背景技術：

1、本文提供了用于在人中治療癌癥(zheng)的方(fang)法和組(zu)合物。本發明還涉及(ji)特(te)異(yi)性(xing)嵌合抗(kang)原受體和載體，用于治療骨髓惡性(xing)腫瘤，例如，急性(xing)髓性(xing)白血(xue)病。

2、急(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)髓性(xing)(xing)(xing)(xing)白(bai)(bai)(bai)血(xue)病(bing)(bing)白(bai)(bai)(bai)血(xue)病(bing)(bing)(aml)是(shi)(shi)一(yi)(yi)種癌癥，其(qi)中骨髓產生異常的(de)(de)(de)成髓細(xi)胞。這是(shi)(shi)成人急(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)白(bai)(bai)(bai)血(xue)病(bing)(bing)的(de)(de)(de)最常見形式(siegel,r.,等(deng),cancer?statistics,ca?cancer?j?clin,64(1):9-29(2014))。aml是(shi)(shi)一(yi)(yi)種進行性(xing)(xing)(xing)(xing)疾病(bing)(bing)，發(fa)病(bing)(bing)年(nian)齡中值為65至70歲(sui)。aml有(you)許(xu)多名(ming)稱(cheng)，包括(kuo)急(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)髓細(xi)胞白(bai)(bai)(bai)血(xue)病(bing)(bing)，急(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)髓性(xing)(xing)(xing)(xing)白(bai)(bai)(bai)血(xue)病(bing)(bing)，急(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)粒(li)細(xi)胞白(bai)(bai)(bai)血(xue)病(bing)(bing)和(he)急(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)非淋巴細(xi)胞白(bai)(bai)(bai)血(xue)病(bing)(bing)。“急(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)”表示該(gai)疾病(bing)(bing)的(de)(de)(de)侵(qin)襲(xi)性(xing)(xing)(xing)(xing)，其(qi)可(ke)以快(kuai)速進展，并(bing)且(qie)如(ru)果不治(zhi)療，在(zai)診斷后的(de)(de)(de)幾個(ge)月內是(shi)(shi)致(zhi)命(ming)的(de)(de)(de)。癌癥起源于骨髓，但通過血(xue)液迅速傳(chuan)播到其(qi)他解剖學部(bu)位(wei)(wei)。在(zai)兒(er)童和(he)成人中觀察到該(gai)疾病(bing)(bing)，但在(zai)老年(nian)人中更常見。患(huan)(huan)(huan)(huan)aml的(de)(de)(de)可(ke)能性(xing)(xing)(xing)(xing)隨著年(nian)齡的(de)(de)(de)增(zeng)(zeng)長而增(zeng)(zeng)加，但一(yi)(yi)個(ge)人可(ke)以在(zai)任何年(nian)齡患(huan)(huan)(huan)(huan)aml。十位(wei)(wei)患(huan)(huan)(huan)(huan)有(you)急(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)(xing)白(bai)(bai)(bai)血(xue)病(bing)(bing)的(de)(de)(de)成人中約八(ba)位(wei)(wei)患(huan)(huan)(huan)(huan)有(you)aml，并(bing)且(qie)六位(wei)(wei)患(huan)(huan)(huan)(huan)有(you)白(bai)(bai)(bai)血(xue)病(bing)(bing)的(de)(de)(de)兒(er)童中約一(yi)(yi)位(wei)(wei)患(huan)(huan)(huan)(huan)有(you)aml。預計平均每年(nian)有(you)12,000例新的(de)(de)(de)aml病(bing)(bing)例，當前美國約有(you)30,000名(ming)患(huan)(huan)(huan)(huan)者帶(dai)病(bing)(bing)存活(huo)或正在(zai)緩解。

3、在老年(nian)(nian)(nian)(nian)aml患(huan)(huan)者(zhe)(zhe)(≥65歲(sui)(sui))中(zhong)，生(sheng)存中(zhong)值較短(65至74歲(sui)(sui)患(huan)(huan)者(zhe)(zhe)為(wei)3.9個(ge)月，≥85歲(sui)(sui)患(huan)(huan)者(zhe)(zhe)為(wei)1.4個(ge)月)。對(dui)aml患(huan)(huan)者(zhe)(zhe)的(de)(de)(de)(de)(de)治療選(xuan)(xuan)擇(ze)(ze)是有(you)(you)(you)限的(de)(de)(de)(de)(de)，并(bing)且(qie)結果(guo)通(tong)常是不好的(de)(de)(de)(de)(de)，平均5年(nian)(nian)(nian)(nian)生(sheng)存率(lv)(lv)為(wei)20％，并(bing)且(qie)對(dui)大于65的(de)(de)(de)(de)(de)患(huan)(huan)者(zhe)(zhe)為(wei)小于5％的(de)(de)(de)(de)(de)5年(nian)(nian)(nian)(nian)生(sheng)存率(lv)(lv)(thein,m.等,老年(nian)(nian)(nian)(nian)急性髓性白血病患(huan)(huan)者(zhe)(zhe)的(de)(de)(de)(de)(de)結果(guo)：分析(xi)30余年(nian)(nian)(nian)(nian)的(de)(de)(de)(de)(de)seer數據(outcome?of?older?patients?with?acute?myeloidleukemia:an?analysis?of?seer?data?over?3decades),cancer,119(15):2720-7(2013))。aml的(de)(de)(de)(de)(de)某些亞組具(ju)有(you)(you)(you)特別(bie)差的(de)(de)(de)(de)(de)結果(guo)，如患(huan)(huan)有(you)(you)(you)染色體7異常、復(fu)雜(za)核型、復(fu)發性和(he)(he)/或(huo)難治性aml和(he)(he)由(you)先導(dao)性骨髓增生(sheng)異常綜合(he)征(mds)或(huo)骨髓增生(sheng)性腫瘤(mpn)引起的(de)(de)(de)(de)(de)aml的(de)(de)(de)(de)(de)患(huan)(huan)者(zhe)(zhe)。65歲(sui)(sui)及以上患(huan)(huan)有(you)(you)(you)aml的(de)(de)(de)(de)(de)患(huan)(huan)者(zhe)(zhe)比年(nian)(nian)(nian)(nian)輕患(huan)(huan)者(zhe)(zhe)更有(you)(you)(you)可能具(ju)有(you)(you)(you)不利風險的(de)(de)(de)(de)(de)細胞遺傳(chuan)學(xue)(xue)。這(zhe)些細胞遺傳(chuan)學(xue)(xue)因素與化(hua)療抗性相關(guan)，并(bing)且(qie)對(dui)療法(fa)的(de)(de)(de)(de)(de)反應(ying)率(lv)(lv)顯著較低(di)。除了(le)反應(ying)率(lv)(lv)之外，由(you)于耐受性差和(he)(he)治療效果(guo)差，通(tong)常不將患(huan)(huan)有(you)(you)(you)aml的(de)(de)(de)(de)(de)老年(nian)(nian)(nian)(nian)患(huan)(huan)者(zhe)(zhe)認(ren)為(wei)是標(biao)準(zhun)誘導(dao)化(hua)療的(de)(de)(de)(de)(de)候選(xuan)(xuan)者(zhe)(zhe)或(huo)選(xuan)(xuan)擇(ze)(ze)不接受標(biao)準(zhun)誘導(dao)化(hua)療。在該亞組的(de)(de)(de)(de)(de)患(huan)(huan)者(zhe)(zhe)中(zhong)，誘導(dao)化(hua)療與高比例(li)的(de)(de)(de)(de)(de)治療相關(guan)死亡率(lv)(lv)和(he)(he)低(di)完全反應(ying)(cr)比例(li)相關(guan)。當前，尚(shang)未有(you)(you)(you)針對(dui)沒(mei)有(you)(you)(you)接受標(biao)準(zhun)誘導(dao)化(hua)療的(de)(de)(de)(de)(de)aml患(huan)(huan)者(zhe)(zhe)的(de)(de)(de)(de)(de)批(pi)準(zhun)療法(fa)。療法(fa)的(de)(de)(de)(de)(de)缺乏和(he)(he)與細胞遺傳(chuan)學(xue)(xue)相關(guan)的(de)(de)(de)(de)(de)不良反應(ying)率(lv)(lv)使aml對(dui)新藥物(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)醫療需求未得到滿(man)足，這(zhe)些新藥物(wu)具(ju)有(you)(you)(you)良好的(de)(de)(de)(de)(de)安(an)全性并(bing)具(ju)有(you)(you)(you)臨床效益。

