專利名稱:類可啉的分離方法
本發明涉及分離類可啉的新方法。具體地講，本發明是關于通過使用具有大比表面的聚合吸附劑從完全類可啉中分離出不完全類可啉并進一步分離出各種完全類可啉的方法。
具有一種“可啉”骨架的化合物，例如維他命B12(5，6-二甲基苯并咪唑基氰鈷酰胺)，是該系列中最首要和生物學上最重要的成員，它們在藥理學上是為人們所熟知的活潑化合物。它們是通過發酵過程來制備的。用于發酵的各種微生物可能產生不同的“可啉”化合物;而當發酵終止時，該發酵介質可含有處于不同生物合成階段的類可啉。存在于發酵介質中的細胞同時含有完全的(含有核苷酸)和不完全(缺乏核苷酸)的類可啉。
不完全類可啉，例如鈷啉醇酰胺和鈷啉醇酸在生物學上是不活潑的，而在某些情況下則是有害的。它們的存在使得有價值的完全類可啉(鈷胺素)的分離和結晶變得困難了。即使在粗制的通常被用作飼料添加劑的維他命B12(含有不同“可啉”化合物的混合物)中，該不完全類可啉也是應避免的，這是因為人們已曉得，例如作為飼料添加劑給小雞喂食的鈷啉醇酰胺的作用猶如一種維他命B12拮抗藥(E.L.史密斯維他命B12Methnen，倫敦，1960，第84頁)。
在某些情況下，使各種完全類可啉相互分離也是必要的。例如，如果是通過利用具有混合群種的微生物來進行發酵(例如見匈牙利書159，356中所描述的半連續過程)，那么除了主要的不完全類可啉以外，所謂的因子Ⅲ(5-羥基苯并咪唑基氰鈷酰胺)就會污染維他命B12產物。在用作飼料添加劑時，因子Ⅲ基本上具有相同于維他命B12的活性，于是，為了這個目的它們就不需被相互分離。然而，對用于人的目的來說，只能使用純晶體的維他命B12，因此，在用于人的情況下，維他命B12和因子Ⅲ必須被相互分離。假如需要，從維他命B12分離的因子Ⅲ可以被進一步提純，且本身可用作飼料添加劑。
在從不完全類可啉中分離出完全類可啉這一技術領域：
中已經有了各種已知方法，例如，從鈷胺素分離出鈷啉醇酰胺和鈷啉醇酸。其他的已知方法涉及到維他命B12和因子Ⅲ的分離。
根據德國書930，651，各種類可啉是通過采用水和含有氰離子的正丁醇的混合物的分配色層法，在填有纖維素粉的柱中被分離的。從廢水中獲得的、除了維他命B12之外還含有因子Ⅲ和不完全類可啉的提純產物被淀積在硅膠上并接受干燥，而所得產物就被應用于上述柱中。整個過程本質上是一種分析方法。但該方法不適合于工業規模的分離。再者，雖然其中已經公開了怎樣從不完全類可啉中分離出因子Ⅲ的內容，但是，至于從維他命B12中分離出這些組份還沒有談到。
根據英國書789，019，是通過采用非極性溶劑和含有酚羥基的化合物的混合物對濃縮液進行萃取而把維他命B12從也含有其他類可啉的混合物中分離出來，并使維他命B12從溶劑相中吸附到氧化鋁上，再用丙酮對它進行溶解。
上述方法的一種改進型被公布在匈牙利書147，627上，其中談到，通過用酚和氯仿的1∶6的混合物進行萃取，在PH值為4～5的介質中把鈷啉醇酰胺從鈷胺素中分離，于是水相就被堿化至PH為8～9，而鈷胺素就用酚和氯仿的1∶5的混合物被萃取出來。此后，維他命B12和因子Ⅲ就通過在氧化鋁柱上的色層分離法在丙酮介質中得到相互分離。
以上兩件書中所公布的方法其缺點在于在用酚和氯仿的混合物進行萃取的過程中存在著一種對乳濁液形成的高敏感性。結果，只能通過離心分離器才能使溶劑相以大的規模得到分離。自然地，乳濁液的形成降低了萃取效率。再一個問題是，還沒有一種經濟的方法可用于溶劑混合物的再生。此外，由于在這些條件下萃取鈷啉醇酰胺不具有選擇性，所以鈷胺素的損失很大。
