本發明(ming)屬于天然產物提取技術領域，尤其涉及一(yi)種肉(rou)桂多糖(tang)的水提取方法。

背景技術：

肉(rou)(rou)(rou)桂(gui)(gui)(gui)(gui)(Cinnamomum cassia presl)，樟科(ke)植(zhi)物(wu)，其(qi)干燥(zao)樹皮為我(wo)國衛生部公布(bu)的(de)(de)即(ji)可做(zuo)食(shi)品(pin)(pin)又可做(zuo)藥(yao)(yao)(yao)品(pin)(pin)的(de)(de)物(wu)品(pin)(pin)之一(yi)。我(wo)國是肉(rou)(rou)(rou)桂(gui)(gui)(gui)(gui)主產區(qu)，肉(rou)(rou)(rou)桂(gui)(gui)(gui)(gui)資(zi)源豐富。肉(rou)(rou)(rou)桂(gui)(gui)(gui)(gui)所含化學成(cheng)分有(you)揮(hui)(hui)(hui)(hui)發油、酚類、有(you)機酸、鞣質、多(duo)糖(tang)(tang)(tang)、甙、甾體、內(nei)脂、香豆精等。藥(yao)(yao)(yao)理試驗表明，肉(rou)(rou)(rou)桂(gui)(gui)(gui)(gui)多(duo)糖(tang)(tang)(tang)具有(you)降(jiang)血糖(tang)(tang)(tang)的(de)(de)生理活性。有(you)文(wen)獻(xian)(xian)報(bao)導了一(yi)種肉(rou)(rou)(rou)桂(gui)(gui)(gui)(gui)多(duo)糖(tang)(tang)(tang)的(de)(de)提(ti)(ti)取(qu)方(fang)法：將肉(rou)(rou)(rou)桂(gui)(gui)(gui)(gui)粉(fen)碎(sui)成(cheng)粗粉(fen)，加(jia)5倍(bei)(bei)量石油醚(mi)回(hui)(hui)流(liu)(liu)(liu)(liu)2次(ci)(ci)，每次(ci)(ci)2h，過(guo)(guo)(guo)濾(lv)(lv)；濾(lv)(lv)渣(zha)(zha)自然風干，加(jia)10倍(bei)(bei)量無(wu)水(shui)(shui)(shui)乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun)回(hui)(hui)流(liu)(liu)(liu)(liu)提(ti)(ti)取(qu)3次(ci)(ci)，每次(ci)(ci)1.5h，過(guo)(guo)(guo)濾(lv)(lv)；濾(lv)(lv)渣(zha)(zha)自然風干，加(jia)10倍(bei)(bei)量80％乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun)回(hui)(hui)流(liu)(liu)(liu)(liu)提(ti)(ti)取(qu)3次(ci)(ci)，每次(ci)(ci)1.5h，過(guo)(guo)(guo)濾(lv)(lv)；濾(lv)(lv)渣(zha)(zha)自然風干，加(jia)10倍(bei)(bei)量水(shui)(shui)(shui)回(hui)(hui)流(liu)(liu)(liu)(liu)提(ti)(ti)取(qu)4次(ci)(ci)，每次(ci)(ci)1.5h，過(guo)(guo)(guo)濾(lv)(lv)。濾(lv)(lv)液(ye)濃(nong)(nong)縮(suo)后(hou)(hou)，加(jia)無(wu)水(shui)(shui)(shui)乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun)使含醇(chun)(chun)(chun)量達30％進(jin)行醇(chun)(chun)(chun)沉，離(li)心(xin)；濾(lv)(lv)液(ye)揮(hui)(hui)(hui)(hui)去乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun)加(jia)無(wu)水(shui)(shui)(shui)乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun)使含醇(chun)(chun)(chun)量達50％進(jin)行醇(chun)(chun)(chun)沉，離(li)心(xin)；濾(lv)(lv)液(ye)揮(hui)(hui)(hui)(hui)去乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun)加(jia)無(wu)水(shui)(shui)(shui)乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun)使含醇(chun)(chun)(chun)量達80％進(jin)行醇(chun)(chun)(chun)沉，離(li)心(xin)。