4、造(zao)血(xue)作(zuo)用(yong)的(de)特(te)點(dian)是由多能干細胞(bao)到(dao)更成熟的(de)分(fen)化細胞(bao)表型的(de)組織特(te)異性分(fen)級分(fen)化。與穩態的(de)造(zao)血(xue)作(zuo)用(yong)相似，認為aml將(jiang)產生在這種(zhong)靜止的(de)干細胞(bao)群中(zhong)積累(lei)的(de)形式突變(bian)，而這產生白血(xue)病干細胞(bao)(lsc)。無法消(xiao)除這種(zhong)aml?lsc群將(jiang)導致復發和(he)治療失敗。

5、雖然大多數(shu)aml患(huan)者(zhe)(zhe)(zhe)藉由誘導(dao)化(hua)療(liao)(liao)將實現緩(huan)解(jie)；盡管(guan)給(gei)予了緩(huan)解(jie)后鞏(gong)固(gu)療(liao)(liao)法，許(xu)多人仍會復(fu)發(fa)(fa)。復(fu)發(fa)(fa)可(ke)能在數(shu)周至(zhi)數(shu)年之(zhi)后發(fa)(fa)生。高達(da)10％的(de)患(huan)者(zhe)(zhe)(zhe)會因誘導(dao)化(hua)療(liao)(liao)而難(nan)以(yi)治愈。這(zhe)兩組的(de)患(huan)者(zhe)(zhe)(zhe)(復(fu)發(fa)(fa)性(xing)(xing)(xing)/難(nan)治性(xing)(xing)(xing))構成(cheng)特別(bie)差的(de)風險(xian)(xian)組。盡管(guan)同種異體(ti)干細胞(bao)移植(zhi)(zhi)被(bei)認(ren)為是(shi)對(dui)于(yu)大多數(shu)這(zhe)些患(huan)者(zhe)(zhe)(zhe)的(de)推薦方法，但僅在少數(shu)患(huan)者(zhe)(zhe)(zhe)中(zhong)是(shi)可(ke)行的(de)并且與顯(xian)著的(de)發(fa)(fa)病(bing)率和(he)死(si)亡(wang)率相(xiang)關(guan)(hamadani,m.,awan,f.和(he)copelan,e.,患(huan)有(you)急(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)髓(sui)(sui)性(xing)(xing)(xing)白(bai)(bai)(bai)血(xue)病(bing)的(de)成(cheng)人的(de)造血(xue)干細胞(bao)移植(zhi)(zhi)(hematopoietic?stem?cell?transplantation?in?adults?with?acute?myeloidleukemia),biol?blood?marrow?transplant,5:556-67(2008))。此外，移植(zhi)(zhi)的(de)難(nan)治性(xing)(xing)(xing)疾(ji)病(bing)的(de)患(huan)者(zhe)(zhe)(zhe)的(de)預(yu)后差(duval,m.等,復(fu)發(fa)(fa)性(xing)(xing)(xing)或(huo)主要誘導(dao)失(shi)效(xiao)的(de)急(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)白(bai)(bai)(bai)血(xue)病(bing)的(de)造血(xue)干細胞(bao)移植(zhi)(zhi)(hematopoietic?stem-cell?transplantation?for?acute?leukemia?in?relapse?orprimary?induction?failure),j?clin?oncol,28(23):3730-8(2010))并且患(huan)有(you)復(fu)發(fa)(fa)性(xing)(xing)(xing)疾(ji)病(bing)的(de)患(huan)者(zhe)(zhe)(zhe)中(zhong)的(de)幾乎一(yi)半是(shi)耐藥(yao)的(de)(chemorefractory)，并因此不適合(he)移植(zhi)(zhi)(hamadani,m.,awan,f.和(he)copelan,e.,患(huan)有(you)急(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)髓(sui)(sui)性(xing)(xing)(xing)白(bai)(bai)(bai)血(xue)病(bing)的(de)成(cheng)人的(de)造血(xue)干細胞(bao)移植(zhi)(zhi)(hematopoieticstem?cell?transplantation?in?adults?with?acute?myeloid?leukemia)biol?bloodmarrow?transplant,5:556-67(2008))，(estey,e.,2013.急(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)髓(sui)(sui)性(xing)(xing)(xing)白(bai)(bai)(bai)血(xue)病(bing)：關(guan)于(yu)風險(xian)(xian)分層和(he)管(guan)理的(de)2013更新(xin)(acute?myeloid?leukemia:2013update?on?risk-stratification?andmanagement).am?j?hematol,88(4),pp.318-27)。正在為這(zhe)組患(huan)者(zhe)(zhe)(zhe)研究許(xu)多新(xin)型藥(yao)物和(he)方法。然而，一(yi)般來說，cr率低(di)于(yu)30％(litzow,m.等,改(gai)善患(huan)有(you)復(fu)發(fa)(fa)性(xing)(xing)(xing)或(huo)難(nan)治性(xing)(xing)(xing)急(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)髓(sui)(sui)性(xing)(xing)(xing)白(bai)(bai)(bai)血(xue)病(bing)患(huan)者(zhe)(zhe)(zhe)預(yu)后的(de)三種新(xin)方案的(de)失(shi)敗:來自東部腫瘤協作組的(de)報告(failure?of?three?novelregimens?to?improve?outcome?for?patients?with?relapsed?or?refractory?acutemyeloid?leukaemia:a?report?from?the?eastern?cooperative?oncology?group),br?jhaemotol,148:217-25(2010))，(cortes,j.等,難(nan)治性(xing)(xing)(xing)和(he)復(fu)發(fa)(fa)性(xing)(xing)(xing)急(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)髓(sui)(sui)性(xing)(xing)(xing)白(bai)(bai)(bai)血(xue)病(bing)中(zhong)p53反(fan)義寡核苷酸(cenersen)2期隨機(ji)研究加上有(you)或(huo)沒有(you)阿(a)糖(tang)胞(bao)苷的(de)伊達(da)比星治療(liao)(liao)(phase2randomized?study?of?p53antisense?oligonucleotide(cenersen)plus?idarubicinwith?or?without?cytarabine?in?refractory?and?relapsed?acute?myeloidleukemia),cancer,118(2):418-27(2012))，(kirschbaum,m.等,復(fu)發(fa)(fa)性(xing)(xing)(xing)、難(nan)治性(xing)(xing)(xing)或(huo)高風險(xian)(xian)髓(sui)(sui)性(xing)(xing)(xing)白(bai)(bai)(bai)血(xue)病(bing)中(zhong)替吡法尼以(yi)一(yi)周使用一(yi)周停用方案進行1期劑量(liang)遞(di)增研究(a?phase?1trialdose-escalation?study?of?tipifarnib?on?a?week-on,week-off?schedule?inrelapsed,refractory?or?high-risk?myeloid?leukemia),leukemia,25(10):1543-7(2011))。