根據匈牙利書150，555中所公布的方法，通過在氧纖維素上的吸附把不完全類可啉從維他命B12、因子Ⅲ和水溶液或水-酒精溶液中的不完全類可啉的混合物中分離出來。因此，是用1∶7～1∶8的含有百里酚的酚和氯仿的經過提純的混合溶液把維他命B12萃取出來。用水洗滌有機相，然后加入丙酮，而通過用氯仿進行萃取使含有維他命B12的水相從酚中得到釋放。對溶液進行蒸發而維他命B12就被結晶出來。通過用一種合適的溶劑進行的提純步驟之后，因子Ⅲ就以晶體形式從水相中被獲取。后來的提純步驟在已引用的書中沒有得到詳細描述。這種方法的工業應用因氧纖維素的弱的比吸收能力而受到限制。再一個缺點是氧纖維的再生是麻煩的，以大的規模進行則是很昂貴的，這是因為這一操作必須用0.1n的鹽酸溶液在60～70℃的溫度中進行。另外，維他命B12和因子Ⅲ的分離涉及到使用大的體積。為了分離1公斤的維他命B12晶體，就要在該過程中使用2.4立方米的酚/氯仿混合物，可以設想，為了從水相中分離出因子Ⅲ就需要同樣量的溶劑。由于沒有一種經濟的方法可用于大量的酚/氯仿/丙酮混合物的再生，因此這是這種方法的一大缺點。
在以上所引用的方法中，對于用混合種群的微生物進行的工業規模的發酵中所形成的類可啉來說，還沒有一種是適合于選擇性且經濟性分離的。
本發明的目的是要為從完全類可啉選擇性地分離出不完全類可啉、并使完全類可啉、主要是維他命B12和因子Ⅲ的相互分離提供一種工業上可行的經濟的方法。
在實驗中我們發現，通過在具有大的比表面的聚合吸附劑上進行選擇性吸附和洗脫就能夠以令人滿意的純度在單一的步驟中把鈷胺素從鈷啉醇酰胺和鈷啉醇酸中有效地分離出來，假如需要，可通過選擇性洗脫在下一步驟中把因子Ⅲ從維他命B12中除去，而維他命B12可用已知方法來分離。
根據本發明的方法，采用水溶液或含有至多20%(體積)的可混溶于水的低級脂族醇(最好是甲醇或乙醇)的水溶劑混合物，或采用含有至多5%(體積)的可混溶于水的低級脂族酮(最好是丙酮)的水溶劑混合物(這些均含有完全和不完全類可啉的混合物，例如鈷啉醇酰胺和鈷啉醇酸)而使完全類可啉吸附在具有大的比表面的聚合吸附劑上，其條件是有氰離子或亞硫酸離子或能給出這種離子的化合物的存在，PH值為8～11，最好為9～10，而不完全類可啉仍留在溶液中。
另一種方法，可按照已知的方法從PH值為2～8的稀釋的水溶液或水/有機溶液中使不完全類可啉吸附在吸附劑上，因此，可用堿化至PH值為8～11、最好為9～10的水溶液或用至多含有20%(體積)的可混溶于水的低級脂族醇(最好是甲醇或乙醇)的水溶劑混合物，或者用至多含有5%(體積)的可混溶于水的低級脂族酮(最好為丙酮)的水溶劑混合物把不完全類可啉洗脫出來，其條件是在氰離子或亞硫酸離子或能給出這種離子的化合物的存在下，溫度為室溫，而完全類可啉仍附在柱上。
假如維他命B12和因子Ⅲ要被相互分離，那么在這兩種類型的方法中是用PH值被調整到8～11最好是9～10的、含有20～40%(體積)的可混溶于水的低級脂族醇(最好是甲醇或乙醇)或含有5～2%(體積)的低級脂族酮(最好為丙酮)的水溶劑混合物把因子Ⅲ從柱上洗脫下來，其條件是在氰離子或亞硫酸離子或能給出這種離子的化合物的存在下，因此就能用已知的方法例如用甲醇或含水丙酮把維他命B12從柱上溶解下來。
