向(3S)-3-[[7-(氨基羰基)-2-溴代噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基](甲基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(207 mg)中加入2-芐氧基苯基硼酸(151mg)、Pd(PPh3)4(51mg)和碳酸銫(432mg)。該混合物在10mL的二氧六環∶H2O(4∶1)中形成漿液，將其加熱至80℃計1h。LCMS指示反應完成(573.09 M+H)。反應混合物于真空下濃縮并再溶解于CH2Cl2，用水、鹽水洗滌和經MgSO4干燥。殘余物于40g硅膠柱上純化，并用30-100％EtOAc/己烷洗脫。合并產物流分，在真空中濃縮得到無色膠狀產物(182mg)。
2-[2-(芐氧基)苯基]-4-{甲基[(3S)-哌啶-3-基]氨基}噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。將(3S)-3-[{7-(氨基羰基)-2-[2-(芐氧基)苯基]噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基}(甲基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(182mg)溶解于MeOH 6ml中，加入1.5mL的4.0M HCl的二氧六環溶液。然后于室溫下攪拌該反應混合物3hr。LCMS指示反應完成(472.87 M+H)。反應完成后將反應混合物于30℃浴溫下、真空下小心濃縮并且將殘余物在CH2Cl2和幾滴MeOH/NH3和飽和NaHCO3之間分配。用鹽水洗滌有機物和經MgSO4干燥，干荷載于硅膠上，之后在12g硅膠柱上純化，用1-12％MeOH/NH3/CH2Cl2洗脫。合并最潔凈的產物流分和真空濃縮，得到白色固體，其經用乙醚研磨，過濾和干燥得到標題產物85mg。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ1.40-1.55(m，1H)，1.62-1.75(m，2H)，1.75-1.84(m，1H)，2.32-2.43(m，1H)，2.60-2.70(m，1H)，2.79-2.87(m，1H)，2.87-2.97(m，1H)，2.91(s，3H)，4.36-4.46(m，1H)，5.28(s，2H)，7.09(t，1H)，7.25-7.32(m，1H)，7.32-7.46(m，5H)，7.55(d，2H)，7.73(d，1H)，7.82-8.04(m，1H)，7.99(s，1H)，8.55(s，1H)。LCMS(ES，M+H＝473)。
實施例65 2-苯基-4-{(2-苯基乙基)[(3S)-哌啶-3-基]氨基}噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 以與實施例1類似的方式，但使用(3S)-3-[(2-苯基乙基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(如以下描述的合成)作為步驟7中的起始原料制備。1H NMR(加D2O)δ8.63(s，1H)，767(m，2H)，7.53(s，1H)，7.44(m，3H)，7.14-7.23(m，5H)，4.50(m，1H)，3.85(m，2H)，3.15(m，3H)，2.80(m，3H)，1.80-1.87(m，3H)，1.66(m，1H)。LCMS(ES，M+H＝457)。
(3S)-3-[(2-苯基乙基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。將(3S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g，5mmol)、(2-溴代乙基)苯(925mg，0.69ml，5mmol)和碳酸鉀(1.73g，12.5mmol)加入至微波加熱管中并加入DMF(6mL)。
將該混合物于90℃加熱1h。各相在EtOAc和水之間分配。用水和鹽水洗滌有機層，干燥和蒸發。混合物經MPLC(EtOAC/己烷)純化得到794mg(52％)的無色油樣標題化合物LCMS(ES，M+H＝305)。
以與類似于實施例65的方式，采用適當的起始原料制備實施例66-68。
實施例69 4-{[反式-2-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 以與實施例1類似的方式，但使用反式-3-氨基-2-甲基哌啶-1-羧酸芐酯(如以下描述的合成)作為步驟7中的起始原料制備。1H NMRδ9.47(m，1H)，9.04(m，1H)，8.59(m，1H)，8.45(s，1H)，8.25(m，1H)，7.71(d，2H)，7.56(m，1H)，7.45(m，2H)，7.35(m，1H)，4.34(m，1H)，3.42(m，1H)，3.22(m，1H)，2.82(m，1H)，2.07(m，1H)，1.83(m，2H)，1.59(m，1H)，1.26(d，3H)。LCMS(ES，M+H＝367)。
((1S)-1-乙酰基-4-{[(芐氧基)羰基]氨基}丁基)氨基甲酸叔丁酯。向裝配磁力攪拌棒和加料漏斗的含N5-[(芐氧基)羰基]-N2-(叔-丁氧基羰基)-L-鳥氨酸(36.6g，100mmol)的3-頸燒瓶中加入無水THF(100mL)。加料漏斗中填充了MeLi(1.6M于乙醚中；275mL；440mmol)，隨后緩慢加入(超過20分鐘)至冷卻至0℃的反應混合物中。然后將該溶液溫熱至rt。再攪拌5h后，通過將反應物傾到至攪拌的冰/水混合物上猝滅反應。用EtOAc(3×100mL)提取含水混合物。然后用鹽水洗滌合并的有機層，經Na2SO4干燥，過濾和真空下濃縮得到黃色油(6.0g，98％)。使用MPLC(SiO2；25-60％EtOAc/己烷)純化后，分離澄清油樣產物(5.2g，14％)。1H NMRδ7.35(m，5H)，7.25(m，2H)，5.00(s，2H)，3.85(m，1H)，2.98(dd，2H)，2.05(s，3H)，1.63(m，1H)，1.39(s，9H)，1.34(m，3H)。LCMS(ES，M+H＝365)。
[反式-2-甲基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯。向攪拌的((1S)-1-乙酰基-4-{[(芐氧基)羰基]氨基}丁基)氨基甲酸叔丁酯(3.9g，10.7mmol)于MeOH(200mL)的溶液中加入10％Pd/C(0.1mmol)。于大氣壓下使非均質性的混合物氫化3天(或40 psi過夜)。經硅藻土過濾后分離出澄清油樣產物和蒸發濾液，得到無需純化即用于下一步的標題化合物(2.3g；100％)。LCMS(ES，M+H＝215)。
反式-3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-2-甲基哌啶-1-羧酸芐酯。向攪拌的溶解于冷卻至0℃的CH2Cl2(40mL)的[反式-2-甲基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(2.3g，10.7mmol)和二異丙基乙基胺(2.1mL，12mmol)的溶液中，加入氯甲酸芐基酯(1.7mL，12mmol)。然后將反應混合物溫熱至rt并再攪拌1h。然后用CH2Cl2稀釋該混合物并用1N HCl和鹽水洗滌，經Na2SO4干燥，過濾和真空下濃縮，得到黃色油。經用MPLC(SiO2；10-40％EtOAc/己烷)純化后，分離出結晶的固體樣標題化合物(反式非對映異構體)(1.8g)。1H NMRδ7.34(m，5H)，6.99(d，1H)，5.04(s，2H)，4.28(dd，1H)，3.83(m，1H)，3.37(m，1H)，2.86(m，1H)，1.77(m，2H)，1.46(m，1H)，1.36(s，9H)，1.33(m，1H)，1.11(d，3H)。LCMS(ES，M+H＝349)。也分離純化的順式非對映異構體，順式-3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-2-甲基哌啶-1-羧酸芐酯(1.3g)。1H NMRδ7.35(m，5H)，6.97(d，1H)，5.07(s，2H)，4.44(m，1H)，3.80(m，1H)，3.40(m，1H)，2.78(m，1H)，1.63(m，1H)，1.49(m，2H)，1.39(s，9H)，1.36(m，1H)，0.96(d，3H)。LCMS(ES，M+H＝349)。
反式-3-氨基-2-甲基哌啶-1-羧酸芐酯。向溶解于MeOH(10mL)中的反式-3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-2-甲基哌啶-1-羧酸芐酯(1.8g，5.2mmol)溶液中加入HCl(4 N于二氧六環中；20mL)。于rt下攪拌1h后，將反應物于真空下濃縮，再溶解于MeOH中，然后真空下濃縮得到澄清結晶的固體樣標題化合物的鹽酸鹽(1.46g，1 00％)。1H NMRδ8.27(br s，3H)，7.39(m，3H)，7.35(m，1H)，7.32(m，1H)，5.09(s，2H)，4.36(dd，1H)，3.88(m，1H)，3.26(m，1H)，2.92(m，1H)，1.79(m，3H)，1.48(m，1H)，1.16(d，3H)。LCMS(ES，M+H＝249)。
實施例70 4-{[順式-2-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 以與實施例1類似的方式，但使用順式-3-氨基-2-甲基哌啶-1-羧酸芐酯(以下描述)作為步驟7中的起始原料制備。1H NMRδ9.79(m，1H)，8.95(m，2H)，8.51(s，1H)，8.15(m，1H)，7.78(d，2H)，7.49(m，3H)，7.38(m，1H)，4.73(m，1H)，3.71(m，1H)，3.28(m，1H)，3.00(m，1H)，1.95(m，2H)，1.82(m，1H)，1.69(m，1H)，1.30(d，3H)。LCMS(ES，M+H＝367)。
順式-3-氨基-2-甲基哌啶-1-羧酸芐基酯。向溶解于MeOH(10mL)的順式-3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-2-甲基哌啶-1-羧酸芐酯(1.2g，3.4mmol)的溶液中加入HCl(4N于二氧六環中；20mL)。于rt下攪拌1h后，將反應物于真空下濃縮，再溶解于MeOH中，然后真空下濃縮得到，澄清結晶的固體樣標題化合物的鹽酸鹽(0.97g，100％)。1H NMRδ8.39(br s，3H)，7.36(m，3H)，7.33(m，2H)，5.09(s，2H)，4.61(dd，1H)，3.83(m，1H)，3.26(m，1H)，2.86(m，1H)，1.72(m，3H)，1.41(m，1H)，1.10(d，3H)。LCMS(ES，M+H＝249)。
以類似的方式制備以下實施例71-74。
通過手性制備型HPLC分離實施例69，制備以下實施例75-76。
通過手性制備型HPLC分離實施例72，制備以下實施例77-78。
實施例79 4-{甲基[反式-2-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 以與實施例1類似的方式，但使用反式-2-甲基-3-(甲基氨基)哌啶-1-羧酸芐酯(如以下描述合成)作為步驟7中的起始原料制備。1H NMR δ9.57(m，1H)，8.92(m，1H)，8.61(s，1H)，8.14(br s，1H)，7.97(s，1H)，7.87(d，2H)，7.50(m，3H)，7.40(m，1H)，4.82(m，1H)，3.55(m，1H)，3.29(s，3H)，3.23(m，1H)，2.94(m，1H)，1.97(m，4H)，1.21(d，3H)。LCMS(ES，M+H＝381)。
反式-3-[(叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基]-2-甲基哌啶-1-羧酸芐酯。于N2氣氛下，向反式-3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-2-甲基哌啶-1-羧酸芐酯(0.10g，0.29mmol)于10mL無水THF的溶液中加入氫化鈉(60％于植物油中；8mg，0.32mmol)。攪拌該溶液30分鐘，然后加入碘代甲烷(0.017mL，0.287mmol)。攪拌反應物混合物2個小時，緩慢加入10mL的MeOH以猝滅反應。將內容物CIV，將殘余物溶解于30mL CH2Cl2中，用水(2x)洗滌。CIV有機層得到0.16g標題產物。1H NMRδ1.14(d，3H)1.38(s，9H)1.54(m，1H)1.68(m，3H)2.73(s，3H)3.06(m，1H)3.74(m，1H)3.84(m，1H)4.04(m，1H)5.07(s，2H)7.34(m，5H)。LCMS(ES，M+H＝363)。
芐基反式-2-甲基-3-(甲基氨基)哌啶-1-羧酸酯。向溶解于MeOH(4mL)的反式-3-[(叔-丁氧基羰基)(甲基)氨基]-2-甲基哌啶-1-羧酸芐酯(0.16g0.45mmol)溶液中加入HCl(4N于二氧六環中；4mL)。于rt下攪拌2h后，將反應物真空下濃縮，再溶解于MeOH，然后真空下濃縮得到油性結晶的固體樣標題化合物的鹽酸鹽(0.12g)。LCMS(ES，M+H＝263)。
實施例80 4-{[反式-2-(2-羥基乙基)哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7- 甲酰胺 以與實施例1類似的方式，但使用反式-3-氨基-2-(2-羥基乙基)哌啶-1-羧酸芐酯(如以下描述合成)作為步驟7中的起始原料制備。1HNMRδ9.57(m，1H)，8.92(m，1H)，8.61(s，1H)，8.14(br s，1H)，7.97(s，1H)，7.87(d，2H)，7.50(m，3H)，7.40(m，1H)，4.82(m，1H)，3.55(m，1H)，3.29(s，3H)，3.23(m，1H)，2.94(m，1H)，1.97(m，4H)，1.21(d，3H)。LCMS(ES，M+H＝381)。
反式-3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-2-(2-乙氧基-2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸芐酯。在干燥的和N2凈化的條件下，將{3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]哌啶-2-基}乙酸乙酯(依據在下列文獻中描述的方法制備Tetrahedron Lett，1993，34，3593-3594)(0.45g，1.6mmol)溶解于10mL CH2Cl2中。加入0.28mL(1.6mmol)DIEA，然后加入0.22mL(1.59mmol)氯甲酸芐基酯。攪拌該溶液30min。然后用水和鹽水先后提取反應混合物。濃縮有機層且殘余物經MPLC；0-50％EtOAc/己烷純化。洗脫標題化合物(43-48％，0.41g)。LCMS(ES，M+H＝421)。
反式-3-氨基-2-(2-羥基乙基)哌啶-1-羧酸芐酯。在應用干燥溶劑的干燥的和N2凈化的條件下，將反式-3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-2-(2-乙氧基-2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸芐酯(0.41g)溶解于9mL THF和1mLMeOH中。向該反應物中加入0.073g NaBH4并攪拌16hr。加入NaBH4后觀察到氣體發生。反應用25mL水稀釋并用CH2Cl2提取。濃縮有機提取物和將殘余物溶解于4mL 4 N HCl的二氧六環溶液中。攪拌該溶液16hr，在高真空下去除溶劑后得到標題化合物，0.20g。LCMS(ES，M+H＝279)。
實施例81 4-{[(3S)-5-芐基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 以與實施例1類似的方式，但使用芐基(3S)-5-芐基哌啶-3-胺(如以下描述的合成)作為在步驟7中的起始原料制備。1H NMRδ8.64(s，1H)，8.19(m，1H)，8.04(m，2H)，7.59(m，2H)，7.56(m，2H)，7.43(m，3H)，7.30(m，3H)，7.22(m，2H)，3.99(m，2H)，3.72(m，3H)，3.37(d，1H)，2.91(m，1H)，2.70(m，1H)，1.99(m，1H)，1.69(m，1H)。LCMS(ES，M+H＝443)。
4-芐基-N-(叔-丁氧基羰基)-L-谷氨酸二甲基酯。于-78℃，向六甲基二甲硅烷基疊氮化鋰(50.0mL，50.0mmol，1M在THF中)溶液中逐滴加入N-(叔-丁氧基羰基)-L-谷氨酸二甲基酯(6.55g，23.8mmol)于30mLTHF的溶液。攪拌得到的溶液30分鐘，隨后加入芐基溴(5.65mL，47.6mmol)。然后于-78℃攪拌反應物混合物1個小時，此后LCMS指示完全轉化為產物。用水(50mL)猝滅反應混合物，用EtOAc(3×100mL)提取。有機層經硫酸鎂干燥、過濾并在減壓下濃縮，經快速柱層析(100％己烷至100％EtOAc)純化后得到白色固體樣標題化合物(5.68克，65％得率)。LCMS(ES，M+Na＝388)。
[(1S)-3-芐基-4-羥基-1-(羥基甲基)丁基]氨基甲酸叔丁酯。于0℃，向含4-芐基-N-(叔-丁氧基羰基)-L-谷氨酸二甲酯(5.68g，15.5mmol)和氯化鈣(6.88g，62.0mmol)于各60mL的EtOH和THF溶液中分批加入NaBH4(4.69g，124mmol)。將反應混合物溫熱至rt并攪拌12小時直至LCMS指示完全轉化為產物。然后用飽和的碳酸氫鈉(2×100mL)和水(2×100mL)猝滅反應混合物，隨后用EtOAc(3×100mL)提取。合并的有機層經硫酸鎂干燥、過濾并在減壓下濃縮，得到直接用于下一反應的標題化合物。LCMS(ES，M+H-BOC基團＝210)。
(2S)-4-芐基-2-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-5-[(甲基磺酰基)氧基]戊基甲烷磺酸鹽。將[(1S)-3-芐基-4-羥基-1-(羥基甲基)丁基]氨基甲酸叔丁酯(4.42g，14.3mmol)于100mL CH2Cl2的溶液冷卻至0℃，其后加入TEA(7.97mL，57.2mmol)，隨后加入甲烷磺酰氯(3.32mL，42.9mmol)。于0℃攪拌反應物混合物1個小時，用CH2Cl2稀釋，用飽和碳酸氫鈉鈉洗滌，經硫酸鎂干燥，過濾和真空下濃縮，得到直接用于下一反應的標題化合物。LCMS(ES，M+Na＝488)。