沉淀(dian)加(jia)水(shui)(shui)(shui)溶(rong)解，用(yong)Sevage法去除蛋白(bai)質，依次(ci)(ci)經(jing)無(wu)水(shui)(shui)(shui)乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun)、丙(bing)酮(tong)、無(wu)水(shui)(shui)(shui)乙(yi)(yi)(yi)醚(mi)洗(xi)滌(di)(di)，低溫干燥(zao)即(ji)得肉(rou)(rou)(rou)桂(gui)(gui)(gui)(gui)多(duo)糖(tang)(tang)(tang)提(ti)(ti)取(qu)物(wu)。還(huan)有(you)文(wen)獻(xian)(xian)報(bao)導了一(yi)種肉(rou)(rou)(rou)桂(gui)(gui)(gui)(gui)多(duo)糖(tang)(tang)(tang)的(de)(de)提(ti)(ti)取(qu)方(fang)法：肉(rou)(rou)(rou)桂(gui)(gui)(gui)(gui)用(yong)粉(fen)碎(sui)機粉(fen)碎(sui)至(zhi)(zhi)能通過(guo)(guo)(guo)40目篩，索氏提(ti)(ti)取(qu)器(qi)脫脂，揮(hui)(hui)(hui)(hui)干溶(rong)劑后(hou)(hou)用(yong)熱水(shui)(shui)(shui)浸提(ti)(ti)。提(ti)(ti)液(ye)經(jing)過(guo)(guo)(guo)濾(lv)(lv)、濃(nong)(nong)縮(suo)至(zhi)(zhi)原來體積(ji)(ji)的(de)(de)1/4至(zhi)(zhi)1/5后(hou)(hou)，加(jia)3倍(bei)(bei)其(qi)體積(ji)(ji)的(de)(de)95％乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun)，置(zhi)(zhi)于冰箱中醇(chun)(chun)(chun)析(xi)24h，得到絮狀(zhuang)沉淀(dian)，離(li)心(xin)10min，去上清液(ye)；所得沉淀(dian)依次(ci)(ci)用(yong)無(wu)水(shui)(shui)(shui)乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun)、丙(bing)酮(tong)、無(wu)水(shui)(shui)(shui)乙(yi)(yi)(yi)醚(mi)各洗(xi)滌(di)(di)3次(ci)(ci)，離(li)心(xin)5min，去上清液(ye)，收集沉淀(dian)，真空(kong)干燥(zao)，即(ji)得肉(rou)(rou)(rou)桂(gui)(gui)(gui)(gui)多(duo)糖(tang)(tang)(tang)。還(huan)有(you)文(wen)獻(xian)(xian)報(bao)導了一(yi)種肉(rou)(rou)(rou)桂(gui)(gui)(gui)(gui)多(duo)糖(tang)(tang)(tang)的(de)(de)提(ti)(ti)取(qu)方(fang)法：取(qu)20.0g肉(rou)(rou)(rou)桂(gui)(gui)(gui)(gui)藥(yao)(yao)(yao)粉(fen)，按(an)藥(yao)(yao)(yao)液(ye)比(bi)1∶20(V/V)，依次(ci)(ci)以(yi)石油醚(mi)、乙(yi)(yi)(yi)醚(mi)、80％乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun)各回(hui)(hui)流(liu)(liu)(liu)(liu)提(ti)(ti)取(qu)4h，藥(yao)(yao)(yao)渣(zha)(zha)揮(hui)(hui)(hui)(hui)干溶(rong)劑后(hou)(hou)以(yi)20倍(bei)(bei)蒸餾水(shui)(shui)(shui)回(hui)(hui)流(liu)(liu)(liu)(liu)提(ti)(ti)取(qu)4h，提(ti)(ti)取(qu)液(ye)濃(nong)(nong)縮(suo)至(zhi)(zhi)一(yi)半體積(ji)(ji)，脫色，濾(lv)(lv)過(guo)(guo)(guo)，濾(lv)(lv)液(ye)加(jia)入無(wu)水(shui)(shui)(shui)乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun)使含醇(chun)(chun)(chun)量達80％，靜置(zhi)(zhi)過(guo)(guo)(guo)夜，濾(lv)(lv)過(guo)(guo)(guo)，殘渣(zha)(zha)用(yong)乙(yi)(yi)(yi)醚(mi)、丙(bing)酮(tong)、無(wu)水(shui)(shui)(shui)乙(yi)(yi)(yi)醇(chun)(chun)(chun)反復洗(xi)滌(di)(di)數次(ci)(ci)，得多(duo)糖(tang)(tang)(tang)，置(zhi)(zhi)硅膠干燥(zao)器(qi)中干燥(zao)備用(yong)。