6、在(zai)aml患(huan)(huan)者(zhe)(zhe)(zhe)中，細(xi)胞遺傳學(xue)(xue)在(zai)預(yu)(yu)測治(zhi)療(liao)(liao)反應中是重要預(yu)(yu)后因素(su)(grimwade,d.等,診斷性細(xi)胞遺傳學(xue)(xue)對aml結果(guo)的重要性：分析(xi)參與mrc?aml?10試驗的1,612名患(huan)(huan)者(zhe)(zhe)(zhe)(theimportance?of?diagnostic?cytogenetics?on?outcome?in?aml:analysis?of?1,612patients?entered?into?the?mrc?aml?10trial).醫(yi)學(xue)(xue)研究委員會(hui)成人和(he)兒童(tong)白(bai)(bai)血病(bing)(bing)工(gong)作(zuo)組(the?medical?research?council?adult?and?children'sleukaemia?workingparties),blood,92(7):2322-33(1998))。患(huan)(huan)有(you)(you)(you)其中白(bai)(bai)血病(bing)(bing)細(xi)胞具(ju)有(you)(you)(you)易(yi)位t(8；21)、t(15；17)、t(16；16)或(huo)inv(16)的aml的患(huan)(huan)者(zhe)(zhe)(zhe)在(zai)誘導化療(liao)(liao)和(he)強化緩(huan)解(jie)后鞏(gong)固化療(liao)(liao)中具(ju)有(you)(you)(you)有(you)(you)(you)利結果(guo)。然而，染色體5或(huo)7，11q23或(huo)復雜核(he)型(xing)(xing)異常(chang)在(zai)當前可用(yong)(yong)(yong)的誘導和(he)緩(huan)解(jie)后化療(liao)(liao)中具(ju)有(you)(you)(you)非(fei)常(chang)差的結果(guo)。具(ju)有(you)(you)(you)正(zheng)常(chang)核(he)型(xing)(xing)或(huo)具(ju)有(you)(you)(you)三體8的患(huan)(huan)者(zhe)(zhe)(zhe)具(ju)有(you)(you)(you)中度預(yu)(yu)后。患(huan)(huan)有(you)(you)(you)aml、t(9；22)或(huo)t(4；11)的患(huan)(huan)者(zhe)(zhe)(zhe)中實現了非(fei)常(chang)差的預(yu)(yu)后。患(huan)(huan)有(you)(you)(you)t(9；22)aml患(huan)(huan)者(zhe)(zhe)(zhe)很少(如果(guo)有(you)(you)(you)的話)僅(jin)用(yong)(yong)(yong)化療(liao)(liao)治(zhi)愈。白(bai)(bai)血病(bing)(bing)胚細(xi)胞上表(biao)達的表(biao)面抗(kang)原的免疫表(biao)型(xing)(xing)測定可能有(you)(you)(you)助于(yu)診斷，并且(qie)對骨髓性、t和(he)b系(xi)白(bai)(bai)血病(bing)(bing)的治(zhi)療(liao)(liao)和(he)預(yu)(yu)后具(ju)有(you)(you)(you)重要意(yi)義。鑒于(yu)已經證明使用(yong)(yong)(yong)常(chang)規療(liao)(liao)法長(chang)期增(zeng)加aml存活(huo)率是難(nan)以捉摸的，需要新型(xing)(xing)治(zhi)療(liao)(liao)策略(lve)。

技術實現思路

1、本公開的(de)一個方面(mian)涉及編碼嵌合抗原受(shou)體(car)的(de)分離的(de)核酸分子(zi)，其中(zhong)所述car包(bao)含：(a)cd33抗原結(jie)合結(jie)構(gou)域；(b)莖結(jie)構(gou)域；(c)跨膜結(jie)構(gou)域；(d)包(bao)含4-1bb或cd28中(zhong)至少一個或其片段(duan)的(de)共刺(ci)激信(xin)(xin)號傳導(dao)結(jie)構(gou)域；(e)cd3ζ信(xin)(xin)號傳導(dao)結(jie)構(gou)域；和任選地(f)截短的(de)表皮生長因子(zi)受(shou)體(her1t或her1t-1)。