[(3S)-1，5-二芐基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯。向(2S)-4-芐基-2-[(叔-丁氧基羰基)氨基]-5-[(甲基磺酰基)氧基]戊基甲烷磺酸酯(14.3mmol)的溶液中加入30mL的芐基胺。將反應混合物加熱至70℃約24小時，其后將該混合物冷卻至rt并傾入1N NaOH(100mL)中。用己烷(4×100mL)提取混合物，有機層經硫酸鎂干燥，過濾和CIV。得到的油經快速柱層析(100％己烷至100％EtOAc)純化，得到標題化合物。LCMS(ES，M+H-BOC基團＝281)。
[(3S)-5-芐基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯。于氮氣氛下，向[(3S)-1，5-二芐基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(3.28g，8.62mmol)于15mL EtOH的溶液中加入10％Pd/C(900mg)。在帕爾(Parr)裝置上用50psi氫氣處理反應混合物24小時。反應混合物經硅藻土過濾，用大量MeOH漂洗，減壓濃縮濾液，得到直接用于下一反應的標題化合物。LCMS(ES，M+H＝291)。
(3S)-5-芐基哌啶-3-胺。向含有溶解于最少量的MeOH的[(3S)-5-芐基哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(1.59g，5.46mmol)的溶液中加入4N HCl的二氧六環(5.0mL)。將得到的溶液于rt下攪拌30分鐘。然后減壓下濃縮反應混合物，得到標題化合物。LCMS(ES，M+H＝191)。
以與實施例81類似的方式采用適當的起始原料制備實施例82。
實施例83 4-[(2，6-二甲基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 2，6-二甲基哌啶-3-胺。于氮氣氛下，向含2，6-二甲基吡啶-3-胺(2.08g，17.0mmol)的高壓容器中加入水和12N HCl(各10mL)，隨后加入氧化鉑(IV)(500mg，2.20mmol)。然后于減壓下將高壓容器抽空并將混合物置于50psi帕爾氫化器中48小時。于氮氣氛下，將混合物抽空，于硅藻土墊上過濾并用大量MeOH漂洗。將收集的濾液在真空下濃縮，得到直接用于下一反應的作為異構體混合物的標題化合物。LCMS(ES，M+H＝129)。
2-溴-4-[(2，6-二甲基哌啶-3-基)氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。向溶解于NMP(10mL)的2，6-二甲基哌啶-3-胺(1.23g，4.50mmol)中加入碳酸鉀(1.87g，13.5mmol)和2-溴-4-氯代噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(1.23g，4.50mmol)。將得到的混合物加熱至80℃并攪拌12小時或直至LCMS指示完全轉化為產物。然后用水(100mL)稀釋混合物，得到的固體經過濾，用水(20mL)洗滌和減壓下干燥最多8個小時。LCMS(ES，M+H＝366)。
4-[(2，6-二甲基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。向含有2-溴-4-[(2，6-二甲基哌啶-3-基)氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(400mg，1.09mmol)、苯基硼酸(200mg，1.64mmol)、碳酸銫(1.06g，3.27mmol)和二氧六環/水(2mL/1mL)的溶液中加入Pd(PPh3)4(126mg，0.109mmol)。將反應物加熱至80℃計1小時，隨后使反應冷卻至rt，過濾，用硅膠層析(100％CH2Cl2至20％MeOH/CH2Cl2/3％NH4OH)純化得到標題化合物。LCMS(ES，M+H＝363)。
4-[(2，6-二甲基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。向含有4-[(2，6-二甲基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈的燒瓶中加入5.00mL的12N HCl。于rt下攪拌反應物混合物并通過LCMS監測。每12小時加入額外的12N HCl得到完全轉化的所需產物。待轉化完全時，用MeOH稀釋反應混合物和減壓下濃縮得到產物，其經制備型HPLC(5％-95％H2O/MeCN/0.1％TFA)純化，得到作為異構體混合物的標題化合物。提供存在于混合物的主要異構體的分析數據1H NMRδ9.96(m，1H)，9.19(m，1H)，9.02(m，1H)，8.50(s，1H)，8.21(m，1H)，7.79(m，2H)，7.49(m，2H)，7.35(m，2H)，4.74(m，1H)，3.67(m，1H)，3.27(m，1H)，1.84(m，4H)，1.36(m，6H)。LCMS(ES，M+H＝381)。
以類似的方式采用適當的起始原料制備以下實施例84-94。
實施例95 2-{3-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 (3S)-3-{[7-氰基-2-(3-甲酰基苯基)-1-苯并噻吩-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。將(3S)-3-[(7-氰基-2-溴代噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(500mg，1.1mmol)、3-甲酰基苯基硼酸(257mg，1.7mmol)、碳酸銫(1.12g，3.4mmol)和Pd(PPh3)4(198mg，0.17mmol)的混合物于二氧六環(8.2mL)和H2O(2.7mL)中加熱至80℃。30min后，使溶液冷卻至rt，經由吸液管去除水層且使溶液于真空下濃縮。殘余物經MPLC(SiO2；20-50％EtOAc/己烷)純化，得到標題化合物(185mg，35％)。LCMS(ES，M+H＝463)。
(3S)-3-[(7-氰基-2-{4-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-1-苯并噻吩-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。于rt下，將(3S)-3-{[7-氰基-2-(3-甲酰基苯基)-1-苯并噻吩-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(50mg，0.11mmol)和二甲基胺(0.54mL的于THF中的2 M溶液，1.1mmol)溶液于乙二醇二甲醚(0.54mL)中攪拌。加入乙酸(2滴)，隨后加入NaBH(OAc)3(92mg，0.43mmol)。將該溶液加熱至80℃計30min。然后使溶液冷卻至rt。加入水(2滴)，隨后加入1M NaOH(1mL)。該產物經EtOAc提取。用鹽水洗滌有機提取物，經MgSO4干燥和真空下濃縮，得到直接用于下一步的標題化合物。LCMS(ES，M+H＝492)。
2-{3-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。將(3S)-3-[(7-氰基-2-{4-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-1-苯并噻吩-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯溶解于12M HCl(4mL)中并保持在于rt下17h。將該溶液于真空下濃縮和與MeOH共沸，得到作為鹽酸鹽的標題化合物(48mg，98％)。1H NMRδ10.62(br s，1H)，9.70(brs，1H)，9.07(m，2H)，8.57(s，1H)，8.44(br s，1H)，7.96(s，1H)，7.90(m，1H)，7.60(m，3H)，4.65(m，1H)，4.35(d，2H)，3.47(m，1H)，3.20(m，2H)，3.01(m，1H)，2.74(s，3H)，2.73(s，3H)，2.03(m，2H)，1.81(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝410)。
以類似的方式，從適當的原料制備以下實施例96-111。
實施例112 2-(4-{[(1-甲基-1H-吲哚-2-基)羰基]氨基}苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 1-甲基-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜戊環-2-基)苯基]-1H-吲哚-2-甲酰胺。于0℃，向1-甲基-1H-吲哚-2-羧酸(364mg，2.08mmol)于CH2Cl2(5.00mL)的溶液中逐滴加入草酰氯(0.536mL，6.24mmol)。向該溶液加入兩滴DMF和將得到的溶液于回流下攪拌過夜，然后隨后將黑色溶液于真空下濃縮。用5mL的CH2Cl2稀釋得到的殘余物和于0℃逐滴加入至[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜戊環-2-基)苯基]胺(0.50g，2.28mmol)于5mL的CH2Cl2和N，N-二異丙基乙基胺(DIPEA，0.56mL，3.12mmol)的溶液中。得到的混合物于rt下攪拌3個小時。然后用水(100mL)提取得到的混合物并用飽和氯化鈉洗滌。有機層經MgSO4干燥，過濾和減壓下濃縮，經柱層析(0-100％EtOAc/己烷)后得到標題化合物(0.417mg，53％得率)。1H NMRδ10.45(s，1H)，7.82(m，2H)，7.67(m，2H)，7.58(d，1H)，7.56(m，2H)，7.36(m，2H)，4.01(s，3H)，1.29(s，12H)。LCMS(ES，M+H＝377)。
(3S)-3-{[7-氰基-2-(4-{[(1-甲基-1H-吲哚-2-基)羰基]氨基}苯基)噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。向(3S)-3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(203mg，0.464mmol)中加入碳酸銫(452mg，1.39mmol)、1-甲基-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜戊環-2-基)苯基]-1H-吲哚-2-甲酰胺(262mg，0.696mmol)、Pd(PPh3)4(53.6mg，0.0464mmol)和二氧六環/水(2mL/1mL)。將反應加熱至80℃計1個小時，隨后使反應物冷卻至rt，過濾和經硅膠層析(0-100％EtOAc/己烷)純化，得到標題化合物(156mg，56％得率)。LCMS(ES，M+H＝607)。
2-(4-{[(1-甲基-1H-吲哚-2-基)羰基]氨基}苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。向含(3S)-3-{[7-氰基-2-(4-{[(1-甲基-1H-吲哚-2-基)羰基]氨基}苯基)噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯的燒瓶中加入5.00mL的12 N HCl。將反應混合物于rt下攪拌并用LCMS監測。再以每12小時加入12N HCl得到完全轉化的所需產物。待轉化完全時，反應混合物用水稀釋和減壓下濃縮，得到產物，經硅膠層析(CH2Cl2至20％MeOH/CH2Cl2/3％NH4OH)純化得到標題化合物。1H NMRδ10.45(s，1H)，8.50(s，1H)，8.14(s，1H)，7.94(m，2H)，7.73(m，3H)，7.59(d，1H)，7.35(m，2H)，7.15(m，2H)，4.19(m，1H)，4.03(s，3H)，3.14(m，2H)，2.87(m，2H)，1.98(m，1H)，1.74(m，1H)，1.53(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝525)。
以類似的方式制備以下實施例113-115。
實施例116 2-溴-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 向固體(3S)-3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(70mg，0.20mmol)中加入4mL濃HCl并將該溶液于rt下攪拌2天。真空去除溶劑和高真空下干燥后得到作為鹽酸鹽的標題化合物(78mg，100％)。1H NMRδ1.50(m，2H)，1.67(m，1H)，1.93(m，1H)，2.81(m，2H)，3.11(m，1H)，3.24(m，1H)，4.11(m，1H)，7.20(m，1H)，7.34(m，1H)，7.95(br s，1H)，8.52(s，1H)。LCMS(ES，M+H＝356)。
實施例117 2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氧基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺(3S)-3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。向攪拌的(3S)-3-羥基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.4g，7mmol)于THF(10mL)的溶液中分批緩慢加入NaH(0.3g，7mmol；60％于礦物油中)。15分鐘后，將懸浮于THF(10mL)的2-溴-4-氯代噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(1.4g，5.1mmol)緩慢加入預形成的醇鹽溶液中。反應混合物于rt下攪拌1h，然后用～80mL的水稀釋。提取入EtOAc，隨后用飽和NaHCO3、飽和NaCl洗滌和經Na2SO4干燥，得到可直接用于下一步的棕色固體產物(～2g，91％)。1H NMRδ8.66(s，1H)，7.79(s，1H)，5.26(m，1H)，4.13(m，1H)，3.84(m，1H)，2.93(m，1H)，1.94(m，3H)，1.50(m，2H)，0.92(s，9H)。LCMS(ES，M+H＝438，440)。
(3S)-3-[(7-氰基-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。將(3S)-3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2g.4.5mmol)、苯基硼酸(0.83g，6.8mmol)、Pd(PPh3)4(0.8g，0.68mmol)和碳酸銫(4.4g，13.6mmol)的混合物溶解于水(5mL)和二氧六環(20mL)中。于氮氣氛下，將該反應混合物于80℃攪拌1h，然后使其冷卻至rt。用吸液管去除水，真空下去除二氧六環。殘余物經MPLC(SiO2；20-50％EtOAc/己烷)純化，得到標題化合物(1.0g，45％；2個步驟)。1H NMRδ8.62(s，1H)7.85(d，2H)7.42-7.54(m，3H)6.74(d，1H)5.29(s，1H)4.15(m，1H)3.83(m，1H)3.35(m，1H)2.97(m，1H)1.98(s，3H)1.52(s，1H)0.90(s，9H)。LCMS(ES，M+H＝436)。
2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氧基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。將(3S)-3-[(7-氰基-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.0g，2.3mmol)和12 N HCl(濃的，15mL)溶液攪拌12小時。加入水(100mL)，真空下使溶液濃縮至干燥。將得到的白色固體溶解于100mL的MeOH，真空下濃縮并在高真空下干燥，得到標題化合物(0.86g，96％)。1H NMRδ9.56(d，1H)9.10(s，1H)8.67(s，1H)8.32(s，1H)8.28(s，1H)7.87(d，2H)7.66(s，1H)7.49(t，2H)7.40(t，1H)，5.64(s，1H)3.41(s，2H)3.17-3.28(m，1H)3.03(d，1H)1.91-2.06(m，3H)1.65-1.79(m，1H)。LCMS(ES，M+H＝354)。
以類似的方式，從適當的起始原料制備實施例118-128。
實施例129 2-苯基-4-(哌啶-3-基硫代)噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 以與實施例17類似的方式，但使用3-巰基哌啶-1-羧酸芐酯(如以下描述的合成)作為第一步驟中的起始原料制備。1H NMRδ9.23(br，2H)，8.91(s，1H)，8.45(s，1H)，7.88(d，2H)，7.83(br，1H)，7.82(s，1H)，7.50(t，2H)，7.43(t，1H)，4.41(m，1H)，3.63(m，1H)，3.23(m，1H)，3.09(m，1H)，2.94(m，1H)，2.22-2.13(m，1H)，1.96-1.72(m，3H)。LCMS(ES，M+H＝370)。
3-(乙酰基硫代)哌啶-1-羧酸芐酯。于0℃，向三苯基膦(3.40g，13.0mmol)和偶氮二甲酸二異丙酯(2.65mL，13.7mmol)的THF(10mL)溶液中加入3-羥基哌啶-1-羧酸芐酯(2.57g，10.9mmol)，隨后加入硫羥乙酸(1.00mL，14.0mmol)。將反應混合物加熱至70℃計18h。冷卻后，將反應混合物于真空下濃縮，經MPLC(梯度5-20％EtOAc/己烷)純化得到所需的黃色油樣產物(1.02g，3.49mmol，32％)。1H NMRδ7.41-7.27(m，5H)，5.12-5.01(m，2H)，3.75(m，1H)，3.58-3.13(m，4H)，2.28(br s，3H)，1.91(m，1H)，1.65-1.43(m，3H)。LCMS(ES，M+Na＝316)。
