本(ben)發明涉及(ji)生物醫學，尤其涉及(ji)一(yi)種p2x1單克隆流式細(xi)胞(bao)儀檢測抗體的制備及(ji)其應用。

背景技術：

1、p2x1屬于(yu)atp嘌(piao)呤能(neng)受(shou)體(ti)(ti)家族。p2x1存在(zai)于(yu)血小(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)、中(zhong)性(xing)粒(li)細(xi)(xi)胞(bao)、和(he)巨噬細(xi)(xi)胞(bao)，也表達(da)于(yu)平(ping)滑肌細(xi)(xi)胞(bao)以及一些腫瘤(liu)細(xi)(xi)胞(bao)。p2x1作(zuo)為一種配體(ti)(ti)門控的(de)(de)(de)(de)(de)(de)膜鈣(gai)離子(zi)通(tong)(tong)(tong)道介導(dao)相對(dui)(dui)較高的(de)(de)(de)(de)(de)(de)鈣(gai)離子(zi)通(tong)(tong)(tong)透。在(zai)中(zhong)性(xing)粒(li)細(xi)(xi)胞(bao)中(zhong)參與(yu)(yu)lps誘(you)導(dao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)急(ji)性(xing)全身炎癥，p2x1通(tong)(tong)(tong)過(guo)參與(yu)(yu)小(xiao)(xiao)(xiao)靜脈(mo)中(zhong)性(xing)粒(li)細(xi)(xi)胞(bao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)遷(qian)移，在(zai)lps誘(you)導(dao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)致死性(xing)內毒素血癥中(zhong)發揮重要作(zuo)用(yong)。p2x1參于(yu)細(xi)(xi)胞(bao)凋亡(wang)，通(tong)(tong)(tong)過(guo)增加細(xi)(xi)胞(bao)內鈣(gai)離子(zi)濃(nong)度導(dao)致細(xi)(xi)胞(bao)程序性(xing)死亡(wang)。p2x1與(yu)(yu)atp結(jie)合介導(dao)神經元之間的(de)(de)(de)(de)(de)(de)突觸(chu)傳遞(di)以及神經元到平(ping)滑肌的(de)(de)(de)(de)(de)(de)突觸(chu)傳遞(di)，例如，它負(fu)責小(xiao)(xiao)(xiao)動(dong)脈(mo)和(he)輸精管(guan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)交感血管(guan)收縮；小(xiao)(xiao)(xiao)鼠研(yan)究表明，這種受(shou)體(ti)(ti)對(dui)(dui)正常的(de)(de)(de)(de)(de)(de)雄性(xing)生殖功能(neng)至關重要。血管(guan)中(zhong)表達(da)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)p2x1受(shou)體(ti)(ti)可被atp與(yu)(yu)釋(shi)放的(de)(de)(de)(de)(de)(de)交感神經遞(di)質去甲腎上腺(xian)素共同激活，導(dao)致平(ping)滑肌去極化和(he)收縮。p2x1受(shou)體(ti)(ti)在(zai)急(ji)性(xing)冠狀(zhuang)動(dong)脈(mo)綜合征(acs)患(huan)者血小(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)表達(da)及激活p2x1受(shou)體(ti)(ti)后導(dao)致血小(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)內鈣(gai)離子(zi)濃(nong)度的(de)(de)(de)(de)(de)(de)增加,p2x1受(shou)體(ti)(ti)在(zai)acs發生時對(dui)(dui)血小(xiao)(xiao)(xiao)板(ban)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)功能(neng)具有調(diao)節作(zuo)用(yong)。