2、本文所提(ti)(ti)供的(de)(de)(de)是這樣的(de)(de)(de)載體(ti)，其(qi)(qi)包含骨架和編碼嵌(qian)合(he)抗(kang)原受體(ti)(car)的(de)(de)(de)核(he)酸序列，其(qi)(qi)中(zhong)所述car包含(a)cd33抗(kang)原結(jie)(jie)(jie)合(he)結(jie)(jie)(jie)構域(yu)(yu)(yu)；(b)莖結(jie)(jie)(jie)構域(yu)(yu)(yu)；(c)跨膜結(jie)(jie)(jie)構域(yu)(yu)(yu)；(d)包含4-1bb或cd28或兩者的(de)(de)(de)共刺激信(xin)號(hao)傳導結(jie)(jie)(jie)構域(yu)(yu)(yu)；和(e)cd3ζ信(xin)號(hao)傳導結(jie)(jie)(jie)構域(yu)(yu)(yu)。在某些(xie)實施方式中(zhong)提(ti)(ti)供了載體(ti)，其(qi)(qi)還包含編碼截短的(de)(de)(de)表皮生長因(yin)子受體(ti)(her1t或her1t-1)或全長或截短的(de)(de)(de)cd20的(de)(de)(de)核(he)酸。

3、本文提供了這樣(yang)的載體(ti)，其包含(han)骨架和(he)編碼下(xia)述的核酸序列：(1)截短的表皮生長因子受(shou)體(ti)或其功能(neng)性片段；和(he)(2)嵌合抗原受(shou)體(ti)(car)，其中(zhong)所述car包含(han)(a)cd33抗原結(jie)(jie)(jie)合結(jie)(jie)(jie)構域(yu)；(b)莖結(jie)(jie)(jie)構域(yu)；(c)跨(kua)膜結(jie)(jie)(jie)構域(yu)；(d)包含(han)4-1bb或cd28或兩者的共刺激(ji)信(xin)號(hao)傳導結(jie)(jie)(jie)構域(yu)；和(he)(e)cd3ζ信(xin)號(hao)傳導結(jie)(jie)(jie)構域(yu)。

4、在某(mou)些實施方式中提供了這樣的載(zai)體，其包(bao)含骨架和(he)(he)(he)編碼下述的核酸序(xu)列：(1)全長cd20和(he)(he)(he)其功能性片段；和(he)(he)(he)(2)嵌合(he)抗原受體(car)，其中所述car包(bao)含(a)cd33抗原結(jie)合(he)結(jie)構域(yu)；(b)莖結(jie)構域(yu)；(c)跨(kua)膜結(jie)構域(yu)；(d)包(bao)含4-1bb或cd28或兩者(zhe)的共刺激信(xin)號(hao)傳(chuan)導結(jie)構域(yu)；和(he)(he)(he)(e)cd3ζ信(xin)號(hao)傳(chuan)導結(jie)構域(yu)。

5、在某些實(shi)施方式中提供(gong)了工程改造的(de)細(xi)胞，例如，免疫效應細(xi)胞，其包(bao)含骨架和編(bian)碼(ma)嵌合(he)(he)抗原受(shou)體(car)的(de)核酸序列，其中所述car包(bao)含(a)cd33抗原結合(he)(he)結構(gou)域；(b)莖結構(gou)域；(c)跨膜結構(gou)域；(d)包(bao)含4-1bb或cd28或兩者(zhe)的(de)共刺(ci)激信號傳導(dao)結構(gou)域；(e)cd3ζ信號傳導(dao)結構(gou)域；和(f)截短的(de)表皮生長因子受(shou)體(her1t或her1t-1)、全長cd20和截短的(de)cd20(cd20t-1)中的(de)至少(shao)一(yi)個。

6、在某些實施方式(shi)中(zhong)提供了工(gong)程(cheng)改造的細(xi)胞，例如，免(mian)疫(yi)效應細(xi)胞，其包含(1)截短的表皮生長因子受體(her1t或(huo)her1t-1)；和(2)嵌合抗原受體(car)，其中(zhong)所述(shu)car包含(a)cd33抗原結合結構(gou)域(yu)；(b)莖結構(gou)域(yu)；(c)跨膜結構(gou)域(yu)；(d)包含4-1bb或(huo)cd28或(huo)兩(liang)者(zhe)的共刺激(ji)信(xin)號傳(chuan)導結構(gou)域(yu)；和(e)cd3ζ信(xin)號傳(chuan)導結構(gou)域(yu)。

7、在(zai)某(mou)些實施(shi)方(fang)式(shi)中(zhong)提(ti)供(gong)了工(gong)程改造的細胞(bao)(bao)，例如(ru)，免疫(yi)效應(ying)細胞(bao)(bao)，其(qi)包含(1)細胞(bao)(bao)標(biao)(biao)(biao)簽，用作(zuo)殺傷開關(guan)、選(xuan)擇標(biao)(biao)(biao)志物(wu)、生物(wu)標(biao)(biao)(biao)志物(wu)或其(qi)組合；和(he)(2)嵌合抗原受體(car)，其(qi)中(zhong)所述car包含(a)cd33抗原結(jie)合結(jie)構域(yu)(yu)；(b)莖結(jie)構域(yu)(yu)；(c)跨膜結(jie)構域(yu)(yu)；(d)共(gong)刺(ci)(ci)激信號(hao)傳(chuan)(chuan)導(dao)結(jie)構域(yu)(yu)；和(he)(e)cd3ζ信號(hao)傳(chuan)(chuan)導(dao)結(jie)構域(yu)(yu)。在(zai)某(mou)些實施(shi)方(fang)式(shi)中(zhong)，共(gong)刺(ci)(ci)激信號(hao)傳(chuan)(chuan)導(dao)結(jie)構域(yu)(yu)包含4-1bb和(he)cd28中(zhong)的至少一(yi)個。在(zai)實施(shi)方(fang)式(shi)中(zhong)，細胞(bao)(bao)標(biao)(biao)(biao)簽是(shi)her1t、her1t-1、cd20或cd20t-1。

8、本文提(ti)供了用(yong)于在人(ren)中刺(ci)激對靶細(xi)胞群或組織(zhi)的(de)(de)(de)t細(xi)胞介(jie)導(dao)的(de)(de)(de)免(mian)疫應答(da)的(de)(de)(de)方(fang)法，其(qi)包括向人(ren)給予(yu)有效量(liang)的(de)(de)(de)經遺傳(chuan)(chuan)修(xiu)飾(shi)以(yi)表(biao)達(da)car的(de)(de)(de)細(xi)胞，其(qi)中所述car包含(han)(a)cd33抗原結(jie)(jie)(jie)合結(jie)(jie)(jie)構域(yu)；(b)莖結(jie)(jie)(jie)構域(yu)；(c)跨膜結(jie)(jie)(jie)構域(yu)；(d)包含(han)4-1bb或cd28或兩者的(de)(de)(de)共刺(ci)激信號(hao)(hao)傳(chuan)(chuan)導(dao)結(jie)(jie)(jie)構域(yu)；(e)cd3ζ信號(hao)(hao)傳(chuan)(chuan)導(dao)結(jie)(jie)(jie)構域(yu)；和(f)截(jie)短的(de)(de)(de)表(biao)皮生長因(yin)子(zi)受體(her1t或her1t-1)。