3-巰基哌啶-1-羧酸芐酯。向3-(乙酰基硫代(acetylthio))哌啶-1-羧酸芐酯(541mg，1.85mmol)的MeOH(20mL)溶液中加入NaSMe(582mg，8.31mmol)的MeOH(10mL)溶液。將混合物攪拌2h，此時LCMS分析指示起始原料完全消耗。將反應混合物于真空下濃縮并將殘余物在EtOAc和0.5M HCl之間分配。濃縮有機層，得到黃色油樣游離硫醇(463mg，1.85mmol，＞98％)。1H NMRδ7.41-7.26(m，5H)，5.13-5.00(m，2H)，3.98(m，1H)，3.76(m，1H)，2.90(m，1H)，2.80(m，1H)，2.70(d，1H)，1.99(m，1H)，1.65(m，1H)，1.40(m，2H)。LCMS(ES，M+Na＝274)。
實施例130 4-{[(3S)-1-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 (3S)-1-甲基哌啶-3-胺。于0℃，向(3S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(8.89g，44.4mmol)的THF(176mL)溶液中逐滴加入1M氫化鋁鋰的THF(88.0mL，88.8mmol)。使得到的灰色溶液溫熱至rt，于氮氣氛下攪拌過夜。于0℃，將10％四水合酒石酸鉀鈉溶液加至混合物中直至停止起泡。用大量EtOAc、隨后用1/1 MeOH/CH2Cl2提取得到的混合物。合并的有機層經MgSO4干燥，過濾和真空下濃縮，得到直接用于下一反應的標題化合物。GCMS (m/z 114)。
2-溴-4-{[(3S)-1-甲基哌啶-3-基]氨基}噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。向2-溴-4-氯代噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(400mg，1.46mmol)的NMP(2.0mL)溶液中加入碳酸鉀(605mg，4.38mmol)和(3S)-1-甲基哌啶-3-胺(333mg，2.92mmol)。將反應混合物加熱至130℃直至LCMS指示反應完成。使反應混合物冷卻至rt，加入約100mL的水。得到的固體經過濾并真空干燥，得到標題化合物。LCMS(ES，M+H＝353)。
4-{[(3S)-1-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。向2-溴-4-{[(3S)-1-甲基哌啶-3-基]氨基}噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(512mg，1.46mmol)中加入碳酸銫(1.43g，4.38mmol)、苯基硼酸(306mg，2.19mmol)、Pd(PPh3)4(169mg，0.146mmol)和二氧六環/水(4mL/2mL)。將反應加熱至80℃計1小時，隨后使反應冷卻至rt，過濾，采用硅膠層析(100％己烷至100％EtOAc)純化，得到標題化合物。LCMS(ES，M+H＝349)。
4-{[(3S)-1-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。
向含4-{[(3S)-1-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈的燒瓶中加入5.00mL的12 N HCl。于rt下攪拌反應物混合物并用LCMS監測。再加入12N HCl，12小時后完全轉化為所需的產物。待轉化完全時，用水稀釋反應混合物和減壓下濃縮，得到產物，經用硅膠層析(100％CH2Cl2至20％MeOH/CH2Cl2/3％NH4OH)純化，得到標題化合物。1H NMRδ8.52(s，1H)，8.20(s，1H)，7.74-7.71(m，3H)，7.48-7.36(m，4H)，7.21(d，1H)，4.28(m，1H)，2.96(m，2H)，2.69(m，2H)，1.93-1.55(m，4H)。LCMS(ES，M+H＝367)。
實施例131 2-(4-氰基苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 將固體2-溴-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺(75mg，0.2mmol)、4-氰基苯基硼酸(44.1mg，0.30mmol)、碳酸銫(260mg，0.80mmol)、Pd(PPh3)4(23mg，0.02mmol)溶解于2ml的二氧六環和0.5ml的水中。將反應混合物加熱至80℃計2個小時。真空中去除溶劑，殘余物經制備型HPLC(H2O/CH3CN/0.1％TFA梯度)純化。將凍干后得到三氟乙酸鹽溶解于MeOH中并用4 N HCl的二氧六環處理，然后于rt下攪拌數小時。真空中去除溶劑和在高真空下干燥后，分離出作為鹽酸鹽的標題化合物(44mg，54％)，1H NMRδ9.36(s，1H)，8.97(s，1H)，8.83(s，1H)，8.60(s，1H)，8.22(s，1H)，7.96(q，4H)，7.56(s，1H)，4.60(m，1H)，3.21(m，2H)，3.02(m，2H)，2.05(m，2H)，1.77(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝378)。
以類似的方式制備以下實施例132。
實施例133 4-{[(2S)-2-氨基-3-羥基丙基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺3-氨基-N-[(芐氧基)羰基]-L-丙氨酸甲酯。向裝備磁力攪拌棒的含3-氨基-N-[(芐氧基)羰基]-L-丙氨酸甲酯(5.0g，21.0mmol)的燒瓶中加入無水MeOH(100mL)。攪拌下向溶液/漿液中鼓泡通入HCl氣約10分鐘。約2分鐘后該發熱反應從渾濁白色轉化至澄清/無色。將該溶液攪拌過夜，之后真空濃縮和干燥，得到作為白色結晶鹽酸鹽的標題化合物(6.0g，98％)。1H NMRδ3.05(t，1H)，3.19(t，1H)，3.70(s，3H)，4.45(m，1H)，5.10(s，2H)，7.38(m，5H)，7.95(d，1H)，8.35(br s，3H)。LCMS(ES，M+H＝253)。
N-[(芐氧基)羰基]-3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3-2-c]吡啶-4-基)氨基]-L-丙氨酸甲酯。向攪拌的4-氯-2-溴-噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(0.53g，1.9mmol)和3-氨基-N-[(芐氧基)羰基]-L-丙氨酸甲酯鹽酸鹽(0.66g，2.3mmol)的NMP(4mL)的溶液中加入碳酸鉀(0.44g，3.2mmol)。將非均質性的混合物加熱至80℃計2h，冷卻至rt，然后加入至～50mL的水中。產物(1.2g)經過濾分離和干燥，得到暗棕色固體。采用MPLC(SiO2；0-100％EtOAc/己烷)純化該固體，得到標題化合物(0.41g)。LCMS(ES，M+H＝489，491；M-H＝487，489)。
N-[(芐氧基)羰基]-3-[(7-氰基-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]-L-丙氨酸甲酯。向用氮凈化的、含N-[(芐氧基)羰基]-3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]-L-丙氨酸甲酯(0.41g.0.85mmol)的燒瓶中加入苯基硼酸(0.21g，1.7mmol)、Pd(PPh3)4(0.10g，0.085mmol)、碳酸銫(0.83g，2.5mmol)、水(2mL)和二氧六環(6mL)。將該反應混合物加熱至80℃計15分鐘，然后使其冷卻至rt。經MPLC(SiO2；0-50％EtOAc/己烷)純化得到標題化合物(89mg)。LCMS(ES，M+H＝487)。[(1S)-2-[(7-氰基-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]-1-(羥基甲基)乙基]氨基甲酸芐酯。于氮氣氛下，向含有溶解于THF (9.5mL)/MeOH(0.5mL)的N-[(芐氧基)羰基]-3-[(7-氰基-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]-L-丙氨酸甲酯(89mg，0.18mmol)的燒瓶中，加入NaBH4(0.014g，0.37mmol)。于rt下攪拌反應物并用LCMS監測。40分鐘后，反應完成。真空下濃縮溶劑，得到直接用于下一步的標題化合物，83mg(100％)。LCMS(ES，M+H＝459)。
4-{[((2S)-2-氨基-3-羥基丙基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。在裝備磁力攪拌棒的燒瓶中加入[(1S)-2-[(7-氰基-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]-1-(羥基甲基)乙基]氨基甲酸芐酯(83mg，0.18mmol)和12 N HCl(5mL)。將該漿液攪拌24小時。真空去除溶劑并用MPLC(SiO2；50-100％NH4OH/MeOH/CH2Cl2(1∶7∶92))純化殘余物，得到標題化合物(23mg)。1H NMRδ1.35(s，2H)，2.75(m，1H)，3.16(m，2H)，3.33(m，1H)，3.87(q，1H)，4.45(t，1H)，7.04(s，1H)，7.14(t，1H)，7.28(m，3H)，7.50(d，2H)，7.68(s，1H)，7.94(s，1H)，8.30(s，1H)。LCMS(ES，M+H＝343)。
以類似于實施例133的方式，在第一步驟中采用3-氨基-N-[(芐氧基)羰基]-D-丙氨酸甲酯替代3-氨基-N-[(芐氧基)羰基]-L-丙氨酸甲酯制備以下實施例134。
實施例135 3-{[7-(氨基羰基)-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基l氨基}-D-丙氨酸 將N-[(芐氧基)羰基]-3-[(7-氰基-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]-D-丙氨酸(54mg，0.11mmol)[為以類似于制備實施例133的方式制備的實施例134的中間體]溶解于4mL的12N HCl并攪拌過夜。反應混合物經蒸發和高真空下干燥。經制備型HPLC純化后分離出作為三氟乙酸鹽的標題產物(19mg，48％)。1H NMRδ8.65(m，2H)，8.40(m，1H)，8.1-8.3(br s，1H)，7.82(m，2H)，7.59(m，2H)，7.49(m，1H)，4.45(m，1H)，4.17(m，2H)，4.08(m，2H)，3.90(br s，2H)。LCMS(ES，M+H＝357)。
實施例136 4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-2-吡啶-4-基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 3-[(4-氰基-2-吡啶-4-基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。向3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(183mg，0.418mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(2.00mL)溶液中加入Pd(PPh3)4(19.3mg，0.017mmol)、碘化銅(15.9mg，0.084mmol)和4-(三丁基甲錫烷基)吡啶(185mg，0.502mmol)。于80℃、氮氣氛下攪拌反應物混合物直至LCMS指示反應完全。過濾得到的黑色反應混合物，用EtOAc漂洗，減壓下濃縮，用硅膠層析(100％CH2Cl2至20％MeOH/CH2Cl2)純化，得到103mg標題化合物(51％得率)。LCMS(ES，M+H＝436)。
4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-2-吡啶-4-基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。向含3-[(7-氰基-2-吡啶-4-基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的燒瓶中加入2.00mL的12N HCl。于rt下攪拌反應物混合物，用LCMS監測。每12小時再加入12N HCl，得到完全轉化的所需產物。待轉化完全時，用水稀釋反應混合物并在減壓下濃縮，得到產物，其經硅膠層析(100％CH2Cl2至20％MeOH/CH2Cl2/3％NH4OH)純化，得到標題化合物。1H NMRδ1.70-1.56(m，2H)，1.99-1.78(m，2H)，2.98-2.89(2H)，3.09(m，1H)，3.24(m，1H)，4.22(m，1H)，7.38(m，1H)，7.66(d，2H)，7.97(m，1H)，8.47(s，1H)，8.57(s，1H)，8.64(d，2H)。LCMS(ES，M+H＝354)。
以類似的方式采用適當的起始原料制備以下實施例137。
實施例138 2-(苯基乙炔基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 2-碘代-4-氧代-4，5-二氫噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。將N-碘代琥珀酰亞胺(10.2g，44mmol)加入到4-氧代-4，5-二氫噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(4.0g，22mmol)于50∶50的DMF/乙酸(32mL)的混合物中的溶液中。將該黑色反應混合物加熱至80℃計12h。冷卻到rt后，邊攪拌邊將反應物加入至～150mL的水。用飽和NaHCO3將該渾濁溶液的pH調節至9-10。經過濾，用水洗滌并在真空烘箱中干燥得到產物(5.0g，76％)。1H NMRδ12.5(br s，1H)，8.31(d，1H)，7.83(s，1H)。LCMS(ES，M+H＝303，M-H＝301)。
4-氯-2-碘代噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。將溶解于POCl3(50mL)中的2-碘代-4-氧代-4，5-二氫噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(5.0g，16.6mmol)的溶液加熱至回流過夜。冷卻到rt后，真空下將反應物濃縮至干燥。將該固體緩慢和小心地懸浮于～300mL的水中。經過濾，隨后用水、飽和NaHCO3、水洗滌并在真空烘箱中干燥得到產物(4.3 g，84％)。1H NMRδ8.80(s，1H)，8.05(s，1H)。LCMS(ES，M+H＝321)。
(3S)-3-[(7-氰基-2-碘代噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。向攪拌的4-氯-2-碘代噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(2.5g，7.8mmol)和(3S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.9g，9.4mmol)的NMP(14mL)溶液中加入碳酸鉀(2.2g，15.6mmol)。將此非均質性混合物加熱至80℃計2h，冷卻至rt，然后加入至～100-150mL的水中。過濾和干燥得到無需純化而直接用于下一步的、暗棕色固體產物(4.4g，100％)。LCMS(ES，M+H＝485；M-H，483)。
(3S)-3-{[7-氰基-2-(苯基乙炔基)噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。向(3S)-3-[(7-氰基-2-碘代噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(150mg，310mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(1.00mL)中加入PdCl2(PPh3)2(16.1mg，0.023mmol)、碘化銅(4.40mg，0.023mmol)、TEA(0.130mL，0.930mmol)和苯乙炔(81.7μL，0.744mmol)。于rt、氮氣氛下攪拌反應物混合物直至LCMS指示反應完全。向得到的反應混合物中加入10mL水，隨后用EtOAc(4×20mL)提取混合物，有機層經MgSO4干燥，過濾和減壓下濃縮溶劑，得到黑色殘余物，經制備型HPLC(5-95％MeCN，H2O，0.1％TFA)純化，得到標題化合物。LCMS(ES，M+H＝459)。
2-(苯基乙炔基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。
向含(3S)-3-{[7-氰基-2-(苯基乙炔基)噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯的燒瓶中加入1.00mL的12N HCl。于rt下攪拌反應物混合物并用LCMS監測。每12小時再加入12N HCl，得到完全轉化的所需產物。待轉化完全時，將反應混合物冷卻至0℃，用6NNaOH逐滴處理直至達到pH 12。用EtOAc以及CH2Cl2/MeOH(1/1)提取混合物，有機層經硫酸鎂干燥，過濾和真空下濃縮得到產物，其經制備型HPLC(5-95％MeCN，H2O，0.1％TFA)純化，得到標題化合物。1H NMRδ1.99-1.63(m，4H)，2.91-2.83(m，2H)，3.3 1-3.20(m，2H)，4.48(m，1H)，7.26(m，1H)，7.48(m，3H)，7.55(m，2H)，8.10(s，1H)，8.71-8.57(重疊m和s，2H)。LCMS(ES，M+H＝377)。
以類似于實施例1的方式，在步驟8中使用(3S)-3-[(7-氰基-2-碘代噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯制備以下實施例139-145。
