專利名稱：包含一種支持材料和至少一種細胞調節因子和/或細胞增殖促進劑的新型藥物形態的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種新型藥物形態，其包含一種支持材料和至少一種細胞調節因子和/或細胞增殖促進劑。
“細胞調節因子”應理解為生化介質，該介質由細胞分泌并能參與細胞機制，例如參與細胞的發育、生長或活化，所述介質尤其指細胞因子、趨化因子及生長因子，后者尤其優選。所述細胞調節因子可以為天自的、合成的或重組的。
“細胞增殖促進劑”應理解為一種天然、重組或合成分子，該分子調節細胞調節因子的信號傳輸路徑，并且對細胞增殖具有活化作用，一個實例為神經鞘氨醇磷酸膽堿。
此外，本發明在作為一種植入片使用方面也具有極高的應用價值，其中，該生物降解性支持材料能夠在入植位置逐漸釋放細胞調節因子，尤其是生長因子和/或細胞增殖促進劑。
皮膚損傷的修復涉及一系列復雜的細胞過程，包括傷口的收縮、炎癥細胞的局部蓄積、血管再生、基質細胞(成纖維細胞、組織細胞等)的活化和增殖、細胞外基質(膠原等)的成分的合成及上皮形成。
上述過程在體內由不同的細胞因子、趨化因子及廿烷類調節。
上述物質包括成纖維細胞生長因子系列(或FGFs)，該系列目前已知有22種形式；這些因子在對其靶細胞的特異性上存在差異，并且其中一些因子，如FGF-1或FGF-2，具有能夠調節在傷口愈合中涉及的所有類型的細胞的生長的優點。
另一有價值的系列為神經生長因子系列(或NGFs)，該系列可參與神經組織、神經肌肉組織及神經上皮組織的再生。
因此，制造出一種能夠用于且留在損傷治療位置、同時保留其對細胞生長的刺激活性的藥物形態具有重大意義。
因此，本發明涉及一種藥物形態，其包含一種支持材料和至少一種細胞調節因子和/或細胞增殖促進劑，其特征是以重量計，支持材料的至少90％，優選為至少95％，由一種基于亞甲基丙二酸酯(methylidene malonate)的組合物組成，其包含—以重量計，0至10％的一種或多種分子式為(I)的亞甲基丙二酸酯 其中—A和B獨立地為基團(a)或(b) 其中，R1和R2獨立地為線型或分支烷基基團，該基團具有1至6個碳原子，n為1至5之間的一個整數；—以重量計，10至90％，且優選為50至90％的一種或多種分子量小于或等于6000的亞甲基丙二酸酯寡聚物，且其由分子式為(II)的重復單元組成 其中，A和B的定義與上文同；以及—以重量計，10至90％，且優選為10至50％的一種或多種分子量大于6000的亞甲基丙二酸酯聚合物，且其由分子式為(II)的重復單元組成。
“分子量大于6000”應特別理解為分子量大于9000，特別是大于12000，尤指大于25000，優選大于50000且甚至高達600000。
在本說明書中，“分子量”應理解為聚苯乙烯(PS)等效物的重均分子量Mw，以g/mol表示，并且通過凝膠滲透層析(GPC)且采用經過標準聚苯乙烯聚合物校準的層析裝置進行測量。
根據其一優選的特征，在上文給出的分子式(I)和(II)中—A為基團(a)，其中R1為乙基基團；以及—B為基團(b)，其中R2為乙基基團，且n為1。
在一個優選的實施方案中，以重量計，該支持材料的至少90％，且優選為至少95％由一種基于亞甲基丙二酸酯的組合物組成，其包含—以重量計，50至90％的一種或多種亞甲基丙二酸酯寡聚物，其分子量小于或等于6000，優選為小于或等于3000，且由分子式為(II)的重復單元組成；以及—以重量計，10至50％的一種或多種分子量大于6000的亞甲基丙二酸酯聚合物。
根據其一優選的特征，基于亞甲基丙二酸酯的組合物包含
