細胞穿透肽以及包含該肽的綴合物和組合物的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及源自人端粒酶逆轉錄酶（human telomerase reverse transcriptase ;hTERT)的細胞穿透肽、細胞穿透肽和活性成分的綴合物和包含該綴合物 的組合物。
【背景技術】
[0002] 盡管低分子量物質、核酸、蛋白質、納米顆粒等在分子水平上具有作為治療物質的 極大可能性，但低分子量物質、核酸、蛋白質、納米顆粒等的使用由于無能力穿透組織和細 胞膜而受限。遞送此類物質至細胞內的系統的發展已成為過去二十年來活躍的研宄領域。 在細胞內部運送物質已成為分子處理方法中的話題。將低分子量物質、核酸或納米顆粒利 用若干試劑、電穿孔或熱休克運送至細胞內部。然而，難以找到一種適當方法在不破壞蛋白 質的活性和完整性的情況下在細胞內部遞送蛋白質。在20世紀80年代，在對人類免疫缺 陷性病毒（human immunodeficiency virus ;HIV)的細胞穿透能力進行的研宄中，已發現， 由特定的11種氨基酸組成的HIV-TAT蛋白質在于細胞內部的運送過程中起重要作用。因 此，在20世紀90年代，探索在細胞內部運送蛋白質的恰當方法的研宄成為重點研宄領域。
[0003] 已知端粒是染色體末端發現的遺傳物質重復序列，端粒防止染色體損傷或合并至 其它染色體上。端粒的長度在每次細胞分裂時縮短，且在一定次數的細胞分裂之后，端粒長 度極端縮短至細胞停止分裂且死亡的程度。在另一方面，已知端粒延伸延長細胞的壽命。作 為實例，癌細胞分泌被稱為端粒酶的酶，該酶防止端粒縮短，因此導致癌細胞增殖。。

【發明內容】

[0004] 本發明的目標在于提供一種細胞穿透肽。
[0005] 本發明的另一目標在于提供作為細胞內的活性成分的載體的有用肽。
[0006] 本發明的另一目標在于提供作為細胞內的活性成分的載體的有用肽，尤其是將活 性成分局部地遞送至線粒體的有用肽。
[0007] 本發明的另一目標在于提供用于遞送活性成分至線粒體以改善、預防或治療線粒 體相關的疾病或病癥的有用肽。
[0008] 本發明的另一目標在于提供活性成分和細胞穿透肽綴合成的綴合物。
[0009] 本發明的另一目標在于提供包含活性成分和細胞穿透肽的綴合物的組合物。
[0010] 本發明的另一目標在于提供包含活性成分和細胞穿透肽的綴合物的藥物組合物。
[0011] 本發明的另一目標在于提供包含活性成分和細胞穿透肽的綴合物的功能性化妝 組合物。
[0012] 本發明的另一目標在于提供包含活性成分和細胞穿透肽的綴合物的健康食品組 合物。
[0013] 本發明的另一目標在于提供包含活性成分和細胞穿透肽的綴合物的對比造影劑。
[0014] 根據本發明的一個實施例的綴合物可為細胞穿透運載肽和活性成分的綴合物，其 中運載肽為包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的肽、具有與上述序列超過80%同源性的氨基 酸序列的肽或上述肽的片段，且其中具有與上述序列超過80%同源性的氨基酸序列的肽和 上述肽的片段為保持SEQ ID NO: 1的細胞穿透能力的肽。
[0015] 根據本發明中的綴合物的另一個實施方式，片段可由三個或更多氨基酸組成。
[0016] 根據本發明中的綴合物的另一個實施方式，運載肽可由三十個或更少氨基酸組 成。
[0017] 根據本發明中的綴合物的另一個實施方式，上述運載肽可為具有SEQ ID NO: 1的 氨基酸序列的肽或具有與上述序列超過80%同源性的氨基酸序列的肽。
[0018] 根據本發明的一個實施方式的對比造影劑可包含上述的任一種綴合物。
[0019] 根據本發明的一個實施方式的對比造影劑可用于進行細胞對比造影。