實施例146 2-(1H-吲唑-1-基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 (3S)-3-{[7-氰基-2-(1H-吲唑-1-基)噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。氮氣氛下，向CuI(2.7mg，0.014mmol)、吲唑(79.2mg，0.670mmol)和碳酸銫(191mg，0.586mmol)的溶液中加入(3S)-3-[(7-氰基-2-碘代噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(135mg，0.279mmol)、反式-1，2-環己烷二胺(4.2L，0.056mmol)和無水1，4-二氧六環(1.0mL)。于110℃攪拌反應物混合物24小時，在該時間點使反應物冷卻至rt并用CH2Cl2稀釋。過濾該混合物和減壓下去除溶劑。用制備型HPLC(5-95％MeCN，H2O，0.1％TFA)純化黑色殘余物，得到標題化合物。LCMS(ES，M+H＝475)。
2-(1H-吲唑-1-基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。向含(3S)-3-{[7-氰基-2-(1H-吲唑-1-基)噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯的燒瓶中加入1.00mL的12N HCl。于rt下攪拌反應物混合物并用LCMS監測。每12小時再加入12N HCl，得到完全轉化的所需產物。待轉化完全時，使反應混合物冷卻至0℃并用6NNaOH逐滴處理直至達到pH 12。用EtOAc以及CH2Cl2/MeOH(1/1)提取混合物，有機層經硫酸鎂干燥，過濾和真空下濃縮得到標題化合物。1H NMRδ1.73-1.61(m，2H)，2.00-1.80(m，2H)，3.02-2.92(m，2H)，3.24(m，1H)，3.38(m，1H)，4.28(m，1H)，7.38(m，2H)，7.94(t，1H)，7.96(d，1H)，8.03(s，1H)，8.20(d，1H)，8.46(s，1H)，8.55(s，1H)。LCMS(ES，M+H＝393)。
以類似的方式制備以下實施例147。
實施例148 2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基][1，3]噻唑并[4，5-c]吡啶-7-甲酰胺 2-苯基-噻唑-5-甲醛。向2-氯代丙醛(malonaldehyde)(500mg，4.69mmol)于5.00mL丙酮的溶液中加入硫代苯甲酰胺(643mg，4.69mmol)。于室溫下攪拌反應物混合物直至LCMS指示反應完成。減壓下濃縮反應混合物，得到直接用于下一步的固體。1H NMRδ7.57(m，3H)，8.09(d，2H)，8.78(s，1H)，10.1(s，1H)。LCMS(ES，M+H＝190)。(2E)-3-(2-苯基-1，3-噻唑-5-基)丙烯酸。向2-苯基-噻唑-5-甲醛(888mg，4.69mmol)中加入丙二酸(684mg，6.57mmol)、吡啶(0.859mL)和哌啶(0.046mL)。將得到的混合物加熱至回流6個小時，隨后冷卻至rt。將反應混合物傾入水(20mL)中并攪拌10分鐘后，過濾得到的固體，用水漂洗和減壓下干燥，得到標題化合物(899mg，83％得率)。1H NMR δ6.25(d，2H)，7.53(m，3H)，7.83(d，1H)，7.95(m，2H)，8.26(s，1H)，12.57(br s，1H)。LCMS(ES，M+H＝232)。
(2E)-3-(2-苯基-1，3-噻唑-5-基)丙烯酰疊氮化物。于0℃，向(2E)-3-(2-苯基-1，3-噻唑-5-基)丙烯酸(899mg，3.89mmol)于15.0mL丙酮的溶液中，逐滴加入異丁基氯甲酸酯(0.661mL，5.05mmol)。于0℃攪拌得到的溶液1個小時，隨后加入疊氮化鈉(328mg，5.05mmol)于3.00mL水中的溶液。于0℃攪拌反應物30分鐘，隨后使反應物溫熱至rt并攪拌30分鐘。加入水(50mL)至得到的溶液中。過濾黃色固體，隨后用水洗滌，得到884mg(89％得率)的標題化合物。1H NMRδ6.40(d，1H)，7.55(m，3H)，7.99(m，2H)，8.06(s，1H)，8.40(s，1H)。2-苯基[1，3]噻唑并[4，5-c]吡啶-4(5H)-酮。于230℃，向苯基醚(3.60mL)和三丁胺(0.900mL)的溶液中逐滴加入于約5.00mL的CH2Cl2中的5-[(1E)-3-氧代-3-(215-三氮-1-烯-2-炔-1-基(triaz-1-en-2-yn-1-y1))丙-1-烯-1-基]-2-苯基-1，3-噻唑。于230℃攪拌混合物30分鐘，隨后使反應物冷卻至rt，接著加入50mL己烷，得到黃色固體。用己烷洗滌得到的固體，減壓下干燥得到標題化合物(84％得率)。1H NMRδ6.96(d，1H)，7.36(m，1H)，7.55(m，3H)，8.01(m，2H)，11.76(br s，1H)。
7-溴-2-苯基[1，3]噻唑并[4，5-c]吡啶-4(5H)-酮。向2-苯基[1，3]噻唑并[4，5-c]吡啶-4(5H)-酮(600mg，2.61mmol)于乙酸(8.00mL)的溶液中逐滴加入溴(0.144mL，2.81mmol)。將該反應混合物加熱至回流30分鐘。30分鐘后，使溶液冷卻至rt并加入40mL水。過濾殘余的固體，用水漂洗并減壓下干燥，得到標題化合物(728mg，90％得率)。1H NMR δ7.56(m，3H)，7.72(s，1H)，8.06(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝309)。4-氯-2-苯基[1，3]噻唑并[4，5-c]吡啶-7-腈。向7-溴-2-苯基[1，3]噻唑并[4，5-c]吡啶-4(5H)-酮(728mg，2.35mmol)于約10.0mL的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中加入氰化銅(I)(464mg，5.18mmol)。于回流下攪拌反應物10小時，隨后冷卻至rt。將氯化鐵(III)的溶液(4.57g，28.2mmol)溶解于1.30mL的濃HCl中，然后加入7.30mL的水。于70℃攪拌該混合物15分鐘，隨后冷卻至rt。加入水(40.0mL)并過濾固體并減壓下干燥。用7.00mL的氧氯化磷處理得到的固體并回流4小時，隨后使反應冷卻至rt。真空去除溶劑。將殘余物溶解于CH2Cl2，用飽和NaHCO3洗滌，有機層經MgSO4干燥，過濾和減壓下濃縮。得到的固體經硅膠層析(100％CH2Cl2)純化，得到標題化合物(189mg，30％得率)。1HNMRδ7.83-7.74(m，3H)，8.22(d，2H)，8.95(s，1H)。LCMS(ES，M-H＝272)。
(3S)-3-[(7-氰基-2-苯基[1，3]噻唑并[4，5-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。向4-氯-2-苯基[1，3]噻唑并[4，5-c]吡啶-7-腈(189mg，0.690mmol)的NMP(3.0mL)溶液中加入碳酸鉀(229mg，1.66mmol)和(3S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(691mg，3.45mmol)。將反應混合物加熱至100℃直至LCMS指示反應完成。然后過濾反應混合物，得到粘性油，其經硅膠柱層析(100％己烷至100％EtOAc)純化，濃縮至干，得到255mg的標題化合物(85％得率)。1H NMRδ1.35(s，9H)，1.96-1.69(m，4H)，2.90(m，2H)，4.07-3.66(m，2H)，4.16(m，1H)，7.61(m，3H)，7.96(br s，1H)，8.15(m，2H)，8.49(s，1H)。LCMS(ES，M+H＝436)。
2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基][1，3]噻唑并[4，5-c]吡啶-7-甲酰胺。向(3S)-3-[(7-氰基-2-苯基[1，3]噻唑并[4，5-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(255mg)中加入3.00mL的12N HCl。于rt下攪拌該渾濁溶液，通過LCMS監測反應完成情況。反應混合物冷卻至0℃，用6 N NaOH逐滴處理直至達到pH 12。用EtOAc以及CH2Cl2/MeOH(1/1)提取混合物，有機層經硫酸鎂干燥，過濾和真空下濃縮得到產物，其經制備型HPLC(5-95％MeCN，H2O，0.1％TFA)純化得到100mg的標題化合物(48％得率)。1H NMRδ1.99-1.65(m，4H)，2.91-2.83(m，2H)，3.24(m，1H)，3.38(m，1H)，4.56(m，1H)，5.2-6.2(br s，2H)，7.47(m，3H)，7.65(d，1H)，8.12(m，2H)，8.67-8.61(重疊m和s，2H)。LCMS(ES，M+H＝354)。
以類似于實施例148的方式，采用適當的起始原料制備以下實施例149-155。
實施例156 2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]呋喃并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺(2E)-3-(5-苯基-2-呋喃基)丙烯酸。將5-苯基-2-呋喃基醛(2.82g，16.4mmol)用丙二酸(2.4g，23.0mmol)、吡啶(3ml)和哌啶(0.16ml)處理。于回流加熱混合物6個小時，之后冷卻至rt。然后邊攪拌中將混合物傾入水(50ml)中。過濾得到的黃色固體，用水洗滌和空氣干燥得到標題化合物(3.5g，99％)。1H NMRδ12.39(br s，1H)，7.83(d，2H)，7.47(t，2H)，7.38(t，2H)，7.13(d，1H)，7.05(d，1H)，6.33(d，1H)。LCMS(ES，M+H＝215)。
(2E)-3-(5-苯基-2-呋喃基)丙烯酰疊氮化物。于0℃，向(2E)-3-(5-苯基-2-呋喃基)丙烯酸(1.63g，7.6mmol)和Et3N(1.40ml，9.9mmol)于丙酮(20ml)的溶液中，逐滴加入ClCO2iBu(1.3ml，9.9mmol)。于0℃攪拌1h后，加入疊氮化鈉(643mg，9.9mmol)的水(5ml)溶液，再于0℃攪拌得到的混合物30min，然后于rt下攪拌30min，然后加入水(100ml)。過濾得到黃色固體樣標題化合物，其用水洗滌并風干(1.21g，67％)。1H NMRδ7.88(d，2H)，7.60(d，1H)，7.48(t，2H)，7.39(t，1H)，7.22(d，2H)，6.44(d，1H)。LCMS(ES，M+H＝240)。
2-苯基呋喃并[3，2-c]吡啶-4(5H)-酮。于230℃，向攪拌的苯基醚(36.4ml)和Bu3N(9.1ml)的混合物中逐滴加入(2E)-3-(5-苯基-2-呋喃基)丙烯酰疊氮化物(2.29g，9.56mmol)于CH2Cl2(18ml)的溶液。控制加液的速率，這樣使內部溫度保持高于190℃。加入后，將得到的棕色溶液攪拌30min，之后冷卻至rt。加入己烷(90ml)并過濾黃色固體，用己烷洗滌和在空氣中干燥，得到標題化合物(1.3g，64.5％)。1H NMRδ11.51(s，1H)，7.84(d，2H)，7.48(t，3H)，7.37(m，2H)，6.70(d，1H)。LCMS(ES，M+H＝212)。
7-溴-2-苯基呋喃并[3，2-c]吡啶-4(5H)-酮。于rt下，用溴(320mg，1.93mmol)處理2-苯基呋喃并[3，2-c]吡啶-4(5H)-酮(369mg，1.75mmol)于乙酸(5ml)的溶液并將得到的混合物于回流加熱30min。冷卻到rt后，加入水(20ml)至混合物中。形成的黃色固體經過濾，用水洗滌和在空氣中干燥，得到直接用于下一步的標題化合物和6，7-二溴-2-苯基呋喃并[3，2-c]吡啶-4(5H)-酮化合物的混合物(2∶1，400mg，52％)。4-氧代-2-苯基-4，5-二氫呋喃并[3，2-c]吡啶-7-腈。將7-溴-2-苯基呋喃并[3，2-c]吡啶-4(5H)-酮(472mg，1.63mmol)和CuCN(320mg，3.58mmol)于DMF的混合物于回流下加熱16小時，之后冷卻至rt。然后加入FeCl3(3.32g，20mmol)于濃HCl(0.9ml)和水(5ml)的溶液，以分解該銅復合物。于70℃攪拌該混合物計15min，然后使其冷卻至rt。加入水(35ml)，使形成的黃色固體過濾，用水洗滌和在空氣中干燥。標題化合物和4-氧代-2-苯基-4，5-二氫呋喃并[3，2-c]吡啶-6，7-二腈的混合物無需純化用于下一步。
4-氯-2-苯基呋喃并[3，2-c]吡啶-7-腈。用POCl3(5ml)處理粗品4-氧代-2-苯基-4，5-二氫呋喃并[3，2-c]吡啶-7-腈，將該混合物于回流下加熱4個小時。減壓下去除溶劑，使殘余物在CH2Cl2和碳酸氫鈉水溶液之間分配。分離有機相和經硫酸鎂干燥。去除溶劑，隨后經硅膠柱層析(洗脫液CH2Cl2和MeOH)得到白色固體樣標題化合物(287 mg，兩個步驟的得率69.7％)。1H NMRδ8.35(s，1H)，8.06(d，2H)，7.86(s，1H)，7.57(m，3H)。LCMS(ES，M+H＝254)。
(3S)-3-[(7-氰基-2-苯基呋喃并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。向4-氯-2-苯基呋喃并[3，2-c]吡啶-7-腈(287mg，1.13mmol)和碳酸鉀(376mg，2.72mmol)于NMP(5ml)的混合物中，加入(3S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.14g，5.67mmol)，于110℃攪拌得到的混合物16小時。然后冷卻混合物并加入水(50ml)，過濾形成的沉淀物得到標題化合物(178mg)。
2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]呋喃并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。用濃HCl(5ml)處理(3S)-3-[(7-氰基-2-苯基呋喃并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(178mg)，且于rt下攪拌該混合物過夜。去除溶劑后，用制備型HPLC純化殘余物，得到作為三氟乙酸鹽的標題化合物。將該鹽溶解于MeOH(1ml)，然后用4 N HCl/二氧六環(2ml)填充。攪拌過夜后，過濾白色固體并風干得到標題化合物(53mg)。1H NMRδ9.14(br s，1H)，8.89(brs，1H)，8.34(s，1H)，7.91(d，2H)，7.85(s，1H)，7.67(s，2H)，7.55(t，2H)，7.45(t，1H)，4.47(m，1H)，3.19(m，2H)，2.96(m，2H)，2.03(m，2H)，1.72(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝337)。
實施例 157 2-甲基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺(2E)-3-(5-甲基-2-噻吩基)丙烯酸。向5-甲基噻吩-2-甲醛(13.1mL，120mmol)中加入丙二酸(17.5g，168mmol)、吡啶(22.0mL)和哌啶(118mL)。使得到的混合物加熱至回流過夜，隨后冷卻至rt。然后將反應混合物傾入水(200mL)中并攪拌10分鐘后，過濾得到的固體，用水漂洗并減壓下干燥得到標題化合物(13.2g，66％得率)。1H NMRδ12.3(s，1H)，7.68(d，1H)，7.32(s，1H)，6.86(s，1H)，6.03(d，1H)，3.36(s，3H)。LCMS(ES，M+H＝169)。
(2E)-3-(5-甲基-2-噻吩基)丙烯酰疊氮化物。于0℃，向(2E)-3-(5-甲基-2-噻吩基)丙烯酸(13.2g，78.3mmol)的300mL丙酮的溶液中，逐滴加入氯甲酸異丁基酯(13.3mL，102mmol)。于0℃攪拌得到的溶液1個小時，隨后加入疊氮化鈉(6.63g，102mmol)的64.0mL的水溶液。然后于0℃攪拌反應物30分鐘，隨后使反應物溫熱至rt并再攪拌30分鐘。向得到的溶液中加入水(500mL)。過濾黃色固體，用水洗滌，得到標題化合物(83％得率)。1H NMRδ7.85(d，1H)，7.47(s，1H)，6.91(s，1H)，6.14(d，1H)，3.32(s，3H)。
2-甲基噻吩并[3，2-c]吡啶-4(5H)-酮。于230℃，向苯基醚(149mL)和三丁胺(37.0mL)的溶液中逐滴加入于約5.00mL的CH2Cl2中的(2E)-3-(5-甲基-2-噻吩基)丙烯酰疊氮化物(7.60g，39.3mmol)。于230℃攪拌混合物30分鐘，隨后使反應冷卻至rt，隨后加入200mL己烷，得到黃色樣固體。用己烷洗滌得到的固體并在減壓下干燥得到標題化合物(4.84g，74％得率)。1H NMRδ 11.3(s，1H)，7.14(s，2H)，6.73(d，1H)，3.32(s，3H)。
7-溴-2-甲基噻吩并[3，2-c]吡啶-4(5H)-酮。向2-甲基噻吩并[3，2-c]吡啶-4(5H)-酮(4.84g，28.9mmol)于乙酸(84.0mL)的溶液中逐滴加入溴(1.64mL，31.8mmol)。將反應混合物加熱至回流1個小時。1個小時后，將溶液冷卻至rt，加入水直至形成固體。過濾殘余的固體，用水漂洗和真空下干燥，得到標題化合物(6.01g，85％得率)。1H NMRδ11.7(br s，1H)，7.47(s，1H)，7.30(s，1H)，3.38(s，3H)。LCMS(ES，M+H＝245)。
4-氯-2-甲基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。向7-溴-2-甲基噻吩并[3，2-c]吡啶-4(5H)-酮(2.76g，11.3mmol)的約24.0mL N，N-二甲基甲酰胺(DMF)的溶液中加入氰化銅(I)(2.22g，24.9mmol)。于回流下攪拌反應物10個小時，隨后冷卻至rt。然后加入溶于6.30mL的濃HCl和35.0mL的水中的氯化鐵(III)溶液(11.0g，67.8mmol)。于70℃攪拌混合物15分鐘，隨后冷卻至rt。加入水(192mL)并過濾固體并在減壓下干燥。然后用34.0mL的氧氯化磷處理得到的固體和置于回流4個小時，隨后反應冷卻至rt。真空去除溶劑。將殘余物溶解于CH2Cl2，用飽和NaHCO3洗滌，和有機層經MgSO4干燥，過濾和減壓下濃縮得到標題化合物(943mg，40％得率)。1H NMRδ8.78(s，1H)，7.49(s，1H)，3.33(s，3H)。LCMS(ES，M+H＝209)。