2、綜上所述p2x1受體(ti)具有廣泛而重(zhong)要的(de)生理功(gong)能，細(xi)胞(bao)膜表(biao)面p2x1受體(ti)的(de)過表(biao)達(da)則會導致(zhi)細(xi)胞(bao)功(gong)能的(de)異(yi)常，因(yin)而研(yan)發一(yi)種(zhong)特異(yi)性(xing)好、靈敏度高、可(ke)快速檢(jian)測(ce)細(xi)胞(bao)膜表(biao)面p2x1受體(ti)表(biao)達(da)量的(de)流(liu)式(shi)(shi)細(xi)胞(bao)儀(yi)(yi)檢(jian)測(ce)抗體(ti)特別重(zhong)要。但(dan)p2x1是一(yi)種(zhong)atp配體(ti)門控的(de)鈣離子通道(dao)，空(kong)(kong)間構象(xiang)處于(yu)一(yi)種(zhong)動態可(ke)變的(de)狀(zhuang)態，作為流(liu)式(shi)(shi)細(xi)胞(bao)儀(yi)(yi)檢(jian)測(ce)抗體(ti)，其識別表(biao)位必(bi)須在胞(bao)外且(qie)空(kong)(kong)間構象(xiang)較為穩定的(de)部位。我們(men)根據p2x1蛋白細(xi)胞(bao)膜上拓撲空(kong)(kong)間結構及功(gong)能結構域(yu)情況來設計制備了免疫抗原，并(bing)制備獲(huo)得了一(yi)種(zhong)p2x1單(dan)克隆流(liu)式(shi)(shi)細(xi)胞(bao)儀(yi)(yi)檢(jian)測(ce)抗體(ti)，其特異(yi)性(xing)、靈敏度等性(xing)能明顯(xian)優(you)于(yu)目前(qian)市售常用p2x1流(liu)式(shi)(shi)檢(jian)測(ce)抗體(ti)。

技術實現思路

1、針對現有(you)技術(shu)存在(zai)的(de)(de)(de)(de)上述技術(shu)問(wen)題，本發明的(de)(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)(de)在(zai)于(yu)提供一(yi)種p2x1單克隆流式細(xi)胞(bao)儀檢(jian)測抗(kang)體的(de)(de)(de)(de)制(zhi)備(bei)及其應用。本技術(shu)根據(ju)p2x1蛋(dan)白(bai)細(xi)胞(bao)膜上拓撲空間(jian)結構及功能結構域情況來(lai)設計制(zhi)備(bei)免疫抗(kang)原，并(bing)在(zai)抗(kang)體篩選(xuan)中(zhong)采用具有(you)天然結構和活性(xing)的(de)(de)(de)(de)p2x1蛋(dan)白(bai)篩選(xuan)，制(zhi)備(bei)獲得了(le)一(yi)種特異(yi)性(xing)好、靈敏度高(gao)的(de)(de)(de)(de)p2x1單克隆流式細(xi)胞(bao)儀檢(jian)測抗(kang)體。

2、在本發明(ming)的(de)(de)設(she)計(ji)構(gou)思中(zhong)，根據p2x1蛋白(bai)細(xi)胞(bao)(bao)膜(mo)上拓撲(pu)空間結(jie)構(gou)及功能(neng)結(jie)構(gou)域情況來設(she)計(ji)制(zhi)備(bei)免疫抗原。p2x1是一種配體(ti)(ti)門(men)控離(li)子通道，由3個同源亞基組成，每個亞基有2個跨膜(mo)區(qu)段，即靠(kao)(kao)近n端(duan)(duan)的(de)(de)tm1和(he)靠(kao)(kao)近c端(duan)(duan)的(de)(de)tm2；n末(mo)端(duan)(duan)和(he)c末(mo)端(duan)(duan)均位于胞(bao)(bao)內，tm1和(he)tm2之間的(de)(de)區(qu)段形成一個位于胞(bao)(bao)外的(de)(de)環，作(zuo)為流式(shi)(shi)細(xi)胞(bao)(bao)儀(yi)檢測抗體(ti)(ti)必須識(shi)別膜(mo)蛋白(bai)胞(bao)(bao)外結(jie)構(gou)表(biao)位；又因p2x1作(zuo)為離(li)子通道其(qi)主要(yao)功能(neng)結(jie)構(gou)域位于tm2及其(qi)附近胞(bao)(bao)外部(bu)分，屬(shu)于門(men)控空間變(bian)構(gou)區(qu)，不適合作(zuo)為流式(shi)(shi)檢測抗體(ti)(ti)識(shi)別表(biao)位；tm1附近的(de)(de)胞(bao)(bao)外部(bu)分空間構(gou)象相對穩定，是流式(shi)(shi)檢測抗體(ti)(ti)最佳的(de)(de)識(shi)別表(biao)位，作(zuo)為設(she)計(ji)制(zhi)備(bei)免疫抗原的(de)(de)區(qu)域。

