本(ben)發明屬于生物學領域，具體涉及小花清風藤中六種酰胺類生物堿的分離提取(qu)方法。
背景技術：
小(xiao)花清(qing)風(feng)藤(teng)(teng)是清(qing)風(feng)藤(teng)(teng)科清(qing)風(feng)藤(teng)(teng)屬的(de)(de)木質藤(teng)(teng)本(ben)或攀綠(lv)灌木，其根(gen)、莖、枝(zhi)、葉均可入藥。枝(zhi)葉入藥對治療病毒(du)性肝炎(yan)有較好(hao)的(de)(de)療效(xiao)。小(xiao)花清(qing)風(feng)藤(teng)(teng)葉子(zi)中含有以下6種具有醫藥用途(tu)及中藥研究價(jia)值的(de)(de)酰胺(an)類化合物(分別簡稱(cheng)為化合物1、2、3、4、5、6)：
由(you)于(yu)以上6種酰胺類化合物結(jie)構差別較(jiao)小，致分離純化難度較(jiao)大。
技術實現要素：
本(ben)發明(ming)目的(de)在于(yu)提供小花(hua)清風藤中六種酰胺類生物(wu)堿的(de)分離提取方法。
為實現(xian)上述目的，本發(fa)明的技術方案為：
小(xiao)花清風藤(teng)中(zhong)六種酰胺類生物(wu)堿的分(fen)離(li)提取(qu)方法，具體包(bao)括以下(xia)步驟：
A：取(qu)小花清風藤干燥葉，粉碎，用其質量3.95倍的甲醇超(chao)聲提取(qu)；
B：將甲醇提取后(hou)得到的提取液濃縮(suo)，向濃縮(suo)后(hou)的溶液中加入等體積量的純化水，并(bing)攪(jiao)拌(ban)均勻，在(zai)7℃條件下放(fang)置過夜；
C：將放置(zhi)過夜的溶液(ye)抽濾(lv)，棄去沉淀，濾(lv)液(ye)濃縮至不含(han)醇；
D：將步驟C得(de)到(dao)的(de)濃縮液加入其體積2倍量的(de)純化(hua)水稀釋，用等體積的(de)乙酸(suan)乙酯對稀釋后的(de)溶(rong)液進行萃取(qu)，將萃取(qu)液濃縮得(de)到(dao)浸膏；
E：將步驟D得(de)到的浸(jin)膏加(jia)入其(qi)質(zhi)量1.58倍的甲醇溶(rong)解(jie)，濾去(qu)不溶(rong)物后，向甲醇溶(rong)液中加(jia)入等體積的丙酮，并攪拌(ban)均勻(yun)，在7℃的條件下(xia)放置過夜；
F：將步驟E得到的溶液進行抽濾(lv)(lv)，棄去沉淀，濾(lv)(lv)液濃縮至干，即得到6種酰胺(an)的總生物堿樣品；
G：將總(zong)生(sheng)物堿樣品用(yong)其質量(liang)0.79倍(bei)(bei)的(de)(de)(de)丙酮溶(rong)(rong)解，加入與總(zong)生(sheng)物堿樣品質量(liang)相同(tong)的(de)(de)(de)柱色(se)譜硅(gui)膠(jiao)(jiao)，攪拌均勻，并(bing)揮去丙酮溶(rong)(rong)劑(ji)，用(yong)硅(gui)膠(jiao)(jiao)柱色(se)譜進行(xing)進一步分(fen)(fen)(fen)離純化，取(qu)總(zong)生(sheng)物堿樣品質量(liang)20倍(bei)(bei)的(de)(de)(de)柱色(se)譜硅(gui)膠(jiao)(jiao)，濕法裝柱，以二氯甲(jia)烷:甲(jia)醇的(de)(de)(de)體(ti)積(ji)比為(wei)(wei)(wei)10:1的(de)(de)(de)溶(rong)(rong)液(ye)(ye)為(wei)(wei)(wei)起