一種利用亞臨界水提取石斛多糖的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種利用亞臨界水提取石斛多糖的方法，屬于天然活性成分提取領域。
【背景技術】
[0002]石斛是蘭科石斛屬植物，我國76種石斛屬植物中有30多種作為藥用，中國藥典2005版收載3種常用品種金釵石斛、鐵皮石斛、馬鞭石斛。在《神農本草經》中，石斛被列為上品，具有滋陰清熱、生津益胃、潤肺止咳、明目強身等功效。化學成分分析顯示，石斛中的多糖成分含量在3%-30%之間，是石斛中的主要活性成分(朱華，黃學萃，楊海廣，等.石斛屬多糖的研宄進展[J].醫藥導報，2007，26 (12):1476-1479.)。藥理學研宄表明，石斛多糖的藥理作用主要表現在免疫、降血糖以及強壯等方面(陳璋輝，陳云龍，吳濤.細莖石斛多糖DMP4a-l的結構特性及免疫活性研宄[J].中國藥學雜志，2005，4(25):1781-1784.)。
[0003]目前石斛多糖的提取方法主要是采用水提法、回流提取法、超聲波/微波提取法、酶提取法、超高壓提取法等。劉文等人(劉文，熊耀康.微波輔助提取金釵石斛多糖的工藝研宄[J].中華中醫藥學刊，2009，27 ￠):1315-1317.)應用微波輔助提取技術，在微波頻率1470MHz，料液比1:30條件下，浸提3h后微波lOmin，得到金釵石斛多糖收率為4.23%。縱偉等人(縱偉，李翠翠.石斛多糖超高壓提取工藝條件的優化[J].鄭州輕工業學院學報，2012，27(4):36-39.)采用超高壓方法提取鐵皮石斛中的多糖成分，在固液比1:20，采用300MPa的壓力提取6min后，石斛多糖的得率達到19.27%。雖然提取時間縮短，但超高壓條件對設備要求較高，很難實現工業化生產。
[0004]亞臨界水又稱為高壓熱水，是指在壓力大于IMPa時，將水加熱到100°C以上，臨界溫度374°C以下，水體依然保持液體狀態。同文獻報道的提取方法相比，亞臨界水提取效率高，溶解性與滲透能力強，其作用效果迅速且能量消耗較少，同時亞臨界水會使蛋白質、淀粉等變性，給后續的分離純化帶來方便，非常適用于工業的大規模生產的提取。此種方法提取石斛多糖價廉、無污染且提取率高，是一種綠色萃取技術，目前尚未見報道。

【發明內容】

[0005]本發明的目的是解決現有技術的不足和缺陷，提供一種前處理簡單，提取得率高，同時又能保持有效成分結構與抗氧化活性的適應工業生產的亞臨界水提取石斛多糖的方法。本發明的技術方案概述如下:
本發明提出的一種利用亞臨界水提取石斛多糖的方法，具體包括以下步驟:
(I)將石斛粉碎，過20?80目篩，得到石斛粉末。
[0006](2)將步驟(I)所得的石斛粉末用80%?95%乙醇浸泡，在70?90°C下回流脫脂30?60min，得到混合液A。
[0007](3)將混合液A，放入離心機的離心管中，在轉速3000?5000r/min下離心5?15min后，取下離心管，得到上清液A和沉淀物A。
[0008](4)將殘渣A放于70?105°C電熱恒溫鼓風干燥箱中干燥5?10h，得到脫脂后的石斛粉末。
[0009](5)將步驟(4)所得的脫脂后的石斛粉末裝入亞臨界水提取裝置中，亞臨界水與石斛粉末的液固比為15?45mL/g，提取壓力為0.5?2.0MPa,提取溫度為100?160°C，提取時間為5?30min，提取I?3次，得到混合液B。
[0010]所述的亞臨界水提取裝置為TGYF-A型不銹鋼高壓提取器。
[0011](6)將混合液B，放入離心機的離心管中，在轉速3000?5000r/min下離心5?15min后，取下離心管，得到上清液B和沉淀物B。
[0012](7)將3?6倍體積的無水乙醇加入上清液B，在溫度為I?5°C下靜置5_10h，得到混合液C。