綜上所(suo)述(shu)，現有的肉桂多糖的提取工藝較為(wei)繁(fan)瑣(suo)，所(suo)需成本較大(da)，生(sheng)產困難(nan)。

技術實現要素：

本發明的目(mu)的在于提(ti)供一種肉(rou)(rou)桂多糖的水提(ti)取(qu)(qu)方法，旨在解決現有的肉(rou)(rou)桂多糖的提(ti)取(qu)(qu)工藝較(jiao)為繁瑣，所需(xu)成(cheng)本較(jiao)大(da)，生(sheng)產困難的問題(ti)。

本發明是(shi)這(zhe)樣實現的，一種肉(rou)桂多(duo)糖的水(shui)提(ti)(ti)取方法，所述肉(rou)桂多(duo)糖的水(shui)提(ti)(ti)取方法的料液比1:20，提(ti)(ti)取溫度100℃、pH值5、提(ti)(ti)取時間2h。

進一步，所述肉桂多糖的(de)水提取方法包(bao)括以下(xia)步驟：

步(bu)驟一(yi)，肉(rou)桂粉碎(sui)至(zhi)60目，加石油醚回流脫脂，料液比1:20，揮(hui)干溶(rong)劑后用(yong)熱(re)水浸提(ti)；提(ti)取(qu)溫(wen)度100℃、pH值5、提(ti)取(qu)時間2h；

步驟二(er)，提取液經過濾、濃縮(suo)后加8倍體積(ji)無水乙醇(chun)進行沉淀，抽濾得濾渣，烘干，用無水乙醇(chun)洗(xi)滌(di)3次，真空干燥，即得肉桂多糖。

本發明(ming)的另一目的在于(yu)提(ti)供一種利用所述肉桂(gui)多糖的水提(ti)取方法提(ti)取的肉桂(gui)多糖。

本發明的另(ling)一(yi)目(mu)的在于提(ti)供一(yi)種利用所述肉桂多糖的水(shui)提(ti)取方法制備的治療糖尿病藥物。

本發(fa)(fa)明提(ti)(ti)(ti)供的肉(rou)桂(gui)多糖(tang)(tang)的水提(ti)(ti)(ti)取方法，以水溶性(xing)多糖(tang)(tang)得(de)率為指標，對(dui)肉(rou)桂(gui)水溶性(xing)多糖(tang)(tang)的提(ti)(ti)(ti)取工藝進行(xing)了單因(yin)素試驗(yan)和正交試驗(yan)研究(jiu)(jiu)，獲得(de)了肉(rou)桂(gui)多糖(tang)(tang)提(ti)(ti)(ti)取的優(you)化工藝參數，為研究(jiu)(jiu)開發(fa)(fa)肉(rou)桂(gui)提(ti)(ti)(ti)供科學依據。優(you)選條件重現性(xing)良好，利于工業(ye)化生產(chan)。料液比1:20，提(ti)(ti)(ti)取溫度100℃、pH值5、提(ti)(ti)(ti)取時間(jian)2h，方案簡(jian)單易(yi)(yi)行(xing)，容易(yi)(yi)放(fang)大生產(chan)。