9、本文提(ti)供了編碼嵌合(he)抗(kang)(kang)原(yuan)受(shou)體(car)的(de)分(fen)離的(de)核酸(suan)，其(qi)中(zhong)所述car包含(han)(a)cd33抗(kang)(kang)原(yuan)結(jie)合(he)結(jie)構(gou)(gou)(gou)域；(b)莖結(jie)構(gou)(gou)(gou)域；(c)跨膜結(jie)構(gou)(gou)(gou)域；(d)包含(han)4-1bb或cd28或兩者的(de)共刺(ci)激信(xin)號傳(chuan)導(dao)結(jie)構(gou)(gou)(gou)域；和(e)cd3ζ信(xin)號傳(chuan)導(dao)結(jie)構(gou)(gou)(gou)域。

10、在(zai)一些實施方式中，cd33抗原(yuan)結合(he)結構域包含下(xia)述至少(shao)一個：(a)與(yu)(yu)氨(an)基(ji)(ji)酸序(xu)列(lie)seq?id?no:8(hm195scfv)具有(you)至少(shao)90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同性(xing)的多(duo)(duo)肽(tai)；(b)與(yu)(yu)氨(an)基(ji)(ji)酸序(xu)列(lie)seq?id?no:9和(he)10(m2h12)具有(you)至少(shao)90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同性(xing)的多(duo)(duo)肽(tai)；(c)與(yu)(yu)氨(an)基(ji)(ji)酸序(xu)列(lie)seq?id?no:11和(he)12(drb2)具有(you)至少(shao)90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同性(xing)的多(duo)(duo)肽(tai)；和(he)(d)與(yu)(yu)氨(an)基(ji)(ji)酸序(xu)列(lie)seq?id?no:14和(he)15(my9-6)具有(you)至少(shao)90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同性(xing)的多(duo)(duo)肽(tai)。

11、在一些(xie)情況中，cd33抗原結(jie)合結(jie)構域是與(yu)氨基酸(suan)序(xu)列(lie)seq?id?no:8(hm195scfv)具有(you)至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或(huo)100％相同性(xing)的多肽。在一些(xie)示例中，莖結(jie)構域是與(yu)氨基酸(suan)序(xu)列(lie)seq?id?no:22(cd8α鉸(jiao)鏈(lian))具有(you)至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或(huo)100％相同性(xing)的多肽。

12、在一(yi)些實(shi)施(shi)方(fang)(fang)式(shi)中，共(gong)刺激(ji)信號傳(chuan)導結構(gou)域(yu)(yu)包(bao)含4-1bb。在一(yi)些情(qing)況中，4-1bb的共(gong)刺激(ji)信號傳(chuan)導結構(gou)域(yu)(yu)包(bao)含與(yu)氨(an)基酸序(xu)(xu)列seq?id?no:24具(ju)有至(zhi)少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同(tong)性的多(duo)肽(tai)。在一(yi)些示例中，共(gong)刺激(ji)信號傳(chuan)導結構(gou)域(yu)(yu)包(bao)含cd28。在一(yi)些實(shi)施(shi)方(fang)(fang)式(shi)中，cd28的共(gong)刺激(ji)信號傳(chuan)導結構(gou)域(yu)(yu)包(bao)含與(yu)氨(an)基酸序(xu)(xu)列seqid?no:28具(ju)有至(zhi)少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同(tong)性的多(duo)肽(tai)。

13、在(zai)一(yi)些(xie)實施方式中(zhong)，cd3ζ信號傳(chuan)導結構域包(bao)含與(yu)氨(an)基酸(suan)序列(lie)seq?id?no:26具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或(huo)100％相同(tong)性(xing)的多肽。在(zai)一(yi)些(xie)實施方式中(zhong)，分離的核酸(suan)分子(zi)還包(bao)含截(jie)(jie)短的表皮生(sheng)長(chang)因子(zi)受體。在(zai)一(yi)些(xie)情況(kuang)中(zhong)，截(jie)(jie)短的表皮生(sheng)長(chang)因子(zi)受體是(shi)her1t，并且包(bao)含與(yu)氨(an)基酸(suan)序列(lie)seq?id?no:32具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或(huo)100％相同(tong)性(xing)的多肽。在(zai)一(yi)些(xie)示例(li)中(zhong)，截(jie)(jie)短的表皮生(sheng)長(chang)因子(zi)受體是(shi)her1t-1，并且包(bao)含與(yu)氨(an)基酸(suan)序列(lie)seq?id?no:54具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或(huo)100％相同(tong)性(xing)的多肽。

14、在一些實施方式(shi)中，所(suo)述car包含與包含seq?id?no:39、41、43、45、47、49、51、53或(huo)55的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或(huo)100％相同性(xing)的多肽。

15、本文提(ti)供了(le)載體，其(qi)包(bao)含骨架和編碼下(xia)述的(de)核酸序列(lie)：(1)包(bao)含her1t、her1t-1或(huo)其(qi)功(gong)能性(xing)變體中至少一個的(de)截(jie)短的(de)表皮生長因子受(shou)體；和(2)嵌合抗原受(shou)體(car)，其(qi)中所述car包(bao)含(a)cd33抗原結合結構域(yu)；(b)莖結構域(yu)；(c)跨膜結構域(yu)；(d)包(bao)含4-1bb或(huo)cd28或(huo)兩者的(de)共刺激信號(hao)傳導結構域(yu)；和(e)cd3ζ信號(hao)傳導結構域(yu)。

16、本文提供了載(zai)體，其(qi)包含(han)(han)骨架和編碼下(xia)述的(de)(de)核酸序(xu)列：(1)全長cd20、截(jie)短的(de)(de)cd20(cd20t-1)或其(qi)功能性片(pian)段；和(2)嵌合抗原受體(car)，其(qi)中所述car包含(han)(han)(a)cd33抗原結(jie)(jie)(jie)合結(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)域；(b)莖結(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)域；(c)跨膜結(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)域；(d)包含(han)(han)4-1bb或cd28或兩者的(de)(de)共刺激信(xin)號(hao)傳導結(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)域；和(e)cd3ζ信(xin)號(hao)傳導結(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)域。