(qi)(qi)始溶(rong)(rong)劑(ji)進行(xing)洗(xi)脫(tuo)，共收集3部(bu)分(fen)(fen)(fen)樣品，分(fen)(fen)(fen)別命名為(wei)(wei)(wei)E1、E2、E3，E1部(bu)分(fen)(fen)(fen)為(wei)(wei)(wei)樣品的(de)(de)(de)綠色(se)色(se)帶全部(bu)出柱后(hou)即停止收集，E2部(bu)分(fen)(fen)(fen)為(wei)(wei)(wei)以二氯甲(jia)烷:甲(jia)醇的(de)(de)(de)體(ti)積(ji)比為(wei)(wei)(wei)10:1的(de)(de)(de)溶(rong)(rong)液(ye)(ye)為(wei)(wei)(wei)起(qi)(qi)始溶(rong)(rong)劑(ji)洗(xi)脫(tuo)四個保(bao)留體(ti)積(ji)的(de)(de)(de)溶(rong)(rong)劑(ji)濃縮后(hou)的(de)(de)(de)產物，E3部(bu)分(fen)(fen)(fen)為(wei)(wei)(wei)純甲(jia)醇洗(xi)脫(tuo)部(bu)分(fen)(fen)(fen)，E1和E3部(bu)分(fen)(fen)(fen)均棄去；
H：以二氯甲烷:甲醇的體積比為2.6:1的溶液為展開劑，將E2部分進行制備薄層分離，分別得到4個樣品，分別為E2-1、E2-2、E2-3、E2-4，其中，E2-1的Rf值為0.90、E2-2的Rf值為0.56～0.60、E2-3的Rf值為0.40～0.50、E2-4的Rf值為0.20～0.26；
I：將E2-2、E2-3、E2-4進一步進行制備薄層,其中，E2-2、E2-3均以正己烷:丙酮的體積比為1.5:1的溶液為展開劑，且采取二次展開，E2-2得到兩個樣品分別命名為E2-2-1和E2-2-2，E2-2-1和E2-2-2的Rf值分別為0.40和0.32；E2-3得到兩個樣品分別命名為E2-3-1和E2-3-2，二者的Rf值分別為0.41和0.35；E2-4以正己烷:乙酸乙酯的體積比為1:2的溶液為展開劑，得到兩個樣品，分別命名為E2-4-1和E2-4-2，二者的Rf值分別為0.27和0.21；E2-2-1、E2-2-2、E2-3-1、E2-3-2、E2-4-1、E2-4-2分別對(dui)應6個(ge)酰胺類化合物中(zhong)的1、2、3、4、5、6。
進一步(bu)，在整個分離提取過程(cheng)中，溫度≤50℃。
進一步，步驟(zou)A中(zhong)，用(yong)甲醇超聲(sheng)提(ti)取3次，每次4小(xiao)時，溫度為50℃。
進一(yi)步(bu)(bu)，步(bu)(bu)驟B所述濃(nong)縮(suo)是將提取(qu)液濃(nong)縮(suo)至總提取(qu)體積的十分之一(yi)。
進一步(bu)，步(bu)驟C和(he)步(bu)驟F所(suo)述抽濾所(suo)用儀器為布氏漏斗(dou)。
進(jin)一步，步驟G所述柱色(se)譜硅膠的規(gui)格為100-300目(mu)。
本發明的有益效果在于：
本發明解(jie)決(jue)了小(xiao)(xiao)花清風藤中6種酰胺類化合物(wu)結構差(cha)別較小(xiao)(xiao)，致分(fen)(fen)離純化難度較大的問題，成功分(fen)(fen)離純化了6種酰胺類化合物(wu)。其中化合物(wu)N-cis-N-coumaroyl tyramine為從該(gai)植物(wu)中得(de)(de)到的新天然(ran)產物(wu)，其他5種均為該(gai)植物(wu)中首(shou)次分(fen)(fen)離得(de)(de)到的。
