細胞穿透性肽、包含該肽的綴合物、及包含該綴合物的組合物的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及源自人端粒酶逆轉錄酶（humantelomerasereverse transcriptase;hTERT)的細胞穿透性肽、細胞穿透性肽及活性成分的綴合物、以及包含該 綴合物的組合物。
【背景技術】
[0002] 盡管低分子量物質、核酸、蛋白質、納米粒子等在分子水平上具有作為治療物質的 極大可能性潛力，但低分子量物質、核酸、蛋白質、粒子等的使用其應用由于不能無能力穿 透組織及細胞膜而受限。輸送此類物質至細胞內的的系統的開發展已成為過去二十年來活 躍的研宄領域。細胞內部運輸物質已成為分子處理治療方法中的的話題。低分子量物質、 核酸或納米粒子通過系通過多種若干試劑、電穿孔或熱休克而運送到運輸到細胞內。然而， 難以找到一種適當方法在不破壞蛋白質的活性及完整性的情況下將蛋白質輸送到在細胞 內部輸送蛋白質。在20世紀80年代，在對人類人免疫缺乏病毒（humanimmunodeficiency virus;HIV)的細胞穿透能力進行的研宄中，已發現，由特定的11種個氨基酸構組成的的 HIV-TAT蛋白質在于在向細胞內部的運輸的過程中起重要作用。因此，在20世紀90年代， 探索運輸到細胞內蛋白質將蛋白質運輸到細胞內的恰當方法的研宄成為重點研宄領域。
[0003] 已知端粒是染色體末端發現的遺傳物質重復序列，端粒防止染色體損傷或防止合 并至其它染色體上。端粒的長度在每次細胞分裂時縮短，且在一定次數的細胞分裂的后，端 粒長度極度縮短至細胞停止分裂且死亡的程度。在另一方面，已知端粒延伸可延長細胞的 壽命。作為實例，癌細胞分泌稱為端粒酶的酶，該酶防止端粒縮短，因此導致癌細胞增殖。
[0004] 本發明的目標在于提供一種新型肽。
[0005] 本發明的另一目標在于提供編碼該新型肽的多核苷酸。
[0006] 本發明的另一目標在于提供細胞穿透性肽。
[0007] 本發明的另一目標在于提供作為細胞內活性成分的載體的有用的肽。
[0008] 本發明的另一目標在于提供作為細胞內活性成分的載體的有用的肽，尤其是將活 性成分局部地輸送至粒線體的有用的肽。
[0009] 本發明的另一目標在于提供用于輸送活性成分至粒線體以改善、預防或治療粒線 體相關疾病或病癥的有用的肽。
[0010] 本發明的另一目標在于提供活性成分與細胞穿透性肽綴合成的綴合物。
[0011] 本發明的另一目標在于提供包含活性成分與細胞穿透性肽的綴合物的組合物。
[0012] 本發明的另一目標在于提供包含活性成分與細胞穿透性肽的綴合物的藥物組合 物。
[0013] 本發明的另一目標在于提供包含活性成分與細胞穿透性肽的綴合物的功能性化 妝組合物。
[0014] 本發明的另一目標在于提供包含活性成分與細胞穿透性肽的綴合物的健康食品 組合物。
[0015] 本發明的另一目標在于提供包含活性成分與細胞穿透性肽的綴合物的對比造影 劑。

【發明內容】

[0016] 根據本發明的一個實施方式的綴合物可為細胞穿透性載體肽與活性成分的綴合 物，其中所述載體肽為包含SEQIDNO: 1至SEQIDNO:6中至少一個氨基酸序列的肽、與上 述序列具有至少80%同源性的肽、或上述肽的片段，且其中具有至少80%同源性的所述肽 和所述片段保留SEQIDN0:1至SEQIDN0:6中的任一氨基酸序列的細胞穿透能力。
[0017] 根據本發明中的綴合物的另一實施方式，所述片段可由3個或更多氨基酸構成。
[0018] 根據本發明中的綴合物的另一實施方式，所述載體肽可由30個或更少氨基酸構 成。
[0019] 根據本發明中的綴合物的另一實施方式，上述載體肽可為由SEQIDN0:1至SEQ IDNO:6中任一氨基酸序列構成的肽。
[0020] 根據本發明的一個實施方式的對比造影劑可包含上述的任一種綴合物。
[0021] 根據本發明的一個實施方式的對比造影劑可用于細胞對比造影。
[0022] 根據本發明的對比造影劑的另一實施方式，所述細胞可為干細胞。
[0023] 根據本發明的一個實施方式的組合物可包含上述的任一種綴合物。
[0024] 根據本發明的組合物的另一實施方式，所述活性成分可用于治療或預防疾病，且 所述組合物可為藥物組合物。
[0025] 根據本發明的組合物的另一實施方式，所述活性成分可為用于功能性化妝品的活 性成分，且所述組合物可為化妝品組合物。
[0026] 根據本發明的組合物的另一實施方式，所述活性成分可為用于功能健康食品的活 性成分，且所述組合物可為健康食品組合物。
[0027] 根據本發明方法的一個實施方式，所述方法可為用于輸送活性成分至細胞內的方 法，其中該方法包括對有需要的對象施用權利要求1至12中任一項所述的綴合物，且其中 載體肽為將活性成分輸送至細胞內的細胞穿透性肽，且其中具有至少80%同源性的所述肽 及上述肽的片段保留由SEQIDNO: 1至SEQIDN0:6中任一氨基酸序列構成的肽的細胞穿 透能力。
[0028] 根據本發明的方法的另一實施方式，所述方法可用于將所述活性成分局部地輸送 至細胞內部的粒線體內。
[0029] 根據本發明細胞穿透性肽的另一實施方式，上述載體肽可以為具有SEQIDNO: 1 至SEQIDN0:6中任意一個或多個氨基酸序列的肽。
[0030] 根據本發明的多核苷酸可編碼上述細胞穿透性肽。
[0031] 根據本發明的載體可包含上述多核苷酸。
[0032] 根據本發明的轉化細胞可包含上述載體。
[0033] 產業利用性
[0034] 難以運輸到細胞內的活性成分可通過使用本發明所公開的肽或肽及活性成分的 綴合物而易于運輸到細胞內。這意味著可增加活性成分的功效且因此可減少活性成分的劑 量。因此，可最小化由于藥物施用造成的副作用且可增加治療的有效性。特別地，當將藥物 局部地輸送至粒線體內時，可改善粒線體相關的疾病或病癥，且可增加疾病預防及治療疾 病的有效性。在化妝品的情況中，通過少量活性成分可產生顯著效果。通過使肽與對比造 影物質綴合，可將該肽用作對比造影物質以監測細胞移植的過程或在細胞治療中的移植細 胞。特別地，該肽可實際上用作用于注入身體內的干細胞的對比造影物質。
【附圖說明】
[0035] 圖1描繪SEQIDNO: 1至SEQIDNO: 6的報告基因是通過重組DNA克隆法制備的 增強型綠焚光蛋白（enhancedgreenfluorescentprotein;EGFP)融合構建體。
[0036] 圖2至圖7描繪通過流式細胞術分析的在FITC與SEQIDNO: 1至SEQIDNO:6 的肽融合后治療的HeLa細胞中細胞攝入的細胞數量。對照細胞僅以FITC處理。
[0037] 圖8至圖11描繪通過流式細胞術分析的在FITC與SEQIDNO: 1至SEQIDNO: 3 和SEQIDN0:6的