—以重量計，55至65％的一種或多種亞甲基丙二酸酯寡聚物，其分子量小于或等于3000，尤其是介于300與1000之間，且由分子式為(II)的重復單元組成；以及—以重量計，35至45％的一種或多種亞甲基丙二酸酯聚合物，其分子量大于6000，優選大于9000，特別是介于12000與25000之間。
其它基于亞甲基丙二酸酯的優選組合我包含—以重量計，40至80％且優選為40至60％的一種或多種亞甲基丙二酸酯寡聚物，其分子量小于或等于6000，優選小于或等于3000，且由分子式為(II)的重復單元組成；以及—以重量計，20至60％且優選為40至60％的一種或多種亞甲基丙二酸酯聚合物，其分子量大于6000，優選大于9000，更優選介于12000與25000之間。
根據本發明的一個優選的特征，可用于本發明之目的的細胞調節因子為生長因子。優選地，生長因子可從下列因子中選擇，如，成纖維細胞生長因子(FGFs)、轉化生長因子β(TGF-β)、血小板衍生生長因子(PDGF)、神經生長因子(NGF)或幾種上述因子的聯合。
根據本發明的一個優選的特征，生長因子可單獨使用或以與配體的復合物使用。實際上，成纖維細胞生長因子系列與其天然配體(通常存在于組織中，如肝素、硫酸類肝素或硫酸類肝素蛋白聚糖)形成各種復合物，該類復合物在生理條件下極為穩定。
優選使用堿性成纖維細胞生長因子，又稱為FGF-2，作為與硫酸類肝素或硫酸類肝素蛋白聚糖的復合物。
在上述復合物中，FGF-2與硫酸類肝素的摩爾比特別為1∶1至1∶20，尤其為1∶1.5至1∶10。
在與硫酸類肝素蛋白聚糖的復合物的情況中，FGF-2與硫酸類肝素蛋白聚糖可以特別是1∶0.01至1∶0.5的摩爾比存在于所述復合物中。
本發明所述的藥物形態的制備包括將細胞調節因子或細胞增殖促進劑，尤其是生長因子，單獨地或以與配體的復合物的形式引入支持材料中。
支持材料可通過這樣一種方法制備，在該方法中，單體和/或寡聚物和/或聚合物的預定混合物通過改變反應條件而在原位產生。
或者，支持材料可通過對不同量的單體和/或寡聚物和/或聚合物加以混合來制備—所述寡聚物和聚合物已預先制備好—以使各組分中的任一組分具有預定的比例。
然后，將細胞調節因子和/或細胞增殖促進劑的水溶液加入到支持材料中。
或者，若通過將不同量的預先制備的單體和/或寡聚物和/或聚合物加以混合來獲得支持材料，則可在制備所述支持材料的一個步驟期間將細胞調節因子和/或細胞增殖促進劑的水溶液加入支持材料中。
在上述兩種情況下，該加入的實現方式使細胞調節因子和/或細胞增殖促進劑不發生任何變性，且使其位于該支持材料的表面上和/或結構中。
本發明的支持材料的特征基本在于，其主要由一種基于亞甲基丙二酸酯的組合物組成，該組合物本身主要由分子量小于或等于6000且優選為小于或等于3000的單體和/或寡聚物組成。
根據本發明的另一個優選特征，該組合物主要由分子量小于或等于6000的一種或多種寡聚物及分子量大于或等于6000的一種或多種聚合物組成。
這種組合物具有粘度和生物粘附特性，該等特性使其可單獨地或與其它生物相容的成分混合用于治療真皮和真皮表皮損傷，特別是將本發明的藥物形態用作植入片。
另外，這些可在本發明范圍內使用的基于亞甲基丙二酸酯的組合物是可生物降解的并釋放乙醇和羥基乙酸，一般認為在所使用的劑量下釋放出的乙醇和羥基乙酸對生物無毒。該生物降解性對于生長因子的釋放，尤其是對于包含在支持材料的寡聚物或聚合物結構中的生長因子在要治療的損傷部位的釋放極為有用。
此外，優選地，基于亞甲基丙二酸酯的該組合物能夠使細胞調節因子或細胞增殖促進劑在其所用介質中保持穩定，該穩定性是可測量的，特別是通過在一段時間內保持它們的生物活性并與介質中游離的該類型因子的活性進行比較來進行測量。