17、在(zai)一些(xie)實施方式(shi)中(zhong)(zhong)(zhong)，載(zai)體(ti)(ti)(ti)是(shi)慢病(bing)毒載(zai)體(ti)(ti)(ti)、逆轉錄病(bing)毒載(zai)體(ti)(ti)(ti)或非病(bing)毒載(zai)體(ti)(ti)(ti)。在(zai)一些(xie)情(qing)況中(zhong)(zhong)(zhong)，截(jie)短(duan)的(de)表皮生長因子受體(ti)(ti)(ti)包(bao)含與(yu)氨(an)基酸(suan)(suan)序列(lie)(lie)seq?id?no:32或seq?id?no:54具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同性(xing)的(de)多(duo)肽(tai)。在(zai)一些(xie)示例(li)中(zhong)(zhong)(zhong)，載(zai)體(ti)(ti)(ti)包(bao)含編碼截(jie)短(duan)的(de)cd20(cd20t-1)或其(qi)功(gong)能性(xing)變體(ti)(ti)(ti)的(de)核苷(gan)酸(suan)(suan)序列(lie)(lie)，其(qi)中(zhong)(zhong)(zhong)所述cd20t-1包(bao)含與(yu)與(yu)氨(an)基酸(suan)(suan)序列(lie)(lie)seq?id?no:56具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同性(xing)的(de)多(duo)肽(tai)。

18、在一些實施(shi)方(fang)式(shi)中(zhong)，全長(chang)cd20包含與(yu)氨基酸(suan)(suan)序列(lie)seq?id?no:36具有至(zhi)少(shao)90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同(tong)性(xing)的多肽。在一些情況中(zhong)，載體還包含編碼自切割性(xing)明(ming)脈扁(bian)刺蛾(e)病毒(t2a)肽的核苷酸(suan)(suan)序列(lie)。在一些示例中(zhong)，載體的骨架是睡美(mei)人(sleeping?beauty)轉座子dna質粒或pfugw。

19、在(zai)一些(xie)示例中，載體還包含啟動子(zi)。在(zai)一些(xie)情況中，啟動子(zi)是hef1a1。在(zai)一些(xie)示例中，cd33抗原結合結構域包含下(xia)述至(zhi)少(shao)一個：(a)與(yu)(yu)氨基酸(suan)序(xu)(xu)列seq?id?no:8(hm195scfv)具有至(zhi)少(shao)90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同(tong)性的多(duo)肽(tai)；(b)與(yu)(yu)氨基酸(suan)序(xu)(xu)列seq?id?no:9和(he)10(m2h12)具有至(zhi)少(shao)90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同(tong)性的多(duo)肽(tai)；(c)與(yu)(yu)氨基酸(suan)序(xu)(xu)列seq?id?no:11和(he)12(drb2)具有至(zhi)少(shao)90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同(tong)性的多(duo)肽(tai)；和(he)(d)與(yu)(yu)氨基酸(suan)序(xu)(xu)列seq?id?no:14和(he)15(my9-6)具有至(zhi)少(shao)90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同(tong)性的多(duo)肽(tai)。

20、在(zai)一些(xie)實施方式(shi)中(zhong)，cd33抗原(yuan)結(jie)(jie)合結(jie)(jie)構(gou)(gou)域(yu)(yu)是(shi)與氨基(ji)酸序(xu)(xu)列(lie)seq?id?no:8(hm195scfv)具有至少(shao)(shao)90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同(tong)性(xing)(xing)的(de)多肽。在(zai)一些(xie)情況中(zhong)，莖結(jie)(jie)構(gou)(gou)域(yu)(yu)包含與氨基(ji)酸序(xu)(xu)列(lie)seq?id?no:22(cd8α鉸鏈)具有至少(shao)(shao)90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同(tong)性(xing)(xing)的(de)多肽。在(zai)一些(xie)示例中(zhong)，共(gong)刺(ci)激信(xin)號傳導(dao)結(jie)(jie)構(gou)(gou)域(yu)(yu)包含4-1bb。在(zai)一些(xie)情況中(zhong)，4-1bb的(de)共(gong)刺(ci)激信(xin)號傳導(dao)結(jie)(jie)構(gou)(gou)域(yu)(yu)包含與氨基(ji)酸序(xu)(xu)列(lie)seq?id?no:24具有至少(shao)(shao)90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同(tong)性(xing)(xing)的(de)核酸序(xu)(xu)列(lie)。

21、在(zai)(zai)一些情況(kuang)中，載體(ti)的(de)(de)共(gong)刺激信號傳(chuan)導(dao)(dao)(dao)結(jie)構域包含cd28。在(zai)(zai)一些情況(kuang)中，cd28的(de)(de)共(gong)刺激信號傳(chuan)導(dao)(dao)(dao)結(jie)構域包含與氨(an)基(ji)(ji)酸序(xu)列(lie)(lie)seq?id?no:28具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相(xiang)同(tong)性(xing)的(de)(de)核酸序(xu)列(lie)(lie)。在(zai)(zai)一些情況(kuang)中，cd3ζ信號傳(chuan)導(dao)(dao)(dao)結(jie)構域包含與氨(an)基(ji)(ji)酸序(xu)列(lie)(lie)seq?id?no:26具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相(xiang)同(tong)性(xing)的(de)(de)核酸序(xu)列(lie)(lie)。

22、在(zai)一些(xie)實施方式(shi)中(zhong)，所(suo)(suo)述(shu)載(zai)體(ti)是質粒。在(zai)一些(xie)情況中(zhong)，各(ge)所(suo)(suo)述(shu)載(zai)體(ti)包含表達質粒。在(zai)一些(xie)示例中(zhong)，非病毒載(zai)體(ti)是睡美人轉座子。在(zai)一些(xie)實施方式(shi)中(zhong)，免疫(yi)效(xiao)應細(xi)胞包含本文所(suo)(suo)公開的核苷酸。

23、本文提供免疫效(xiao)應細胞，其包(bao)(bao)含(han)骨架和(he)(he)編碼下(xia)述的核酸序列：(1)截短的表(biao)皮生長因子受(shou)體(her1t)；和(he)(he)(2)嵌合(he)抗原受(shou)體(car)，其中所(suo)述car包(bao)(bao)含(han)(a)cd33抗原結(jie)合(he)結(jie)構域(yu)(yu)；(b)莖結(jie)構域(yu)(yu)；(c)跨(kua)膜結(jie)構域(yu)(yu)；(d)包(bao)(bao)含(han)4-1bb或cd28或兩者的共刺激信號傳(chuan)導結(jie)構域(yu)(yu)；和(he)(he)(e)cd3ζ信號傳(chuan)導結(jie)構域(yu)(yu)。

24、本文還提供免疫效(xiao)應細胞(bao)，其包含(1)細胞(bao)標簽(qian)，用作殺傷開關、選(xuan)擇標志(zhi)物(wu)、生物(wu)標志(zhi)物(wu)或(huo)其組合(he)(he)(he)；和(2)嵌合(he)(he)(he)抗原受體(car)，其中(zhong)所述car包含(a)cd33抗原結合(he)(he)(he)結構(gou)域(yu)；(b)莖結構(gou)域(yu)；(c)跨膜結構(gou)域(yu)；(d)包含4-1bb或(huo)cd28或(huo)兩者的(de)共刺(ci)激信號傳導結構(gou)域(yu)；和(e)cd3ζ信號傳導結構(gou)域(yu)。