采(cai)用本發(fa)(fa)明提(ti)取的(de)肉(rou)(rou)桂(gui)(gui)總多(duo)(duo)糖(tang)(tang)(tang)(tang)(tang)具有(you)降(jiang)低(di)糖(tang)(tang)(tang)(tang)(tang)尿(niao)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)小鼠的(de)血(xue)糖(tang)(tang)(tang)(tang)(tang)的(de)作用，為(wei)(wei)進一(yi)步開發(fa)(fa)肉(rou)(rou)桂(gui)(gui)的(de)藥用價值提(ti)供(gong)了理(li)論基(ji)(ji)礎。目前(qian)，糖(tang)(tang)(tang)(tang)(tang)尿(niao)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)已成為(wei)(wei)全(quan)球患病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)率(lv)(lv)極(ji)高的(de)疾(ji)(ji)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)之一(yi)，其中(zhong)以2型(xing)糖(tang)(tang)(tang)(tang)(tang)尿(niao)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)尤(you)為(wei)(wei)多(duo)(duo)見，其并發(fa)(fa)癥較多(duo)(duo)，危(wei)害性極(ji)大。隨著社會(hui)經濟的(de)發(fa)(fa)展和(he)生(sheng)活方(fang)式(shi)的(de)改變，全(quan)球2型(xing)糖(tang)(tang)(tang)(tang)(tang)尿(niao)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)發(fa)(fa)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)率(lv)(lv)不(bu)(bu)斷上升。在我國糖(tang)(tang)(tang)(tang)(tang)尿(niao)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)發(fa)(fa)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)率(lv)(lv)約為(wei)(wei)2～4。2型(xing)糖(tang)(tang)(tang)(tang)(tang)尿(niao)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)包括兩個(ge)重要的(de)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)理(li)生(sheng)理(li)特(te)點：胰(yi)島(dao)素抵(di)抗(kang)和(he)胰(yi)島(dao)素分泌異常。其中(zhong)胰(yi)島(dao)素抵(di)抗(kang)又(you)與肥(fei)胖、高脂(zhi)血(xue)癥等(deng)代(dai)謝紊亂聯(lian)系在一(yi)起。近些年(nian)的(de)臨(lin)床和(he)實驗(yan)研究(jiu)證明，肉(rou)(rou)桂(gui)(gui)在治(zhi)療(liao)糖(tang)(tang)(tang)(tang)(tang)尿(niao)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)及(ji)脂(zhi)質代(dai)謝異常性疾(ji)(ji)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)方(fang)面有(you)確切療(liao)效，確能(neng)起到(dao)降(jiang)血(xue)糖(tang)(tang)(tang)(tang)(tang)、調節血(xue)脂(zhi)的(de)作用。在抗(kang)糖(tang)(tang)(tang)(tang)(tang)尿(niao)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)方(fang)面，前(qian)人多(duo)(duo)認為(wei)(wei)糖(tang)(tang)(tang)(tang)(tang)尿(niao)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)機(ji)是以“陰(yin)虛為(wei)(wei)本，燥(zao)熱(re)為(wei)(wei)標”，但(dan)是隨著疾(ji)(ji)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)的(de)發(fa)(fa)展，多(duo)(duo)數2型(xing)糖(tang)(tang)(tang)(tang)(tang)尿(niao)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)發(fa)(fa)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)的(de)中(zhong)醫證候(hou)并非一(yi)定經過陰(yin)虛熱(re)盛——氣陰(yin)兩虛——陰(yin)陽(yang)(yang)(yang)兩虛的(de)3個(ge)階(jie)段發(fa)(fa)展過程，陽(yang)(yang)(yang)虛證候(hou)在病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)程各(ge)個(ge)時期均可(ke)出現，適量的(de)給予溫陽(yang)(yang)(yang)藥，如肉(rou)(rou)桂(gui)(gui)，常獲良效，探其原因(yin)(yin)，陽(yang)(yang)(yang)虛不(bu)(bu)能(neng)蒸津化液(ye)，故口(kou)渴，陽(yang)(yang)(yang)虛不(bu)(bu)能(neng)固(gu)攝津液(ye)，故多(duo)(duo)尿(niao)，因(yin)(yin)此，肉(rou)(rou)桂(gui)(gui)應用于治(zhi)療(liao)2型(xing)糖(tang)(tang)(tang)(tang)(tang)尿(niao)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)有(you)效。此外，肉(rou)(rou)桂(gui)(gui)還具有(you)鎮痛、抗(kang)菌和(he)抗(kang)腫瘤作用，對消(xiao)化系統、心血(xue)管系統及(ji)免疫系統都具有(you)良好的(de)療(liao)效，這為(wei)(wei)肉(rou)(rou)桂(gui)(gui)能(neng)夠(gou)綜合治(zhi)療(liao)糖(tang)(tang)(tang)(tang)(tang)尿(niao)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)及(ji)其并發(fa)(fa)癥提(ti)供(gong)了理(li)論基(ji)(ji)礎。

附圖說明

圖1是本發明(ming)實施例提供(gong)的肉桂多糖的水(shui)提取(qu)方(fang)法流(liu)程(cheng)圖。

圖2是本發明實施(shi)例(li)提供的提取溫(wen)度對得率(lv)的影(ying)響示意圖。

圖3是本發明實施例提(ti)供的提(ti)取時間(jian)對得(de)率的影響示意圖。

圖4是本發明實施例提供(gong)的料液比對(dui)得率的影響示(shi)意(yi)圖。

圖(tu)5是本發明(ming)實(shi)施(shi)例提供的(de)pH值對得率的(de)影(ying)響示(shi)意圖(tu)。

具體實施方式

為了使本發明(ming)(ming)的(de)目的(de)、技術(shu)方案及(ji)優點更加清(qing)楚明(ming)(ming)白，以下(xia)結合(he)實施例，對本發明(ming)(ming)進行進一步詳(xiang)細說明(ming)(ming)。應當理解(jie)，此(ci)處所描述的(de)具體實施例僅僅用以解(jie)釋(shi)本發明(ming)(ming)，并(bing)不(bu)用于限定(ding)本發明(ming)(ming)。