所屬技術領域的技術人員可容易地制備這些基于亞甲基丙二酸酯的組合物，任選地通過在適當的溶劑中將其分別制備的組分(單體、寡聚物、聚合物組分)簡單地進行混合，并隨后將溶劑蒸發掉來制備。
因此，亞甲基丙二酸酯單體在葉輪泵真空條件下脫氣至恒重以除去聚合抑制劑(SO2)后，可通過對應于專利US 4 931 584和US 5 142098的專利EP 0 283 346中所描述的方法制備，這些專利引入本文作參考。
亞甲基丙二酸酯寡聚物及聚合物可通過陰離子法或自由基法由上述單體合成。
關于基于亞甲基丙二酸酯且由一種或多種寡聚物和一種或多種聚合物的混合物制成的優選組合物，這些組合物也可通過一個步驟獲得；各組分的相對比例可通過改變聚合介質中的陰離子或自由基引發劑的濃度來調節。
因此，所屬技術領域的技術人員可容易地調節基于亞甲基丙二酸酯的上述組合物的物理化學特性，以獲得本發明的支持材料。
一般而言，除了上述基于亞甲基丙二酸酯的上述組合物外，本發明的支持材料的其它組分最多可占該材料的10％(以重量計)。
當然，這些組分將被選擇用來與上述基于亞甲基丙二酸酯的組合物共同形成均勻的混合物。
這些組分可具有各種不同的特性，可具有疏水性或親水性，或來源于天然或合成。
下列為可特別地提及的該類組分的實例—聚氰基丙烯酸酯，優選為聚氰基丙烯酸烷基酯；—聚甲基丙烯酸烷基酯；—生物相容性聚氨基甲酸乙酯；—聚氧化烯；—聚氨基酸；以及—聚乙烯醇。
一般而言，這些組分將以與上述基于亞甲基丙二酸酯的組合物的混合物的形式存在于支持材料中。
應注意，在不超出本發明范圍的情況下，這些組分也能以單體單元的形式存在于支持材料中，該單體單元存在于無規、多嵌段(multiblock)或接枝共聚物中，該共聚物包含具有上述分子式(II)的亞甲基丙二酸酯單元。
這些基于亞甲基丙二酸酯的共聚物可通過所屬技術領域的技術人員所熟知的常規聚合技術來制備，其中可以提及通過離子法進行的聚合、通過自由基法進行的聚合或(對于多嵌段或接枝共聚物而言)共聚物前體序列連接技術，這些序列已預先在鏈的未端進行了適當的功能化。
這些除亞甲基丙二酸酯之外的組分也能以單體單元的形式存在于支持材料中，這些單體單元連接起來形成同聚物或無規、多嵌段或接枝共聚物，其中不含有具有化學式(II)的亞甲基丙二酸酯。
通常，形成上述組分的單體單元可從聚丙烯酸酯、多糖及聚氧化烯的組分單體單元中選擇。
在可用于本發明范圍內的聚丙烯酸酯組分單體單元中可以提及氰基丙烯酸烷基酯、甲基丙烯酸烷基酯及衣康酸酯。
一般而言，在用于本發明范圍內的基于亞甲基丙二酸酯的共聚物的單體單元中，至少50％將由亞甲基丙二酸酯組成。
根據本發明的另一個特征，本發明涉及一種藥物組合物，該藥物組合物包含一種上述藥物形態以及一種藥學可接受的賦形劑。
本發明的藥物形態或包含該形態的藥物組合物可局部給藥或通過注射給藥。
本發明進一步涉及上述藥物形態在下列方面的用途制造一種植入片，或制備一種用藥時與傷口接觸的組合物，或制備一種用于治療皮膚損傷或真皮或真皮表皮損傷—例如燒傷(尤其是二度和三度燒傷)、潰瘍、褥瘡、皮膚潰瘍或靜脈曲張性潰瘍—的藥物。
其進一步涉及上述藥物形態在神經組織、神經肌肉組織或神經上皮組織再生用藥物的制備中的用途。
根據本發明的另一個特征，本發明涉及一種治療皮膚損傷和真皮或真皮表皮損傷—尤其是燒傷的方法，其特征在于，它由向所述損傷或傷口施用有效量的上述藥物形態組成。
下面將通過實施例對本發明進行說明，但并不意味著對本發明加以限制。實施例1本發明的藥物形態的制備，其含有FGF-2/硫酸類肝素復合物將40mg亞甲基丙二酸酯單體(1-乙氧羰基-1-乙氧羰基亞甲氧羰基乙烯)置于低真空下，以除去聚合抑制劑(二氧化硫)，并在2ml丙酮中溶解，然后將其置入一個25ml的燒瓶中。進行15分鐘的磁力攪拌。