3、本(ben)發(fa)明采用的技術方案(an)如(ru)下：

4、一種p2x1單克隆流式細胞(bao)儀檢(jian)測抗體的制備方法，包括以(yi)下(xia)步驟：

5、1)以(yi)p2x1蛋白tm1附近的胞外部分，即(ji)e39-n178肽段(duan)為靶標來制備免疫(yi)抗原；由于該區段(duan)翻譯后(hou)途經內質網(wang)、高爾基體(ti)、分泌嚢泡等細胞器組(zu)成的分泌途徑最終到(dao)達(da)質膜(mo)外表面，其間經過了各種(zhong)翻譯后(hou)修(xiu)飾，這種(zhong)修(xiu)飾都(dou)會(hui)影響流式檢測抗體(ti)的識別效率，故我(wo)們采用真核細胞表達(da)系統來制備免疫(yi)抗原。

6、步驟1)的(de)具體(ti)方法如(ru)下：根據ncbi?reference?sequence:nm_002558.4，人源p2x1基因序列，取(qu)e39-n178肽(tai)段為靶標，在其n端添(tian)加一個er信號(hao)肽(tai)，使目標蛋白(bai)能夠進入分泌途徑(jing)，兩端分別設計上ecor?i和(he)xho?i酶(mei)切位點，核苷酸序列為seq?id?no:1，合(he)成后亞克隆到由杭州(zhou)邁爾德生物科技有限公司(si)提供的(de)慢(man)病毒載體(ti)pmld-mfc.copgfp(所述慢(man)病毒載體(ti)pmld-mfc.copgfp高表(biao)達帶小(xiao)鼠igg?fc段純化標簽)，與載體(ti)上的(de)小(xiao)鼠igg的(de)fc段，即mfc形(xing)成融合(he)蛋白(bai)，用于蛋白(bai)制備純化，獲得的(de)質(zhi)粒標識為pmld-hp2x1e39-n178-mfc.copgfp；

7、將所述pmld-hp2x1e39-n178-mfc.copgfp質粒用慢病毒轉(zhuan)染(ran)系統轉(zhuan)染(ran)293細(xi)(xi)胞，建立(li)高表(biao)達目標蛋(dan)白(bai)的穩轉(zhuan)細(xi)(xi)胞系；擴增培養(yang)后收集培養(yang)液，用protein?a柱純(chun)化制(zhi)備含有p2x1蛋(dan)白(bai)e39-n178肽段的mfc融合蛋(dan)白(bai)，氨(an)基酸序列為(wei)seq?id?no:2，標識為(wei)hp2x1e39-n178-mfc蛋(dan)白(bai)，作為(wei)免疫抗原；

8、2)利用步驟(zou)1)的免疫抗(kang)(kang)原為原料，通過小(xiao)鼠雜交瘤單(dan)克(ke)隆(long)抗(kang)(kang)體制備(bei)技術，制備(bei)p2x1單(dan)克(ke)隆(long)流式細胞儀檢測抗(kang)(kang)體。

9、進一(yi)(yi)步地，制備和(he)純化一(yi)(yi)種具有天然(ran)空間的人源p2x1蛋(dan)白，用于p2x1單克隆(long)流式細胞儀檢(jian)測抗體克隆(long)株的篩選。

10、進一步地，步驟2)的具體操作過程如下：

11、s1：將步(bu)驟1)制(zhi)備的hp2x1e39-n178-mfc蛋白作(zuo)為抗原，用(yong)quick?antibody水溶性佐劑免疫balb/c小(xiao)鼠；

12、s2：制(zhi)備天然空間結構和活性的人源p2x1蛋白，用于p2x1單克(ke)隆流式細(xi)胞(bao)儀檢測(ce)抗(kang)體(ti)克(ke)隆株(zhu)的篩選；