下(xia)面結合(he)附圖對本發(fa)明的(de)應用原理作詳(xiang)細的(de)描述。

如(ru)圖1所示，本發明實施例提供的肉(rou)桂(gui)多糖的水(shui)提取方法包括以下(xia)步驟：

S101：肉桂粉碎至(zhi)60目，加石油醚回流脫脂，料(liao)液比1:20，揮干溶劑后(hou)用熱水(shui)浸(jin)提(ti)；提(ti)取溫度100℃、pH值5、提(ti)取時間2h；

S102：提取液(ye)經過濾(lv)(lv)、濃縮后加(jia)8倍體積無水乙(yi)(yi)醇進行沉淀，抽(chou)濾(lv)(lv)得(de)濾(lv)(lv)渣，烘干，用(yong)無水乙(yi)(yi)醇洗(xi)滌3次，真空干燥，即得(de)肉桂(gui)多糖(tang)。

下面結(jie)合試驗對本發明的應(ying)用原理(li)作(zuo)進一步的描述。

l材料與方法

1.1材料與設備

肉(rou)(rou)桂：產地(di)廣西，經宜春(chun)學(xue)(xue)院(yuan)陳(chen)武教授鑒定為(wei)樟科植物肉(rou)(rou)桂(Cinnamomum cassia presl)的干(gan)燥樹皮，洗凈、干(gan)燥、粉碎備用(yong)；葡(pu)萄糖對(dui)照品：中國藥(yao)品生物制品檢定所(suo)；石油(you)醚、濃硫酸(suan)、苯酚：國產分(fen)析純。鏈脲佐菌素(su)(STZ，美國Sigma公司)，二甲雙胍(上海華氏(shi)制藥(yao)有限(xian)公司)，葡(pu)萄糖試(shi)劑(ji)盒(南(nan)京建(jian)成(cheng)生物工程研究(jiu)所(suo))，其余試(shi)劑(ji)均為(wei)分(fen)析純。昆明種(zhong)小鼠(雌雄兼用(yong)，SPF級，體(ti)重18～22g，南(nan)昌大(da)學(xue)(xue)實驗動物科學(xue)(xue)部(bu)提供)。

數顯恒(heng)(heng)溫水(shui)浴鍋(guo)：江蘇省金壇市富華儀(yi)(yi)器有限(xian)(xian)公司(si)；電熱恒(heng)(heng)溫干(gan)燥(zao)箱：上海(hai)精密儀(yi)(yi)器儀(yi)(yi)表有限(xian)(xian)公司(si)；RE-3000旋轉蒸(zheng)發器：上海(hai)亞榮生化儀(yi)(yi)器廠(chang)；電子天平：北京(jing)賽多(duo)利斯儀(yi)(yi)器系(xi)統有限(xian)(xian)公司(si)；酶(mei)標儀(yi)(yi)stat Fax 2100：江西(xi)華科精密儀(yi)(yi)器有限(xian)(xian)公司(si)

1.2試驗方法

1.2.1肉桂多(duo)糖的制備(bei)

肉桂(gui)粉(fen)碎至60目，加石油醚回流脫脂，揮干溶劑后(hou)用熱水浸提(ti)。提(ti)取液經過濾、濃(nong)縮后(hou)加8倍體積(ji)無水乙(yi)醇進行沉淀(dian)，抽(chou)濾得(de)濾渣，烘干，用無水乙(yi)醇洗滌3次，真空干燥(zao)，即得(de)肉桂(gui)多糖(tang)。

1.2.2苯酚--硫酸測定方法(fa)

分(fen)別精密(mi)稱取葡萄(tao)糖對照品30mg，置50mL容量(liang)瓶(ping)中，加入超純水制成0.6mg/ml的混合溶液，作為對照品溶液。

精確吸取1mL5％苯酚與5ml 98％濃硫酸混勻，流水冷卻，分別精確吸取60ul對照品溶液或樣品溶液，180ul硫酸苯酚混勻的顯色劑，混勻，沸水浴加熱25min，反應液冷卻，用酶標儀于490nm處測定其吸光度值。用1mL蒸餾水代替對照品溶液，同法操作作為空白溶液。計算回歸方程為Y＝3.15X-0.003(R²＝0.997)