[0013](8)將混合液C，放入離心機的離心管中，在轉速3000?5000r/min下離心5?15min后，取下離心管，得到上清液C和沉淀物C。
[0014](8)將沉淀物C依次用3?6倍體積的無水乙醇、丙酮和乙醚洗滌，得到石斛多糖。
[0015]本發明提出的一種利用亞臨界水提取石斛多糖的方法，得到的石斛多糖收率為20.67 ?23.36%，純度為 91.50 ~ 98.21%。
[0016]本發明優點如下:
(I)本發明提出的一種利用亞臨界水提取石斛多糖的方法，采用亞臨界水提取石斛多糖，提取率明顯高于傳統的熱水浸提法，并且提取時間短，提取效率高。
[0017](2)本發明提出的一種利用亞臨界水提取石斛多糖的方法，得到的石斛多糖具有顯著的抗氧化活性，對羥基自由基、ABTS自由基和超氧陰離子自由基均顯示較強的清除能力。
[0018](3)本發明提出的一種利用亞臨界水提取石斛多糖的方法，該工藝流程簡單，生產周期短，綠色無污染，且設備要求低，易實現工業應用。
【附圖說明】
[0019]圖1:本發明提出的一種利用亞臨界水提取石斛多糖的方法的工藝流程圖。
【具體實施方式】
[0020]下面將結合附圖和實施例對本發明做進一步的詳細說明。
[0021]本發明提出的一種利用亞臨界水提取石斛多糖的方法，具體包括以下步驟:
(I)將石斛粉碎，過20?80目篩，得到石斛粉末。
[0022](2)將步驟(I)所得的石斛粉末用80%?95%乙醇浸泡，在70?90°C下回流脫脂30?60min，得到混合液A。
[0023](3)將混合液A，放入離心機的離心管中，在轉速3000?5000r/min下離心5?15min后，取下離心管，得到上清液A和沉淀物A。
[0024](4)將殘渣A放于70?105°C電熱恒溫鼓風干燥箱中干燥5?10h，得到脫脂后的石斛粉末。
[0025](5)將步驟(4)所得的脫脂后的石斛粉末裝入亞臨界水提取裝置中，亞臨界水與石斛粉末的液固比為15?45mL/g，提取壓力為0.5?2.0MPa,提取溫度為100?160°C，提取時間為5?30min，提取I?3次，得到混合液B。
[0026]所述的亞臨界水提取裝置為TGYF-A型不銹鋼高壓提取器。
[0027](6)將混合液B，放入離心機的離心管中，在轉速3000?5000r/min下離心5?15min后，取下離心管，得到上清液B和沉淀物B。
[0028](7)將3?6倍體積的無水乙醇加入上清液B，在溫度為I?5°C下靜置5_10h，得到混合液C。
[0029](8)將混合液C，放入離心機的離心管中，在轉速3000?5000r/min下離心5?15min后，取下離心管，得到上清液C和沉淀物C。
[0030](8)將沉淀物C依次用3?6倍體積的無水乙醇、丙酮和乙醚洗滌，得到石斛多糖。
[0031]本發明提出的一種利用亞臨界水提取石斛多糖的方法，得到的石斛多糖收率為20.67?23.36%，純度為91.50?98.21%，體外抗氧化活性測定結果顯示，在石斛多糖濃度為1.0mg/mL時，對羥基自由基和ABTS自由基清除能力最強，清除率達到了 100%，對超氧陰離子自由基清除率達到了 60%以上。
[0032]實施例1:
一種利用亞臨界水提取石斛多糖的方法，具體包括以下步驟:
(I)將石斛粉碎，過40目篩，得到石斛粉末。
[0033](2)將步驟(I)所得的石斛粉末用85%乙醇浸泡，在90°C下回流脫脂30min，得到混合液A。
[0034](3)將混合液A，放入離心機的離心管中，在轉速5000r/min下離心5min后，取下離心管，得到上清液A和沉淀物A。
[0035](4)將殘渣A放于80°C電熱恒溫鼓風干燥箱中干燥9h，得到脫