具體實施方式
所(suo)舉(ju)實施(shi)(shi)例是為了更好地對(dui)本(ben)發(fa)明的(de)(de)(de)內(nei)容進(jin)行說明，但并不是本(ben)發(fa)明的(de)(de)(de)內(nei)容僅限于所(suo)舉(ju)實施(shi)(shi)例。所(suo)以(yi)熟悉本(ben)領(ling)域的(de)(de)(de)技(ji)術人員根據上述(shu)發(fa)明內(nei)容對(dui)實施(shi)(shi)方案進(jin)行非本(ben)質的(de)(de)(de)改(gai)進(jin)和調(diao)整，仍屬(shu)于本(ben)發(fa)明的(de)(de)(de)保護范圍。
實施例1
小花(hua)清風藤(teng)中六種酰胺(an)類生物堿(jian)的分(fen)離提取方法，具體(ti)步驟為：
A：取小花清(qing)風(feng)藤(teng)干燥(zao)葉(xie)，粉碎(sui)，用其質量3.95倍的甲(jia)醇(chun)超聲提取3次，每次4小時，溫度為50℃；
B：將甲醇提(ti)取后得到的提(ti)取液(ye)濃縮至總提(ti)取體(ti)積(ji)的十分之一，向濃縮后的溶液(ye)中(zhong)加入(ru)等(deng)體(ti)積(ji)量(liang)的純化水，并(bing)攪拌均勻(yun)，在7℃條件(jian)下放置過夜；
C：將放置過夜(ye)的(de)溶液(ye)用布氏漏(lou)斗(dou)抽濾，棄去沉淀，濾液(ye)濃縮至不含醇；
D：將步驟(zou)C得到的濃縮(suo)液加入其體積2倍(bei)量(liang)的純化水稀(xi)釋，用(yong)等(deng)體積的乙酸乙酯(zhi)對稀(xi)釋后(hou)的溶(rong)液進行萃取，將萃取液濃縮(suo)得到浸膏；
E：將步驟D得(de)到的(de)浸膏(gao)加入其(qi)質量1.58倍的(de)甲(jia)醇溶解，濾去不溶物后，向甲(jia)醇溶液(ye)中加入等體(ti)積的(de)丙(bing)酮，并攪拌均勻，在7℃的(de)條件下放置過(guo)夜；
F：將步(bu)驟E得到的溶液(ye)用布氏漏斗抽濾，棄去沉淀，濾液(ye)濃(nong)縮(suo)至干，即得到6種酰胺的總生物堿樣品(pin)；
G：將總(zong)生物(wu)堿樣(yang)(yang)品(pin)用(yong)其質量(liang)0.79倍的(de)(de)(de)丙酮溶(rong)(rong)(rong)解，加入與總(zong)生物(wu)堿樣(yang)(yang)品(pin)質量(liang)相(xiang)同(tong)的(de)(de)(de)柱(zhu)色(se)譜(pu)(pu)(pu)硅膠(jiao)，攪拌均勻，并揮去(qu)丙酮溶(rong)(rong)(rong)劑(ji)，用(yong)硅膠(jiao)柱(zhu)色(se)譜(pu)(pu)(pu)進(jin)行(xing)進(jin)一步分(fen)離(li)純化，取總(zong)生物(wu)堿樣(yang)(yang)品(pin)質量(liang)20倍的(de)(de)(de)柱(zhu)色(se)譜(pu)(pu)(pu)硅膠(jiao)，濕法裝柱(zhu)，以二氯甲烷:甲醇的(de)(de)(de)體(ti)積(ji)(ji)比(bi)為(wei)(wei)(wei)10:1的(de)(de)(de)溶(rong)(rong)(rong)液為(wei)(wei)(wei)起始(shi)溶(rong)(rong)(rong)劑(ji)進(jin)行(xing)洗(xi)脫(tuo)，