[0020] 根據本發明的對比造影劑的另一個實施方式，細胞可為干細胞。
[0021] 根據本發明的一個實施方式的組合物可包含上述的任一種綴合物。
[0022] 根據本發明中的組合物的另一個實施方式，活性成分可用于治療或預防疾病，且 組合物可為藥物組合物。
[0023] 根據本發明的組合物的另一個實施方式，活性成分可為用于功能性化妝品的活性 成分，且組合物可為化妝品組合物。
[0024] 根據本發明的組合物的另一個實施方式，活性成分可為用于功能健康食品的活性 成分，且組合物可為健康食品組合物。
[0025] 根據本發明的一個實施方式的活性成分的細胞質革巴向遞送系統（targeting delivery system)可包含上述的任一種綴合物，其中運載肽局部地移動至細胞質內且起到 局部地遞送所述活性成分至細胞質內的作用，其中具有與上述序列超過80%同源性的氨基 酸序列的肽和該肽的片段為保持SEQ ID NO: 1的細胞穿透能力的肽。
[0026] 根據本發明的一個實施方式的活性成分的線粒體靶向遞送系統可包含上述的任 一種綴合物，其中運載肽局部地移動至線粒體內且起到局部地遞送所述活性成分至線粒體 內的作用，其中具有與上述序列超過80%同源性的氨基酸序列的肽和該肽的片段為保持 SEQ ID NO: 1的細胞穿透能力的肽。
[0027] 根據本發明的一個實施方式用于調節線粒體活性的組合物可包含上述的任一種 綴合物，其中運載肽局部地移動至線粒體內且起到局部地遞送所述活性成分至線粒體內的 作用，其中具有與上述序列超過80%同源性的氨基酸序列的肽和該肽的片段為保持SEQ ID NO: 1的細胞穿透能力的肽。
[0028] 根據本發明的用于調節線粒體活性的組合物的另一個實施方式，組合物可為用于 與線粒體有關的疾病或病癥的治療、預防、進展抑制或癥狀緩和的藥物組合物，且活性成分 為用于與線粒體有關的疾病或病癥的治療、預防、進展抑制或癥狀緩和的成分。
[0029] 根據本發明的一個實施例的方法可為一種遞送活性成分至細胞內的方法，其中該 方法包含對需要的受試對象施用任一種上述綴合物的步驟，且其中運載肽為執行將活性成 分遞送至細胞內的細胞穿透肽，且其中具有與序列超過80%同源性的氨基酸序列的肽和序 列的片段可為保持SEQ ID NO: 1的肽的細胞穿透能力的肽。
[0030] 根據本發明的方法的另一個實施方式，該方法可用于在細胞內部局部地遞送活性 成分至線粒體內。
[0031] 根據本發明的肽可包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列或上述肽的片段。SEQ ID NO: I 的片段可由3至7個氨基酸組成。
[0032] 根據本發明的肽可為具有包含SEQ ID NO: 1的超過17個氨基酸的細胞穿透肽。
[0033] 根據本發明的多核苷酸可編碼上述細胞穿透肽。
[0034] 根據本發明的載體可包含上述多核苷酸。
[0035] 根據本發明的轉化細胞可包含上述載體。
[0036] 產業利用性
[0037] 難以在細胞內部運送的活性成分可通過使用本發明所公開的肽或肽和活性成分 的綴合物而易于在細胞內部運送。此意味著可增加活性成分的功效且因此可減少活性成分 的劑量。因此，可最小化由于投藥造成的副作用且可增加治療的有效性。特別地，當將藥物 局部地遞送至線粒體內時，可改善線粒體相關的疾病或病癥，且可增加預防和治療疾病的 有效性。在化妝品的情況中，利用少量活性成分可產生顯著效應。通過使肽與對比造影物質 綴合，可將該肽用作對比造影物質以監測細胞移植的過程或在細胞處理中的移植細胞。特 別地，該肽可實際上用作用于注入體內的干細胞的對比造影物質。
【附圖說明】
[0038] 圖1表示在具有限制性酶切位點（EcoRI和HindIII)的pET28a載體中產生的綠 色焚光蛋白（green fluorescence pro