13、s3：將(jiang)步驟s2制(zhi)備(bei)的(de)具有天然(ran)空間(jian)結(jie)構和活性的(de)人源p2x1蛋白作為包被抗(kang)原，以抗(kang)小(xiao)(xiao)鼠igg?f(ab)2的(de)酶標(biao)羊抗(kang)作為二抗(kang)，用(yong)elisa法檢測步驟s1免疫小(xiao)(xiao)鼠的(de)血清(qing)效價，要(yao)求血清(qing)稀釋(shi)409600倍od值(zhi)仍然(ran)大于(yu)或等于(yu)1的(de)免疫小(xiao)(xiao)鼠才(cai)能用(yong)于(yu)后(hou)續雜(za)交(jiao)瘤(liu)制(zhi)備(bei)將(jiang)血清(qing)效價達到要(yao)求的(de)小(xiao)(xiao)鼠用(yong)于(yu)雜(za)交(jiao)瘤(liu)制(zhi)備(bei)；

14、s4：同樣將步驟s2制(zhi)備(bei)的(de)具有(you)天然空間結(jie)構和活性(xing)(xing)(xing)的(de)人源p2x1蛋白作(zuo)為(wei)(wei)包被抗(kang)(kang)原(yuan)，以(yi)抗(kang)(kang)小鼠igg?f(ab)2的(de)酶(mei)標羊抗(kang)(kang)作(zuo)為(wei)(wei)二抗(kang)(kang)，用elisa法(fa)檢篩(shai)選(xuan)陽性(xing)(xing)(xing)克(ke)(ke)隆；以(yi)雜交瘤細胞培(pei)養液(ye)稀釋(shi)102400倍時od大(da)于1的(de)克(ke)(ke)隆為(wei)(wei)陽性(xing)(xing)(xing)克(ke)(ke)隆，選(xuan)效價最高的(de)陽性(xing)(xing)(xing)克(ke)(ke)隆并進行進一步驗證，以(yi)獲得p2x1單克(ke)(ke)隆流(liu)式細胞儀檢測抗(kang)(kang)體。

15、進(jin)一步地(di)，步驟s2中(zhong)，所(suo)述天(tian)然(ran)空間結(jie)(jie)構和活(huo)性的人源(yuan)p2x1蛋白(bai)的制備(bei)方法如(ru)下：擴增收(shou)集(ji)(ji)高(gao)表(biao)達帶(dai)小鼠igg?fc段純(chun)化標簽(qian)的人源(yuan)p2x1蛋白(bai)的hp2x1mfc.copgfp/293穩轉細胞，于tris鹽酸(suan)緩(huan)沖液(ye)(ye)(ye)(ye)中(zhong)冰浴勻漿(jiang)破碎，離心，去(qu)上(shang)(shang)清，稱取膜(mo)(mo)碎片(pian)沉淀濕重，共(gong)收(shou)集(ji)(ji)膜(mo)(mo)碎片(pian)沉淀濕重不低(di)于100克；加(jia)(jia)入(ru)tris鹽酸(suan)緩(huan)沖液(ye)(ye)(ye)(ye)制備(bei)成膜(mo)(mo)懸液(ye)(ye)(ye)(ye)，在膜(mo)(mo)懸液(ye)(ye)(ye)(ye)中(zhong)，按5％(w/v)加(jia)(jia)入(ru)苯乙(yi)烯-馬(ma)來酸(suan)共(gong)聚物凍干粉，混合均(jun)勻；振蕩離心，收(shou)集(ji)(ji)上(shang)(shang)清液(ye)(ye)(ye)(ye)并(bing)(bing)過0.45μm濾(lv)膜(mo)(mo)，過膜(mo)(mo)后(hou)的濾(lv)液(ye)(ye)(ye)(ye)過protein?a柱(zhu)(zhu)，用(yong)pbs緩(huan)沖液(ye)(ye)(ye)(ye)洗柱(zhu)(zhu)之后(hou)，用(yong)2倍柱(zhu)(zhu)體積(ji)的ek酶(mei)(mei)切緩(huan)沖液(ye)(ye)(ye)(ye)進(jin)行柱(zhu)(zhu)平衡，最后(hou)加(jia)(jia)入(ru)等(deng)柱(zhu)(zhu)體積(ji)的ek酶(mei)(mei)切緩(huan)沖液(ye)(ye)(ye)(ye)，用(yong)ek酶(mei)(mei)室溫震蕩酶(mei)(mei)切12h；隨后(hou)通過重力流(liu)穿柱(zhu)(zhu)，收(shou)集(ji)(ji)流(liu)穿液(ye)(ye)(ye)(ye)，用(yong)10kd的超(chao)濾(lv)管置換(huan)為pbs緩(huan)沖液(ye)(ye)(ye)(ye)，并(bing)(bing)濃縮100倍，獲得可溶性的由苯乙(yi)烯-馬(ma)來酸(suan)環(huan)扣(kou)的仍在膜(mo)(mo)脂質(zhi)雙分(fen)子層上(shang)(shang)的具有天(tian)然(ran)空間結(jie)(jie)構和活(huo)性的人源(yuan)p2x1蛋白(bai)納米(mi)顆粒。