共收(shou)集3部(bu)(bu)分(fen)樣(yang)(yang)品(pin)，分(fen)別命名為(wei)(wei)(wei)E1、E2、E3，E1部(bu)(bu)分(fen)為(wei)(wei)(wei)樣(yang)(yang)品(pin)的(de)(de)(de)綠色(se)色(se)帶全部(bu)(bu)出柱(zhu)后(hou)(hou)即停(ting)止收(shou)集，E2部(bu)(bu)分(fen)為(wei)(wei)(wei)以二氯甲烷:甲醇的(de)(de)(de)體(ti)積(ji)(ji)比(bi)為(wei)(wei)(wei)10:1的(de)(de)(de)溶(rong)(rong)(rong)液為(wei)(wei)(wei)起始(shi)溶(rong)(rong)(rong)劑(ji)洗(xi)脫(tuo)四個(ge)保留(liu)體(ti)積(ji)(ji)的(de)(de)(de)溶(rong)(rong)(rong)劑(ji)濃(nong)縮后(hou)(hou)的(de)(de)(de)產物(wu)，E3部(bu)(bu)分(fen)為(wei)(wei)(wei)純甲醇洗(xi)脫(tuo)部(bu)(bu)分(fen)，E1和(he)E3部(bu)(bu)分(fen)均棄去(qu)；使用(yong)的(de)(de)(de)制備薄層板(ban)為(wei)(wei)(wei)德國Merck生產的(de)(de)(de)TLC Silica Gel Plate 60 F254 Glass plates；
H：以二氯甲烷:甲醇的體積比為2.6:1的溶液為展開劑，將E2部分進行制備薄層分離，分別得到4個樣品，分別為E2-1、E2-2、E2-3、E2-4，其中，E2-1的Rf值為0.90、E2-2的Rf值為0.56～0.60、E2-3的Rf值為0.40～0.50、E2-4的Rf值為0.20～0.26；
I：將E2-2、E2-3、E2-4進一步進行制備薄層,其中，E2-2、E2-3均以正己烷:丙酮的體積比為1.5:1的溶液為展開劑，且采取二次展開，E2-2得到兩個樣品分別命名為E2-2-1和E2-2-2，E2-2-1和E2-2-2的Rf值分別為0.40和0.32；E2-3得到兩個樣品分別命名為E2-3-1和E2-3-2，二者的Rf值分別為0.41和0.35；E2-4以正己烷:乙酸乙酯的體積比為1:2的溶液為展開劑，得到兩個樣品，分別命名為E2-4-1和E2-4-2，二者的Rf值分別為0.27和0.21；E2-2-1、E2-2-2、E2-3-1、E2-3-2、E2-4-1、E2-4-2分別對應6個酰胺類化合物的1、2、3、4、5、6。
在整個分離提取過程中(zhong)，溫度≤50℃。
步驟G所述柱色譜硅(gui)膠的規格為100目。
實施例2
小花(hua)清風藤中(zhong)六種酰胺類生物堿的分離提取方法，具體步驟為(wei)：
A：取(qu)小花(hua)清風藤(teng)干燥葉(xie)，粉碎(sui)，用其質量(liang)3.95倍的甲(jia)醇超聲提取(qu)3次，每次4小時，溫度(du)為50℃；
B：將(jiang)甲醇提(ti)取(qu)后得(de)到的(de)提(ti)取(qu)液濃(nong)縮(suo)至(zhi)總提(ti)取(qu)體積的(de)十分之一，向濃(nong)縮(suo)后的(de)溶(rong)液中(zhong)加入等體積量(liang)的(de)純化水，并攪拌均勻，在7℃條件下放(fang)置過(guo)夜；
C：將放(fang)置過夜(ye)的溶液(ye)(ye)用布氏漏斗(dou)抽濾，棄去沉淀，濾液(ye)(ye)濃縮至不含醇；