(3S)-3-[(7-氰基-2-甲基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。向4-氯-2-甲基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(943mg，4.52mmol)的NMP(5.0mL)的溶液中加入碳酸鉀(1.49g，10.8mmol)和(3S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.72g，13.6mmol)。將反應混合物加熱至130℃直至LCMS指示反應完成。將反應混合物冷卻至rt和加入約100mL的水。過濾得到的固體和真空干燥，得到標題化合物。LCMS(ES，M+Na＝395)。2-甲基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。向含(3S)-3-[(7-氰基-2-甲基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯的燒瓶中加入5.00mL的12N HCl。于rt下攪拌反應物混合物并用LCMS監測。每12小時再加入12N HCl，得到完全轉化的所需產物。待轉化完全時，用水稀釋反應混合物和減壓下濃縮得到產物，經硅膠層析(100％CH2Cl2至20％MeOH/CH2Cl2/3％NH4OH)純化得到標題化合物。1HNMRδ8.42(s，1H)，7.81(br s，1H)，7.41(s，1H)，7.14(s，1H)，7.14(br s，1H)，6.96(d，1H)，4.11(m，1H)，3.31(s，3H)，3.14(m，2H)，2.82(m，2H)，1.94(m，1 H)，1.52(m，1H)，1.36(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝291)。
實施例158 2-(3-氟苯基)-7-[(3S)哌啶-3-基氨基]噻吩并[2，3-c]吡啶-4-甲酰胺(2Z)-3-氰基-3-(3-噻吩基)丙烯酸。向3-噻吩乙腈(166mmol)中加入乙醛酸(174mmol)、MeOH(332mL)和碳酸鉀(174mmol)。將得到的混合物加熱至回流3個小時，隨后冷卻至rt。過濾得到的固體，用MeOH漂洗并在真空烘箱中干燥，得到標題化合物(26.6g，90％得率)。LCMS(ES，M-H＝178)。
(2Z)-3-氰基-3-(3-噻吩基)丙烯酰氯。向草酰氯(27.3mL，313mmol)于CH2Cl2(57mL)的溶液中分部分加入(2Z)-3-氰基-3-(3-噻吩基)丙烯酸(26.6g，149mmol)。于rt下攪拌得到的溶液直至LCMS指示反應完全。然后過濾反應混合物并用CH2Cl2漂洗。收集濾液，減壓下濃縮和真空下干燥，得到直接用于下一反應的黃色固體樣標題化合物(18.5g，63％得率)。
(2Z)-3-氰基-3-(3-噻吩基)丙烯酰疊氮化物。于0℃，向疊氮化鈉(12.2g，187mmol)于二氧六環/水(23mL)中的1∶1混合物的溶液中加入于33mL的二氧六環中的(2Z)-3-氰基-3-(3-噻吩基)丙烯酰氯(18.5g，93.5mmol)。于0℃攪拌反應物15分鐘，隨后使反應物溫熱至rt。約1.5個小時后，加入水(100mL)至反應并過濾得到的固體，并在真空烘箱中干燥，得到標題化合物(15.1g，82％得率)。1H NMRδ 8.24(s，1H)，7.76-7.71(m，2H)，7.25(s，1H)。LCMS(ES，M-H＝204)。
7-氧代-6，7-二氫噻吩并[2，3-c]吡啶-4-腈。于230℃，向苯基醚(224mL)和三丁胺(53.0mL)的溶液中逐滴加入于約10mL的CH2Cl2中的(2Z)-3-氰基-3-(3-噻吩基)丙烯酰疊氮化物。于230℃攪拌混合物30分鐘，冷卻至rt，隨后加入500mL己烷，得到黃色樣固體。用己烷洗滌得到的固體和真空下干燥，得到標題化合物(4.61 g，44％得率)。1H NMR δ12.4(br s，1H)，8.26(m，2H)，7.42(d，1H)。
2-溴-7-氧代-6，7-二氫噻吩并[2，3-c]吡啶-4-腈。向7-氧代-6，7-二氧噻吩并[2，3-c]吡啶-4-腈(2.30g，13.1mmol)于1/1乙酸/DMF(10mL)中的溶液中加入N-溴代琥珀酰亞胺(11.6g，65.3mmol)。將反應混合物加熱至80℃計1小時。使溶液冷卻至rt并用100mL的水稀釋。然后用飽和的碳酸氫鈉中和反應，隨后過濾得到的固體，其在真空烘箱中干燥，得到標題化合物(3.20g，96％得率)。1H NMRδ12.7(br s，1H)，8.41(s，1H)，8.32(d，1H)。LCMS(ES，M+H＝256)。
2-溴-7-氯代噻吩并[2，3-c]吡啶-4-腈。向2-溴-7-氧代-6，7-二氫噻吩并[2，3-c]吡啶-4-腈(3.20g，12.5mmol)中加入45.0mL的氧氯化磷。使反應加熱至回流過夜，之后LCMS指示反應完成。然后使反應冷卻至rt和減壓下去除揮發物。向得到的殘余物中加入約200mL的水。過濾黑色固體并用大量的水漂洗和真空下干燥，得到標題化合物(2.80g，82％得率)。1H NMRδ8.97(s，1H)，8.71(s，1H)。
(3S)-3-[(2-溴-4-氰基噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。向2-溴-7-氯代噻吩并[2，3-c]吡啶-4-腈(2.80g，10.2mmol)的NMP(10.0mL)溶液中加入碳酸鉀(4.23g，30.6mmol)和(3S)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(4.92g，24.6mmol)。將反應混合物加熱至130℃直至LCMS指示反應完成。然后將反應混合物冷卻至rt，加入約100mL的水。過濾得到的固體，真空干燥，得到標題化合物。1H NMRδ 8.47(s，1H)，8.35(s，1H)，7.90(br s，1H)，4.14(m，1H)，3.38(m，1H)，3.24(m，1H)，2.93(m，2H)，1.94-1.73(m，4H)，1.37(s，9H)。LCMS(ES，M+H＝33 8)。
(3S)-3-{[4-氰基-2-(3-氟苯基)噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。向(3S)-3-[(2-溴-4-氰基噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(428mg，0.979mmol)中加入碳酸銫(957mg，2.94mmol)、3-氟苯基硼酸(206mg，1.47mmol)、Pd(PPh3)4(113mg，0.0979mmol)和二氧六環/水(4mL/2mL)。將該反應物加熱至80℃1個小時，隨后將反應冷卻至rt，過濾并用硅膠層析(100％己烷至100％EtOAc)純化，得到標題化合物(241mg，54％得率)。LCMS(ES，M+H＝453)。2-(3-氟苯基)-7-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[2，3-c]吡啶-4-甲酰胺。向含(3S)-3-{[4-氰基-2-(3-氟苯基)噻吩并[2，3-c]吡啶-7-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯的燒瓶中加入約2.00mL的PPA。于110℃攪拌反應物混合物12小時。用10.0mL的水稀釋反應混合物并用6N NaOH調至堿性pH。然后用EtOAc(4×100mL)，隨后用CH2Cl2/MeOH(1/1，4×100mL)提取混合物，經MgSO4干燥和減壓下濃縮，得到產物，經硅膠層析(100％CH2Cl2至20％MeOH/CH2Cl2/3％NH4OH)純化得到標題化合物。1H NMRδ 8.01(s，1H)，7.91(s，1H)，7.51(s，1H)，7.38(m，1H)，7.36(m，4H)，7.34(br s，1H)，6.80(m，1H)，4.21(m，1H)，3.15(m，2H)，2.87(m，2H)，1.92-1.46(m，4H)。LCMS(ES，M+H＝371)。
以類似的方式采用適當的起始原料制備以下實施例159。
實施例160 2-苯基-4-(哌啶-3-基氨基)-1H-吲哚-7-甲酰胺 2-氨基-4-硝基苯甲酸甲酯。向2-氨基-4-硝基苯甲酸(24g，0.132mol)的MeOH(500mL)溶液中緩慢加入亞硫酰氯(96mL)。將得到的溶液回流過夜。待冷卻后，經過濾分離結晶的產物，在高真空下干燥(22.9g，88％)。1H NMRδ7.90(d，1H)7.67(d，1H)7.25(dd，1H)7.13(s，2H)3.84(s，3H)。
4-硝基-2-苯基-1H-吲哚-7-羧酸。向冷卻至-15℃的2-氨基-4-硝基苯甲酸甲基酯(2.2g，11.2mmol)和苯乙酮(2.8g，23.3mmol)的DMSO(30mL)溶液中加入固體KOtBu(2.7g，24mmol)。攪拌20分鐘后，然后于rt下再攪拌2h，用飽和NH4Cl(200mL)猝滅反應，然后于rt下再攪拌1h。過濾紅色沉淀物，用水洗滌和高真空下干燥，得到標題化合物(2.85g，90％)。1H NMR δ12.05(s，1H)7.99(d，1H)7.89(d，2H)7.65(d，1H)7.50(t，2H) 7.44(s，1H)7.41(d，1H)7.30(br s，1H)。LCMS(ES，M-H＝281)。
4-硝基-2-苯基-1H-吲哚-7-甲酰胺。于-1 5℃，向4-硝基-2-苯基-1H-吲哚-7-羧酸(0.60g，2.1mmol)和N-甲基嗎啉(2.3mmol)的CH2Cl2(20mL)的溶液中加入氯甲酸異丁基酯(0.5mL，3.8mmol)。攪拌1h后，向反應混合物中鼓泡通入NH3(g)10-15分鐘，然后于rt下再攪拌1h。去除溶劑后，殘余物經MPLC(SiO2；50-100％EtOAc/己烷)純化，得到暗黃色固體樣產物(0.50g，85％)。1H NMRδ11.72(s，1H)8.46(s，1H)8.11(d，1H)8.02(d，2H)7.92(s，1H)7.76(d，1H)7.50-7.57(m，3H)7.47(d，1H)。LCMS(ES，M+H＝282；M-H＝280)。
4-氨基-2-苯基-1H-吲哚-7-甲酰胺。向用氮-凈化的、攪拌的、溶解于MeOH(30mL)的4-硝基-2-苯基-1H-吲哚-7-甲酰胺(0.50g，17.8mmol)溶液中加入10％Pd/C(30mg)。將得到的非均質性混合物添加H2(g)氣球。于rt下攪拌過夜后，過濾反應物(0.45u，Teflon)。濾液經真空下濃縮得到亮黃色固體樣標題化合物(0.35g，80％)。1H NMRδ10.90(s，1H)7.74(d，3H)7.53(q，4H)7.35(t，1H) 7.12(d，1H)6.22(d，1H)6.10(s，2H)。LCMS(ES，M+H＝252；M-H＝250)。
3-{[7-(氨基羰基)-2-苯基-1H-吲哚-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。向溶解于AcOH(15mL)的4-氨基-2-苯基-1H-吲哚-7-甲酰胺(0.60g，2.4mmol)和3-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.6g，2.8mmol)的溶液中加入Na2SO4。將混合物于rt下攪拌1h，然后緩慢加入用三乙酰氧基硼氫化鈉(1.5g，7.2mmol)。于rt下攪拌反應物1h。用EtOAc和水稀釋該混合物，用飽和NaHCO3、1N HCl和飽和NaCl洗滌。有機層經Na2SO4干燥，過濾和CIV。殘余物經MPLC(SiO2；50-80％EtOAc/己烷)純化得棕褐色固體標題產物(0.3g，30％)。LCMS(ES，M+H＝435；M-H＝433)。2-苯基-4-(哌啶-3-基氨基)-1H-吲哚-7-甲酰胺。將4.0N HCl的二氧六環(10mL)加入攪拌的3-{[7-(氨基羰基)-2-苯基-1H-吲哚-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.15g，0.35mmol)的MeOH(10mL)溶液中。于rt下攪拌反應物2h，然后真空下濃縮得到鹽酸鹽。用2.0N NH3的MeOH(10mL)溶液稀釋殘余物和CIV。殘余物經MPLC(SiO2；10％MeOH/CH2Cl2/1.5％NH4OH-20％MeOH/CH2Cl2/3％NH4OH)純化，得到灰白色固體樣標題化合物(90mg，78％)。1H NMRδ10.87(s，1H)7.69(d，2H)7.57(d，1H)7.45(t，2H)7.28(t，1H)7.20(s，1H)6.96(br s，1H)6.15(d，1H)6.02(d，1H)3.50(d，1H)3.30(s，2H)3.05-3.20(m，2H)2.84(d，1H)2.34-2.46(m，1H)1.98(s，1H)1.60-1.72(m，1H)1.43-1.58(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝335；M-H＝333)。
通過與制備實施例158類似的方式，采用適當的起始原料制備以下實施例161-169。
經實施例160的手性制備型HPLC分離，制備以下實施例170-171。
經實施例166的手性制備型HPLC分離，制備以下實施例172-173。
經實施例161的手性制備型HPLC分離，制備以下實施例174-175。
經實施例162的手性制備型HPLC分離，制備以下實施例176-177。
實施例178 N-甲基-2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺4-{[(3S)-1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-羧酸。向(3S)-3-[(7-氰基-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.00克，4.60mmol)中加入6 N HCl(50mL)，將得到的溶液加熱至回流過夜或直至LCMS指示完全轉化為產物。然后將反應混合物冷卻至rt，減壓下濃縮并在真空烘箱中干燥24小時得到標題化合物。LCMS(ES，M+H＝3 54)。
(3S)-3-({7-[(甲基氨基)羰基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基}氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。將4-{[(3S)-1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-羧酸加入含HATU(81.0mg，0.213mmol)、甲基胺(2 M的THF，0.200mL，0.426mmol)、DIPEA(0.037mL，0.213mmol)和DMF(1.0mL)的圓底燒瓶中。于rt下攪拌反應物12小時，隨后用飽和NH4Cl溶液(2×20mL)洗滌反應混合物，用EtOAc(2×20mL)提取。合并有機層，經硫酸鎂干燥、過濾并在減壓下濃縮。用MPLC(SiO2；100％己烷至100％EtOAc)純化混合物，得到標題化合物。LCMS(ES，M+H＝467)。
N-甲基-2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。向(3S)-3-({7-[(甲基氨基)羰基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基}氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯中加入4 N HCl的二氧六環溶液(5.0mL)，于rt下攪拌反應物20分鐘，隨后減壓濃縮反應物，得到標題化合物。1H NMR δ8.93(m，1H)，8.77(m，1H)，8.49(m，2H)，8.28(m，1H)，7.73(d，2H)，7.50(m，2H)，7.38(m，1H)，4.54(m，1H)，3.21(m，2H)，2.92(m，2H)，2.83(d，3H)，2.00(m，2H)，1.72(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝367)。
以類似的方式合成實施例179。
實施例180 2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-N-吡嗪-2-基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 4-{[(3S)-1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-羧酸。向(3S)-3-[(7-氰基-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.00克，4.60mmol)中加入6N HCl(50mL)，得到的溶液加熱至回流過夜或直至LCMS指示完全轉化為產物。然后將該反應物冷卻至rt，減壓下濃縮并在真空烘箱中干燥24小時，得到標題化合物。LCMS(ES，M+H＝354)。
(3S)-3-({2-苯基-7-[(吡嗪-2-基氨基)羰基]噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基}氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。于0℃，向含氨基吡嗪(113mg，1.19mmol)的甲苯(1.0mL)溶液的圓底燒瓶中加入三甲基鋁(2.0M在己烷中，0.600mL，1.19mmol)。于rt下攪拌該溶液30分鐘，然后將其加入含4-{[(3S)-1-(叔-丁氧基羰基)哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-羧酸(108mg，0.238mmol)、HATU(136mg，0.358mmol)、DIPEA(0.064mL，0.358mmol)和DMF(1.0mL)的圓底燒瓶中。于100℃攪拌反應物12小時，隨后用飽和NH4Cl溶液(2×20mL)洗滌反應混合物并用EtOAc(2×20mL)提取。合并有機層，經硫酸鎂干燥、過濾并在減壓下濃縮，混合物經制備型HPLC(5％至95％MeCN/水/0.1％TFA)純化得到標題化合物。LCMS(ES，M+H＝531)。