16、本發明還(huan)提供(gong)所(suo)(suo)述p2x1單克(ke)隆(long)流(liu)式細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)儀(yi)檢測抗(kang)體的(de)(de)應(ying)(ying)(ying)用(yong)(yong)，p2x1是(shi)一(yi)種配體門控離(li)子通(tong)道，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)膜(mo)表(biao)(biao)面p2x1表(biao)(biao)達的(de)(de)高低(di)會直接影響細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)內胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)液(ye)游(you)離(li)鈣離(li)子濃度，而細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)對胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)液(ye)游(you)離(li)鈣離(li)子濃度的(de)(de)變化是(shi)非常敏感的(de)(de)，通(tong)過鈣調(diao)蛋白cam的(de)(de)作用(yong)(yong)具有廣泛的(de)(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)生理功(gong)(gong)能(neng)；所(suo)(suo)述p2x1單克(ke)隆(long)流(liu)式細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)儀(yi)檢測抗(kang)體，通(tong)過流(liu)式細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)儀(yi)檢測細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)膜(mo)表(biao)(biao)面p2x1表(biao)(biao)達水平進而應(ying)(ying)(ying)用(yong)(yong)于基于p2x1表(biao)(biao)達的(de)(de)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)功(gong)(gong)能(neng)的(de)(de)分(fen)析應(ying)(ying)(ying)用(yong)(yong)，所(suo)(suo)述分(fen)析應(ying)(ying)(ying)用(yong)(yong)包括中性(xing)粒(li)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)趨化功(gong)(gong)能(neng)、血小板(ban)凝集功(gong)(gong)能(neng)、細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)周期、細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)凋亡、細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)分(fen)化或腫瘤細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)活性(xing)的(de)(de)流(liu)式細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)儀(yi)檢測分(fen)析應(ying)(ying)(ying)用(yong)(yong)。

17、進(jin)一(yi)步地，所(suo)述p2x1單克(ke)隆流(liu)(liu)式細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)儀(yi)檢(jian)測(ce)抗(kang)體記為fcm001抗(kang)體，fcm001抗(kang)體通過(guo)(guo)流(liu)(liu)式細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)儀(yi)檢(jian)測(ce)中性(xing)(xing)(xing)粒(li)(li)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)膜(mo)表(biao)(biao)面p2x1表(biao)(biao)達(da)(da)水平，進(jin)而反映中性(xing)(xing)(xing)粒(li)(li)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)的(de)(de)(de)趨(qu)化功能；隨機取健康人(ren)群和不同(tong)程(cheng)度細(xi)(xi)(xi)(xi)菌感染的(de)(de)(de)肺炎患者的(de)(de)(de)外周血，用中性(xing)(xing)(xing)粒(li)(li)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)分(fen)離試劑盒(he)提純(chun)中性(xing)(xing)(xing)粒(li)(li)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)后(hou)，用fcm001抗(kang)體流(liu)(liu)式細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)儀(yi)檢(jian)測(ce)各組細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)p2x1的(de)(de)(de)表(biao)(biao)達(da)(da)情(qing)況(kuang)，通過(guo)(guo)趨(qu)化距離cd和趨(qu)化綜合評分(fen)cfs來評測(ce)p2x1表(biao)(biao)達(da)(da)水平，分(fen)析中性(xing)(xing)(xing)粒(li)(li)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)膜(mo)表(biao)(biao)面p2x1的(de)(de)(de)表(biao)(biao)達(da)(da)水平與中性(xing)(xing)(xing)粒(li)(li)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)趨(qu)化功能的(de)(de)(de)相關性(xing)(xing)(xing)，證明(ming)p2x1表(biao)(biao)達(da)(da)越高，中性(xing)(xing)(xing)粒(li)(li)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)趨(qu)化功能就(jiu)(jiu)越差，反之，則中性(xing)(xing)(xing)粒(li)(li)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)趨(qu)化功能就(jiu)(jiu)越好(hao)。