D：將步驟C得到(dao)的(de)濃(nong)縮液(ye)加入其(qi)體積2倍量的(de)純(chun)化水稀釋，用等體積的(de)乙酸乙酯(zhi)對稀釋后的(de)溶(rong)液(ye)進行萃取，將萃取液(ye)濃(nong)縮得到(dao)浸膏；
E：將步驟D得到(dao)的浸膏加(jia)入(ru)其質量1.58倍的甲(jia)醇(chun)(chun)溶解(jie)，濾去不溶物(wu)后，向甲(jia)醇(chun)(chun)溶液(ye)中加(jia)入(ru)等體積的丙酮，并攪拌均勻(yun)，在7℃的條(tiao)件下放置(zhi)過夜(ye)；
F：將步驟E得到的溶液用布氏漏(lou)斗抽濾(lv)，棄去沉淀，濾(lv)液濃縮至干(gan)，即得到6種酰胺的總生(sheng)物堿樣品；
G：將(jiang)總生(sheng)物(wu)堿(jian)樣品用(yong)其(qi)質量(liang)0.79倍的(de)(de)丙酮溶解，加入與總生(sheng)物(wu)堿(jian)樣品質量(liang)相(xiang)同的(de)(de)柱(zhu)色(se)譜(pu)(pu)硅膠，攪拌(ban)均(jun)勻，并揮去丙酮溶劑，用(yong)硅膠柱(zhu)色(se)譜(pu)(pu)進(jin)(jin)行進(jin)(jin)一步分(fen)(fen)離純(chun)化，取總生(sheng)物(wu)堿(jian)樣品質量(liang)20倍的(de)(de)柱(zhu)色(se)譜(pu)(pu)硅膠，濕法裝柱(zhu)，以(yi)(yi)二(er)氯(lv)(lv)甲(jia)烷:甲(jia)醇(chun)(chun)的(de)(de)體(ti)積比(bi)為(wei)(wei)10:1的(de)(de)溶液為(wei)(wei)起始溶劑進(jin)(jin)行洗脫，共(gong)收(shou)(shou)集3部(bu)(bu)分(fen)(fen)樣品，分(fen)(fen)別(bie)命名為(wei)(wei)E1、E2、E3，E1部(bu)(bu)分(fen)(fen)為(wei)(wei)樣品的(de)(de)綠色(se)色(se)帶全部(bu)(bu)出柱(zhu)后即停止(zhi)收(shou)(shou)集，E2部(bu)(bu)分(fen)(fen)為(wei)(wei)以(yi)(yi)二(er)氯(lv)(lv)甲(jia)烷:甲(jia)醇(chun)(chun)的(de)(de)體(ti)積比(bi)為(wei)(wei)10:1的(de)(de)溶液為(wei)(wei)起始溶劑洗脫四(si)個保留體(ti)積的(de)(de)溶劑濃縮(suo)后的(de)(de)產物(wu)，E3部(bu)(bu)分(fen)(fen)為(wei)(wei)純(chun)甲(jia)醇(chun)(chun)洗脫部(bu)(bu)分(fen)(fen)，E1和E3部(bu)(bu)分(fen)(fen)均(jun)棄(qi)去；使用(yong)的(de)(de)制備薄層板(ban)為(wei)(wei)德國Merck生(sheng)產的(de)(de)TLC Silica Gel Plate 60 F254 Glass plates；
H：以二氯甲烷:甲醇的體積比為2.6:1的溶液為展開劑，將E2部分進行制備薄層分離，分別得到4個樣品，分別為E2-1、E2-2、E2-3、E2-4，其中，E2-1的Rf值為0.90、E2-2的Rf值為0.56～0.60、E2-3的Rf值為0.40～0.50、E2-4的Rf值為0.20～0.26；