然后一次性加入0.4ml濃度為0.1N的NaOH，繼續進行磁力攪拌。
磁力攪拌約進行20分鐘。獲得體積為2.4ml的溶液，其中含40mg支持材料。在真空下將丙酮蒸發后，上述材料將減少至其原有體積的1/5。
這樣，就得到了一種支持材料，其由一種亞甲基丙二酸酯組合物組成，該組合物包含90％的分子量約為3000的寡聚物及10％的分子量在約20000與25000之間的聚合物。
在室溫下加入相等體積的含有FGF-2/硫酸類肝素復合物(以下稱為FGF-2/HS)的水溶液。
該復合物預先制備，方法是將2種成分在100μl濃度為5mM、pH值為7.6的Tris緩沖液中混合，并在室溫下對該混合物進行2小時的磁力攪拌。
表1中列出的各種復合物利用通過電泳純化的人重組FGF-2(TEBU，法國)和硫酸類肝素(SIGMA)來制備，其分子量為7.5kD。
表1

加入FGF-2/硫酸類肝素復合物后，將該混合物迅速蒸發至體積為0.5至0.7ml，然后在真空條件下在一個烘箱中將其蒸發一整夜，直至其完全干燥為止。
這樣生成40mg本發明的一種藥物形態。實施例2對包含FGF-2/HS復合物的藥物形態對細胞增殖的刺激活性的評價將本發明的包含實施例1中的FGF-2/HS復合物的藥物形態與條件培養液接觸，所述條件培養液即一種培養基，細胞已在其中培養了2-3天，因此該培養基含有由這些細胞分泌的酶，其源于Caco-2人腸上皮細胞(ATCC第HTB-37號)的培養物。
在37℃下，將上述藥物形態與該培養基接觸，其比率為1ml培養基中加入40mg該藥物形態，接觸時間為24小時。在500g下離心10分鐘，以2.5％v/v(5μl每200μl)的比率將上清液加入休眠BP-A31細胞的培養基中。
所采用的BP-A31細胞系為小鼠成纖維細胞的BP-A31細胞系(化學轉化的3T3成纖維細胞，其表達高水平的FGF受體—T.Buchou等，Exp.Cell.Res.，1988，174(2)，411-420)。
在24孔板中以每加樣孔40000個細胞的比率(或在96孔板中以每加樣孔8000個細胞的比率)在含有8％的胎牛血清和抗生素的DMEM(GIBCO)中培養24小時。
然后，在加入處于相同培養基的測試樣品之前，將它們在不含有血清的培養基中培養48小時，得到休眠培養物并并增強其對外源FGF的敏感度。
在37℃下培養24小時后，使用MTT測定法(T.Mosmann，J.Immunol.Meth.，1983，65，55-63)估測增殖率。
MTT(溴化二甲基噻唑二苯基四唑鎓)為一種黃色的染料，其與活細胞接觸被細胞的線粒體呼吸鏈還原為MTT甲。
MTT甲為藍紫色晶體，其溶解時產生一種與活細胞數目成比例的染色作用。
采用的測量程序如下—在每一加樣孔(NUNCLON DELTA 96孔板)中加入200μl細胞懸浮液；—在溫度為37℃、空氣95％/CO25％的條件下進行培養，培養時間根據實驗方案確定，即，含血清時為24小時，不含血清時為48小時，加入產物且無血清時為24小時；
—在不除去培養基的情況下在每一加樣孔中加入20μl濃度為5mg/ml的MTT溶液，該濃度為5mg/ml的MTT儲備溶液在生理血清中制備并已在0.22μm的濾器中進行過濾滅菌；—在溫度為37℃、空氣95％/CO25％的條件下進行培養，培養時間為2小時30分鐘；—在500g下離心10分鐘，以將上清液除去，此后，用抽吸法除去培養基；以及—將以下列比例制備的200μl提取液加入每一加樣孔中的細胞液10gSDS(十二烷基硫酸鈉)50ml DMF(二甲基甲酰胺)50ml 蒸餾水用一滴乙酸將pH值調整為4.7。
將碟振搖1小時或在37℃下放置一整夜，在顯微鏡下進行檢查，以確保所有的甲基甲均已溶解。