假如維他命B12和因子Ⅲ不需要被相互分離，那么也可用已知的方法例如用上述甲醇或含水丙酮把完全類可啉從溶液中分離出來。
作為具有大比表面的聚合吸附劑可以使用，例如非離子型的、非極性型的或弱極性的宏網狀吸附樹脂，它們的孔尺寸為10-8～10-7米，其比表面至少為200平方米/克。這種樹脂包括，例如Amberlite、XAD2、XAS4、XAD7、XAD8、(Rohm和Haas)，Diaion HP20、HP21、SP207、PH2MG(三菱)。
根據本發明的方法，作為能給出亞硫酸離子的化合物，例如酸式亞硫酸鈉或鉀、偏亞硫酸氫鈉或鉀、亞硫酸鈉或鉀、二氧化硫水溶液、二烴基亞硫酸鹽例如二甲基亞硫酸鹽可以被使用。能給出氰離子的化合物包括例如金屬氰化物，如氰化鉀、氰化鈉、氰化銨、氫氰化物等等。含有以絡合形式的(例如氰亞鐵酸鉀)或以結合碳原子方式的(例如芐基氰、芐腈)氰化物基團的化合物也適合于該目的。
吸附作用可通過把所使用的吸附劑與含有類可啉的溶液相混合來進行。吸附劑可被充填到柱中，可采用固定床或流化床技術，而溶液即可從上到下也可由下向上流過該柱。
PH值可用合適的堿來調節，最好是用氫氧化銨或氫氧化鈉。
根據本發明的分離技術可從粗制的發酵介質開始被使用，但同樣也適合于已提純的溶液的情況。
根據本發明的方法的主要優點如下1.分離作用是選擇性的，并且不存在鈷胺素的損失。
2.該過程也同樣適合于在細胞消化之后從粗制的發酵介質中分離出類可啉，也適用于以前在一步或多步步驟中已提純了的含有類可啉溶液的處理。
3.本方法給出了優異的工業結果，這是因為所使用的具有大的比表面的聚合吸附劑有著高吸附能力，良好的物理和化學穩定性，并且在吸附設備中的分離作用之后能容易地再生。
4.另一個優點是，該方法可以在亞硫酸離子或只給出亞硫酸離子的化合物的存在下實現，也就是說，假如需要，可避免會導至安全和環境問題的氰離子及必要的投資5.假如維他命B12是用丙酮來洗脫，那么根據本發明，維他命B12就可通過再次加入一批丙酮被容易地結晶出來。如果是使用先前技術方法所公布了的溶劑，那么維他命B12只是在進一步的蒸發步驟之后以晶體形式被淀析出來。
6.因子Ⅲ可在分離之后被使用，假如需要，可在除去鹽、進行蒸發和干燥之后作為飼料添加劑之用。
以下將借助下列非限制性例子對本發明進行更詳細的說明。
起始物料的制備a).含有棒狀桿菌(corynebacterium)菌株樣品(24Al)、(244Cl)、乳酸桿菌(Lactobacillus)菌株樣品(244BCl)和丙菌(Propionibacferium)菌株樣品(239AI/6)的發酵介質的消化，這些菌株樣品分別存放在匈牙利國家醫學細菌收集中心和在76、77、78和79這些號數下的國家衛生研究院中(采用匈牙利書159，356中所公布的方法制備的產生甲烷的混合種群發酵介質)，也就是說，是根據如下所述的匈牙利書171，339來進行存在于細胞內的類可啉的溶解的在1立方米的含有24.2克鈷胺素和95.6克不完全類可啉的發酵介質中加入1升10%的氰化鈉溶液，然后用20%的氫氧化鈉溶液把該溶液堿化至PH值為9，接著在攪拌條件下該混合物被加熱至70℃并在該溫度下保持30分鐘。此后，加入50升30%的氯化鐵(Ⅲ)溶液(17.4公斤的FeCl3·6H2O)到該混合物中并又攪拌10分鐘。用20%的氫氧化鈉溶液把混合物的PH值調節到8。又經過10分鐘的攪拌之后便通過沉積離心機把沉淀物從混合物中除去。所獲得的溶液在每1升中含有23克的鈷胺素和88克的不完全類可啉。