18、本發明取得的有(you)益效果在于：

19、本發明通過定點設(she)計人源p2x1蛋(dan)白(bai)胞(bao)(bao)(bao)外特定表(biao)(biao)(biao)(biao)位基因序列，并用(yong)(yong)(yong)(yong)真核細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)為(wei)宿(su)主(zhu)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)高表(biao)(biao)(biao)(biao)達(da)制(zhi)備人源p2x1蛋(dan)白(bai)片段做為(wei)抗(kang)(kang)(kang)原免疫小(xiao)(xiao)鼠(shu)；應(ying)(ying)用(yong)(yong)(yong)(yong)小(xiao)(xiao)鼠(shu)雜(za)交瘤單(dan)克隆抗(kang)(kang)(kang)體制(zhi)備技術，以具有天然空間(jian)結構(gou)的全長人源p2x1蛋(dan)白(bai)作為(wei)包(bao)被抗(kang)(kang)(kang)原，elisa法篩選制(zhi)備獲(huo)得一(yi)個高效價p2x1單(dan)克隆抗(kang)(kang)(kang)體；經fitc標(biao)記后與市(shi)售流(liu)(liu)(liu)式(shi)抗(kang)(kang)(kang)體進行(xing)中性(xing)(xing)粒細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的檢測(ce)比(bi)較，證明其特異(yi)性(xing)(xing)和靈敏度均優于(yu)(yu)市(shi)售抗(kang)(kang)(kang)體；應(ying)(ying)用(yong)(yong)(yong)(yong)本發明獲(huo)得的p2x1抗(kang)(kang)(kang)體對健康人群(qun)和細(xi)(xi)菌(jun)感(gan)染肺炎患者外周血中性(xing)(xing)粒細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)進行(xing)流(liu)(liu)(liu)式(shi)分(fen)析(xi)，檢測(ce)出(chu)患者中性(xing)(xing)粒細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)表(biao)(biao)(biao)(biao)面p2x1表(biao)(biao)(biao)(biao)達(da)水平高于(yu)(yu)健康人，達(da)極其顯著差異(yi)，p<0.0001。本發明獲(huo)得的p2x1單(dan)克隆抗(kang)(kang)(kang)體經熒光標(biao)記后，可作為(wei)流(liu)(liu)(liu)式(shi)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)儀檢測(ce)抗(kang)(kang)(kang)體，檢測(ce)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)膜表(biao)(biao)(biao)(biao)面p2x1表(biao)(biao)(biao)(biao)達(da)水平，進而應(ying)(ying)用(yong)(yong)(yong)(yong)于(yu)(yu)基于(yu)(yu)p2x1表(biao)(biao)(biao)(biao)達(da)的細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)功能的分(fen)析(xi)應(ying)(ying)用(yong)(yong)(yong)(yong)，所述分(fen)析(xi)應(ying)(ying)用(yong)(yong)(yong)(yong)包(bao)括(kuo)但不僅(jin)限于(yu)(yu)中性(xing)(xing)粒細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)趨化功能、血小(xiao)(xiao)板凝集功能、細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)周期、細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)凋亡、細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)分(fen)化或腫(zhong)瘤細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)活性(xing)(xing)的流(liu)(liu)(liu)式(shi)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)儀檢測(ce)分(fen)析(xi)應(ying)(ying)用(yong)(yong)(yong)(yong)。