專利名稱：一種靶向于miR-122的小分子化合物的制作方法
技術領域：
本發明屬于生物技術領域，涉及藥物設計方面。
背景技術：
MicroRNA (微小核糖核酸)是一種長度為18 25核苷酸單鏈的內源性非編碼性小RNA。它主要通過與靶標基因3'非翻譯區的完全或不完全配對，抑制其翻譯，從而參與調控個體發育、細胞凋亡、增殖及分化等生命活動。在病理條件下，microRNA可通過調控其靶標基因及其參與的信號通路，影響腫瘤的發生和發展，發揮著類似于癌基因或抑癌基因的功能。實驗表明在很多腫瘤中，一些類型的microRNA是高表達的，這些高表達的 microRNA與腫瘤的侵入性、轉移性等有一定的相關性。這些microRNA為腫瘤診斷和治療提供了新的策略。目前抑制microRNA功能的普遍方法是采用反義抑制的原理。實驗證明，與成熟體microRNA完全互補或與前體microRNA—些區域互補的經過修飾的RNA可以有效的抑制 microRNA功能。一些體內實驗證明，這種抑制RNA通過體內注射也有效果。因此具有一定的臨床應用價值。然而，反義抑制方法存在體內給藥困難的問題。目前的各種向體內運送RNA方法， 包括化學轉染試劑以及病毒載體等，都存在效率和安全性問題，因此一直無法達到臨床應用的要求。而傳統的小分子化合物藥物則在給藥方面存在明顯的優勢，或注射或口服，簡單有效。因此我們認為小分子化合物抑制劑將比傳統的反義抑制RNA更有潛力成為靶向 microRNA的藥物。

發明內容
本發明的目的是提供一種具有抑制腫瘤細胞生長或誘導腫瘤細胞凋亡活性的化合物。本發明的第一方面,提供了一種 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethano 1 chloride的用途，用于制備治療腫瘤、抑制腫瘤細胞生長、和/或誘導腫瘤細胞凋亡的化合物。在另一優選例中，所述的致凋亡化療藥物包括腫瘤壞死因子，更佳地為人TNFa。在另一優選例中，所述的腫瘤或腫瘤細胞是表達名為mir-122的microRNA的腫瘤或腫瘤細胞。較佳地，所述的腫瘤選自下組乳腺癌、肺癌、胃癌、細腸癌、前列腺癌、肝癌； 更佳的腫瘤選自下組肺癌。在另一優選例中，提供了 一種 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride的用途，用于制備人mir-122的特異抑制劑。


圖 1 是/]、分子化合物 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanolchloride的屬性圖。圖 2 是小分子化合物 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanolchloride 的結構式圖。圖 3 是小分子化合物 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanolchloride 的3D結構圖。
具體實施例方式本發明人經過廣泛而深入的研究，發現部分腫瘤細胞內mir-122的表達往往升高，抑制mir-122的表達和功能可以抑制腫瘤細胞的增殖和體內外的致瘤活性。本發明人運用軟件從數萬個侯選化合物中篩出了若干個可能會和mir-122結合的小分子化合物，首次得到了一個可以強烈增強TNF-a肺癌細胞系MCF-7增殖抑制作用的化合物1-dibenzofu ran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride。在此基礎上完成了本發明。具體而言，本發明人的研究表明，mir-122在肺癌腫瘤組織中的選擇性高表達，而在正常肺組織中未見表達，提示mir-122可能與腫瘤發生及生長密切相關。因此本發明的研究表明，抗凋亡作用的分子mir-122在細胞生長調控、細胞凋亡、 腫瘤發生等過程中發揮重要作用。因此，mir-122很可能在臨床腫瘤的診斷和治療中作為潛在的候選靶標。在此基礎上，本發明人篩選了大量的化合物，從而獲得了一種可能有效抑制腫瘤的小分子化合物，所述的小分子化合物特異性地在蛋白水平靶向抗凋亡分子-mir-122。活性成分l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride /]、分子化合物及其藥學上可以接受的鹽和活性衍生物。l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride 是一禾中指向 mir-122 的先導化合物。一類特別優選的鹽是鈉鹽或鉀鹽。實施例1/]、分子化合物 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride 的蹄選。采用計算機輔助的虛擬方法進行。首先用生物信息學的方法下載mir-122序列并利用計算機軟件建立三維結構模型，然后對NCI Diversity Set數據庫內140，000個化合物進行篩選，取得具有成藥潛能的2000個。然后通過ADT軟件處理成AutoDoCk4識別的格式，接著利用AutoGricM和 AutoDock4軟件生成柵格及執行分子對接。同時，以mir-122略作改變作為對照，剔除對接結果中非特異性結合的化合物。最后選定一個化合物，即l-dibenz0furan-3-yl-2-piperi din-2-ylethanol chloride。實施例2小分子化合物 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride 對月中瘤細胞的生長抑制本實施例采用了常規的MTT法，方法如下
先將MCF-7細胞30000個細胞/孔的密度鋪96孔板過夜，然后把小分子化合物l_d ibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride 以不同濃度單獨與人 TNF_a 聯合加入。40小時后每孔加入MTT (5mg/ml) IOul，37度孵育4小時后用150ul 二甲亞楓溶液紫色結晶后放置于酶標儀以570吸光度檢測。結果 Il 示，l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride 可以在 5-lOul終濃度顯著增強TNF-a對細胞增殖的抑制，而其本身未對細胞造成顯著的毒性作用，為本發明專利所申請保護的一種靶向于mir-122的抗腫瘤小分子化合物。
權利要求
1.一禾中 l-dibenzofuran-3-yl-2-piperidin-2-ylethanol chloride 白勺用途，其特征在于，用于制備治療腫瘤、抑制腫瘤細胞生長、和/或誘導腫瘤細胞凋亡的化合物。
2.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的腫瘤或腫瘤細胞是表達mir-122的腫瘤或腫瘤細胞。
全文摘要
本發明涉及一種基于生物信息學和計算機技術相結合的抑制劑虛擬篩選平臺而篩選出的能夠特異地結合上mir-122，并抑制其調控作用的一種小分子化合物。該小分子化合物具有有效性高，特異結合能力強，易于篩選等優點。該化合物將比傳統的microRNA反義抑制更有潛力成為靶向于microRNA的抗腫瘤新藥。
文檔編號A61P35/00GK102266335SQ20101019018
公開日2011年12月7日 申請日期2010年6月1日 優先權日2010年6月1日
發明者曾華宗 申請人:上海聚類生物科技有限公司