2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-N-吡嗪-2-基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。向(3S)-3-({2-苯基-7-[(吡嗪-2-基氨基)羰基]噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基}氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯中加入4 N HCl的二氧六環溶液(5.0mL)，于rt下攪拌反應物20分鐘，隨后減壓下濃縮反應物，得到標題化合物。1H NMRδ11.12(s，1H)，9.44(s，1H)，8.94(s，1H)，8.80(br s，1H)，8.48(s，1H)，8.42(s，1H)，8.34(s，1H)，7.88(m，1H)，7.76(m，2H)，7.52(m，2H)，7.40(m，1H)，4.61(m，1H)，3.24(m，2H)，2.94(m，2H)，2.02(m，2H)，1.75(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝431)。實施例181 4-{[2-(羥基甲基)哌啶-3-基]氧基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)吡啶-3-醇。向2-(羥基甲基)吡啶-3-醇(14.86g，91.96mmol)于150mL THF中加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯(15.2g，101mmol)和N，N-二甲基氨基吡啶(20.0g，101mmol)。于rt下攪拌反應物4個小時，隨后用EtOAc(3×100mL)提取反應物并用水洗滌。合并的有機層經硫酸鎂干燥、過濾并在減壓下濃縮，經MPLC(SiO2；100％己烷至100％EtOAc)純化后得到白色固體樣標題化合物。LCMS(ES，M+H＝240)。
2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)哌啶-3-醇。于氮氣氛下，向含2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)吡啶-3-醇(4.00g，16.7mmol)的高壓容器中加入各10mL的EtOH和水，隨后加入氧化鉑(IV)(1.00g)。減壓下抽空高壓容器并置于50psi帕爾氫化器中24小時。然后于氮氣氛下抽出混合物，經硅藻土墊過濾并用大量MeOH漂洗。真空下濃縮收集的濾液，得到作為異構體的混合物的標題化合物(約10％的次要非對映異構體)。LCMS(ES，M+H＝246)。
2-溴-4-{[2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)哌啶-3-基]氧基}噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。向溶解于3.0mL THF的2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)哌啶-3-醇(295mg，1.20mmol)中加入氫化鈉(30.0mg，1.20mmol)，將得到的混合物于rt下攪拌20分鐘。然后加入2-溴-4-氯代噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(293mg，1.07mmol)于3.0mL THF中的漿液，并于rt下攪拌反應物1個小時。用碳酸氫鈉(10mL)稀釋并用EtOAc(2×20mL)提取得到的混合物。合并有機層，經硫酸鎂干燥、過濾并在減壓下濃縮，得到標題化合物。LCMS(ES，M+H＝483)。
4-{[2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)哌啶-3-基]氧基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈。向2-溴-4-{[2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)哌啶-3-基]氧基}噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(516mg，1.07mmol)中加入苯基硼酸(194mg，1.61mmol)、碳酸銫(1.04g，3.21mmol)、二氧六環/水(4 mL/2 mL)，然后加入Pd(PPh3)4(1 24mg，0.107mmol)。將該反應物加熱至80℃計1個小時，隨后使反應冷卻至rt，過濾并用MPLC(SiO2，100％己烷至100％EtOAc)純化，得到標題化合物。LCMS(ES，M+H＝480)。
4-{[2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)哌啶-3-基]氧基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。向含4-{[2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)哌啶-3-基]氧基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈的燒瓶中加入5.00mL的12N HCl。于rt下攪拌反應物混合物并用LCMS監測。每12小時再加入12N HCl，得到完全轉化的所需產物。待轉化完全時，用MeOH稀釋反應混合物和減壓下濃縮得到產物，其經MPLC(SiO2，100％CH2Cl2至20％MeOH/CH2Cl2/3％NH4OH)純化，得到作為異構體的混合物的標題化合物(約10％的次要非對映異構體)。提供存在于混合物中的主要異構體的分析數據1H NMRδ9.31(m，1H)，8.93(m，1H)，8.64(s，1H)，8.44(s，1H)，8.27(m，1H)，7.84(d，2H)，7.69(m，1H)，7.46(m，3H)，5.70(m，1H)，3.68(m，2H)，3.54(m，1H)，3.34(m，1H)，3.06(m，1H)，2.17(m，1H)，1.85(m，2H)，1.67(m，1H)。LCMS(ES，M+H＝384)。實施例182 4-{[2-(羥基甲基)哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 2-(甲氧基羰基)煙酸。向呋喃并[3，4-b]吡啶-5，7-二酮(41.0g，275mmol)中加入200mL的MeOH。將該反應物加熱至回流約1個小時，隨后真空濃縮得到作為異構體的混合物標題化合物和3-(甲氧基羰基)吡啶-2-羧酸(分別為2.3∶1)。LCMS(ES，M+H＝182)。
3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]吡啶-2-羧酸甲酯。向2-(甲氧基羰基)煙酸和3-(甲氧基羰基)吡啶-2-羧酸(10.46g，57.7mmol)的混合物中加入叔-丁醇(100mL)和TEA(8.85mL，63.5mmol)。于rt下攪拌反應物5分鐘，然后加入二苯基磷酰基疊氮化物(13.1mL，60.6mmol)。將該反應物加熱至回流并攪拌約4個小時。將反應混合物冷卻至rt，濃縮至干燥，再溶解于EtOAc并用水和飽和的碳酸氫鈉(各為2×20mL)洗滌。合并有機層，經硫酸鎂干燥、過濾并在減壓下濃縮。混合物經柱層析純化(100％己烷至100％EtOAc)，得到標題化合物和2-[(叔-丁氧基羰基)氨基]煙酸甲基酯(9.24g，64％得率)。LCMS(ES，M+Na＝275)。[2-(羥基甲基)吡啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯。向3-[(叔-丁氧基羰基)氨基]吡啶-2-羧酸甲酯和2-[(叔-丁氧基羰基)氨基]煙酸甲酯(5.00g，19.8mmol)中加入THF/MeOH(30mL/3mL)，使反應冷卻至0℃，隨后加入硼氫化鈉(1.49g，39.6mmol)。將反應溫熱至rt并攪拌4個小時。然后將反應混合物溶解于EtOAc中并用飽和的碳酸氫鈉溶液洗滌。合并有機層，經硫酸鎂干燥、過濾并在減壓下濃縮，經制備型HPLC(5-95％MeCN/水/0.1％TFA)分離，得到標題化合物和[3-(羥基甲基)吡啶-2-基]氨基甲酸叔丁酯。所需的異構體經1D NOE NMR實驗證實。1H NMRδ8.78(br s，1H)，8.17(m，1H)，8.10(d，1H)，7.27(dd，1H)，4.64(s，2H)，1.46(s，9H)。LCMS(ES，M+H＝225)。
[2-(羥基甲基)哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯。氮氣氛下，向含[2-(羥基甲基)吡啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(1.46g，6.51mmol)的高壓容器中加入各5mL的EtOH和水，隨后加入氧化鉑(IV)(500mg)。減壓下抽空高壓容器并置于50psi帕爾氫化器中24小時。然后于氮氣氛下抽出混合物，經硅藻土墊過濾并用大量MeOH漂洗。真空下濃縮收集的濾液，得到作為異構體的混合物的標題化合物。MS m/z 231(M+H)。
3-氨基-2-(羥基甲基)哌啶-1-羧酸芐酯。向圓底燒瓶中加入[2-(羥基甲基)哌啶-3-基]氨基甲酸叔丁酯(785mg，3.41mmol)，DIPEA(0.653mL，3.75mmol)和CH2Cl2(10mL)。將燒瓶冷卻至0℃，加入氯代碳酸芐基酯(benzyl chloridocarbonate)(0.504mL，3.58mmol)。將反應物溫熱至rt并攪拌12小時，隨后用CH2Cl2和EtOAc提取該混合物并用飽和碳酸氫鈉洗滌。合并的有機層經硫酸鎂干燥、過濾并在減壓下濃縮。殘余物經MPLC(SiO2；100％己烷至100％EtOAc至20％MeOH/CH2Cl2)純化和直接用4N HCl的二氧六環溶液(5mL)處理30分鐘。減壓下濃縮反應混合物，得到標題化合物。LCMS(ES，M+H＝265)。
3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]-2-(羥基甲基)哌啶-1-羧酸芐酯。向含3-氨基-2-(羥基甲基)哌啶-1-羧酸芐酯(246mg，0.932mmol)的圓底燒瓶中加入2-溴-4-氯代噻吩并[3，2-c]吡啶-7-腈(128mg，0.466mmol)、碳酸鉀(100mg，0.700mmol)和NMP(5.0mL)。將反應混合物加熱至80℃，每小時用LCMS監測反應完成，隨后將混合物冷卻至rt。加入水(50mL)并過濾得到的固體，在減壓下干燥12小時得到標題化合物。LCMS(ES，M+H＝502)。
3-[(7-氰基-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]-2-(羥基甲基)哌啶-1-羧酸芐酯。向3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]-2-(羥基甲基)哌啶-1-羧酸芐酯(0.466mmol)中加入苯基硼酸(0.699mmol)、碳酸銫(0.932mmol)、二氧六環/水(2.0mL/1.0mL)，然后加入Pd(PPh3)4(0.0466mmol)。將反應物加熱至80℃計1個小時，隨后將反應冷卻至rt，過濾并用MPLC(SiO2；100％己烷至100％EtOAc)純化得到標題化合物。LCMS(ES，M+H＝499)。
4-{[2-(羥基甲基)哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。向含3-[(7-氰基-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]-2-(羥基甲基)哌啶-1-羧酸芐酯的燒瓶中加入5.00mL的12N HCl。于rt下攪拌反應物混合物并用LCMS監測。每12小時再加入12N HCl，得到完全轉化的所需產物。待轉化完全時，用MeOH稀釋反應混合物，在減壓下濃縮得到產物，其經制備型HPLC(5-95％MeCN/水/0.1％TFA)純化，得到作為異構體的混合物的標題化合物(大約比例為1/1)。1H NMRδ9.95(m，1H)，9.21(m，1H)，8.98(m，1H)，8.70(m，1H)，8.51(m，1H)，8.38(m，1H)，8.15(m，1H)，7.77(m，2H)，7.44(m，3H)，4.88(m，1H)，3.76(m，1H)，3.28(m，2H)，2.96(m，2H)，2.10(m，2H)，1.87(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝383)。
實施例183 2-苯基-7-[(3S)-哌啶-3-基氧基]-1H-苯并咪唑-4-甲酰胺 4-氟-3-硝基苯甲酰胺。向4-氟-3-硝基苯甲酸(12.0g，64.8mmol)中逐滴加入CH2Cl2(300mL)、草酰氯(16.7mL，195mmol)和約0.100mL DMF。于rt下攪拌該混合物3個小時，隨后將反應冷卻至-78℃和向溶液中鼓泡通入液體NH3約20分鐘。得到的黃色固體經MPLC(SiO2；100％己烷至100％EtOAc)純化，得到標題化合物(9.00g，76％得率)。LCMS(ES，M-H＝183)。
(3S)-3-[4-(氨基羰基)-2-硝基苯氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。向含有溶解于5.00mL的DMF的(3S)-3-羥基哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.97g，19.7mmol)的溶液中加入氫化鈉(473mg，19.7mmol)。于rt下攪拌所得到的溶液30分鐘，隨后加入溶解于5.00mL DMF的4-氟-3-硝基苯甲酸(3.29g，17.9mmol)。于rt下攪拌該混合物12小時或直至LCMS指示完全轉化為產物。然后向反應混合物中加入20mL水，過濾所得到的固體并在減壓下干燥，得到標題化合物(4.15g，63％得率)。LCMS(ES，M+H＝366)。(3S)-3-[2-氨基-4-(氨基羰基)苯氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。
向溶解于50mL MeOH的(3S)-3-[4-(氨基羰基)-2-硝基苯氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(4.15g，11.4mmol)的溶液中加入10％Pd/C(800mg)。向得到的混合物中充填氫12小時或直至LCMS指示完全轉化為產物。經硅藻土過濾混合物并用大量MeOH漂洗，經MPLC(SiO2；100％己烷至100％EtOAc至20％MeOH/CH2Cl2)純化后得到所需的產物。LCMS(ES，M+H＝336)。
(3S)-3-(4-(氨基羰基)-2{[亞氨基(苯基)甲基]氨基}苯氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。于0℃，將三甲基鋁(2M在己烷中，17.9mL，35.8mmol)加入(3S)-3-[2-氨基-4-(氨基羰基)苯氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.20g，3.58mmol)的20mL THF的溶液中。將該混合物溫熱至rt并攪拌1個小時，隨后加入芐腈(3.66mL，35.8mmol)的10mL THF溶液。于60℃攪拌溶液直至LCMS指示起始原料完全消耗。將混合物冷卻至0℃。逐滴加入10％四水合酒石酸鉀鈉溶液(約20mL)。用EtOAc(4×20mL)提取混合物，有機層經硫酸鎂干燥，過濾和真空下濃縮得到一物質，經MPLC(SiO2；CH2Cl2至20％MeOH/CH2Cl2)純化，得到標題化合物(464mg，30％得率)。LCMS(ES，M+H＝439)。
(3S)-3-{[4-(氨基羰基)-2-苯基-1H-苯并咪唑-7-基]氧基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。向溶解于各3.0mL MeOH和水的(3S)-3-(4-(氨基羰基)-2-{[亞氨基(苯基)甲基]氨基}苯氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯溶液中，逐滴加入次氯酸鈉(0.100mL，1.17mmol)。于rt下攪拌所得到的溶液5分鐘，隨后加入碳酸鈉(148mg)的3.0mL水溶液。然后將溶液加熱至回流并用LCMS監測反應完成。待起始原料一消耗，將該混合物冷卻至rt，用EtOAc和CH2Cl2/MeOH(1/1)提取，有機層經硫酸鎂干燥、過濾并在減壓下濃縮。得到的混合物經MPLC(SiO2；100％CH2Cl2至20％MeOH/CH2Cl2)純化，得到標題化合物。LCMS(ES，M+H＝437)。
2-苯基-7-[(3S)-哌啶-3-基氧基]-1H-苯并咪唑-4-甲酰胺。向(3S)-3-{[4-(氨基羰基)-2-苯基-1H-苯并咪唑-7-基]氧基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(18.7mg，0.043mmol)中加入5.0mL的4.0N HCl的二氧六環溶液。于rt下攪拌反應物約30分鐘，真空減壓下濃縮，高真空下干燥，得到標題化合物。1H NMRδ9.60(m，1H)，9.10(m，2H)，8.48(s，2H)，7.98(m，1H)，7.85(m，1H)，7.63(m，3H)，7.03(d，1H)，5.16(m，1H)，4.13(m，1H)，3.69(m，1H)，3.46(m，1H)，3.27(m，1H)，2.00(m，2H)，1.79(m，1H)，1.62(m，1H)。LCMS(ES，M+H＝337)。
實施例184 2-{4-[4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基]苯基}-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜戊環-2-基)苯基]哌嗪。向4-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜戊環-2-基)苯基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(235mg，0.656mmol)中加入5.0mL的4N HCl的二氧六環溶液，于rt下攪拌得到的溶液2個小時，隨后減壓下濃縮該溶液，得到白色固體樣標題化合物。1H NMRδ9.14(br s，1H)，7.54(d，2H)，6.96(d，2H)，3.43(m，4H)，3.18(m，4H)，1.25(s，12H)。
(3S)-3-{[7-氰基-2-(4-哌嗪-1-基苯基)噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。向1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼雜戊環-2-基)苯基]哌嗪(58.0mg，0.225mmol)中加入(3S)-3-[(2-溴-7-氰基噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(361mg，0.826mmol)、碳酸銫(806mg，2.48mmol)、Pd(PPh3)4(95.4mg，0.0826mmol)和二氧六環/水(2.0mL/1.0mL)。于80℃攪拌反應物30分鐘、冷卻至rt，過濾，用大量EtOAc漂洗，經硫酸鎂干燥和減壓下濃縮。用MPLC(SiO2；100％CH2Cl2至20％CH3OH/CH2Cl2/3％NH4OH)純化混合物得到標題化合物。LCMS(ES，M+H＝519)。
(3S)-3-[(7-氰基-2-{4-[4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基]苯基}噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯。向溶解于5.0mL THF的(3S)-3-{[7-氰基-2-(4-哌嗪-1-基苯基)噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(74.0mg，0.143mmol)中逐滴加入TEA(0.0239mL，0.172mmol)，然后逐滴加入甲烷磺酰氯(0.0133mL，0.172mmol)。于rt下攪拌反應物約1個小時，隨后用飽和的碳酸氫鈉溶液(2×20mL)洗滌并用EtOAc(2×20mL)提取反應混合物。有機層經硫酸鎂干燥、過濾并在減壓下濃縮，用MPLC(SiO2；100％CH2Cl2至20％CH3OH/CH2Cl2/3％NH4OH)純化后得到標題化合物。LCMS(ES，M+H＝597)。
2-{4-[4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基]苯基}-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。向(3S)-3-[(7-氰基-2-{4-[4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基]苯基}噻吩并[3，2-c]吡啶-4-基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯中加入約5mL 12N HCl和于rt下攪拌所得到的溶液12小時或直至LCMS指示完全轉化為所需的產物。用MeOH稀釋得到的反應混合物，減壓下濃縮并用MPLC(SiO2；100％CH2Cl2至20％CH3OH/CH2Cl2/3％NH4OH)純化，得到標題化合物。1H NMRδ9.40(m，1H)，8.87(m，1H)，8.48(s，2H)，8.31(m，2H)，7.66(d，2H)，7.12(d，2H)，4.53(m，1H)，3.38(m，5H)，3.25(m，5H)，3.03(m，2H)，2.94(s，3H)，2.01(m，2H)，1.78(m，2H)。LCMS(ES，M+H＝515)。
以類似的方式，采用適當的起始原料制備實施例185-189。
實施例190 4-[(4-羥基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 以與實施例1類似的方式，但使用反式-3-氨基-4-羥基哌啶-1-羧酸芐酯(按在J.Med.Chem.1997，40，226中描述合成)作為步驟7中的起始原料制備。1H NMRδ9.29(m，1H)，8.85(m，1H)，8.60(m，1H)，8.51(s，1H)，8.19(m，1H)，7.77(d，2H)，7.56(m，1H)，7.50(dd，2H)，7.40(dd，1H)，4.42(m，1H)，4.0-4.3(br s，1H)，3.88(m，1H)，3.51(m，1H)，3.27(m，1H)，3.05(m，2H)，2.16(m，1H)，1.73(m，1H)。LCMS(ES，M+H＝369)。
以類似的方式制備實施例191。
實施例192 4-[(3-羥基哌啶-4-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺 以與實施例1類似的方式，但使用反式-4-氨基-3-羥基哌啶-1-羧酸芐酯(按在J.Med.Chem.1997，40，226中描述合成)作為步驟7中的起始原料制備。1H NMR δ 8.85(m，1H)，8.73(m，1H)，8.48(s，1H)，8.36(br，1H)，8.08(m，1H)，7.75(d，2H)，7.55(br，1H)，7.51(t，2H)，7.40(t，1H)，5.74(br，1H)，4.33(m，1H)，3.93(m，1H)，3.38(m，2H)，3.04(m，1H)，2.86(m，1H)，2.27-2.16(m，1H)，1.90-1.67(m，1H)。LCMS(ES，M+H＝369)。
以與實施例192類似的方式制備實施例193。
以與實施例58類似的方式，采用適當的起始原料制備實施例194-195。
以與實施例69-70類似的方式，采用適當的起始原料制備實施例196-197。

權利要求
1.一種式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽，
其中
A和D各自獨立選自N、CH、S、O和NR4；
L選自NR5、O和S；
X和Y各自獨立選自N和CH；
R1選自氰基、鹵代；C1-6烷基、-NR11R12、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、環烷基、環烯基、芳基、雜環基、OR6；-CO碳環基、-CO雜環基、-CO(C1-6烷基)、-CONR28R29、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳環基、-S(O)x雜環基、S(O)yNR28R29和-(C1-6烷基)S(O)yNR28R29，其中x獨立為0-2和y獨立為1或2；和其中R1可在一個或多個碳原子上被一個或多個R9任選取代；和其中如果雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R10的基團任選取代；
R2選自(C1-3烷基)NR7R8、含至少一個氮原子的4-至7-元雜環、-CO碳環基、-CO雜環基、-CO(C1-6烷基)、-CONR28R29、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳環基、-CO2雜環基、-CO2NR28R29、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x環烷基、-S(O)x環烯基、-S(O)x雜環基、S(O)yNR28R29和-(C1-6烷基)S(O)yNR28R29其中x獨立為0-2和y獨立為1或2和其中R2可在一個或多個碳原子上被一個或多個R13任選取代；和其中如果雜環基還含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R14的基團任選取代；
R3選自H、芐基、C1-6烷基、環烷基、環烯基、芳基、雜環基、OR6、CHO、-CO碳環基、-CO(C1-6烷基)、-CONR28R29、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳環基、-S(O)x雜環基、S(O)yNR28R29和-(C1-6烷基)S(O)yNR28R29，其中x獨立為0-2，y獨立為1或2和其中R3可在一個或多個碳原子上被一個或多個R15任選取代；和其中如果雜環基含-NH-部分，則所述氮可被選自R16的基團任選取代；
R4選自H、C1-3烷基、環丙基和CF3；
R5選自H、C1-6烷基、環烷基、環烯基、雜環基和OR6；其中R5可在碳上被一個或多個R17任選取代；和其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R18的基團任選取代；
R6選自H、C1-6烷基、環烷基、環烯基、芳基和雜環基；其中R6可在碳上被一個或多個R19任選取代；和其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R24的基團任選取代；
R7和R8獨立選自H、C1-6烷基、環烷基、環烯基、芳基和雜環基；其中R7和R8各自獨立地可在碳上被一個或多個R20任選取代；和其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R21的基團任選取代；
R11和R12獨立選自H、C1-6烷基、環烷基、環烯基、芳基、雜環基，其中R11和R12各自獨立地可在碳上被一個或多個R32任選取代；和其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R33的基團任選取代；
R9、R13、R15、R17、R19、R20、R32和R34各自獨立選自鹵代、硝基、-NR28R29、氰基、異氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、環烷基、環烯基、雜環基、羥基、酮基(＝O)、-O(C1-6烷基)、-O碳環基、-O雜環基、-O芳基、-OC(O)C1-6烷基、-NHCHO、-N(C1-6烷基)CHO、-NHCONR28R29、-N(C1-6烷基)CONR28R29、-NHCO(C1-6烷基)、-NHCO碳環基、-NHCO(雜環基)、-NHCO2(C1-6烷基)；-NHCO2H、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-NHSO2(C1-6烷基)、羧基、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO雜環基、-CO環烷基、-CO環烯基、-CO芳基、-CO2H、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳環基、-CO2雜環基、-OC(O)(NR28R29)、巰基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳環基、-S(O)x雜環基和-S(O)xNR28R29；其中x獨立為0-2，其中R9、R13、R15、R17、R19、R20、R32和R34各自獨立地可在碳上被一個或多個R22任選取代和其中如果雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R23的基團任選取代；
R10、R14、R16、R18、R21、R24、R33和R35各自獨立選自氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、環烷基、環烯基、雜環基、羥基、-O(C1-6烷基)、-O碳環基、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO雜環基、-CO碳環基-CO芳基、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳環基、-CO2雜環基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳環基、-S(O)x雜環基和-S(O)yNR28R29；其中x獨立為0-2和y獨立為1或2；其中R10、R14、R16、R18、R21、R24、R33和R35各自獨立地可在碳上被一個或多個R25任選取代和其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R26的基團任選取代；
R22和R25各自獨立選自鹵代、硝基、-NR28R29、氰基、異氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、環烷基、環烯基、雜環基、羥基、酮基(＝O)、-O(C1-6烷基)、-O碳環基、-O雜環基、-O芳基、-OC(O)C1-6烷基、-NHCHO、-N(C 1-6烷基)CHO、-NHCONR28R29、-N(C1-6烷基)CONR28R29、-NHCO(C1-6烷基)、-NHCO碳環基、-NHCO(雜環基)、-NHCO2(C1-6烷基)；-NHCO2H、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-NHSO2(C1-6烷基)、羧基、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO雜環基、-CO環烷基、-CO環烯基、-CO2H、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳環基、-OC(O)(NR28R29)、巰基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳環基、-S(O)x雜環基和-S(O)xNR28R29；其中x獨立為0-2，其中R22和R25可在碳上被一個或多個R36任選取代和其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R27的基團任選取代；
R23和R26各自獨立選自氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、環烷基、環烯基、雜環基、羥基、-O(C1-6烷基)、-O碳環基、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO雜環基、-CO環烷基、-CO環烯基、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳環基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳環基、-S(O)x雜環基和-S(O)yNR28R29；其中x獨立為0-2和y獨立為1或2；其中R23和R26各自獨立地可在碳上被一個或多個R30任選取代和其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R31的基團任選取代；
R28和R29各自獨立選自H、氨基、氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、環烷基、環烯基、雜環基、羥基、-O(C1-6烷基)、-O芳基、-OCO烷基、-脒基、-CHO、-CO(C1-6烷基)、-CO雜環基、-CO環烷基、-CO環烯基、-SO(C1-6烷基)、-SO2(C1-6烷基)、其中R28和R29各自獨立地可在碳上被一個或多個R34任選取代；和其中如果所述雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R35的基團任選取代；
R30和R36各自獨立選自鹵代、硝基、-NR28R29、氰基、異氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、環烷基、環烯基、雜環基、羥基、酮基(＝O)、-O(C1-6烷基)、-O碳環基、-OC(O)C1-6烷基、-NHCHO、-N(C1-6烷基)CHO、-NHCONR28R29、-N(C1-6烷基)CONR28R29、-NHCO(C1-6烷基)、-NHCO碳環基、-NHCO(雜環基)、-NHCO2(C1-6烷基)；-NHCO2H、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-NHSO2(C1-6烷基)、羧基、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO雜環基、-CO環烷基、-CO環烯基、-CO2H、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳環基、-OC(O)(NR28R29)、巰基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳環基、-S(O)x雜環基和-S(O)xNR28R29；其中x獨立為O-2；
R27和R31各自獨立選自氰基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、芳基、環烷基、環烯基、雜環基、羥基、-O(C1-6烷基)、-O碳環基、-(C1-6烷基)-O-(C1-6烷基)、-脒基、-CHO、-CONR28R29、-CO(C1-6烷基)、-CO雜環基、-CO環烷基、-CO環烯基、-CO2(C1-6烷基)、-CO2碳環基、-S(O)x(C1-6烷基)、-S(O)x碳環基、-S(O)x雜環基和-S(O)yNR28R29；其中x獨立為0-2和y獨立為1或2。
2.依據權利要求1的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R2選自(C1-3烷基)NR7R8和含至少一個氮原子的4-至7-元雜環，其中R2可在一個或多個碳原子上被一個或多個R13任選取代；和其中如果雜環基還含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R14的基團任選取代。
3.依據權利要求1的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R2為含至少一個氮原子的4-至7-元雜環，其中R2可在一個或多個碳原子上被一個或多個R13任選取代；和其中如果雜環基還含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R14的基團任選取代。
4.依據權利要求1的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R1選自芳基和雜環基和其中R1可在一個或多個碳原子上被一個或多個R9任選取代；和其中如果雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R10的基團任選取代。
5.依據權利要求1的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中R3為H。
6.依據權利要求1的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中X為N；Y為CH；A為CH和D為S。