b).根據以上的步驟a)所制備的發酵介質是象英國專利申請書2，137，207中的實施例1所描述的那樣進行提純的，也就是通過在宏網狀吸附樹脂上的吸附并隨后對細胞進行消化和對類可啉進行溶解而把存在于發酵介質中的雜質從含有類可啉的完整細胞中分離出來。根據本發明，類可啉的選擇性吸附或選擇性洗脫是從所獲得的沉淀溶液開始的。發酵介質是按下述過程加以凈化的。
如上述步驟a)中所描述的那樣獲得的發酵介質，其中每1升中含有28毫克的維他命B12和5.2毫克的因子Ⅲ，同時還含有129毫克的不完全類可啉。1立方米的該發酵介質在兩個單元的流化床吸附系統中接受凈化，該系統中的單元是串聯的。未經過濾的發酵介質連續地通過兩部設備，每一部設備都具有2.5升用10升Diaion樣品207吸附樹脂充填的有效體積，介質通過的速率為100升/小時。在這過程中，存在于發酵介質中的多數細胞外雜質將被吸附在樹脂中。此后，用100升水對柱子進行洗滌。接著，把2500毫升10%的偏亞硫酸氫鉀溶液加入到已獲得的部分凈化的發酵介質中，而PH值就通過連續加入50%的硫酸水溶液來調整到4。然后該發酵介質在連續系統中被加熱至110℃并停留10分鐘，這里細胞將接受消化而類可啉被溶解到發酵介質中。發酵介質于是就通過一熱交換器而被冷卻至30℃以下。所獲得的溶液在每一升中含有27毫克的維他命B12、5毫克的因子Ⅲ和118毫克的不完全類可啉。
c).根據英國專利申請2，137，207和2，149，407中所描述的方法，按照以下方式從上述步驟a)所獲得的發酵介質中來獲取兼有完全和不完全類可啉的含水濃縮液
如步驟b)中所描述的那樣經過凈化和消化的發酵介質通過每根含有10升Diaion樣品207樹脂的二根串聯的柱子，物料的流向是自下而上，采用的是流化床技術。在該步驟中，完全和不完全類可啉被吸附在樹脂上。用水把細胞碎片和有機及無機的雜質按吸附作用所發生的相同方向從柱上洗掉。然后，把總含量為3克氫化鉀的20升水溶液由下向上施用到柱上以生成氰基形式的類可啉。靜止10分鐘以后，含有氰化鉀的水從柱中排走，然后再用100升水對該柱進行清洗。此后，通過100升90%(體積)的甲醇溶液連續地由上向下流過該柱致使氰基類可啉從樹脂上溶解下來。經過在50℃下的蒸發把甲醇從甲醇的洗脫液中除去，于是就獲得了10升含水的濃縮物，其中含有23克維他命B12、4克因子Ⅲ和99.7克不完全類可啉。
根據本發明的方法可進一步通過以下的實施例加以說明實施例1從1立方米的發酵介質根據上述步驟C制備的含水濃縮液含有27克鈷胺素和99.7克不完全類可啉，用濃氫氧化銨溶液把它調整到PH值為9.5，隨后再往該溶液中加入50克偏亞硫酸氫鉀。然后該溶液以5升/小時的速率通過用5升Diaion HP-20樹脂制備的100×1000毫米的吸附柱，接著用濃氫氧化銨溶液堿化至PH9.5，再用含有1克/升的偏亞硫酸氫鉀的水對該柱進行清洗。然后再用水洗滌至中性。流經樹脂的溶液和含水的洗滌液含有存在于起始溶液中的全部不完全類可啉，而鈷胺素被吸附在樹脂上。用2升90%(體積)的含水甲醇按已知方法對鈷胺素進行洗脫。甲醇蒸發之后，該水溶液就含有25克鈷胺素。其產量為起始濃縮物中鈷胺素含量的92.6%。