讀數使用僅含有該提取液的讀數空白在570nm處(LabsystemsMultiscan MS ELISA平板讀數器)讀取。
結果以24小時期間的細胞增殖百分比(與未加入生長因子的對照培養物比較)表示，如下文表2所示表2

上述結果表明，本發明的藥物形態刺激BP-A31細胞的增殖。實施例3包含FGF-2/HS復合物的新型藥物形態的制備及評價將40mg的材料置入20ml的試管中，該材料由不同百分比的亞甲基丙二酸酯寡聚物及聚合物組成，該寡聚物及聚合物由1-乙氧羰基-1-乙氧羰基亞甲氧羰基乙烯單體制備而成。將該材料在1ml丙酮中溶解，持續振搖15分鐘。在真空條件下將丙酮蒸發后，該材料體積降低至原來的1/5，即200μl。
在室溫下加入等體積的包含FGF-2/HS復合物的水溶液。該復合物預先如上所示(實施例1)制備，并在室溫下對混合物進行磁力攪拌，時間為2小時。加入FGF-2/HS復合物后，直接在真空條件下將混合物蒸發一整夜，直至其完全干燥為止。由此獲得40mg的一種藥物形態。
制備本發明的三種藥物形態，它們的寡聚物/聚合物比例不同，該差異影響粘度和生物粘附特性，所述比例分別為40/60(最固體的形態)，60/40及80/20(最液體的形態)。
本發明的上述三種藥物形態的寡聚物/聚合物比例不同并且可以含有或不含有FGF-2/HS復合物，按照實施例1中所描述的方案使它們與BP-A31細胞接觸，以確定該藥物形態的毒性以及包含FGF-2/HS復合物的藥物形態對增殖的刺激活性。
表3中給出的結果比較了各種藥物形態對增殖的作用，所述藥物形態的差異在于其寡聚物/聚合物比例不同且含有或不含有FGF-2/HS復合物。該結果對應于培養基中含有3.1％的藥物形態的情況。上述結果以24小時期間的細胞增殖百分比(與不加入支持材料的對照培養物比較)表示。
表3

上述結果表明，配制在本發明的三種藥物形態中的FGF-2對細胞增殖具有刺激活性。另外，在不存在FGF-2/HS復合物的情況下，增殖百分比仍大于100％，這表明該三種支持材料在使用的劑量下均未表現出可檢測到的毒性。實施例4將FGF-2/HS復合物配制在藥物形態中對FGF-2生物活性的穩定性的影響一方面，使用的材料為實施例3中的三種藥物形態，其中支持材料由比例不同(以重量計)的亞甲基丙二酸酯寡聚物和聚合物組成；且另一方面，為自由(未經配制的)FGF-2。將該3種藥物形態及自由FGF-2在4℃下存放7、14和21天后，與未加入生長因子的對照培養物進行比較，以實施例2中描述的MTT測定法對細胞增殖刺激活性進行24小時的測量。
在

圖1中以圖形方式顯示了上述結果，其中，以天數表示的在4℃下的存放時間在橫坐標上繪出，增殖百分比在縱坐標上繪出。
圖中采用下列符號-◆-代表一種藥物形態，其包含一種支持材料以及FGF-2/HS復合物，其中，該支持材料由40％的寡聚物和60％的聚合物組成；-×-代表一種藥物形態，其包含一種支持材料以及FGF-2/HS復合物，其中，該支持材料由60％的寡聚物和40％的聚合物組成；-▲-代表一種藥物形態，其包含一種支持材料以及FGF-2/HS復合物，其中，該支持材料由80％的寡聚物和20％的聚合物組成；-■-代表自由(未經配制的)FGF-2。
結果表明，該三種藥物形態至少在21天內保持了FGF-2對細胞增殖的刺激活性。相反，自由(未經配制的)FGF-2的活性僅在最早期(零天)與配制在本發明的藥物形態中的FGF-2的刺激活性相當，該自由FGF-2的生理活性迅速喪失(7天后)。實施例5包含生長因子PDGF和TGF-β的藥物形態的制備及其穩定性研究將PDGF及TGF-β配制在一種包含60％(以重量計)的亞甲基丙二酸酯寡聚物和40％(以重量計)的亞甲基丙二酸酯聚合物的材料中，該寡聚物及聚合物由1-乙氧羰基-1-乙氧羰基亞甲氧羰基乙烯單體制備而成。每40mg材料使用100ng PDGF或TGF-β，如實施例3中所述。然后，按照實施例1中描述的方案將本發明的含有或不含有生長因子的藥物形態與L929成纖維細胞接觸，并且通過MTT測定法確定PDGF或TGF-β對細胞增殖的刺激作用。