1.2.3肉桂多糖提取(qu)物的(de)含量測定

取肉桂多(duo)(duo)糖提取物(wu)溶液1ml，按1.2.2所(suo)述方法測定(ding)其吸光度值。計算肉桂多(duo)(duo)糖的含量(liang)。

1.2.4單因素實(shi)驗(yan)和正交(jiao)實(shi)驗(yan)

以(yi)肉(rou)桂多糖的得率(lv)為(wei)指(zhi)標(biao)，以(yi)提取(qu)溫度、提取(qu)時間、料液比、pH值為(wei)主要考察因素進行單因素實(shi)驗(yan)及正(zheng)交實(shi)驗(yan)，優選(xuan)提取(qu)工藝參數(shu)。

1.2.5降糖實驗

小(xiao)鼠(shu)(shu)(shu)適應性飼養3d后(hou)，稱重，禁(jin)食不(bu)禁(jin)水(shui)12h。隨(sui)機取10只作為空(kong)白對照(zhao)(zhao)組(zu)。其(qi)余小(xiao)鼠(shu)(shu)(shu)按(an)150mg/kg劑(ji)量(liang)腹(fu)腔(qiang)(qiang)注(zhu)射鏈脲佐菌素(STZ)1次(STZ溶于0.1mol/L，pH4.2的檸檬酸/檸檬酸鈉緩(huan)沖液中，現(xian)配現(xian)用，冰浴(yu)保存)。空(kong)白對照(zhao)(zhao)組(zu)小(xiao)鼠(shu)(shu)(shu)腹(fu)腔(qiang)(qiang)注(zhu)射等量(liang)上述緩(huan)沖液。恢(hui)復飲食72h后(hou)稱重，禁(jin)食不(bu)禁(jin)水(shui)12h斷(duan)尾采血(xue)，血(xue)液于離(li)心(xin)機7000r/min離(li)心(xin)5min，分離(li)血(xue)清，用葡萄糖(tang)試(shi)劑(ji)盒(he)測定小(xiao)鼠(shu)(shu)(shu)空(kong)腹(fu)血(xue)糖(tang)(FBG)，凡FBG≥11.1mmol/L視(shi)為糖(tang)尿病(bing)小(xiao)鼠(shu)(shu)(shu)模(mo)(mo)型。成(cheng)(cheng)模(mo)(mo)小(xiao)鼠(shu)(shu)(shu)按(an)血(xue)糖(tang)值均衡原則將造模(mo)(mo)成(cheng)(cheng)功小(xiao)鼠(shu)(shu)(shu)分成(cheng)(cheng)3組(zu)，每(mei)組(zu)l0只，即模(mo)(mo)型組(zu)、陽性對照(zhao)(zhao)組(zu)(二甲雙胍)、肉桂多糖(tang)組(zu)。第(di)2天開始每(mei)天灌胃相應藥(yao)物(wu)，空(kong)白對照(zhao)(zhao)組(zu)和模(mo)(mo)型對照(zhao)(zhao)組(zu)均予以等體積(ji)蒸餾(liu)水(shui)，連(lian)續給藥(yao)7天。每(mei)周測一次空(kong)腹(fu)血(xue)糖(tang)值。

2結果與分析

2.1提取溫度(du)的影響

采(cai)用料(liao)液比1:10，提取(qu)時(shi)間2h，自然pH的條件對肉(rou)桂多糖進行提取(qu)，考察不(bu)同提取(qu)溫度對得(de)率的影響結果見圖2。

由圖2可見，隨著肉桂(gui)(gui)總(zong)多(duo)糖(tang)提(ti)(ti)取溫(wen)(wen)度的提(ti)(ti)高(gao)，肉桂(gui)(gui)總(zong)多(duo)糖(tang)的得(de)率出現上升，當溫(wen)(wen)度達到80℃以上后，在提(ti)(ti)高(gao)溫(wen)(wen)度多(duo)糖(tang)得(de)率無明(ming)顯(xian)變化，因此在操作(zuo)過程中(zhong)選用80℃作(zuo)為總(zong)多(duo)糖(tang)的提(ti)(ti)取溫(wen)(wen)度。