實施例2根據在起始物質制備中所描述的步驟a)，從1.5立方米的發酵介質中所獲得的15升含水濃縮物含有40.5克鈷胺素和177克不完全類可啉以及5%的殘留甲醇(主體的甲醇被蒸發掉之后)，在該含水濃縮物中加入150毫升10%的氰化鉀溶液。用2n的氫氧化鈉溶液把PH值調節到10.0。該溶液以6升/小時的速率流過用6升Amberlite XAD-2吸附樹脂制備的柱子，隨后用10升水對該柱進行清洗。溶液流過柱子而洗滌液含有不完全類可啉的總量。此后，用6升80%(體積)的甲醇水溶液按已知方式對吸附在樹脂上的鈷胺素進行洗脫。最后把甲醇蒸發掉從而獲得了含有36.45克鈷胺素的水溶液。產量為起始含水濃縮物中鈷胺素含量的90%。
實施例3如上述步驟b)所述的從1000升發酵介質獲得的一種含有類可啉、在細胞的消化過程所溶解的其它物質和細胞碎片的含水混合物含有32克鈷胺素，118克不完全類可啉，其PH值為4.0，該含水混合物以200升/小時的速率由下向上通過填有20升Diaion樣品207吸附樹脂的柱子。在這一步驟中，所有類可啉被吸附在樹脂上。細胞碎片、有機和無機的雜質按吸附作用所發生的相同方向從樹脂柱上洗掉。然后，200升含有0.1%氰化鉀、4%(重量)丙酮且PH值為9.5的水溶液從上到下流過該柱。接著用20升水洗滌柱子。存在于起始混合物中的不完全類可啉的總量將存在于含有氰化鉀的清洗液中，然后又存在于水清洗液中。按已知的方法用60%(體積)的丙酮溶液把氰基鈷胺素從吸附樹脂洗脫下來。待丙酮蒸發掉之后就可獲得含有28.5克鈷胺素的水溶液。產量為起始的凈化過和消化過的發酵介質中鈷胺素含量的89%。
實施例4根據在起始物質制備中所述的步驟a)，所獲得的1000升發酵介質含有23克鈷胺素和88克不完全類可啉，并且已被消化和通過離心作用從沉積物得到離釋，這樣的發酵介質的PH值被氫氧化鈉調節到9.0。然后，把50克氰化鈉溶解在該介質中，該介質又自下向上通過填有40升Diaion樣品207吸附樹脂的柱子，所使用的是流化床技術，從而粘住了鈷胺素。在這些情況下，不完全類可啉沒有被吸附在樹脂上。然后再次采用流化床技術用水自下而上清洗吸附劑，隨后用90%的甲醇溶液按已知方法對氰基鈷胺素進行洗脫。洗脫液含有20.24克氰基鈷胺素。產量為起始的消化過的發酵介質中鈷胺素含量的88%。
實施例5如在起始物質制備中步驟c)所描述的那樣，受到凈化并被轉化成氰基化合物的10升水溶液含有27克鈷胺素和99.7克不完全類可啉，用1n的氫氧化鈉溶液把該水溶液堿化至PH9.5。50克偏亞硫酸氫鉀被溶解在該溶液中，然后該溶液又流經4升弱極性的丙烯酸酯-聚合物的Diaion HP2MG樹脂柱。接著，用水把該柱洗至中性。溶液流經柱子而堿性的洗滌液含有存在于起始物質中的不完全類可啉的總量。此后，用65%的乙醇溶液按已知方式把鈷胺素從吸附柱上洗脫下來。洗脫液含有23.2克的鈷胺素。其產量為起始含水濃縮液中活性組份含量的86%。
實施例6本質上按照實施例1中所描述的方法，起始物質為10升含有23克維他命B12、4克因子Ⅲ和99.7克不完全類可啉的含水濃縮物，所不同的是，對吸附在樹脂上的鈷胺素進行選擇性的而不是全部的洗脫。具體是使10升含有10%(體積)的丙酮的水(其中，在用氫氧化銨把PH值調整到9.5之后有2克氰化鉀被溶解)以5升/小時的速率自下而上流過用5升Diaion HP20吸附劑充填的柱子。然后用5升水沖洗該柱。洗脫液和沖洗液被混合了，從該所得到的混合物按如下方法制備了含有因子Ⅲ的、適合于用作飼料添加劑的產物把堿性的丙酮液和水洗液混合，用10%的硫酸溶液把PH值調整到4并加入水直到丙酮含量低于5%(體積)為止。然后使該溶液流過用0.5升的Diaion HP樹脂充填的柱子以吸附因子Ⅲ。用5升水對該吸附劑進行洗滌，而用1升90%的甲醇溶液對因子Ⅲ進行洗脫。洗脫液含有3.7克因子Ⅲ。產量為92.5%。在甲醇蒸發和經噴霧干燥該水溶液之后，該產品就可用作飼料添加劑。