I：將E2-2、E2-3、E2-4進一步進行制備薄層,其中，E2-2、E2-3均以正己烷:丙酮的體積比為1.5:1的溶液為展開劑，且采取二次展開，E2-2得到兩個樣品分別命名為E2-2-1和E2-2-2，E2-2-1和E2-2-2的Rf值分別為0.40和0.32；E2-3得到兩個樣品分別命名為E2-3-1和E2-3-2，二者的Rf值分別為0.41和0.35；E2-4以正己烷:乙酸乙酯的體積比為1:2的溶液為展開劑，得到兩個樣品，分別命名為E2-4-1和E2-4-2，二者的Rf值分(fen)別(bie)為0.27和0.21；E2-2-1、E2-2-2、E2-3-1、E2-3-2、E2-4-1、E2-4-2分(fen)別(bie)對應6個(ge)酰胺類化(hua)合(he)物中的1、2、3、4、5、6。
在整個分(fen)離(li)提取過程中(zhong)，溫度≤50℃。
步驟G所述(shu)柱色譜(pu)硅(gui)膠的規(gui)格(ge)為300目。
實施例3
小花清(qing)風藤中六種酰胺類生物堿的分離提(ti)取方法，具體步(bu)驟為：
A：取小花清風藤干燥(zao)葉，粉碎，用(yong)其(qi)質量3.95倍的甲醇超聲提取3次，每次4小時，溫度為50℃；
B：將(jiang)甲醇提(ti)取后得(de)到的(de)提(ti)取液(ye)濃縮至總提(ti)取體(ti)積(ji)的(de)十(shi)分之(zhi)一，向濃縮后的(de)溶(rong)液(ye)中加入等體(ti)積(ji)量的(de)純化水，并(bing)攪拌均(jun)勻(yun)，在7℃條件下(xia)放置過夜；
C：將放置過夜的溶液(ye)用布氏漏(lou)斗(dou)抽(chou)濾(lv)，棄去沉(chen)淀，濾(lv)液(ye)濃縮(suo)至不含(han)醇；
D：將步驟(zou)C得(de)到(dao)的(de)(de)濃(nong)縮液加(jia)入其體積2倍(bei)量的(de)(de)純化水(shui)稀(xi)釋(shi)(shi)，用(yong)等體積的(de)(de)乙酸(suan)乙酯(zhi)對稀(xi)釋(shi)(shi)后(hou)的(de)(de)溶(rong)液進行萃取，將萃取液濃(nong)縮得(de)到(dao)浸(jin)膏(gao)；
E：將步驟(zou)D得到(dao)的浸膏(gao)加入(ru)其質量1.58倍的甲醇(chun)溶(rong)(rong)解，濾去不溶(rong)(rong)物后，向甲醇(chun)溶(rong)(rong)液中加入(ru)等體積(ji)的丙酮，并攪拌均(jun)勻，在(zai)7℃的條件(jian)下放(fang)置過夜；
F：將步驟E得(de)到的溶液用布(bu)氏漏(lou)斗抽濾(lv)，棄去沉(chen)淀，濾(lv)液濃縮至干(gan)，即得(de)到6種酰胺的總生物堿樣品；
G：將總生(sheng)(sheng)物堿(jian)樣品用其質(zhi)量0.79倍(bei)的(de)(de)(de)丙(bing)酮(tong)溶(rong)(rong)解(jie)，加入與總生(sheng)(sheng)物堿(jian)樣品質(zhi)量相同的(de)(de)(de)柱(zhu)(zhu)色(se)譜硅(gui)膠(jiao)，攪拌均(jun)勻，并(bing)揮去(qu)丙(bing)酮(tong)溶(rong)(rong)劑(ji)，用硅(gui)膠(jiao)柱(zhu)(zhu)色(se)譜進行進一步分(fen)(fen)(fen)離純(chun)化(hua)，取總生(sheng)(sheng)物堿(jian)樣品質(zhi)量20倍(bei)的(de)(de)(de)柱(zhu)(zhu)色(se)譜硅(gui)膠(jiao)，濕法裝柱(zhu)(zhu)，以二氯(lv)甲(jia)烷:甲(jia)醇的(de)(de)(de)體積比(bi)為(wei)10:1的(de)(de)(de)溶(rong)(rong)液為(wei)起(qi)始(shi)溶(rong)(rong)劑(ji)進行洗脫(tuo)，共(gong)收集3部(bu)分(fen)(fen)(fen)樣品，分(fen)(fen)(fen)別命名為(wei)E1、E2、E3，E1部(bu)分(fen)(fen)(fen)為(wei)樣品的(de)(de)(de)綠色(se)色(se)帶全部(bu)出柱(zhu)(zhu)后即停止(zhi)收集，E2部(bu)分(fen)(fen)(fen)為(wei)以二氯(lv)甲(jia)烷:甲(jia)醇的(de)(de)(de)體積比(bi)為(wei)10:1的(de)(de)(de)溶(rong)(rong)液為(wei)起(qi)始(shi)溶(rong)(rong)劑(ji)洗脫(tuo)四個保留體積的(de)(de)(de)溶(rong)(rong)劑(ji)濃縮(suo)后的(de)(de)(de)產(chan)物，E3部(bu)分(fen)(fen)(fen)為(wei)純(chun)甲(jia)醇洗脫(tuo)部(bu)分(fen)(fen)(fen)，E1和E3部(bu)分(fen)(fen)(fen)均(jun)棄去(qu)；使用的(de)(de)(de)制備薄層板為(wei)德國(guo)Merck生(sheng)(sheng)產(chan)的(de)(de)(de)TLC Silica Gel Plate 60 F254 Glass plates；
H：以二氯甲烷:甲醇的體積比為2.6:1的溶液為展開劑，將E2部分進行制備薄層分離，分別得到4個樣品，分別為E2-1、E2-2、E2-3、E2-4，其中，E2-1的Rf值為0.90、E2-2的Rf值為0.56～0.60、E2-3的Rf值為0.40～0.50、E2-4的Rf值為0.20～0.26；
I：將E2-2、E2-3、E2-4進一步進行制備薄層,其中，E2-2、E2-3均以正己烷:丙酮的體積比為1.5:1的溶液為展開劑，且采取二次展開，E2-2得到兩個樣品分別命名為E2-2-1和E2-2-2，E2-2-1和E2-2-2的Rf值分別為0.40和0.32；E2-3得到兩個樣品分別命名為E2-3-1和E2-3-2，二者的Rf值分別為0.41和0.35；E2-4以正己烷:乙酸乙酯的體積比為1:2的溶液為展開劑，得到兩個樣品，分別命名為E2-4-1和E2-4-2，二者的Rf值分(fen)別為0.27和0.21；E2-2-1、E2-2-2、E2-3-1、E2-3-2、E2-4-1、E2-4-2分(fen)別對應(ying)6個(ge)酰胺類化合物的1、2、3、4、5、6。
在整(zheng)個分離提取過(guo)程中，溫度≤50℃。
步驟G所(suo)述柱(zhu)色譜(pu)硅膠的規格為200目。
此外(wai)，應當(dang)理解，雖然本說明(ming)書(shu)(shu)按照實施方(fang)式加以描(miao)述，但并非每個實施方(fang)式僅(jin)包含一個獨立的技(ji)術方(fang)案，說明(ming)書(shu)(shu)的這種敘述方(fang)式僅(jin)僅(jin)是為(wei)清楚起見(jian)，本領域技(ji)術人員(yuan)(yuan)應當(dang)將說明(ming)書(shu)(shu)作為(wei)一個整體，各實施例(li)中(zhong)的技(ji)術方(fang)案也(ye)可(ke)以經適當(dang)組合，形成本領域技(ji)術人員(yuan)(yuan)可(ke)以理解的其他實施方(fang)式。