用于治療便秘的嘧啶衍生物和脂肪酸源的制作方法
【專利摘要】本發明涉及一種用于治療便秘，具體是治療患有GI失調、神經系統紊亂、或精神障礙的患者的便秘的嘧啶衍生物和脂肪酸源的組合。有利地，該組合包含一種或多種維生素或纖維。
【專利說明】
用于治療便秘的嘧啶衍生物和脂肪酸源
技術領域
[0001] 本發明涉及用于治療便秘，尤其是治療患有GI失調、神經系統紊亂（神經性紊亂， neurological disorder)、或精神障礙的患者的便秘的啼啶衍生物和脂肪酸源的組合。
【背景技術】
[0002] 術語GI-失調覆蓋寬泛的一組不同的紊亂，從闌尾炎、腸梗阻、結腸炎、克羅恩氏病 (Crohn's disease)、消化性潰瘍發展至肛痿，包括胃腸道(GIT)增強或削弱的運動性(腹瀉 時太快，慢傳輸型便秘時太慢），以及直腸括約肌的伸縮力變化(導致大便失禁或大便嵌塞/ 頑固性便秘）。
[0003] 便秘是排便疼痛的普遍原因。嚴重的便秘包括頑固性便秘(無法通過大便或氣體） 和大便嵌塞，其可以發展成腸梗阻并危及生命。
[0004] 便秘是由許多原因引起的癥狀。這些原因有兩類:在至少一部分胃腸道中排便受 阻和慢傳輸型（或運動少）。慢傳輸型便秘的已知原因包括飲食、激素失調如甲狀腺機能減 退、藥物治療的副作用、低級炎癥(也稱為慢性炎癥）、食物過敏、和很少見的重金屬中毒。治 療包括飲食習慣的變化、輕瀉劑、灌腸劑、生物反饋，以及在特殊情形下可能需要手術。
[0005] -般而言，用于治療胃腸道失調(GI-失調）的包含核苷酸或脂肪酸的組合物是本 領域已知的。
[0006] 關于功能性GI失調，US 2007/0218112涉及使用谷氨酸或核苷酸。提到了多種紊 亂，包括腹瀉和便秘。沒有提到用于治療便秘的包含核苷酸的具體組合物。該實施例將精力 集中在谷氨酸在胃腸道中的作用上。
[0007] US 2012/0189597A1涉及改變細胞能荷的方法，該方法包括給予需要其的哺乳動 物包含有效量的外源核苷酸的營養組合物，例如以保持哺乳動物的胃腸功能。可選地，存在 魚油。該文獻沒有提及治療便秘。
[0008] US2012/270830A1涉及用于治療哺乳動物的功能性腸道紊亂的包含茶氨酸和核苷 酸的營養組合物。可選地，該組合物包含魚油。給出了腸道紊亂的多種實例，包括消化不良、 腸易激綜合癥、功能性大便失禁、功能性肛門直腸疼痛和慢結腸傳輸。這些紊亂在本質上不 同，并且甚至可以認為某些是對立的（如腹瀉與慢傳輸）。該文獻沒有描述用于治療便秘的 確切的嘧啶衍生物和多不飽和脂肪酸的組合。
[0009] US 5,709,888 Bl涉及脂肪酸混合物并涉及脂肪酸混合物與核苷酸和/或核苷的 混合物。陳述了后者混合物作為用于治療患有腹瀉的嬰兒的奶粉添加劑是有用的。
[0010] 因此，盡管本領域已經承認了脂肪酸和核苷酸在胃腸系統中的作用，但是由引用 的現有技術不清楚怎樣配制確切用于治療便秘的包含脂肪酸源和核酸的組合物，更不用說 治療慢傳輸型便秘。

【發明內容】

[0011] 本發明的目的是提供用于治療便秘，具體是用于治療慢傳輸型便秘的具體組分的 組合。
[0012] 術語慢傳輸型便秘于1986年在一組除多種其他系統性癥狀之外在正常口徑的結 腸情況下都表現出緩慢的總腸道傳輸時間的女性中提出(Preston Gut 1986)。
[0013] 現在已經發現與多不飽和脂肪酸(PUFA)組合的嘧啶或其衍生物對于治療便秘是 有效的，具體是因為通過胃腸道的傳輸時間改善。本發明人發現與多不飽和脂肪酸(PUFA) 組合的嘧啶或其衍生物增強通過全長消化道(從胃部到直腸)的傳輸，極大地緩解便秘。
[0014] 此外，發現嘧啶（衍生物）和PUFA的這種組合可以顯著減少GIT中蛋白質α-突觸核 蛋白聚集體(alpha-synuclein aggregate)的形成（通過乙狀結腸活檢可以在人類中檢 測），可能通過TLR4作用。
[0015] TLR4,是指Toll樣受體4,是結合至來自革蘭氏(GRAM)陰性細菌的LPS(脂多糖）的 受體，也存在于神經原膜上，并涉及在α-突觸核蛋白向細胞的運輸中。
[0016] 盡管本文沒有示出，但是存在經受相同的魚藤酮處理的TLR4K0小鼠未能示出α-突 觸核蛋白沉積并具有正常的傳輸時間的實驗證據，強有力地指出α-突觸核蛋白到腸肌叢的 神經原的胞吞需要TLR4，并且該沉積是傳輸時間損傷的原因。
[0017] 蛋白質α-突觸核蛋白聚集體的這種減少可以潛在地用作神經退行性疾病進展的 替代標志。
[0018] 發明人發現包含嘧啶衍生物和多不飽和脂肪酸(PUFA)的組合物對于減少大便通 過腸道系統的傳輸時間是有效的。具體地，本發明人發現嘧啶衍生物和PUFA的組合對于治 療慢傳輸型便秘是有用的。這通過使用了小鼠模型的實施例得到證明。
[0019] 具體認為本發明對于治療人，優選至少18歲的人，具體是至少50歲的人，更具體是 老年人(至少65歲）是有用的。
[0020] 進一步設想了具體是患有神經系統紊亂的人受益于根據本發明使用的組合的治 療。
[0021] 因此，本發明涉及用于預防或治療便秘，優選慢傳輸型便秘的嘧啶衍生物和具有 18-24個碳原子的多不飽和脂肪酸的組合。
[0022] 本發明還涉及使用嘧啶衍生物和具有18-24個碳原子的多不飽和脂肪酸來制造用 于預防或治療便秘，優選慢傳輸型便秘的藥物或組合。
[0023] 優選地，便秘與胃腸失調有關。具體地，所述胃腸失調是胃腸道粘膜的慢性炎癥， 優選地選自由腸梗阻、結腸炎、炎癥性腸病、和消化性潰瘍組成的組。
[0024] 可替換地，便秘可與神經系統紊亂或精神障礙有關。神經系統紊亂優選地是周圍 神經病、自主神經病、或腸神經系統神經病，優選地是自主神經病、或腸神經系統神經病。 [0025]優選地，神經系統紊亂是神經退行性疾病。
[0026]優選地，神經系統紊亂選自由突觸核蛋白病（synucleopathies)、糖尿病性神經 病、杜興肌營養不良（Duchenne ' s dystrophy )、腦血管疾病（更具體地是中風）、多發性硬 化、單純性自主神經衰竭、和脊髓損傷組成的組，優選地選自由腦血管疾病（更具體地是中 風）、多發性硬化、單純性自主神經衰竭、脊髓損傷和帕金森病組成的組。
[0027] 優選地，精神障礙是廣泛性發育障礙，優選地是自閉癥。
[0028] 優選地，精神障礙是抑郁癥，具體是抑郁情緒障礙。
[0029] 在一個具體的實施方式中，治療或預防患有大腦性麻痹的受試者的便秘。
[0030]根據一個優選的實施方式，根據本發明使用的組合中，多不飽和脂肪酸選自ω-3 多不飽和脂肪酸的組，優選地作為魚油提供。更優選地，ω-3多不飽和脂肪酸選自由二十二 碳六烯酸(DHA)、二十二碳五烯酸(DPA)、和二十碳五烯酸(EPA)組成的組。
[0031] 優選地，通過該組合給予的DHA的日劑量在300mg至4000mg的范圍內，更優選地在 500mg至2500mg的范圍內。
[0032] 優選地，通過該組合給予的DHA加 EPA的日劑量在400mg至5000mg的范圍內，更優選 地在500mg至3000mg的范圍內，具體在1000 mg至3000mg的范圍內，更具體地在1000 mg至 2500mg的范圍內。
[0033] 優選地，根據本發明使用的組合包含提供具有18-24個碳原子的多不飽和脂肪酸 的魚油。
[0034] 優選地，在根據本發明使用的組合中，嘧啶衍生物是堿基、核苷或核苷酸;優選地 選自尿苷、脫氧尿苷、衍生的（脫氧)尿苷、胞苷、脫氧胞苷和衍生的（脫氧)胞苷的組;更優選 地選自 UMP、UDP、UTP、CMP、CDP、CTP dUMP、dUDP、dUTP、dCMP、dCDP和dCTP的組，其中，可選地 所述核苷酸的(脫氧)核糖的一個或多個羥基部分被酰化。
[0035] 在一個特別優選的實施方式中，核苷酸是UMP或酰化的UMP。
[0036] 在一個特別優選的實施方式中，核苷是尿苷或酰化尿苷。
[0037]酰基可以是任何生理學上可接受的有機酸殘基，具體是C2-C24有機酸殘基。優選 的酰化形式的嘧啶來源是其中（脫氧）核糖已經被乙酸、正己酸、辛酸、或正癸酸酰化的那 些，因為這些增加尿苷源的生物利用率。用于將這些中鏈脂肪酸反應至尿苷，例如反應至尿 苷的5'位的方法與其他脂肪酸相同是本領域已知的并包括常規的酰化方法。在進一步的實 施方式中，尿苷源被PUFA，例如ω -3PUFA酰化。
[0038]可以作為營養組合物的一部分給予根據本發明使用的組合。優選地，根據本發明 的營養組合物包含膽堿。
[0039]優選地，根據本發明的營養組合物進一步包含磷脂、維生素 Ε、維生素 C、硒、維生素 Β12、維生素 Β6和葉酸中的至少一種；更優選地，包含磷脂、維生素 E、維生素 C、硒、維生素 Β12、維生素 Β6和葉酸中的至少2、3、4、5、或6種，更加優選地包含磷脂、維生素 E、維生素 C、 硒、維生素 Β12、維生素 Β6和葉酸。
[0040]本發明進一步涉及用于監測便秘、優選慢傳輸型便秘的治療的方法，所述方法包 括給予根據本發明使用的組合，以及測量結腸中的突觸核蛋白聚集體的水平。
[0041 ]本發明進一步涉及用于監測突觸核蛋白病，優選地PD、路易體癡呆（dementia with Lewy bodies)、或多系統萎縮癥的治療的方法，更優選地涉及用于監測F1D的治療的方 法，所述方法包括給予根據本發明使用的組合，以及測量結腸中的突觸核蛋白聚集體的 水平。
【附圖說明】
[0042] 圖1示出了實施例1的結果:紋狀體內注射載體(Veh)或魚藤酮(Rot)之后不同時間 (天)下轉棒(旋轉，rotarod)上的平均時間（秒）。如表1所解釋的，示出了四組小鼠。
[0043] 圖2示出了實施例1的結果:死亡之前一小時胃內給予2.5%伊文思藍溶液(Evans Blue solution)時藍色腸管的長度。給出了四個實驗組各自的平均長度和標準誤差(表1)。
[0044] 圖3示出了實施例1的結果：四個實驗組中結腸的平均長度(cm)(表1)。
[0045] 圖4示出了實施例1的結果:檢測四個小鼠實驗組的結腸中的α-突觸核蛋白的抗體 的組織免疫染色的強度。給出了包含5根長茸毛(villi)的區域的平均光密度(O.D.)。
[0046] 圖5示出了檢測小鼠實驗組的結腸中的α-突觸核蛋白的抗體的組織免疫染色(棕 色）（實施例1，表1)。
[0047] 圖6示出了實施例5的結果，與療法設定中小鼠在轉棒上消耗的時間有關。
[0048] 圖7示出了飲食1和2對腸道傳輸的影響。
[0049] 圖8示出了飲食1和2對結腸長度的影響。
【具體實施方式】
[0050] 例如，由圖4和5可以推斷，UMP和含有18-24個碳原子的多不飽和脂肪酸(可以魚油 的形式提供)的組合可以顯著減少胃腸道中的毒害神經的蛋白質α-突觸核蛋白聚集體的形 成。用殺蟲劑魚藤酮處理的野生小鼠在腸壁的腸肌叢細胞中具有細胞質的α-突觸核蛋白沉 積，其阻礙腸運動。用根據本發明的組合治療這些小鼠減少α-突觸核蛋白染色并改善傳輸 時間。
[0051] 進一步發現使用根據本發明的組合對用于帕金森病的小鼠模型中的肌肉運動功 能具有積極影響。
[0052]除非另外指出，否則將本文使用的術語"一個"或"一種"定義為"至少一種"。
[0053] 當涉及單數名詞(例如，化合物、添加劑等)時，旨在包括復數。
[0054] 除非另外指出，否則應當將本文使用的術語"或"理解為"和/或"。
[0055] 為了清楚，在本文中作為相同或單獨的實施方式描述了簡要描述特征，然而，將要 了解的是本發明的范圍可以包括具有描述的所有或一些特征的組合的實施方式。
[0056] 術語"便秘"具體涉及其最常用的定義，即，對于人來說，少于正常的，優選地少于 一周三次的排便。
[0057] 研究便秘患者的最廣泛使用的和接受的方法是不透射線（固體標記)方法(參見例 如Preston and Lennard-Jones,Gut,1986，27,41_48)〇
[0058] 以現有技術常見的方式在本文中使用術語"脂肪酸"。因此，可以作為游離脂肪酸 或其鹽或以適用于營養性藥物產品的衍生物形式提供脂肪酸-衍生物形式在體內降解釋放 脂肪酸。合適的衍生物形式包括本領域已知的酯和醚，包括甘油一酸酯、甘油二酸酯、甘油 三酯、和磷脂形式。具體地，通過甘油三酯已經實現了良好的結果。
[0059] 當計算量時，可以假設與純脂肪酸相同的生物利用率和類似于完整分子中的脂肪 酸的摩爾量的脂肪酸的貢獻，并校正完整分子的重量。
[0060] 優選地，根據本發明使用的組合包含至少一種c〇3-PUFA，更優選地包含至少一種 選自二十二碳六烯酸(DHA)、二十二碳五烯酸(DPA)和二十碳五烯酸(EPA)的組的PUFA。
[0061] 優選地作為甘油三酯、甘油二酸酯、甘油一酸酯、游離脂肪酸或它們的鹽或酯、磷 月旨、溶血磷脂、甘油醚、脂蛋白、神經酰胺、糖脂或它們的組合提供DHA、EPA和/或DPA。
[0062]更優選地，根據本發明使用的組合包含至少甘油三酯形式的DHA。
[0063] 優選地，根據本發明使用的組合包含用于每天給予400至5000mg(DHA+EPA)，更優 選地每天500至3000mg，最優選地每天1000至2500mg的充足量的DHA和EPA。
[0064]存在于根據本發明使用的組合中的總脂肪酸中的（DHA+EPA)的比例優選地是5-50wt. %，更優選地是10_45wt. %，最優選地是15_40wt. %。
[0065] 更優選地，根據本發明使用的本組合包含用于給予每天300至4000mg，更優選地每 天500-2500mg的量的DHA的充足量的DHA。
[0066] 根據本發明使用的本組合優選地包含非常少量的花生四烯酸(AA)。
[0067] 基于總的脂肪酸，根據本發明使用的本組合優選地包含小于5wt. %的花生四烯 酸，更優選地低于2.5wt. %，例如低至0.5wt %。
[0068]優選地，根據本發明使用的本組合中的重量比DHA/AA是至少5,優選地至少10,更 優選地至少15,優選地高達例如30或甚至高達60。
[0069] 根據本發明使用的本組合中的ω -6/ ω -3脂肪酸的比率優選地低于0.5，更優選地 低于0.2,例如低至0.05或0.01。具體地，根據本發明使用的本組合中的比率ω-6/ω-3脂肪 酸(C20和更高)優選地低于0.3，更優選地低于0.15，例如低至0.06或低至0.03。
[0070] 根據本發明使用的本組合優選地包含基于總的脂肪酸的l-40wt. %的DHA，優選地 基于總的脂肪酸的3-36wt. %的DHA，更優選地基于總的脂肪酸的10-30wt. %的DHA。
[0071] 根據本發明使用的本組合優選地包含基于總的脂肪酸的0.5_20wt.%的EPA，優選 地基于總的脂肪酸的2-1 Owt. %的EPA，更優選地基于總的脂肪酸的5-1 Owt. %的EPA。
[0072] 通過組合給予的含有18-24個碳原子的多不飽和脂肪酸的日劑量在0.4-15克的范 圍內，優選地在0.6-10g的范圍內，具體在l-5g的范圍內。
[0073] 具體地，通過包含EPA和DHA兩者的組合實現了良好的結果。如果兩者都存在，那么 重量與重量比EPA = DHA通常在1:99至99:1的范圍內，優選地在1:10-5:1的范圍內，具體在1: 5-1:2的范圍內。
[0074] 如果EPA和/或DHA存在，那么DHA加 EPA的總的日劑量合起來優選地在300-5000mg/ 天的范圍內，優選地在500-3000mg/天的范圍內，具體在1000-2500mg/天的范圍內。
[0075] 在一個有利的實施方式中，適合將魚油或藻類油作為PUFA的來源。特別適合將魚 油作為PUFA的來源。
[0076] 本文使用的術語"嘧啶衍生物"是指含有雜環的六元環的分子，該環包含1和3位的 氮，和2、4、5和6位的碳，其中，至少碳提供有官能團，具體是選自酮基（=0)和伯胺基團（_ NH2)的官能團。雜環通常包含一個或兩個雙鍵。優選地，環中的氮中的至少一個結合至糖 基，具體結合至核糖或脫氧核糖。
[0077] 優選地，嘧啶衍生物選自嘧啶堿基及其衍生物的組，具體選自尿嘧啶、胞嘧啶、和 它們的衍生物的組。它們的優選的衍生物是尿嘧啶或胞嘧啶的核苷以及尿嘧啶或胞嘧啶的 核苷酸。因此，在一個優選的實施方式中，組合提供選自UMP、UDP、UTP、CMP、CDP、CTP dUMP、 dUDP、dUTP、dCMP、dCDP和dCTP的組中的至少一種核苷酸。
[0078] 可以如此使用核苷或核苷酸，或可以衍生它的官能團的一個或多個。具體地，可以 衍生連接至雜環六元環的氨基，或可以例如通過C1-C24羧酸衍生，優選地酯化(酰化)核苷 或核苷酸的核糖或脫氧核糖的一個或多個羥基。
[0079] 在一個實施方式中，嘧啶衍生物包含選自PUFA組的脂肪酸部分。因此，在一個具體 的實施方式中，本發明使用的組合包含組合在單個分子中的PUFA和嘧啶衍生物，其可以在 體內水解。嘧啶衍生物的酯和制備這些的方法通常是本領域已知的。EP 1，390,378和US 5， 470,838中描述了這些衍生物等。
[0080] 優選地，根據本發明用于應用的組合包含選自尿苷、脫氧尿苷、磷酸尿苷、尿嘧啶、 酰化尿苷、和胞苷的尿苷源。
[0081] 在本發明的上下文中可以將在人體內轉化為尿苷的飲食胞苷視為尿苷的來源。因 此，根據本發明用于應用的組合可以包含作為尿苷的來源的胞苷、脫氧胞苷、磷酸胞苷、胞 嘧啶和/或酰化胞苷。
[0082] 優選地，根據本發明使用的本組合包含尿苷和/或磷酸尿苷，更優選地包含磷酸尿 苷。
[0083]具體地，根據本發明使用的本組合包含選自單磷酸尿苷(UMP)、二磷酸尿苷(UDP) 和三磷酸尿苷(UTP)的一種或多種磷酸尿苷，以及更優選地包含UMP。
[0084]最優選地，根據本發明使用的本組合包含UMP和/或尿苷。優選地，通過UMP提供根 據本發明使用的本組合中的至少50wt. %的尿苷，更優選地至少75wt. %，最優選地至少 95wt · % 〇
[0085]優選地給予根據本發明使用的本組合(或以一定格式）以提供0.08_3g/天，優選地 0.1-2g/天，更優選地0.2-lg/天的量的尿苷(尿苷、脫氧尿苷、磷酸尿苷、尿嘧啶和酰化尿苷 衍生物的累積量）。
[0086] 根據本發明使用的本組合優選地包含每100mL液體產物0.08-3g UMP，每100mL液 體產物〇. l-2g UMP，更優選地每100mL液體產物0.2-lg的量的尿苷。
[0087] 優選地，每千克體重每天給予1-37.5mg UMP。
[0088]使用等價物和UMP的分子量，通過采用等摩爾量可以由UMP的劑量計算重量基礎上 所需的等價物的劑量，后者是(約）324道爾頓。因此，嘧啶的日劑量有利地在3-116μπι〇 1/kg 體重/天的范圍內。
[0089] 優選地至少每天一次，具體每天2-10次給予該組合。對于小于每天一次給予該組 合或組合物的實施方式，活性成分的單位劑量(每次服用的劑量)通常在本文其他地方提到 的日劑量的范圍內，但是活性成分的濃度可以更高。
[0090] 在一個有利的實施方式中，作為營養組合物的一部分給予組合。營養組合物通常 進一步包含可消化的碳水化合物部分和/或蛋白質物質部分。進一步地，組合物可以包含含 有PUFA的脂質部分和一種或多種其他脂質。
[0091] 在一個具體的實施方式中，營養組合物包含飲食纖維。已經發現與PUFA和嘧啶組 合的纖維的存在對便秘，尤其是慢傳輸型便秘具有積極效果。此外，已經發現其在患有神經 退行性疾病，如帕金森病的受試者中提供肌肉運動功能的改善。
[0092] 根據本發明的纖維的總的日劑量優選地是1至15g，更優選地是3至12g，具體是4-l〇g。就根據本發明使用的產物中的總的纖維含量而言，纖維的含量優選地是l_15g/100g， 具體是3-10g/100g產物。
[0093] 纖維可以選自可溶纖維和不溶纖維。
[0094] 纖維通常由多個碳水化合物單元組成。纖維可以是短鏈難消化的碳水化合物或長 鏈難消化的碳水化合物。根據纖維的類型，國家食品法規對于什么構成短鏈或長鏈具有不 同的限定。如本文中使用的，短鏈纖維通常具有小于20,具體是2-12以下，更具體是3-9的聚 合度;長鏈纖維具有至少高于為短鏈纖維指定的聚合度，如10或更高、13或更高或20或更 尚。
[0095] 發明人出乎意料地發現與〇-3-PUFA(EPA/DHA)和嘧啶衍生物(尿苷來源)組合的 纖維的特定基團的存在對便秘具有積極效果。通過實施例示出，關于結腸長度和腸傳輸，用 包含產生丁酸酯的纖維的飲食治療的小鼠比用不含這種纖維的飲食治療的小鼠表現得更 好。從實施例，發明人意識到尤其是帕金森患者可以受益于與尿苷來源、《3-PUFA和可選地 一種或多種其他組分如維生素 D組合的產生丁酸酯的纖維。
[0096] 產生丁酸酯的纖維是難消化的碳水化合物，當被結腸菌群發酵時具有分解產物丁 酸酯。本文使用的術語'產生丁酸酯的纖維'具體是指體內發酵24小時后能夠產生至少 0.5mmol或更多，優選地至少0.75mmol或更多，更優選地至少I .Ommol或更多丁酸酯/克纖維 的纖維。實際上，在這些條件下，體外發酵24小時后，可產生的丁酸酯的最大量通常是5mmol 或更少，具體是3.5mmol或更少，更具體是2.5mmol或更少的丁酸酯/克纖維。
[0097] 使用半動態結腸模型（例如，使用??Μ人造消化道系統）可確定可產生的丁酸酯的 量。在可替代的模型中，收集健康成人(沒有胃腸道問題;在取樣之前最近2周沒有使用抗生 素)的新鮮大便樣品。將大便樣品分為更小的份并在厭氧柜中將其與丙三醇（10%)混合，并 存儲在-80 °C下。在每個實驗中，以相同的濃度集中來自所有供體的大便樣品并將其一起混 合在厭氧柜中，以盡可能多地避免成人微生物群中依賴受試者的變化。在發酵條件下用纖 維接種樣品，且允許發酵發生。24h后使用GC確定丁酸酯的產生。具體地，
[0098]-該模型利用來自19-35歲的四個健康成人(例如三個男性供體和一個女性供體） 的樣品；
[00"]-將纖維接種在200mg/6m 1大便懸浮液含量的大便懸浮液中 [0100]-通過1:5v/v混合奠便與發酵介質制備大便懸浮液；
[0101]-發酵介質:緩沖蛋白胨水3.0g/l，酵母提取物2.5g/l，胰化蛋白胨3.0g/l，L-半胱 氨酸-HCl 0.4g/l，膽汁鹽0.05g/l，K2HP04.3H202.6g/l，NaHC03 0.2g/l，NaCl 4.5g/l， MgS04.7H20 0.5g/l，CaC12.2H20 0.3g/l，FeS04.7H20 0.005g/l。可以將組分逐一添加到 800ml水中，用K2HP04或NaHC03調節pH至6.3±0.1并將體積填充到1升。在121°C下消毒介質 15分鐘
[0102] -發酵溫度是37 °C
[0103] 根據本發明產生丁酸酯的纖維的總劑量優選地是1至15g/劑量，更優選地2至IOg/ 劑量，具體地3-8g/劑量。基于根據本發明使用的組合物中總的纖維含量，產生丁酸酯的纖 維的總含量高達IOOwt%，具體地99wt. %或更低，更具體地95wt. %或更低。基于總的纖維 含量，產生丁酸酯的纖維的總含量優選地是至少50wt. %，優選地至少70wt. %，更優選地至 少80wt. %，具體地90wt. %或更高。
[0104] 優選地，在使用上述的半動態結腸模型的情況下，根據本發明使用的組合或營養 組合物包含足以產生0.3-5mmol，更優選地0.5-3.5，具體地0.7-3，更具體地1.0-2.5mmol 丁 酸酯/克纖維的量的纖維。
[0105] 優選的可溶的產生丁酸酯的纖維包括低聚果糖(FOS)、低聚半乳糖(GOS)、麩皮和 糊精(例如Nutriose:?)。這些是易溶的，并且當發酵時是結腸菌群產生丁酸酯的合適底物。 優選的麩皮是燕麥麩皮、米糠和麥麩。在一個特別優選的實施方式中，使用了幾種產生丁酸 酯的纖維，如FOS和糊精加可選的麩皮和/或GOS;或FOS和麩皮加可選的糊精和/或GOS。通過 短鏈FOS、長鏈FOS、燕麥麩皮、GOS和糊精的組合實現了良好的結果。在其他優選的實施方式 中，組合物是包含一種或多種產生丁酸酯的纖維但基本不含GOS的營養組合物的一部分。這 種組合物優選地是不含乳制品的組合物。
[0106] 優選的不溶的產生丁酸酯的纖維包括抗性淀粉，如高直鏈淀粉或回生淀粉或RS3 淀粉。抗性淀粉適合提供每g抗性淀粉特別多的丁酸酯產物。
[0107] 在Englystetal Am J Clin Nutr 1999,69,448-454的系統中，將抗性淀粉定義為 消化之后在2小時內保持完整的那些淀粉。商業可獲得的抗性淀粉是Acti star和Nove lose 330〇
[0108] 優選的抗性淀粉是來自水稻或玉米的抗性淀粉。
[0109] 在一個具體的實施方式中，抗性淀粉包含大于50wt%的al，4葡聚糖的直鏈聚合 物，其具有10和35之間的聚合度。這種抗性淀粉的合適來源是豆子、豌豆、熱處理的馬鈴薯 和熱處理的谷類。與木聚糖組合的抗性淀粉和β葡聚糖同時存在于結腸中將支持正確類型 的生成丁酸酯的細菌種類的生長。
[0110] 在一個具體的實施方式中，營養組合物包含一種或多種游離氨基酸或它們的鹽。
[0111] 在一個具體的實施方式中，營養組合物包含一種或多種微量元素。
[0112] 在一個具體的實施方式中，營養組合物包含一種或多種維生素。
[0113] 在一個具體的實施方式中，組合物包含膽堿。優選地，本營養組合物包含膽堿和/ 或卵磷脂。優選地，給予營養組合物(或以一定的形式）以提供大于50mg膽堿/天，優選地80-2000mg膽堿/天，更優選地120-1 OOOmg膽堿/天，最優選地150_600mg膽堿/天。
[0114] 優選地，本營養組合物包含50mg至3克膽堿/100mL液體制劑，優選地200mg-1000mg 膽喊/I OOml。
[0115] 本營養組合物可以有利地包含磷脂，優選地以卵磷脂的形式提供磷脂。本營養組 合物優選地是液體組合物，其中，以0.01和1克卵磷脂/100mL，更優選地0.05和0.5克卵磷 月旨/100mL的量提供卵磷脂。
[0116] 本營養組合物可以有利地包含維生素，優選地包含維生素 C、維生素 E、和維生素 B， 更優選地包含維生素 C、維生素 E、維生素 B6、維生素 B12和葉酸。
[0117] 有利地，包含維生素 B12和葉酸。
[0118] 本營養組合物優選地包含每100mL液體產物50至1000 yg葉酸，更優選地150至750μ g，最優選地200至500yg葉酸。
[0119] 本方法優選地包括給予50-1000yg葉酸/天，更優選地150-750yg，最優選地200-500yg葉酸/天。
[0120] 本營養組合物優選地包含每100mL液體產物0.5至15yg維生素 B12,更優選地1至10 1^，最優選地1.5至5以〖維生素1312。
[0121] 本方法優選地包括給予0.5-15yg維生素 B12/天，更優選地l-10yg，最優選地1.5-5 yg維生素 B12/天。
[0122] 有利地，根據本發明的本營養組合物包含每100mL液體產物0.5至3mg，優選地0.5-2mg維生素 B6。
[0123] 優選地，包含維生素 B6、維生素 B12和葉酸。
[0124] 進一步地，發明人發現了維生素 D在本發明的組合中的積極效果。維生素 D特別適 合包含在用于老人、帕金森患者或癡呆患者，例如阿爾茨海默患者的本發明的組合中。
[0125] 通過包含維生素 D3(膽鈣化固醇、骨化二醇、骨化三醇）的組合物已經得到了良好 的結果。
[0126] 如果存在，那么根據本發明使用的營養組合物中的維生素 D的濃度，優選地維生素 D3的濃度通常在5-110yg/100的范圍內，具體在6-85yg/100g的范圍內，優選地在10-50yg/ 100g的范圍內，更優選地是15-45yg/100g。
[0127] 根據本發明使用的組合通常向治療的哺乳動物(特別是人）提供每天高達約50yg 劑量的維生素 D。如果存在，那么日劑量優選地是至少5yg，更優選地是25-40yg。對于液體產 物，維生素 D3含量優選地是5-85yg/單位劑量。液體產物的單位劑量優選地具有50-250ml， 具體100-150ml的體積。
[0128] 營養組合物可以是可飲用的流體組合物、可g的組合物或固體組合物。優選地，營 養組合物是液體組合物，優選易于飲用的液體組合物。
[0129] 優選地通過口服將根據本發明的組合或營養組合物給予需要其的受試者。在可替 代的實施方式中，使用了管飼(tube feeding)。
[0130] 在又一個實施方式中，直腸給予組合。
[0131]根據本發明使用的組合，或本發明的營養組合物，包括本文所描述的任何實施方 式，優選地用于預防或治療患有神經系統紊亂或有患神經系統紊亂的風險的受試者的便 秘，具體地慢傳輸型便秘(也稱為變慢的傳輸型便秘）。如在本文中使用的，'有風險'具體是 指明顯在平均值以上的風險。
[0132] 承認便秘是急性中風患者中頻繁出現的普遍經歷。一個可能的原因可能是腸蠕動 波的協作削弱以及盆底和外括約肌的松弛。
[0133] 胃腸功能失調是頻繁的且有時是帕金森病(PD)的主要征兆，其中，便秘可由降低 的排便頻率引發。已經報告了大于50%的PD患者患有中度至嚴重的便秘。這些ro患者中的 一些具有病理學延長的結腸傳輸時間，換句話說患有慢傳輸型便秘。結腸中α-突觸核蛋白 聚集體的減少可能有利于自主神經系統(ANS)和/或腸神經系統(ENS)更好地作用，因此允 許胃腸道蠕動的更好作用，以及更通常是消化過程(指的是包括攝取、消化、營養物的吸收 和通便)的更好作用。
[0134] 此外，已經示出抗膽堿藥和左旋二羥苯丙氨酸(1-二羥苯丙氨酸)通過使大腸運動 減速，增強便秘問題。
[0135] 已經示出慢傳輸和胃癱導致1-二羥苯丙氨酸在腸道中降解為多巴胺。多巴胺反過 來抑制膽堿能纖維并甚至進一步分別加劇慢傳輸和胃排空延遲的問題。
[0136] 研究已經示出1-二羥苯丙氨酸在同時解決便秘問題時更有效。
[0137] 因此，可以將根據本發明使用的組合或本發明的營養組合物與用于治療PD的抗膽 堿藥如苯海索、奧芬、苯托品、波那普林、貝納利秦、或mithixine平行使用，或與1-二羥苯丙 氨酸平行使用（即，同時、或之前、或之后給予）。
[0138] 根據本發明使用的組合或本發明的營養組合物可以用于治療突觸核蛋白病相關 的/有關的便秘，包括(除ro之外)路易體癡呆和多系統萎縮癥。
[0139] 腸道功能障礙常見于多發性硬化患者。可能通過慢性(低級）炎癥減弱，通過下調 TLR4可能得到的減弱，預期根據本發明使用的組合或本發明的營養組合物改善便秘問題， 尤其是慢傳輸型便秘。
[0140] 具有脊髓損傷的患者患有結腸傳輸時間延長，導致慢傳輸型便秘得到良好證明。 可能通過自主神經系統(ANS)和/或腸神經系統(ENS)更好地作用，預期根據本發明使用的 組合或本發明的營養組合物改善便秘問題，尤其是慢傳輸型便秘。
[0141] 存在影響周圍神經系統和/或運動神經元的其他疾病，便秘與其有關。這種疾病的 實例是糖尿病性神經病、單純性自主神經衰竭(PAF)。
[0142] 可能通過自主神經系統(ANS)和/或腸神經系統(ENS)更好地作用，預期根據本發 明使用的組合或本發明的營養組合物改善便秘問題，尤其是慢傳輸型便秘。（參見Winge et al.,2003,J Neurol Neurosurg Psychiatry；74；13-19)
[0143] 在患有GI-失調如腸梗阻、結腸炎、炎癥性腸病(更具體地克羅恩病或潰瘍性結腸 炎）、和消化性潰瘍的患者中，可能通過慢性(低級）炎癥減弱，通過下調TLR4可能得到的減 弱，預期根據本發明使用的組合或本發明的營養組合物改善便秘問題，尤其是慢傳輸型便 秘。
[0144] 觸發胃腸道粘膜的慢性炎癥的GI-失調增強粘膜完整性的破壞，這激活TLR4。
[0145] 在患有PDD(廣泛性發展障礙），具體地ASD(自閉癥）的患者中，可能通過慢性(低 級)炎癥減弱，通過下調TLR4可能得到的減弱，預期根據本發明使用的組合或本發明的營養 組合物改善便秘問題，尤其是慢傳輸型便秘。
[0146] 現在將通過下列實施例說明本發明。
[0147] 實施例1
[0148] 通過大腦的立體定位手術紋狀體內注射2.7yg魚藤酮在小鼠中誘發便秘，其帕金 森病(PD)最重要的和衰弱非運動癥狀。流行病學研究之前已經示出暴露于這種殺蟲劑誘發 帕金森病(PD)。除了觀察到的便秘，紋狀體內注射魚藤酮還導致眾所周知的ro運動癥狀，由 小鼠保持移動轉棒的能力消弱示出（參見圖1)。轉棒踏旋器由底座(行走板)上具有非滑表 面的塑料棒組成。將小鼠放置在加速棒上，速度從2rpm開始逐漸升高到20rpm。記錄的嚙齒 動物保持在旋轉棒上的能力(第一次倒下的時間）最大是5分鐘。基準線之前，用轉棒裝置訓 練小鼠以排除貫穿實驗的學習效應。
[0149] 在該動物模型中，示出用UMP+魚油的飲食干涉將腸傳輸時間標準化至控制級并治 療便秘。
[0150] 使用四個各有10只小鼠的實驗組，根據表1其被注射了魚藤酮或載體且其接受了 對照或活性飲食（陽性飲食，active diet) ( =UMP+魚油）。表2呈現了對照和活性飲食的具 體組成。手術之前一周開始飲食干涉并持續六周。
[0151] 表1實驗組

[0155] (*)參見Reeves 1993-J Nutr;Nov; 123(11); 1939-51 · 1 UMP+魚油顯著增加胃內施加的伊文思藍通過注射魚藤酮的小鼠的小腸的傳輸速 度(參見圖2)。出于該目的，在小鼠死亡之前1小時，手術之后六周通過不銹鋼插管胃內給予 1.5 %甲基纖維素溶液(O，3ml/動物）中的2.5 %伊文思藍染料。將藍色腸管的長度(cm)作為 腸傳輸時間的量度(圖2中示出）。
[0157] 手術后六周測量的關于UMP+魚油飲食的注射魚藤酮小鼠的結腸的長度也幾乎恢 復到正常(參見圖3)。
[0158] 此外，給定UMP+魚油的注射魚藤酮的小鼠的GI管道具有顯著少于對照飲食的注射 魚藤酮小鼠的特征突觸核蛋白聚集體(參見圖4和圖5)。可以將帕金森患者的乙狀結腸 (sigmoid colon)中α-突觸核蛋白的存在用作疾病的替代標志。
[0159] 實施例2:
[0160] 準備使用液體產物，提供每IOOmL:
[0161] 能量：50-120kcal
[0162] 蛋白質：0_10g
[0163] 脂質：l-5g
[0164] 難消化的碳水化合物:4_30g
[0165] 且其包含：
[0166] DHA+EPA+DPA= 1000-2000mg
[0167] 單磷酸尿苷(二鈉鹽)0.5g
[0168] 實施例3
[0169] 根據本發明的優選的營養組合物每日劑量或每100mL組合物包含：
[0170] 100-500mg，優選地200-400mg EPA，
[0171] 900-1500mg，優選地950-1300mg DHA
[0172] 50-600mg，優選地60-200mg 磷脂，
[0173] 200-600mg，優選地300-500mg 膽堿，
[0174] 400-800mg，優選地500-700mg UMP，
[0175] 20_60mg，優選地30_50mg維生素 Ε(α-ΤΕ)，
[0176] 6〇- IOOmg，優選地 60_90mg 維生素 C，
[0177] 40_80yg，優選地 45_65yg 砸，
[0178] 1-5以8，優選地2-4以8維生素趴2，
[0179] 0 · 5-3mg，優選地 0 · 5-2mg 維生素 B6，和
[0180] 200-600yg，優選地300-500yg 葉酸。
[0181] 實施例4
[0182] 如實施例2或3準備將液體產物用于患有神經病的糖尿病患者，其中碳水化合物部 分由以下各項組成(每IOOmL):
[0183] 1.5g 半乳糖
[0184] 3g異蔗糖
[0185] Ig緩慢消化的淀粉
[0186] 0.2g 果糖
[0187] 3g麥芽糖糊精
[0188] 2g葡萄糖
[0189] 1.05g異麥芽低聚糖
[0190] 實施例5
[0191] 研究了療法設定中包含嘧啶衍生物(UMP)和PUFA來源(DHA)的飲食的影響，其中， 用根據本發明的飲食治療開始于注射5.4yg魚藤酮或載體4周后并持續七周。使用了六個雄 性C57B1/6J小鼠實驗組，如下表指出，其被載體(Sham)或魚藤酮處理并接受了對照飲食或 根據本發明的飲食(飲食1或飲食2):
[0192] 表3:實驗組
[0194] 下表呈現了對照和活性飲食的組成。
[0195] 表4:飲食的組成
[0197] 1產生丁酸酯的纖維(5克/100g飲食）：
[0198] 1.50g GOS
[0199] 〇.17g 長鏈 FOS
[0200] 1.67g 短鏈 FOS
[0201] 1.67g nutriose
[0202] 和進一步的0.5g乳糖以及0.5g碳水化合物以及水分7.27g
[0203] 2其他維生素(每100g飲食） 抗壞血酸（100%純） 0.16 g 維生素 E (乙酸生育酚，50%) 0.465 g 維生素 D (膽鈣化固醇，：500.000 TU/g) 5 6
[0204] 維生素 Β6 (吡哆醇鹽酸鹽，82 %) 0.00407 g 葉酸（100%) 0.00060 g 維生素 B12 (氰鈷胺素0,1%) 0.0:575 g: 亞硒酸鈉* 5 H20 0.00034 g
[0205]飲食1由對照飲食加其他的UMP和DHA(魚油)組成。
[0206]飲食2如飲食1，沒有纖維素，但是取而代之的是低聚半乳糖和低聚果糖(長鏈和短 鏈低聚果糖兩者的混合物并代替UMP尿苷。
[0207]紋狀體內注射魚藤酮或sham(載體）1周后開始轉棒測試，進行10周。如圖6所示，魚 藤酮誘發運動問題，但是用飲食1或飲食2開始治療后，示出了運動功能的改善(與'魚藤酮+ 對照食物'組相比，棒上增加的平均時間）。其他存在的飲食纖維對運動功能具有積極影響。
[0208]圖7和8示出了飲食1和2對腸傳輸和結腸長度的影響。
【主權項】
1. 一種嘧啶衍生物和具有18-24個碳原子的多不飽和脂肪酸的組合，用于預防或治療 便秘。2. 根據權利要求1所述的用于應用的組合，其中，所述便秘是慢傳輸型便秘。3. 根據權利要求1或2所述的用于應用的組合，其中，所述便秘與胃腸失調有關。4. 根據權利要求3所述的用于應用的組合，其中，所述胃腸失調是胃腸道粘膜的慢性炎 癥，優選地選自由腸梗阻、結腸炎、炎癥性腸病、以及消化性潰瘍組成的組。5. 根據權利要求1或2所述的用于應用的組合，其中，所述便秘與神經系統紊亂或精神 障礙有關。6. 根據權利要求5所述的用于應用的組合，其中，所述神經系統紊亂是周圍神經病、自 主神經病、或腸神經系統神經病，優選地是自主神經病、或腸神經系統神經病。7. 根據權利要求5或6所述的用于應用的組合，其中，所述神經系統紊亂選自由以下組 成的組:突觸核蛋白病、糖尿病性神經病、杜興肌營養不良、腦血管疾病、多發性硬化、單純 性自主神經衰竭、以及脊髓損傷，優選地選自由腦血管疾病、多發性硬化、單純性自主神經 衰竭、脊髓損傷、以及帕金森病組成的組。8. 根據權利要求5至7中任一項所述的用于應用的組合，其中，所述神經系統紊亂是脊 髓損傷。9. 根據權利要求5所述的用于應用的組合，其中，所述神經系統紊亂是帕金森病。10. 根據權利要求5至7中任一項所述的用于應用的組合，其中，所述神經系統紊亂是中 風。11. 根據權利要求6所述的用于應用的組合，其中，所述神經系統紊亂是大腦性麻痹。12. 根據權利要求5至7中任一項所述的用于應用的組合，其中，所述精神障礙是廣泛性 發育障礙，優選地是自閉癥，或所述精神障礙是抑郁癥，尤其是抑郁情緒障礙。13. 根據權利要求1至12中任一項所述的用于應用的組合，其中，所述多不飽和脂肪酸 選自ω-3多不飽和脂肪酸的組，優選地選自由二十二碳六烯酸（DHA)、二十二碳五烯酸 (DPA)、以及二十碳五烯酸(ΕΡΑ)組成的組。14. 根據權利要求13所述的用于應用的組合，其中，通過所述組合給予的DHA加 ΕΡΑ的日 劑量在400mg至5000mg的范圍內，優選地在500mg至3000mg的范圍內，尤其是在lOOOmg至 3000mg的范圍內。15. 根據前述權利要求中任一項所述的用于應用的組合，其中，所述組合包含提供具有 18-24個碳原子的多不飽和脂肪酸的魚油。16. 根據前述權利要求中任一項所述的用于應用的組合，其中，所述嘧啶衍生物是堿 基、核苷或核苷酸。17. 根據前述權利要求中任一項所述的用于應用的組合，其中，所述嘧啶衍生物選自以 下的組:尿苷、脫氧尿苷、衍生的尿苷、衍生的脫氧尿苷、胞苷、脫氧胞苷、衍生的胞苷以及衍 生的脫氧胞昔。18. 根據前述權利要求中任一項所述的用于應用的組合，其中，所述嘧啶衍生物是核苷 酸，所述核苷酸的一個或多個官能團可以衍生。19. 根據權利要求18所述的用于應用的組合，其中，所述核苷酸選自UMP、UDP、UTP、CMP、 CDP、CTP dUMP、dUDP、dUTP、dCMP、dCDP以及dCTP的組，其中，可選地將所述核苷酸的（脫氧） 核糖的一個或多個羥基部分酰化。20. 根據權利要求19所述的用于應用的組合，其中，所述核苷酸是UMP或酰化UMP。21. 根據權利要求17-20中任一項所述的用于應用的組合，其中，所述組合包含尿苷或 酰化尿苷。22. 根據前述權利要求中任一項所述的用于應用的組合，其中，將所述組合給予至少18 歲的人。23. 根據前述權利要求中任一項所述的用于應用的組合，其中，作為營養組合物的一部 分給予所述組合。24. 根據權利要求23所述的用于應用的營養組合物，包含膽堿。25. 根據權利要求23或24所述的營養組合物，進一步包含磷脂、維生素 E、維生素 C、硒、 維生素 B12、維生素 B6以及葉酸中的至少一種。26. -種用于監測便秘、優選慢傳輸型便秘的治療的方法，所述方法包括給予根據權利 要求1至23中任一項所述的用于應用的組合或根據權利要求24或25所述的營養組合物，以 及測量結腸中的α-突觸核蛋白聚集體的水平。27. -種用于監測突觸核蛋白病，優選PD、路易體癡呆、或多系統萎縮癥，更優選PD的治 療的方法，所述方法包括給予根據權利要求1至23中任一項所述的用于應用的組合或根據 權利要求24或25所述的營養組合物，以及測量結腸中的α-突觸核蛋白聚集體的水平。28. 根據權利要求1至23任一項中描述的組合用于制備用于預防或治療便秘、優選慢傳 輸型便秘的藥物或制劑的用途。29. 根據權利要求28所述的用途，其中，分別預防或治療患有根據權利要求4或6-12中 描述的胃腸失調、神經系統紊亂或精神障礙的受試者的便秘、優選慢傳輸型便秘。
【文檔編號】A61K31/519GK105979939SQ201480075054
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2014年9月30日
【發明人】達 席爾瓦 索菲婭·洛佩斯
【申請人】N.V.努特里西阿公司