25、在(zai)一(yi)些實施方(fang)式中(zhong)，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)標簽包(bao)括her1t、her1t-1、cd20t-1或cd20。在(zai)一(yi)些情(qing)況中(zhong)，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)標簽包(bao)括her1t，并且(qie)所述(shu)her1t包(bao)含多肽序(xu)列seq?id?no:32。在(zai)一(yi)些示例(li)中(zhong)，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)標簽包(bao)括her1t-1，并且(qie)所述(shu)her1t-1包(bao)含多肽序(xu)列seq?id?no:54。在(zai)一(yi)些情(qing)況中(zhong)，免疫效應細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)包(bao)含本文所公開(kai)的載體。在(zai)一(yi)些實施方(fang)式中(zhong)，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)是t細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)、天然殺傷(shang)(nk)細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)、細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)毒性t淋巴細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(ctl)或調節性t細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)。在(zai)一(yi)些示例(li)中(zhong)，當cd33抗原(yuan)結(jie)合結(jie)構域與cd33結(jie)合時，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)表現出(chu)抗腫瘤免疫。

26、本文提(ti)供(gong)了用于在有此需求的(de)(de)人中刺激(ji)對靶細胞群或(huo)(huo)組織的(de)(de)t細胞介導的(de)(de)免疫應答的(de)(de)方法，其包(bao)括向所述人對象給予有效(xiao)量的(de)(de)經遺(yi)傳(chuan)(chuan)修飾以表(biao)達car的(de)(de)細胞，其中所述car包(bao)含(han)(a)cd33抗原結(jie)(jie)合(he)結(jie)(jie)構域(yu)(yu)；(b)莖結(jie)(jie)構域(yu)(yu)；(c)跨膜(mo)結(jie)(jie)構域(yu)(yu)；(d)包(bao)含(han)4-1bb或(huo)(huo)cd28或(huo)(huo)兩者的(de)(de)共刺激(ji)信號傳(chuan)(chuan)導結(jie)(jie)構域(yu)(yu)；(e)cd3ζ信號傳(chuan)(chuan)導結(jie)(jie)構域(yu)(yu)；和(he)(f)截短的(de)(de)表(biao)皮生長因子受體(her1t或(huo)(huo)her1t-1)。

27、在一(yi)些實(shi)施方(fang)式中，中，所述人已(yi)經(jing)被(bei)診(zhen)斷(duan)為急性(xing)髓性(xing)白血病(bing)(aml)。在一(yi)些情況中，急性(xing)髓性(xing)白血病(bing)是復(fu)發性(xing)或難治(zhi)性(xing)aml。

28、提(ti)供了編碼嵌合抗(kang)原受體(car)的(de)(de)(de)分離的(de)(de)(de)核酸(suan)(suan)，其(qi)中，所述car包(bao)含(han)(han)：(a)具有氨基(ji)酸(suan)(suan)序(xu)(xu)(xu)列(lie)seq?id?no:8的(de)(de)(de)cd33抗(kang)原結合結構域(yu)；(b)具有氨基(ji)酸(suan)(suan)序(xu)(xu)(xu)列(lie)seq?id?no:22的(de)(de)(de)莖結構域(yu)；(c)具有氨基(ji)酸(suan)(suan)序(xu)(xu)(xu)列(lie)seq?id?no:28的(de)(de)(de)包(bao)含(han)(han)cd28的(de)(de)(de)共刺激信號傳(chuan)導(dao)結構域(yu)；(d)her1標(biao)簽，其(qi)包(bao)含(han)(han)具有氨基(ji)酸(suan)(suan)序(xu)(xu)(xu)列(lie)seq?id?no:32的(de)(de)(de)her1t和具有氨基(ji)酸(suan)(suan)序(xu)(xu)(xu)列(lie)seq?id?no:54的(de)(de)(de)her1t-1中的(de)(de)(de)至少(shao)一個；(e)具有氨基(ji)酸(suan)(suan)序(xu)(xu)(xu)列(lie)seq?id?no:26的(de)(de)(de)cd3ζ信號傳(chuan)導(dao)結構域(yu)。

29、本文還(huan)提供了編碼嵌合抗原受體(car)的(de)(de)(de)分(fen)離的(de)(de)(de)核酸(suan)(suan)(suan)，其中(zhong)，所(suo)述(shu)car包含(han)(han)：(a)具(ju)有(you)(you)氨(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)序(xu)(xu)列(lie)seq?id?no:8的(de)(de)(de)cd33抗原結合結構域(yu)；(b)具(ju)有(you)(you)氨(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)序(xu)(xu)列(lie)seq?id?no:22的(de)(de)(de)莖(jing)結構域(yu)；(c)具(ju)有(you)(you)氨(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)序(xu)(xu)列(lie)seq?id?no:24的(de)(de)(de)包含(han)(han)4-1bb的(de)(de)(de)共刺(ci)激信號傳導結構域(yu)；(d)her1標簽(qian)，其包含(han)(han)具(ju)有(you)(you)氨(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)序(xu)(xu)列(lie)seq?id?no:32的(de)(de)(de)her1t和具(ju)有(you)(you)氨(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)序(xu)(xu)列(lie)seq?id?no:54的(de)(de)(de)her1t-1中(zhong)的(de)(de)(de)至少(shao)一個；(e)具(ju)有(you)(you)氨(an)(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)序(xu)(xu)列(lie)seq?id?no:26的(de)(de)(de)cd3ζ信號傳導結構域(yu)。

30、在(zai)(zai)一(yi)些(xie)實(shi)施方式中，載(zai)體(ti)(ti)包含(han)本(ben)文所(suo)公開的一(yi)個(ge)或多(duo)(duo)個(ge)多(duo)(duo)核苷酸。在(zai)(zai)一(yi)些(xie)情況中，所(suo)述載(zai)體(ti)(ti)是(shi)慢病(bing)(bing)毒(du)載(zai)體(ti)(ti)、逆轉錄(lu)病(bing)(bing)毒(du)載(zai)體(ti)(ti)或非病(bing)(bing)毒(du)載(zai)體(ti)(ti)。在(zai)(zai)一(yi)些(xie)示例(li)中，非病(bing)(bing)毒(du)載(zai)體(ti)(ti)是(shi)睡(shui)美人轉座子。在(zai)(zai)一(yi)些(xie)實(shi)施方式中，所(suo)述樣品是(shi)多(duo)(duo)個(ge)載(zai)體(ti)(ti)。