在對因子Ⅲ進行洗脫和水洗之后，就用1.5升0.1n的醋酸溶液然后用水對樹脂柱進行沖洗直至中性。接著，用2升70%(體積)的丙酮溶液把維他命B12從柱中溶解下來。隨后，通過加入丙酮用已知的方法從已獲得的溶液中把維他命B12結晶出來。產量為19.3克維他命B12，這是起始的含水濃縮物的84%。
實施例7按照在起始物質的制備中步驟a)所述的方法，從1.5立方米的發酵介質中制備的15升含水濃縮物含有5%(體積)的甲醇、34.5克維他命B12、6克因子Ⅲ和149.6克不完全類可啉，如實施例2中所描述的那樣對該含水濃縮物進行處理，所不同的是按照如下方法分別對吸附在樹脂上的維他命B12和因子Ⅲ進行溶解30升含有30%(體積)甲醇的水(用1n的氫氧化鈉溶液把PH值調整到9.0)，其中溶有0.01%氰化鉀，以6升/小時的速率通過6升Amberlite XAD2柱子。然后用6升水洗滌該柱。洗滌水與洗脫液相混合。所獲得的溶液含有5.4克因子Ⅲ。接著用10%的鹽酸溶液把PH值調整到4～4.5，并且加入水直到甲醇含量低于10%(體積)為止。然后溶液被流經1升Amberlite XAD2樹脂以吸附因子Ⅲ，而用5升水洗柱，隨后用2升90%的甲醇溶液對因子Ⅲ進行洗脫。甲醇被蒸發掉而殘留的水溶液則接受噴霧干燥從而獲得能被用作飼料添加劑的產品。
在對因子Ⅲ進行洗脫和用水沖洗之后，該樹脂柱又進一步受到水的沖洗直到排出的水呈中性。然后使2.5升90%的甲醇溶液流經該溶液從而溶解維他命B12。靜止10分鐘之后，該洗脫液就被排放。此后，每次用1升批量的90%的甲醇重復上述處理兩次。混合的洗脫液含有3.14克維他命B12。從甲醇蒸發后獲得的水溶液中可按已知方法通過加入7倍量的丙酮來獲得粗制的晶體維他命B12。該粗制產品含有28.9克維他命B12。通過按照已知方法從水中結晶出該產物就可獲得30.2克維他命B12，這樣就滿足了第六版匈牙利藥典要求維他命B12的含量為96%的要求。產量為起始的含水濃縮物中存在的維他命B12含量的84%。
實施例8按照在起始物質的制備中步驟b)所述的方法，通過對1000升起始發酵介質的凈化和消化而獲得的發酵介質含有27克維他命B12、5克因子Ⅲ和118克不完全類可啉，按照實施例3中所描述的那樣對該發酵介質進行處理，所不同的是，在對不完全類可啉的選擇性洗脫之后再用30升被10%氫氧化鈉溶液(含有15%體積的丙酮和0.01%的氫化鉀)調整到PH值為9.5的水把因子Ⅲ從柱子上洗脫下來，隨后又用5升水對柱子進行沖洗。已混合的洗脫液和沖洗液含有4.3克因子Ⅲ。產量為起始的消化的發酵介質中因子含量的86%。
對因子Ⅲ進行洗脫和用水進行沖洗之后，再用水沖洗該樹脂柱直到排放的水呈中性為止。以后，把吸附在樹脂上的維他命B12溶解在30升70%(體積)的丙酮溶液中。再把相同體積的丙酮加入到該洗脫液中從而獲得晶體形式的維他命B12。通過從水中再結晶出已獲得的粗制晶體，按照已知方法就可獲得21.6克結晶產物，其中含有96%的維他命B12(20.7克)。產量為凈化過和消化過的發酵介質中B12含量的76.8%。