2.2提(ti)取時(shi)間的影響

采(cai)用(yong)料液比1:10，提取(qu)溫度80℃，自然pH的(de)條件對肉桂多糖進行提取(qu)，考察不同提取(qu)時間對得率(lv)的(de)影響，結果見圖3。

由圖(tu)3可(ke)知(zhi)，隨著提(ti)取(qu)(qu)(qu)時(shi)間(jian)的(de)延(yan)長，提(ti)取(qu)(qu)(qu)效果(guo)(guo)緩(huan)慢的(de)升高，提(ti)取(qu)(qu)(qu)時(shi)間(jian)達到120min時(shi)，提(ti)取(qu)(qu)(qu)效果(guo)(guo)達到最大(da)值(zhi)，在延(yan)長時(shi)間(jian)提(ti)取(qu)(qu)(qu)效果(guo)(guo)反而降低，因此選用提(ti)取(qu)(qu)(qu)時(shi)間(jian)為120min。

2.3料液比的影響

采(cai)用(yong)提(ti)取溫度(du)80℃，提(ti)取時間2h，自然pH的條件對肉桂多糖進行提(ti)取，考察不同(tong)料(liao)液比對得率的影(ying)響，結果(guo)見圖4。

由圖4可見，隨著料(liao)(liao)液(ye)比的增(zeng)大，提取效果不斷增(zeng)高，但當(dang)料(liao)(liao)液(ye)比超過1:20時，肉(rou)桂(gui)總多糖(tang)得(de)率增(zeng)加較小(xiao)，綜合考慮成本(ben)因素(su)選擇1:20作為(wei)提取的最佳(jia)料(liao)(liao)液(ye)比。

2.4pH值的影響

采(cai)用料液(ye)比1:10，提取(qu)(qu)溫度80℃，提取(qu)(qu)時(shi)間2h，不同pH值條件對肉(rou)桂多(duo)糖進行提取(qu)(qu)，考察不同pH值對得(de)率的影響(xiang)，結果見圖(tu)5。

由圖5可見，在溶液pH值3-8的范圍內，隨著pH值的升高肉桂(gui)總多糖得率逐漸上升，pH6時(shi)達(da)到(dao)最(zui)高，此(ci)后變化不大，因此(ci)最(zui)適pH值為6。

2.5正交試驗設計

根據單因素試驗結果，選取提取溫度、提取時間、料液比為考察因素，各取3個水平，選用L₉(3³)正交(jiao)表進(jin)行(xing)試驗。以肉桂總多(duo)糖(tang)得率為指標，每次實驗肉桂粉用量為5g。正交(jiao)試驗水平因素見表1，試驗結果見表2。

表1正交試驗因素水平(ping)表

表2 L₉(3⁴)正交試(shi)驗設計及結果

由表2可知，4個因素對總多糖得率的影響主次順序為：A>D>C>B即：提取溫度>pH值>料液比>提取時間；最佳工藝參數為A₃D₁C₂B₂，即(ji)：提取溫度100℃，pH5.0，料液比(bi)為(wei)1:20，提取時(shi)(shi)間2h。經驗證試驗表明：加水量為(wei)肉桂粉(fen)的20倍，pH5.0，提取溫度100℃，提取時(shi)(shi)間2h，進(jin)行(xing)3組，測得(de)肉桂總多糖的平均得(de)率(lv)為(wei)1.783％，其RSD為(wei)2.57％，優選(xuan)條件的重(zhong)現性(xing)良(liang)好，固形物中總多糖含量為(wei)41.3％。

2.6方差分析

由表3方(fang)差(cha)分析(xi)結果表明：由F比可知各因素對試驗結果影(ying)響的程(cheng)度是(shi)提取(qu)溫(wen)(wen)度>pH值>料液比>提取(qu)時間，即影(ying)響最大(da)的是(shi)提取(qu)溫(wen)(wen)度，其次(ci)是(shi)pH值、料液比，影(ying)響最小的是(shi)提取(qu)時間，這與上面結果分析(xi)一致(zhi)。