結果以24小時期間的細胞增殖百分比(與未經處理的對照培養物比較)表示，如下表4所示。
表4

上述結果表明，與FGF-2的情況相同，生長因子PDGF及TGF-β均表現出對細胞增殖的刺激活性。支持材料本身(不含生長因子)對細胞沒有作用。實施例6含有生長因子NGF的藥物形態的制備及其活性研究NGF在與FGF-2相似的劑量水平上(20至100ng/ml之間)刺激神經元細胞，如PC12大鼠嗜鉻細胞瘤細胞或Neuro2A神經母細胞瘤的分化。這些細胞停止增殖并產生軸突延伸，這一點成為表示其分化的形態判據。
將NGF配制在包含60％(以重量計)的亞甲基丙二酸酯寡聚物和40％(以重量計)的亞甲基丙二酸酯聚合物的支持材料中(每40mg材料配制1μg NGF，如實施例2所述)，上述寡聚物和聚合物由1-乙氧羰基-1-乙氧羰基亞甲氧羰基乙烯單體制備而成。按照實施例1中描述的方案將本發明的含有或不含NGF的藥物形態與PC12與Neuro2A神經元細胞接觸。對細胞分化的刺激作用通過確定(在標準化網格中計數)軸突延伸超過或等于1個細胞直徑的細胞百分比進行定量分析。
結果以出現軸突的細胞的百分比(與未經處理的培養物比較)表示，如下文表5所示。
表5

上述結果表明，本發明的該藥物形態中的NGF表現出對神經元分化的生物活性。支持材料本身(不含NGF)對神經元細胞不具有任何作用。因此，含有NGF的該藥物形態提供了一種刺激神經元修復的方法。實施例7含有鞘氨醇磷酸膽堿(SPC)的一種藥物形態的制備及其對成纖維細胞的活性的研究代謝產物鞘氨醇磷酸膽堿(SPC)確定了一類新的細胞內第二信使，其對細胞生長及信號轉導的調節表現出廣譜生物活性。當前關于SPC的文獻數據顯示，其刺激許多休眠或呈指數增長的多種細胞類型的增殖。
將SPC配制在包含60％(以重量計)的亞甲基丙二酸酯寡聚物及40％(以重量計)的亞甲基丙二酸酯聚合物的一種支持材料中(每40mg材料配制100μg SPC，如實施例2所述)，上述寡聚物和聚合物由1-乙氧羰基-1-乙氧羰基亞甲氧羰基乙烯單體制備而成。按照實施例1中描述的方案將本發明的含有SPC或其對照溶劑的藥物形態與BP-A31成纖維細胞接觸。此處顯示將3.1％的該藥物形態加入加樣孔中產生15μM的SPC最終理論濃度的作用。細胞增殖刺激作用通過MTT測定法進行定量分析。結果以24小時期間的細胞增殖百分比(與未經處理的對照培養物比較)表示，如下文表6所示。
表6

上述結果表明，含有SPC的本發明的該藥物形態表現出對BP-A31細胞的增殖的生物刺激活性。該活性與自由SPC的促有絲分裂活性相當。
權利要求
1.包含一種支持材料和至少一種細胞調節因子和/或細胞增殖促進劑的藥物形態，其特征是以重量計，至少90％且優選為至少95％的支持材料由一種基于亞甲基丙二酸酯的組合物組成，其包含—以重量計，0至10％的一種或多種分子式為(I)的亞甲基丙二酸酯 其中—A和B獨立地為基團(a)或(b) 其中R1和R2獨立地為線型或分支烷基基團，該基團具有1至6個碳原子，n為1至5之間的一個整數；—以重量計，10至90％且優選為50至90％的一種或多種分子量小于或等于6000的亞甲基丙二酸酯寡聚物，且其由分子式為(II)的重復單元組成 其中A和B的定義與上文同；以及—以重量計，10至90％且優選為10至50％的一種或多種分子量大于6000的亞甲基丙二酸酯聚合物，且其由分子式為(II)的重復單元組成。