31、提供了用于在(zai)免疫效應(ying)細(xi)胞(bao)中(zhong)(zhong)(zhong)表達car的(de)系統，所(suo)述(shu)系統包括一(yi)個或多個載(zai)體，所(suo)述(shu)載(zai)體編(bian)碼(ma)本文(wen)所(suo)公開的(de)分(fen)離的(de)核酸。在(zai)一(yi)些(xie)實施(shi)方式(shi)(shi)中(zhong)(zhong)(zhong)，所(suo)述(shu)免疫效應(ying)細(xi)胞(bao)是t細(xi)胞(bao)或nk細(xi)胞(bao)。在(zai)一(yi)些(xie)情況中(zhong)(zhong)(zhong)，所(suo)述(shu)系統還包括編(bian)碼(ma)至少一(yi)個其(qi)他基因(yin)(yin)的(de)核酸。在(zai)一(yi)些(xie)示例中(zhong)(zhong)(zhong)，所(suo)述(shu)其(qi)他基因(yin)(yin)包含細(xi)胞(bao)因(yin)(yin)子(zi)。在(zai)一(yi)些(xie)實施(shi)方式(shi)(shi)中(zhong)(zhong)(zhong)，所(suo)述(shu)細(xi)胞(bao)因(yin)(yin)子(zi)包含il-2、il-15、il-12、il-21以及il-15和(he)il-15r的(de)融合(he)體中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)至少一(yi)個。一(yi)些(xie)情況中(zhong)(zhong)(zhong)，所(suo)述(shu)細(xi)胞(bao)因(yin)(yin)子(zi)呈(cheng)分(fen)泌的(de)形(xing)式(shi)(shi)。一(yi)些(xie)實施(shi)方式(shi)(shi)中(zhong)(zhong)(zhong)，所(suo)述(shu)細(xi)胞(bao)因(yin)(yin)子(zi)呈(cheng)膜(mo)結(jie)合(he)的(de)形(xing)式(shi)(shi)。

32、在(zai)(zai)(zai)一(yi)(yi)(yi)些(xie)(xie)(xie)(xie)情(qing)況中(zhong)(zhong)(zhong)，所(suo)述(shu)(shu)系統(tong)包含一(yi)(yi)(yi)個載(zai)(zai)體。在(zai)(zai)(zai)一(yi)(yi)(yi)些(xie)(xie)(xie)(xie)示(shi)例中(zhong)(zhong)(zhong)，所(suo)述(shu)(shu)一(yi)(yi)(yi)個或多個載(zai)(zai)體是慢病毒(du)載(zai)(zai)體、逆轉錄病毒(du)載(zai)(zai)體或非病毒(du)載(zai)(zai)體。在(zai)(zai)(zai)一(yi)(yi)(yi)些(xie)(xie)(xie)(xie)實施(shi)方式(shi)中(zhong)(zhong)(zhong)，非病毒(du)載(zai)(zai)體是睡(shui)美人轉座子。在(zai)(zai)(zai)一(yi)(yi)(yi)些(xie)(xie)(xie)(xie)情(qing)況中(zhong)(zhong)(zhong)，所(suo)述(shu)(shu)系統(tong)還包括睡(shui)美人轉座酶。在(zai)(zai)(zai)一(yi)(yi)(yi)些(xie)(xie)(xie)(xie)示(shi)例中(zhong)(zhong)(zhong)，睡(shui)美人轉座酶是sb11、sb100x或sb110。在(zai)(zai)(zai)一(yi)(yi)(yi)些(xie)(xie)(xie)(xie)情(qing)況中(zhong)(zhong)(zhong)，所(suo)述(shu)(shu)免(mian)疫(yi)效(xiao)應(ying)細(xi)胞(bao)(bao)是哺(bu)乳動物細(xi)胞(bao)(bao)。在(zai)(zai)(zai)一(yi)(yi)(yi)些(xie)(xie)(xie)(xie)實施(shi)方式(shi)中(zhong)(zhong)(zhong)，在(zai)(zai)(zai)免(mian)疫(yi)效(xiao)應(ying)細(xi)胞(bao)(bao)中(zhong)(zhong)(zhong)表達car的方法包括用本文所(suo)公開(kai)的系統(tong)與(yu)所(suo)述(shu)(shu)免(mian)疫(yi)效(xiao)應(ying)細(xi)胞(bao)(bao)接觸。

33、本(ben)文提供了刺激工程(cheng)改(gai)造的(de)(de)(de)(de)t細胞(bao)增(zeng)殖和(he)/或存活(huo)的(de)(de)(de)(de)方法(fa)，其(qi)包括：(a)由(you)對象獲得樣品，所述樣品包含(han)t細胞(bao)或t細胞(bao)祖細胞(bao)；(b)用(yong)編碼本(ben)發(fa)明的(de)(de)(de)(de)分(fen)離(li)的(de)(de)(de)(de)核酸的(de)(de)(de)(de)一個(ge)或多個(ge)載體和(he)編碼轉座(zuo)酶的(de)(de)(de)(de)載體轉染(ran)所述細胞(bao)，以提供工程(cheng)改(gai)造的(de)(de)(de)(de)表達cd33?car的(de)(de)(de)(de)t細胞(bao)群(qun)；(c)和(he)任選地，離(li)體培養cd33?car?t細胞(bao)群(qun)2天(tian)或更(geng)少。

34、在一些(xie)(xie)實施方(fang)式(shi)中，該(gai)方(fang)法還包括(kuo)用編碼細胞因(yin)子(zi)(zi)的(de)載(zai)體(ti)轉(zhuan)染所述(shu)細胞。在一些(xie)(xie)情(qing)況中，細胞因(yin)子(zi)(zi)是包含il-15和il-15rα的(de)融合蛋白。在一些(xie)(xie)示(shi)例(li)中，所述(shu)一個(ge)或(huo)多個(ge)載(zai)體(ti)是慢病毒(du)載(zai)體(ti)、逆轉(zhuan)錄病毒(du)載(zai)體(ti)或(huo)非病毒(du)載(zai)體(ti)。在一些(xie)(xie)實施方(fang)式(shi)中，非病毒(du)載(zai)體(ti)是睡美(mei)(mei)人(ren)轉(zhuan)座子(zi)(zi)。在一些(xie)(xie)情(qing)況中，該(gai)方(fang)法還包括(kuo)睡美(mei)(mei)人(ren)轉(zhuan)座酶。在一些(xie)(xie)示(shi)例(li)中，睡美(mei)(mei)人(ren)轉(zhuan)座酶是sb11、sb100x或(huo)sb110。