表3方差分析

2.7肉桂多糖對糖尿病小鼠血(xue)糖的影(ying)響

小(xiao)鼠(shu)適應(ying)(ying)性飼養3d后(hou)，稱重(zhong)，禁(jin)食(shi)不禁(jin)水12h。隨機(ji)取10只作為(wei)空白對(dui)照組(zu)。其余小(xiao)鼠(shu)按(an)150mg/kg劑(ji)量腹(fu)腔注(zhu)(zhu)射鏈脲佐菌素(STZ)1次(STZ溶于(yu)0.1mol/L，pH4.2的檸(ning)檬(meng)酸/檸(ning)檬(meng)酸鈉緩沖(chong)液(ye)中，現配現用，冰(bing)浴保存(cun))。空白對(dui)照組(zu)小(xiao)鼠(shu)腹(fu)腔注(zhu)(zhu)射等量上述緩沖(chong)液(ye)。恢(hui)復飲食(shi)72h后(hou)稱重(zhong)，禁(jin)食(shi)不禁(jin)水12h斷(duan)尾采血(xue)，血(xue)液(ye)于(yu)離心(xin)機(ji)7000r/min離心(xin)5min，分(fen)離血(xue)清，用葡萄糖(tang)(tang)試劑(ji)盒測(ce)定(ding)小(xiao)鼠(shu)空腹(fu)血(xue)糖(tang)(tang)(FBG)，凡FBG≥11.1mmol/L視為(wei)糖(tang)(tang)尿病(bing)小(xiao)鼠(shu)模型(xing)。成模小(xiao)鼠(shu)按(an)血(xue)糖(tang)(tang)值均衡原則(ze)將造模成功小(xiao)鼠(shu)分(fen)成3組(zu)，每組(zu)l0只，即模型(xing)組(zu)、陽性對(dui)照組(zu)(二(er)甲雙胍(gua))、肉(rou)桂(gui)(gui)多糖(tang)(tang)組(zu)。第2天開始每天灌(guan)胃相應(ying)(ying)藥物，空白對(dui)照組(zu)和模型(xing)對(dui)照組(zu)均予(yu)以等體積蒸餾水，肉(rou)桂(gui)(gui)多糖(tang)(tang)組(zu)灌(guan)300mg/kg/d的肉(rou)桂(gui)(gui)多糖(tang)(tang)，連續給藥7天。測(ce)空腹(fu)血(xue)糖(tang)(tang)值結果見表4。

表(biao)4肉(rou)桂多(duo)糖對糖尿病小鼠(shu)空腹血糖的影響

由(you)表(biao)4可知，空(kong)白對照組(zu)(zu)(zu)小鼠(shu)(shu)(shu)(shu)的(de)血(xue)(xue)糖(tang)一直維(wei)持在正常范(fan)圍內，而(er)模型對照組(zu)(zu)(zu)小鼠(shu)(shu)(shu)(shu)的(de)血(xue)(xue)糖(tang)值(zhi)(zhi)保持較高水平，肉(rou)桂多(duo)糖(tang)組(zu)(zu)(zu)給藥前(qian)后小鼠(shu)(shu)(shu)(shu)血(xue)(xue)糖(tang)值(zhi)(zhi)有顯著差異(P＜0.05)。表(biao)明肉(rou)桂多(duo)糖(tang)能降低糖(tang)尿病小鼠(shu)(shu)(shu)(shu)的(de)血(xue)(xue)糖(tang)值(zhi)(zhi)。

3討論

本試驗確定了(le)肉(rou)桂(gui)多糖的(de)優(you)化(hua)(hua)提(ti)(ti)(ti)取條(tiao)件和優(you)化(hua)(hua)醇沉(chen)條(tiao)件。優(you)化(hua)(hua)提(ti)(ti)(ti)取工(gong)藝(yi)條(tiao)件為提(ti)(ti)(ti)取溫(wen)度(du)100℃、pH值5、提(ti)(ti)(ti)取時間2h、料液比1:20；其中提(ti)(ti)(ti)取溫(wen)度(du)對得率有(you)顯著影響(xiang)。優(you)選(xuan)條(tiao)件重現性(xing)良好，利用(yong)(yong)工(gong)業化(hua)(hua)生產。采用(yong)(yong)本工(gong)藝(yi)提(ti)(ti)(ti)取的(de)肉(rou)桂(gui)總多糖具有(you)降低糖尿(niao)病小(xiao)鼠(shu)的(de)血(xue)糖的(de)作用(yong)(yong)，為進(jin)一步開發肉(rou)桂(gui)的(de)藥用(yong)(yong)價值提(ti)(ti)(ti)供了(le)理論基礎。

以上所述僅為本發明的(de)較佳實施例而已，并不(bu)用以限制本發明，凡在本發明的(de)精神和原則之(zhi)內所作的(de)任何修改、等同替(ti)換和改進等，均應包含在本發明的(de)保護范圍之(zhi)內。