7.依據權利要求1的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中X為CH；Y為CH；A為CH和D為NR4。
8.依據權利要求1的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中L為NR5。
9.依據權利要求1的式I化合物或其藥學上可接受的鹽，其中
A為CH；
D為S；
L為NR5；
X為N；
Y為CH；
R1選自C1-6烷基、芳基和雜環基，其中R1可在一個或多個碳原子上被一個或多個R9任選取代；和其中如果雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R10的基團任選取代；
R2為含至少一個氮原子的4-至7-元雜環，其中R2可在一個或多個碳原子上被一個或多個R13任選取代；和其中如果雜環基還含有-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R14的基團任選取代；
R3為H；
R5為H或C1-3烷基。
10.依據權利要求1的式I化合物或其藥學上可接受的鹽，其中
A為CH；
D為NR4；
L為NR5；
X為CH；
Y為CH；
R1選自C1-6烷基、芳基和雜環基，其中R1可在一個或多個碳原子上被一個或多個R9任選取代；和其中如果雜環基含-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R10的基團任選取代；
R2為含至少一個氮原子的4-至7-元雜環，其中R2可在一個或多個碳原子上被一個或多個R13任選取代；和其中如果雜環基還含有-NH-部分，則所述部分的氮可被選自R14的基團任選取代；
R3為H；
R4為H、C1-3烷基、環丙基和CF3；
R5為H或C1-3烷基。
11.依據權利要求1的式I化合物或其藥學上可接受的鹽，所述化合物選自
1) 2-苯基-4-[(3 S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
2) 4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-2-(3-噻吩基)噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
3) 2-(3-氟苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
4) 4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-2-(2-噻吩基)噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰 胺；
5) 2-(4-氟苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
6) 2-(3，4-二氟苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
7) 2-(1-芐基-1H-吡唑-4-基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
8) 4-{甲基[(3S)-哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
9) 2-(3-氟苯基)-4-{甲基[(3S)-哌啶-3-基]氨基}噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
10) 2-(4-氟苯基)-4-{甲基[(3S)-哌啶-3-基]氨基}噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
11) 4-{甲基[(3S)-哌啶-3-基]氨基}-2-(3-噻吩基)噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
12) 4-{[反式-2-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
13) 2-(3-氟苯基)-4-{[反式-2-甲基哌啶-3-基]氨基}噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
14) 4-{[反式-2-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-(3-噻吩基)噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
15) 2-(4-氟苯基)-4-{[反式-2-甲基哌啶-3-基]氨基}噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
16) 4-{[(2R，3S)-2-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
17) 4-{[(2R，3S)-2-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-(3-噻吩基)噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
18) 4-{甲基[反式-2-甲基哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
19) 4-[(2，6-二甲基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
20) 4-[(2，6-二甲基哌啶-3-基)氨基]-2-(3-氟苯基)噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
21) 4-[(2，6-二甲基哌啶-3-基)氨基]-2-(3-噻吩基)噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
22) 4-[(6-甲基哌啶-3-基)氨基]-2-(3-噻吩基)噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
23) 4-[(6-甲基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
24) 2-{4-[(二甲基氨基)甲基]苯基}-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
25) 4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-2-[4-(哌啶-1-基甲基)苯基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
26) 2-[4-(嗎啉-4-基甲基)苯基]-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
27) 2-(4-氯苯基)-4-(哌啶-3-基氨基)-1H-吲哚-7-甲酰胺；
28) 2-(4-氟苯基)-4-(哌啶-3-基氨基)-1H-吲哚-7-甲酰胺；
29) 2-苯基-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-1H-吲哚-7-甲酰胺；
30) 2-(3-氟苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-1H-吲哚-7-甲酰胺；
31) 2-(4-氯苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-1H-吲哚-7-甲酰胺；
32) 2-(4-氟苯基)-4-[(3S)-哌啶-3-基氨基]-1H-吲哚-7-甲酰胺；
33) 4-{乙基[(3S)-哌啶-3-基]氨基}-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
34) 4-{乙基[(3S)-哌啶-3-基]氨基}-2-(3-噻吩基)噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；
35) 4-[(反式-2-乙基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺；和
36) 4-[(順式-2-乙基哌啶-3-基)氨基]-2-苯基噻吩并[3，2-c]吡啶-7-甲酰胺。
12.一種權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽，所述化合物用于治療或預防與癌癥相關的疾患。
13.一種權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽，所述化合物用于治療或預防腫瘤性疾病，如乳腺癌、卵巢癌、肺癌、結腸癌、直腸癌、前列腺癌、膽道癌、骨癌、膀胱癌、頭頸部癌、腎癌、肝癌、胃腸組織癌、食管癌、胰腺癌、皮膚癌、睪丸癌、甲狀腺癌、子宮癌、宮頸癌、陰道癌或其它組織的癌癥，以及白血病和淋巴瘤，包括CLL和CML，中樞和外周神經系統的腫瘤和其它腫瘤類型諸如黑色素瘤、多發性骨髓瘤、纖維肉瘤和骨肉瘤和惡性腦腫瘤。
14.一種權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽，所述化合物用于治療或預防包括自身免疫性疾病、炎癥、神經性疾病和心血管疾病的增殖性疾病。
15.一種在人或動物中限制細胞增殖的方法，所述方法包括給予所述人或動物有效治療量的權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。
16.一種治療罹患癌癥的人或動物的方法，所述方法包括給予所述人或動物有效治療量的權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。
17.一種預防性治療癌癥的方法，所述方法包括給予需要這樣的治療的人或動物有效治療量的權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。
18.一種治療罹患腫瘤性疾病的人或動物的方法，所述腫瘤性疾病為例如乳腺癌、卵巢癌、結腸癌、直腸癌、前列腺癌、膽道癌、骨癌、膀胱癌、頭頸部癌、腎癌、肝癌、胃腸組織癌、食管癌、胰腺癌、皮膚癌、睪丸癌、甲狀腺癌、子宮癌、宮頸癌、陰道癌或其它組織的癌癥，以及白血病和淋巴瘤，包括CLL和CML，中樞和外周神經系統的腫瘤和其它腫瘤類型例如黑色素瘤、多發性骨髓瘤、纖維肉瘤和骨肉瘤，及惡性腦腫瘤，權利要求1-11中任何一項的要求的或其藥學上可接受的鹽。
19.一種治療罹患增殖性疾病如自身免疫性疾病、炎癥、神經性疾病和心血管疾病的人或動物的方法，所述方法包括給予所述人或動物有效治療量的權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。
20.一種治療癌癥的方法，所述方法包括給予人權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽和抗腫瘤藥。
21.一種治療癌癥的方法，所述方法包括給予人或動物權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽和DNA損傷劑。
22.一種治療與癌癥相關聯的感染的方法，所述方法包括給予需要這樣的治療的人或動物有效治療量的權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。
23.一種預防性治療與癌癥相關聯的感染的方法，所述方法包括給予需要這樣的治療的人或動物有效治療量的權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。
24.一種藥用組合物，它包含權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽以及至少一種藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
25.權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽在制備藥物中的應用。
26.權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于治療或預防癌癥的藥物中的應用。
27.權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于治療或預防腫瘤性疾病的藥物中的應用，所述腫瘤性疾病為例如乳腺癌、卵巢癌、肺癌、結腸癌、直腸癌、前列腺癌、膽道癌、骨癌、膀胱癌、頭頸部癌、腎癌、肝癌、胃腸組織癌、食管癌、胰腺癌、皮膚癌、睪丸癌、甲狀腺癌、子宮癌、宮頸癌、陰道癌或其它組織的癌癥，以及白血病和淋巴瘤包括CLL和CML，中樞和外周神經系統的腫瘤和其它腫瘤類型諸如黑色素瘤、多發性骨髓瘤、纖維肉瘤和骨肉瘤，及惡性腦腫瘤。
28.權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于治療或預防增殖性疾病的藥物中的應用，所述增殖性疾病包括自身免疫性疾病、炎癥、神經性疾病和心血管疾病。
29.一種抑制CHK1激酶的方法，所述方法包括給予需要所述抑制的動物或人有效治療量的權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。
30.權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于抑制CHK1激酶活性的藥物中的應用。
31.權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于限制細胞增殖的藥物中的應用。
32.一種抑制Pak激酶的方法，所述方法包括給予需要所述抑制的動物或人有效治療量的權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。
33.權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于抑制Pak激酶活性的藥物中的應用。
34.一種在人或動物中限制腫瘤發生的方法，所述方法包括給予所述人或動物有效治療量的權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。
35.一種用于在溫血動物中產生Pak激酶抑制作用的藥用組合物，它包含與藥學上可接受的稀釋劑或載體混合的權利要求1-11中任何一項定義的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽。
36.權利要求1-11中任何一項要求的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽在制備用于限制腫瘤發生的藥物中的應用。
37.式(IV)、(1V’)、(VI)、(VI’)、(IX)、(XI)、(XII)和(XIII)化合物，所述化合物在權利要求1定義的式(I)化合物或其鹽的制備中用作中間體
其中R1、R2、R3和R5如在式(I)中定義和Z為鹵代。
38.一種制備依據權利要求1的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽的方法，其中X為N，Y為CH，A為CH，D為S，R3為H和L為NR5，所述方法包括
a.使式(II)化合物
其中Z為鹵代，如溴代、氯代或碘代，與其中R2和R5如在式(I)中定義的式(III)胺在以下堿的存在下反應，
NHR2R5
(III)
得到式(IV)化合物
b.使式(IV)化合物與式(V)或(V’)化合物反應，
R1B(OR’)2
(V)(V’)
其中R1如在式(I)中定義和R’為H或甲基，得到式(VI)化合物
(VI)；
c.使式(VI)化合物水解，形成式(IA)所示的依據式(I)的化合物
d.然后如果需要
i)將一種式(I)化合物轉化為另一種式(I)化合物；
ii)去除任何保護基團；
iii)形成藥學上可接受的鹽。
39.一種制備式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽的方法，其中X為N，Y為CH，A為CH，D為S，R3為H和L為O，所述方法包括
a.使式(II)化合物
其中Z為鹵代，如溴代、氯代或碘代，與其中R2如在式(I)中定義的式(III’)醇，
R2OH
(III’)
在堿的存在下反應，得到式(IV’)化合物
b.使式(IV’)化合物與式(V)或(V’)化合物反應，
R1B(OR’)2
(V)(V’)
其中R1如在式(I)中定義和R’為H或甲基，得到式(VI’)化合物
c.水解式(VI’)化合物，形成式(IB)所示的依據式(I)的化合物
d.然后如果需要
i)將一種式(I)化合物轉化為另一種式(I)化合物；
ii)去除任何保護基團；
iii)形成藥學上可接受的鹽。
40.一種制備式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽的方法，其中X為CH，Y為CH，A為CH，D為NR4和L為NR5，所述方法包括
a.使其中R”為H、甲基、乙基或芐基的式(VII)化合物
與其中R1如在式(I)中定義的式(VIII)酮反應，
得到式(IX)吲哚
b.使式(IX)吲哚與其中R3如在式(I)中定義的式(X)胺反應
R3NH2
(X)
得到式(XI)化合物
c.使式(XI)化合物還原，形成式(XII)胺
d.使式(XII)化合物與適當的R2的醛、酮、羧酸或磺酰氯反應，其中R2如在式(I)中定義，形成式(IC)所示的依據式(I)的化合物
或者作為選擇，使式(XII)化合物與亞硝酸鈉和鹵化銅反應，形成式(XIII)化合物，其中Z為鹵代，
e.使式(XIII)化合物與其中R2和R5如在式(I)中定義的式(III)胺，
NHR2R5
(III)
在催化劑的存在下反應，得到式(ID)所示的依據式(I)的化合物
f.然后如果需要
i)將一種式(I)化合物轉化為另一種式(I)化合物；
ii)去除任何保護基團；
iii)形成式(IC)或(ID)化合物的藥學上可接受的鹽。
全文摘要
本發明涉及新的式(I)化合物和它們的藥用組合物和它們的使用方法。這些新的化合物具有CHK1激酶抑制活性、PDK1抑制活性和Pak激酶抑制活性，因此用于癌癥的治療和/或預防。
文檔編號C07D495/04GK101189243SQ200680019862
公開日2008年5月28日 申請日期2006年4月5日 優先權日2005年4月6日
發明者K·達利, N·赫倫, A·赫德, S·喬安尼迪斯, J·W·簡特卡, P·萊恩, J·斯科特, D·托德, M·瓦斯賓德, D·余, Y·余 申請人:阿斯利康(瑞典)有限公司