實施例9根據起始物質的制備中要點a)，所獲得的10升水溶液中含有23克維他命B12、4克因子Ⅲ和99.7克不完全類可啉維他命B12和因子Ⅲ，按照實施例5中所述的那樣采用4升Diaion HP2MG吸附樹脂柱對上述水溶液進行選擇性吸附。用水沖洗該樹脂以后，5升含有0.02%氫化鉀、25%(重量)甲醇并被10%的氫氧化鈉溶液調節到PH值為10.0的水流經該柱，接著用5升水對該柱進行沖洗。所混合的洗脫液和沖洗水含有3.4克因子Ⅲ。然后用水把該樹脂沖洗成中性，并按照已知方法采用90%(體積)的甲醇溶液把維他命B12從吸附劑上洗脫下來。把甲醇蒸發掉，把7倍于柱體積的丙酮加入到該水溶液中從而獲得23.57克含有80%維他命B12的粗制晶體。通過按已知方法從水中實行再結晶后就以藥典的質量獲得了17.6克維他命B12(B12含量為96.5%)。產量為起始含水濃縮物的74%。
權利要求
1.采用具有大的比表面的聚合吸附劑通過選擇性吸附和/或選擇性洗脫分離類可啉的方法，其特征包括a)在氰離子或亞硫酸離子或能給出這種離子的化合物的存在下使完全類可啉從水溶液或從含水溶劑混合物中粘附到吸附劑上，這種水溶液或含水溶劑混合物含有至多20%(體積)可與水混溶的低級脂族醇或至多含有5%(體積)可與水混溶的低級脂族酮，其PH值已被調整至8～11，或b)在氰離子或亞硫酸離子或能給出這種離子的化合物的存在下，按照已知的方法采用水溶液或含水溶劑混合物把不完全類可啉從已吸附在吸附劑上的類可啉中洗脫下來，所說的水溶液或含水溶劑混合物含有至多20%(體積)可與水混溶的低級脂族醇或含有至多5%(體積)可與水混溶的低級脂族酮，其PH值已被調整至8～11，和假如需要，最好是采用選擇性地含有水的可與水混溶的有機溶劑按照已知方法對粘附在吸附劑上的完全類可啉進行洗脫，或假如需要，在氰離子或亞硫酸離子或能給出這種離子的化合物的存在下，用含有20～40%(體積)可與水混溶的低級脂肪醇或5～20%(體積)低級脂肪酮、其PH值已被調整至8～11的含水溶劑混合物把因子Ⅲ從吸附劑上洗脫下來，最好是采用選擇性地含有水的可與水混溶的有機溶劑按已知方法把維他命B12從吸附劑上洗脫下來。
2.根據權利要求
1所述的方法，其特征是用于步驟a)、b)或用于因子Ⅲ洗脫的溶液的PH值被調整至9～10。
3.根據權利要求
1所述的方法，其特征是在步驟a)、和步驟b)中使用了可與水混溶的低級脂族甲醇或乙醇，也使用了可與水混溶的低級脂族丙酮。
4.根據權利要求
1所述的方法，其特征是使用了能給出氰離子或亞硫酸離子的化合物，即氰化鈉或鉀或偏亞硫酸氫鉀或鈉。
專利摘要
本發明涉及一種新的類可啉的分離方法，特別是通過在具有大的比表面的聚合吸附劑上進行選擇性吸附和/或選擇性洗脫來分離類可啉的方法。根據本發明的方法同樣適用于從完全類可啉和各種不同的類可啉中分離出不完全類可啉，尤其是適用于維他命B
文檔編號C12P19/42GK86106277SQ86106277
公開日1987年6月3日 申請日期1986年9月15日
發明者凱利門, 杰克塞, 西莫諾維, 斯泰福考 申請人:里奇吉頓化工廠導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan