專利名稱：具有n-末端磺酰基或氨基磺酰基的新穎二肽對-脒基芐基酰胺的制作方法
技術領域：
本發明涉及具有N-末端磺酰基或氨基磺酰基的二肽對-脒基芐基酰胺，涉及其制備方法，并且涉及其作為凝血酶抑制劑的用途。
EP601459公開了具有氨磺酰基團的雜環凝血酶抑制劑。
本發明涉及式I化合物及其立體異構體和生理耐受酸的鹽
其中取代基具有下面的定義R1是C1-C20烷基，C1-C3氟代烷基，C3-C8環烷基，芳基-C1-C10烷基；芳基，雜芳基，OH或R3R2N，其中R2和R3相同或不同，是氫原子，C1-C10烷基，芳基，芳基-C1-C10烷基，或一起是芳基或雜芳基可以與之稠和的、或可以含有一個雜原子(O，S，NH或取代的N)的C2-C7亞烷基鏈，A是式IIα-氨基酸殘基
其中R4是氫原子，C1-C8烷基，C3-C7環烷基，芳基，或芳基-C1-C3烷基，R5是氫原子，C1-C8烷基，C3-C7環烷基，C3-C7環烷基-C1-3-烷基，芳基，芳基-C1-C3烷基，二(C3-C7環烷基)-甲基或二苯基甲基或，如果R4＝H，則是C1-C8烷基，其中一個氫原子被OR6或CO-OR6(其中R6＝氫原子，C1-C8烷基或芳基-C1-C3烷基)替代，或R4和R5一起是可以含有一個稠合烷基的C2-C6亞烷基鏈，B是式III環狀α-氨基酸殘基
其中m是2，3或4，且環上的一個氫原子可以被羥基或C1-C3烷基替代，而且，如果m＝3或4，則環中的一個CH2基團可以被氧原子，硫原子，NH-，或N-C1-C4烷基替代，和/或兩個相鄰的氫原子可以被雙鍵替代。
下面四組化合物是優選的1.式I化合物，其中取代基具有下面的定義R1是OH或R3R2N，其中R2和R3相同或不同，是氫原子，C1-C10烷基，芳基，芳基-C1-C10烷基，或一起是芳基或雜芳基可以與之稠合的或可以含有一個雜原子(O，S，NH或取代的N)的C2-C7亞烷基鏈，A是式IIα-氨基酸殘基
其中R4是C1-C8烷基，C3-C7環烷基，芳基，芳基-C1-C3烷基，R5是氫原子，C1-C8烷基，C3-C7環烷基，C3-C7環烷基-C1-3-烷基，芳基，芳基-C1-C3烷基，二(C3-C7環烷基)-甲基或二苯基甲基或，如果R4＝H，則是C1-C8烷基，其中一個氫原子被OR6或CO-OR6(其中R6＝氫原子，C1-C8烷基或芳基-C1-C3烷基)替代，或R4和R5一起是可以含有一個稠合芳基的C2-C6亞烷基鏈，B是式III環狀α-氨基酸殘基
其中m是2，3或4，且環上的一個氫原子可以被羥基或C1-C3烷基替代，而且-如果m＝3或4-則環中的一個CH2基團可以被氧原子，硫原子，NH-，或N-C1-C4烷基替代，和/或兩個相鄰的氫原子可以被雙鍵替代。
2.式I化合物，其中取代基具有下面的定義R1是C1-C20烷基，C1-C3氟代烷基，C3-C8環烷基，芳基-C1-C10烷基，芳基，雜芳基，A是式IIα-氨基酸殘基
其中R4是C1-C8烷基，C3-C7環烷基，芳基，芳基-C1-C3烷基，R5是C1-C8烷基，C3-C7環烷基，C3-C7環烷基-C1-3-烷基，芳基，芳基-C1-C3烷基，二(C3-C7環烷基)-甲基或二苯基甲基或R4和R5一起是可以含有一個稠合芳基的C2-C6亞烷基鏈，B是一個下面的基團
3.式I化合物，其中取代基具有下面的定義R1是C1-C20烷基，C1-C3氟代烷基，C3-C8環烷基，芳基-C1-C10烷基，芳基，雜芳基，或OH，A是下式α-氨基酸殘基
其中R5是C1-C8烷基，其中一個氫原子被OR6或CO-OR6(其中R6＝氫原子，C1-C8烷基或芳基-C1-C3烷基)替代，B是一個下面的基團
4.式I化合物，其中取代基具有下面的定義R1是C1-C20烷基，C1-C3氟代烷基，C3-C8環烷基，芳基-C1-C10烷基，芳基，雜芳基，或OH，A是下式α-氨基酸殘基
其中R5是C1-C8烷基，其中一個氫原子被OR6或CO-OR6(其中R6＝氫原子，或C1-C8烷基)替代，B是式III環狀α-氨基酸殘基
其中m是2，3或4，且環上的一個氫原子可以被羥基或C1-C3烷基替代。
術語“芳基”指環系中含有6-10碳原子的單-或雙環芳香基團，例如苯基或萘基，并且可以含有至多三個相同或不同的取代基。
術語“雜芳基”指含有1或2個雜原子如N，O或S、并且有一個芳環可以與之稠合的5-或6-元芳環。
1-4組化合物I中，特別好的化合物具有下面的取代基R1，A和B第1組化合物R1為NH2，C1-4單-或-二烷基氨基或哌啶基A為下面氨基酸的殘基纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，苯基甘氨酸，環己基甘氨酸，苯丙氨酸，環己基丙氨酸，二苯基丙氨酸，二環己基丙氨酸，其中的苯環可以被至多三個相同或不同的C1-C4烷基，C1-C4烷氧基，OH，F，Cl或COOR6基團取代，B為下列氨基酸的殘基氮雜環丁烷-2-羧酸，脯氨酸，2-哌啶酸，二氫脯氨酸，4-羥基脯氨酸，氧代脯氨酸，硫代脯氨酸，4-C1-4-烷基-2-哌啶酸，嗎啉-2-羧酸，哌嗪-2-羧酸，4-C1-4烷基哌嗪-2-羧酸殘基第二組化合物R1為C1-4烷基，CF3CH2-，苯基，萘基，苯基-C1-4-亞烷基(特別是芐基和苯乙基)，萘基-C1-4-亞烷基，吡啶基，異喹啉基A為下面氨基酸的殘基α-甲基苯丙氨酸，α-甲基環己基丙氨酸，α-甲基苯基甘氨酸，α-甲基環己基甘氨酸殘基，B為下面氨基酸的殘基二氫脯氨酸，氧代脯氨酸，硫代脯氨酸，2-哌啶酸，4-C1-4-烷基-2-哌啶酸，嗎啉-2-羧酸，哌嗪-2-羧酸，4-C1-4烷基-哌嗪-2-羧酸，第三組化合物R1為C1-4烷基，CF3CH2-，苯基，萘基，苯基-C1-4-亞烷基(特別是芐基和苯乙基)，萘基-C1-4-亞烷基，吡啶基，異喹啉基，A為下面氨基酸的殘基天冬氨酸，谷氨酸，絲氨酸，高絲氨酸，蘇氨酸，其中未鍵聯羧酸或羥基可以分別被C1-8烷基酯化或醚化(特別是絲氨酸叔丁酯和蘇氨酸叔丁酯)，B為下面氨基酸的殘基二氫脯氨酸，氧代脯氨酸，硫代脯氨酸，嗎啉-2-羧酸，第四組化合物R1為C1-4烷基，CF3CH2-，苯基，萘基，苯基-C1-4-亞烷基(特別是芐基和苯乙基)，萘基-C1-4-亞烷基，吡啶基，異喹啉基，A為下面氨基酸的殘基絲氨酸，高絲氨酸，蘇氨酸，其中OH可以被C1-8烷基醚化，或者天冬氨酸，谷氨酸，其中未鍵聯羧基可以被C1-8烷基酯化，B為4-羥基脯氨酸，4-C1-4-烷基-2-哌啶酸的殘基，基團R1，A，B如結構式I所示鍵聯在一起，優選地，氨基酸殘基A具有(D)構型，并且優選地氨基酸殘基B具有(L)構型。優選地提到下面的物質CF3-CH2-SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmbC4H9-SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmbC8H17-SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmbC16H33-SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmb異丙基-SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmb苯基 -SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmb2-萘基-SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmb3-吡啶基 -SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmb2-噻吩基 -SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmbN-哌啶基 -SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmbH2N-SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmbMe2N-SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmbEtHN-SO2-(D)Phe-Pro-NH-pAmbMe-SO2-(D)Phe(4-OMe)-Pro-NH-pAmbMe-SO2-(D)Phe(3-OMe)-Pro-NH-pAmbMe-SO2-(D)Phe(2-Cl)-Pro-NH-pAmbMe-SO2-(D)Dpa-Pro-NH-pAmbMe-SO2-(L)Dpa-Pro-NH-pAmbMe-SO2-(D)Dpa(4，4′-OMe)-Pro-NH-pAmbMe-SO2-(L)Dpa(4，4′-OMe)-Pro-NH-pAmbMe-SO2-(D)Dpa(4，4′-Cl)-Pro-NH-pAmbMe-SO2-(L)Dpa(4，4′-Cl)-Pro-NH-pAmbMe-SO2-(D，L)Phg(3，4-Cl)-Pro-NH-pAmbMe-SO2-(D)Asp(OH)-Pro-NH-pAmbMe-SO2-(L)Asp(OH)-Pro-NH-pAmbMe-SO2-(D)Asp(OMe)-Pro-NH-pAmbMe-SO2-(L)Asp(OMe)-Pro-NH-pAmbMe-SO2-(D)Asp(OtBu)-Pro-NH-pAmbMe-SO2-(L)Asp(OtBu)-Pro-NH-pAmbMe-SO2-(D)Phe-Aze-NH-pAmbMe-SO2-(D)Phe-Pip-NH-pAmbl-萘基 -SO2-Gly-Pro-NH-pAmb上表中的縮寫具有下面的意義Phe＝苯丙氨酸，pAmb＝對脒基苯甲基，Pro＝脯氨酸，Cpa＝二苯基丙氨酸，Phg＝苯基甘氨酸，Asp＝天冬氨酸，Aze＝氮雜環丁烷-2-羧酸，Pip＝2-哌啶酸式I化合物可以以結構式所示的形式存在或者以其生理耐受酸的加成鹽的形式存在。這些酸的例子是鹽酸，檸檬酸，酒石酸，乳酸，磷酸，甲磺酸，乙酸，甲酸，馬來酸，富馬酸，馬來酸，琥珀酸，羥基琥珀酸，硫酸，戊二酸，天冬氨酸，丙酮酸，苯甲酸，葡糖醛酸，草酸，抗壞血酸和乙酰甘氨酸。本發明進一步涉及式IV中間體
其中R1，A和B具有上述定義，它可被用來制備化合物I。化合物I可以根據反應模式I或II由α-氨基酸H-A-OH或由N-保護的環狀氨基酸B-OH起始而制備。反應式I
反應式II
在上面的反應模式中，R7是H或C1-C4烷基，R8是C1-C4烷基，優選甲基或叔丁基，R9是CN或
且P是保護基團，優選叔丁氧羰基(Boc)，或芐氧羰基(Cbz)。或者，被保護的氨基酸P-A-OH和H-B-OR8可以偶聯，從而得到二肽P-A-B-OR8，接著在消去P后與R1SO2Cl反應或者在消去R8后與對-氰基-或對-脒基苯甲胺反應，任何反應順序都可以。R1-SO2-A-OH也可以直接與對-H-B-NHCH2C6H4R9偶連，得到終產物I或中間體IV。所需的偶連反應在標準的肽化學條件下進行(參見M.Bodansky，A.Bodansky“肽合成的實踐”，Springer出版社，1084)。Boc保護基團用HCl/二噁烷或CF3COOH/二氯甲烷消去，而Cbz保護基團通過氫解或用HF消去。酯功能基在醇溶劑如甲醇或乙醇中用NaOH或LiOH水解。叔丁酯用酸例如CF3COOH水解。在有機堿如三乙胺，吡啶或N，N-二異丙基乙胺存在下與磺酰氯R1-SO2Cl的反應在有機溶劑如CH2Cl2，THF或DMF中發生。在游離羧酸功能基的情況下，反應在堿金屬氫氧化物或碳酸鹽水溶液存在下進行。脒由腈前體通過常規的Pinner合成(R.Roger和.G.Neilson，化學綜述61，1961，179)而制備，或者優選地通過改良的Pinner合成法、通過硫代酯亞胺鹽為中間體進行(H.Vieweg等，藥物學39，1994，226)而制備。通過在阮內鎳或Pd/C在醇溶劑等的存在下，將羥胺加成到氰基上而獲得的N-羥基脒的催化氫化產生脒(B.J.Broughton等，“藥物化學”18，1975，1117).本發明新的化合物可以用來治療和預防所有的與凝血酶相關的疾病，特別是血栓栓塞疾病如心肌梗塞，外周動脈閉合疾病，深部靜脈血栓形成，肺栓塞和休克。另外，其可以用來防止通過機械方法或溶解而使動脈血管開通后的再閉合。它們特別的優點是它們在口服給藥后也是有效的。根據本發明的化合物可以口服或經常規途徑腸胃外給藥(皮下，靜脈內，肌內，腹膜內，直腸)。也可以通過鼻咽腔用蒸氣或噴霧給藥。劑量取決于患者的年齡，癥狀和體重以及給藥方式。總的原則是每人日劑量活性物質是口服大約10-2000mg，腸胃外給藥大約1-200mg。該劑量可以以2-4單劑給藥或一天一次以緩釋劑型形式給藥。本發明新的化合物可以以常規固體或液體藥物形式使用，例如作為未包衣的或(膜)包衣的片劑，膠囊劑，粉劑，顆粒劑，栓劑，溶液，軟膏，乳懸液，或噴霧劑。這些制劑可以常規生產。在這些制劑中，活性物質可以與常規藥物助劑一起加工，如片劑粘合劑，填料，防腐劑，片劑崩解劑，流動調節劑，增韌劑，濕潤劑，分散劑，乳化劑，溶劑，緩釋劑，抗氧化劑和/或噴射氣體(參見H.Sucker等制藥技術，席默出版社，斯圖加特，1978)。以這些常規的方法獲得的藥物制劑含有0.1-99％重量的活性物質。
實施例1N-異丙基磺酰-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-脒基苯甲基)酰胺乙酸鹽a)Boc-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-脒基苯甲基)酰胺在-15℃在2分鐘內將2.0g(14.6mmol)氯甲酸異丁酯加入到5.1g(14.2mmol)Boc-D-Phe-Pro-OH和1.53g(15.2mmol)N-甲基嗎啉于15ml DMF中的溶液中，混合物攪拌10分鐘后，加入1.9g(14.2mmol)對-氰基芐胺(W.Walter等，年鑒(Ann.)660，1962，60)和1.53g N-甲基嗎啉于3mlDMF中的溶液。-15℃攪拌3小時后，TLC檢測(CH2Cl2/MeOH，9/1)顯示沒有可測得的起始化合物。為了分離，將反應混合物倒入200ml水中，分離出油狀物，短時間后固化，破碎并抽濾。將還潮濕的殘余物溶解于250ml乙酸乙酯和50ml乙醚的混合物中，連續用5％濃度的檸檬酸水溶液，碳酸氫鈉和飽和的氯化鈉溶液洗滌。硫酸鈉干燥后，減壓蒸餾去除溶劑，殘余物與正己烷混合后抽濾。從50ml乙酸乙酯中重結晶，得到5.6g TLC-純的產物。熔點156-157℃。b)D-苯丙氨酰脯氨酸(對-氰基苯甲基)酰胺鹽酸鹽將上面的化合物溶解于100ml 5N鹽酸于二噁烷中的溶液中，并在室溫下攪拌3小時，其間沉淀出鹽酸鹽。抽濾，用乙醚洗滌直到無游離的HCl，減壓下用KOH干燥。得到4.6g(95％理論值)白色結晶，熔點220-222℃。c)N-異丙基磺酰基-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-氰基苯甲基)酰胺將2.05g(6.05mmol)上述鹽酸鹽懸浮于50ml CH2Cl2。加入1.35g(13.5mmol)三乙胺，得到一溶液，在0-5℃向該溶液中滴加0.9g(6.1mmol)丙烷-2-磺酰氯溶解于10ml CH2Cl2中的溶液。反應混合物在室溫下攪拌5小時后用水，5％濃度的檸檬酸和5％濃度的NaHCO3溶液搖蕩萃取。用硫酸鈉干燥后蒸餾去除溶劑，粘稠油狀殘余物從乙酸乙酯/乙醚(1∶1)混合物中重結晶。d)N-異丙基磺酰基-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-硫代脒基芐基)酰胺在0℃，將4.1g上面的化合物和4ml三乙胺溶解于用H2S飽和的40ml吡啶中；并在室溫下靜置過夜。TLC檢測(CH2Cl2/MeOH，9/1)表明，轉化為硫代酰胺的反應已經完全。為了分離，減壓蒸餾去除大部分吡啶，殘余物溶解于250ml乙酸乙酯，并用氯化鈉、5％濃度的檸檬酸和NaHCO3溶液洗滌。干燥并蒸餾去除溶劑，得到4.1g純的結晶硫代酰胺。e)N-異丙基磺酰基-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺乙酸鹽所述硫代酰胺溶解于150ml丙酮中，加入7ml碘甲烷后在室溫下靜置過夜。去除溶劑后，無定形殘余物與無水乙醚一起攪拌后干燥。將S-甲基硫代亞氨酸甲酯氫碘酸鹽溶解于50ml乙醇中，加入15ml 10％乙酸銨溶液，混合物在60℃加熱3小時。為了分離，去除溶劑，殘余物溶解于100ml CH2Cl2，過濾去除不溶成分后，蒸餾去除CH2Cl2。用乙酸乙酯/乙醚混合物溶解，去除溶解于其中的雜質。保留的碘鹽/乙酸鹽混合鹽溶解于丙酮/水(3/2)中，并用IRA乙酸根離子交換樹脂轉化為純的乙酸鹽，其在乙腈中加熱后呈白色結晶粉末形式，熔點148-152℃(分解)。FAB-MS(M+H)+＝500。實施例2N-(噻吩基-2-磺酰基)-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺乙酸鹽a)Boc-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺通過1c的方法，用H2S將Boc-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-氰基芐基)酰胺(參見制備實施例1a)轉化為硫代酰胺后，按照1d的方法轉化為脒。脒以白色結晶的形式獲得，熔點237-239℃。FAB-MS(M-H)+＝347。b)D-苯丙氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺二鹽酸鹽按照實施例1b的方法，用5N HCl的二噁烷溶液從上述化合物中消去Boc保護基團。分離的二鹽酸鹽是高吸濕性粉末，熔點130-140℃。FAB-MS(M-H)+＝247。c)N-(噻吩基-2-磺酰基)-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺乙酸鹽加入1.9g(12.6mmol)1-羥基苯并三唑和3.3g(25mmol)二環己基碳化二亞胺后將3.9g(12.6mmol)N-苯基磺酰基-D-苯丙氨酸(埃及化學期刊，23，1981，273)于40ml THF中的溶液在室溫下攪拌4小時。抽濾沉淀的脲并用少量的THF洗滌。在5℃向濾液中加入4.1g(12.6mmol)N-(對-脒基芐基)脯氨酸酰胺二鹽酸鹽和1.6g碳酸氫鈉于6ml水中的溶液。室溫下攪拌48小時后，蒸餾去除大部分溶劑，殘留物溶解于乙醇，過濾去除不溶物并再次濃縮。殘余物在硅膠柱上純化，CH2Cl2/MeOH/50％濃度的乙酸混合物(45/5/1.5)洗脫。蒸餾純級分洗脫液，向終了產物中加入甲苯，殘余物從50ml加入了少量水的丙酮中重結晶。分離得到白色結晶形式的3.3g(48％理論值)的脒乙酸鹽。熔點95-98℃。FAB-MS(M-H)+＝540.5。實施例3N-(2-萘基磺酰基)-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺乙酸鹽a)Boc-脯氨酸(對-氰基芐基)酰胺在0℃將276g Boc-Pro-OSu(0.88mol)加入到2升二氯甲烷中。向該溶液中連續加入163.9g 4-氰基芐胺鹽酸鹽(0.97mol)和230ml二異丙基乙胺(1.34mol)。懸浮液在溶化的冰浴中攪拌48小時后過濾。濾液用20％濃度的碳酸氫鈉溶液(4X)，飽和的碳酸氫鈉溶液(3X)，和飽和的氯化鈉溶液(2X)洗滌，干燥并在旋轉蒸發器中蒸發。殘余物從甲基叔丁基醚中重結晶，得到261g(90％)白色結晶，熔點124-125℃。b)N-(4-氰基芐基)脯氨酸酰胺鹽酸鹽將260g(0.79mol)上面Boc保護的化合物溶解于1升乙醚中，加入過量的醚制鹽酸溶液后，攪拌過夜，過濾沉淀出的鹽酸鹽。用乙醚洗滌直到無游離的HCl，然后用乙醇重結晶。得到200g(95％)白色結晶，熔點209-211℃。c)N-(2-萘基磺酰基)-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-氰基芐基)酰胺將5.9g(21.3mmol)上述脯氨酸酰胺鹽酸鹽溶解于100ml DMF。連續加入7.8g(21.3mmol)N-(2-萘基磺酰基)-D-苯丙氨酸(A.Bernat等，法國專利2593812)，2.15g(21.3mmol)三乙胺和3.25g(21.3mmol)1-羥基苯并三唑(HOBT)。在0-5℃攪拌的同時，向該溶液中加入4.4g(21.3mmol)二環己基碳化二亞胺溶解于30ml乙酸乙酯中的溶液。反應混合物在室溫下攪拌48小時。抽濾沉淀的脲后，減壓蒸餾去除大部分溶劑，殘余物溶解于200ml乙酸乙酯中，連續用5％濃度的碳酸氫鈉，4％濃度的檸檬酸溶液和水洗滌。干燥后，蒸餾去除乙酸乙酯，油狀殘余物溶解于30mlCH2Cl2并加入50ml乙醚結晶，分離得到9.1g(76％)所需的化合物。d)N-(2-萘基磺酰基)-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺乙酸鹽排除水分，用HCl氣體在0℃飽和80ml甲醇，將5.6g(10mmol)上述化合物溶解其中，溶液在0℃靜置48小時。然后在20℃去除溶劑，將殘余物溶解于20ml甲醇并在0-5℃加入到80ml NH3飽和的甲醇溶液中。溶液回流3小時后冷卻并過濾，蒸餾去除溶劑，用乙酸根離子交換樹脂將殘余物轉化為脒的乙酸鹽。用加了少量水的丙酮重結晶，得到白色結晶的標題化合物5.1g(80％)，熔點221-225℃，FAB-MS(M+H+)＝584.5。實施例4N-(吡啶基-3-磺酰基)-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺乙酸鹽a)N-(吡啶基-3-磺酰基)-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-氰基芐基)酰胺根據實施例1c的方法，使D-苯丙氨酰脯氨酸(對-氰基芐基)酰胺鹽酸鹽(類似于1a和b制備)與吡啶-3-磺酰氯反應。RF＝0.57(CH2Cl2/MeOH，9/1)。b)N-(吡啶基-3-磺酰基)-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-羥基脒基芐基)酰胺乙酸鹽2g上述化合物，0.74g羥胺鹽酸鹽和2.2g三乙胺溶解于30ml乙醇中，并在60-70℃、氮氣下攪拌2小時。TLC檢測顯示檢測不到起始物。向反應混合物中加入水，用冰醋酸調節pH為3-4。水相用CH2Cl2萃取幾次，將合并的CH2Cl2萃取液干燥并蒸餾去除二氯甲烷。仍含有乙酸的殘余物直接用于下面的反應。RF＝0.1(CH2Cl2/MeOH，9/1)。c)N-(吡啶基-3-磺酰基)-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺乙酸鹽在50℃、在0.4g 10％Pd/C存在下，將2.4g(5mmol)上述化合物于40ml甲醇中的溶液氫化7小時。然后抽濾掉催化劑，蒸餾去除溶劑，殘余物與乙酸乙酯混合并加熱。加入丙酮和少量水并冷卻，得到澄清的溶液，結晶出酰胺乙酸鹽。分離出1.3g(49.5％)白色粉末。熔點201-202℃，RF＝0.28(CH2Cl2/MeOH/50％濃度的乙酸，8/2/0.5)。實施例5N-(2-萘基磺酰基)甘氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺乙酸鹽a)Boc-甘氨酰脯氨酸(對-氰基芐基)酰胺在0℃，連續向7.0g(40mmol)Boc-甘氨酸于240ml二氯甲烷中的溶液中加入30ml二異丙基乙胺，10.6g(40mmol)N-(對-氰基芐基)脯氨酰酰胺鹽酸鹽和32ml(44mmol)丙烷膦酸苷(50％濃度的乙酸乙酯溶液)。在0℃攪拌2小時后，有機相用1N氫氧化鈉，水和飽和的氯化鈉溶液洗滌，干燥并蒸餾去除溶劑。分離得14.8g(96％)白色粉末，RF＝0.57(CH2Cl2/MeOH，9/1)。
1H-NMR(DMSO-d6)，δin ppm1.4(s，9H，(CH3)3)，1.7-2.2(m，4H，CH2-CH2)，3.3-3.6(m，2H，脯氨酸的N-CH2)，3.8(m，2H，甘氨酸的N-CH2，4.3-45(m，3H，CH和N-CH2-Ar)，6.8(m，1H，BOC-)7.4-7.5(m(因為存在第二旋轉異物體而明顯三重線)，2H，Ar-H)，7.8(d，2H，Ar-H)8.5和18.8(每個m，與1H一起(兩個旋轉異構體)，NH)b)H-甘氨酰脯氨酸(對-氰基芐基)酰胺鹽酸鹽根據1b，從上面的化合物中消除Boc基團，分離得到8g(64％)白色粉末。
1H-NMR(DMSO-d6)，δin ppm1.7-2.2(m，4H，CH2-CH2)，3.4-4.0(m，4H，脯氨酸和甘氨酸的N-CH2-)，4.2-4.5(m，3H，CH和N-CH2-Ar)，7.5(d，2H，Ar)，7.8(d，2H，Ar)，8.3(s，br，3H，NH3+)，8.9和9.2(每個m，與1H一起(兩個旋轉異構體)，NH)c)N-(2-萘磺酰基)甘氨酰脯氨酸(對-氰基芐基)酰胺根據1c，上面的化合物與2-萘磺酰氯反應，得到3.3g白色粉末RF＝0.59(CH2Cl2/MeOH，9/1).
1H-NMR(DMSO-d6)，δin ppm1.6-2.0(m，4H，CH2-CH2)，3.3-3.5(m，2H，N-CH2(脯氨酸))，3.7(m，2H，N-CH2(甘氨酸))，4.1-4.4(m，3H，CH和N-CH2-Ar)，7.4-8.5(13H，芳香H和2NH)d)N-(2-萘磺酰基)甘氨酰脯氨酸(對-硫代酰胺基芐基)酰胺根據1d，將上面的化合物轉化為硫代酰胺。產量3.0g(85％)，亮黃色粉末。
1H-NMR(DMSO-d6)，δin ppm1.5-2.0(m，4H，CH2-CH2)，3.3-3.5(m，2H，N-CH2(脯氨酸))，3.7(m，2H，N-CH2(甘氨酸))，4.1-4.4(m，3H，CH and N-CH2-Ar)，9.5(s，1H，硫代酰胺)，9.8(s，1H，硫代酰胺)e)N-(2-萘磺酰基)甘氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺乙酸鹽根據1e進行制備，分離得2.5g(68％)氫碘酸鹽，RF＝0.09(CH2Cl2/MeOH，9/1)。然后用乙酸根離子交換樹脂(Amberlite)轉化為乙酸鹽，HPLC純度99％。FAB-MS(M-H)+＝493.51H-NMR(DMSO-d6)，δin ppm1.6-2.0(m，4H，CH2-CH2)，～3.5((m，2H，N-CH2(脯氨酸)-部分被H2O信號覆蓋)，3.7(m，2H，N-CH2(甘氨酸)，4.1-4.4(m，3H，CH和N-CH2-Ar)，7.3-8.5(13H，芳香H和NH)，～8.4-9.2(4H，脒)實施例6N-(1-萘磺酰基)甘氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺根據實施例5，用1-萘基磺酰氯得到標題化合物。FAB-MS(M-H)+＝493。實施例7N-(正十六烷基磺酰基)-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺乙酸鹽根據實施例1進行制備，得到白色粉末，熔點194-201℃，FAB-MS(M-H)+＝695。實施例8N-(正丁基磺酰基)-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺乙酸鹽根據實施例1進行制備，得到白色粉末，熔點203-211℃，FAB-MS(M-H)+＝526.5。實施例9N-(異丙基氨基磺酰基)-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺乙酸鹽a)N-(異丙基氨基磺酰基)-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-氰基芐基)酰胺根據實施例1c，D-苯丙氨酰脯氨酸(對-氰基芐基)酰胺鹽酸鹽與異丙基氨基磺酰氯反應。b)N-(異丙基氨基磺酰基)-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-羥基脒基芐基)酰胺根據實施例4b，使9a與羥胺鹽酸鹽反應，制備該化合物。c)N-(異丙基氨基磺酰基)-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺乙酸鹽在40℃、在Pd/C催化下，在甲醇/冰醋酸/THF溶劑混合物中氫化9b(13小時)。然后抽濾去除催化劑，減壓濃縮溶液，與乙醇共餾幾次，殘余物溶解于水，水相用乙酸乙酯萃取3次，然后凍干含有所需產物的水相(白色固體，熔點199-205℃，FAB-MSM+H515)。實施例10N-(二甲基氨基磺酰基)-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺乙酸鹽根據實施例9進行制備(白色固體，熔點高于90℃分解，FAB-MSM+H501)。實施例11N-羥基磺酰基-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺在20℃、冷卻下，將0.58g(0.33ml，5mmol)氯磺酸于10ml DCM中的溶液緩慢滴加到1.8g(4.36mmol)D-苯丙氨酰脯氨酸(對-氰基芐基)酰胺鹽酸鹽和1.68g(13.0mmol)二異丙基乙胺于20ml DCM中的溶液中。室溫下攪拌30分鐘后，混合物用DCM稀釋到100ml，開始用2M HCl萃取，然后用10ml水萃取兩次，有機相用硫酸鎂干燥并在旋轉蒸發器中蒸發溶劑。得到2.0g N-羥基磺酰基-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-氰基芐基)酰胺粗產物，其不用進一步純化即可用于下面的反應。2.0g所述的粗產物與0.9g(13mmol)羥胺鹽酸鹽和2.5ml二異丙胺于50ml乙醇中的溶液在室溫下攪拌過夜后濃縮，在50℃高真空下去除揮發組分1小時。產物極易溶于水，因此使得不可能萃取。粗產物(1.8g)直接用于下面的氫化反應。上面粗產物在50℃、在稍高于大氣壓的氫氣中，在40ml甲醇和5ml冰醋酸混合物中氫化，一刮勺尖10％Pd/C催化。5.5小時后過濾掉催化劑，在旋轉蒸發器中濃縮溶液，與甲醇和甲苯共餾幾次。所得產物與DCM攪拌幾次，得到1.5g(三階段理論值為73％)純的N-羥基磺酰基-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺，根據NMR，其是甜菜堿形式。熔點220-224℃，白色粉末，FAB-MS474(M-N)+。根據實施例4制備下面的化合物實施例12N-三氟甲基磺酰基-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺乙酸鹽白色結晶，熔點240-242℃(分解)，FAB-MS526(M-H)+。實施例13N-(β，β，β-三氟乙基磺酰基)-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺乙酸鹽白色結晶，熔點87-89℃(無定形)，FAB-MS540(M-H)+。實施例14N-(正-辛基磺酰基)-D-苯丙氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺乙酸鹽白色無定形結晶，FAB-MS570(M-H)+。實施例15N-甲基磺酰基-(D，L)-二苯丙氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺乙酸鹽白色無定形結晶，FAB-MS548(M-H)+。實施例16N-甲基磺酰基-二(4-氯苯基)丙氨酰脯氨酸(對-脒基芐基)酰胺乙酸鹽白色無定形結晶，FAB-MS617(M-H)+。實施例a用常規方法在壓片機中制備下面組合物的片劑100mg實施例2的物質240mg玉米淀粉27mg明膠90mg乳糖4.5mg Aerosil(亞微觀細分散的化學純二氧化硅)0.5mg硬脂酸鎂4.5mg滑石實施例b用常規方法制備下面組合物的包衣片劑200mg實施例3的物質300mg芯組合物350mg糖包衣組合物所述芯組合物由9份玉米淀粉，3份乳糖，和1份Luviskol(6040乙烯吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物，參考“制藥工業”(1962)586)組成。所述糖包衣組合物由5份蔗糖，2份玉米淀粉，2份碳酸鈣和1份滑石組成。用該方法制備的片劑接著用腸包衣。實施例c100g實施例1的物質溶解于5000ml加有氯化鈉的水中，用0.1N NaOH調節pH為6.0，得到與血液等張的溶液。將5ml一份的該溶液分配到安瓿中并滅菌。
權利要求
1.式I化合物及其立體異構體和其與生理耐受酸的加成鹽
其中取代基具有下面的定義R1是C1-C20烷基，C1-C3氟代烷基，C3-C8環烷基，芳基-C1-C10烷基，芳基，雜芳基，OH或R3R2N，其中R2和R3相同或不同，是氫原子，C1-C10烷基，芳基，芳基-C1-C10烷基，或一起是芳基或雜芳基可以與之稠和的、或可以含有一個雜原子(O，S，NH或取代的N)的C2-C7亞烷基鏈，A是式IIα-氨基酸殘基
其中R4是氫原子，C1-C8烷基，C3-C7環烷基，芳基，芳基-C1-C3烷基，R5是氫原子，C1-C8烷基，C3-C7環烷基，C3-C7環烷基-C1-3-烷基，芳基，芳基-C1-C3烷基，二(C3-C7環烷基)-甲基或二苯基甲基或，如果R4＝H，則為C1-C8烷基，其中一個氫原子被OR6或CO-OR6(其中R6＝氫原子，C1-C8烷基或基-C1-C3烷基)替代，或R4和R5一起是可以含有一個稠合烷基的C2-C6亞烷基鏈，B是式III環狀α-氨基酸殘基
其中m是2，3或4，且環上的一個氫原子可以被羥基或C1-C3烷基替代，而且，如果m＝3或4，則環中的一個CH2基團可以被氧原子，硫原子，NH-，或N-C1-C4烷基替代，和/或兩個相鄰的氫原子可以被雙鍵替代。
2.權利要求1的式I化合物用于治療疾病的用途。
全文摘要
本發明涉及式I化合物，其中R
文檔編號A61K38/05GK1168673SQ95196669
公開日1997年12月24日 申請日期1995年11月25日 優先權日1994年12月6日
發明者H·J·博姆, S·科斯爾, H·馬克, T·普費夫爾, W·塞茲, H·W·霍夫肯, W·霍恩伯格, T·茲爾克 申請人:巴斯福股份公司