2.如權利要求1所述的藥物形態，其特征是在以上給出的分子式(I)和(II)中—A為基團(a)，其中R1為乙基基團；以及—B為基團(b)，其中R2為乙基基團并且n為1。
3.如權利要求1或2所述的藥物形態，其特征是以重量計，至少90％且優選為至少95％的支持材料由一種基于亞甲基丙二酸酯的組合物組成，其包含—以重量計，50至90％的一種或多種亞甲基丙二酸酯寡聚物，其分子量小于或等于6000，優選為小于或等于3000，并且由分子式為(II)的重復單元組成；以及—以重量計，10至50％的一種或多種分子量大于6000的亞甲基丙二酸酯聚合物。
4.如權利要求3所述的藥物形態，其特征是基于亞甲基丙二酸酯的上述組合物包含—以重量計，55至65％的一種或多種亞甲基丙二酸酯寡聚物，其分子量小于或等于3000，并且由分子式為(II)的重復單元組成；以及—以重量計，35至45％的一種或多種亞甲基丙二酸酯聚合物，其分子量大于6000，且優選為大于9000。
5.如權利要求4所述的藥物形態，其特征是基于亞甲基丙二酸酯的上述組合物包含—以重量計，55至65％的一種或多種亞甲基丙二酸酯寡聚物，其分子量在300至1000之間，并且由分子式為(II)的重復單元組成；以及—以重量計，35至45％的一種或多種亞甲基丙二酸酯聚合物，其分子量在12000至25000之間。
6.如權利要求1或2所述的藥物形態，其特征是以重量計，至少90％且優選為至少95％的支持材料由基于亞甲基丙二酸酯的組合物組成，其包含—以重量計，40至80％且優選為40至60％的一種或多種亞甲基丙二酸酯寡聚物，其分子量小于或等于6000，優選小于或等于3000，并且由分子式為(II)的重復單元組成；以及—以重量計，20至60％且優選為40至60％的一種或多種亞甲基丙二酸酯聚合物，其分子量大于6000。
7.如權利要求1至6中任一權利要求所述的藥物形態，其特征是以重量計，支持材料包含最高可達10％的一種或多種除基于亞甲基丙二酸酯的上述組合物之外的組分，其形式為單體單元，這些單元與分子式為(II)的亞甲基丙二酸酯單元相連，以形成無規、多嵌段或接枝共聚物。8、如權利要求7所述的藥物形態，其特征是至少50％的所述共聚物的單體單元由亞甲基丙二酸酯單元組成。
9.如權利要求1至6中任一權利要求所述的藥物形態，其特征是以重量計，支持材料包含最高可達10％的一種或多種除基于亞甲基丙二酸酯的上述組合物之外的組分，其形式為單體單元，這些單元連接以形成同聚物或無規、多嵌段或接枝共聚物，其中不含分子式為(II)的亞甲基丙二酸酯。
10.如權利要求1至9中任一權利要求所述的藥物形態，其特征是細胞調節因子是一種天然、合成或重組生長因子。
11.如權利要求1至10中任一權利要求所述的藥物形態，其特征是生長因子從下列因子中選擇成纖維細胞生長因子(FGFs)、血小板衍生生長因子(PDGF)、轉化生長因子β(TGF-β)、神經生長因子(NGF)或幾種上述因子的聯合。
12.如權利要求1至11中任一權利要求所述的藥物形態，其特征是生長因子單獨使用或以與配體的復合物使用。
13.如權利要求1至12中任一權利要求所述的藥物形態，其特征是所述生長因子為堿性成纖維細胞生長因子(或FGF-2)，配體為硫酸類肝素或一種硫酸類肝素蛋白聚糖。
14.如權利要求13所述的藥物形態，其特征是生長因子FGF-2與硫酸類肝素以1∶1至1∶20且特別是1∶1.5至1∶10的摩爾比復合。
15.如權利要求13所述的藥物形態，其特征是生長因子FGF-2與硫酸類肝素蛋白聚糖以1∶0.01至1∶0.5的摩爾比復合。
16.如權利要求1至15中任一權利要求所述的藥物形態，其特征是其含有一種天然、合成或重組細胞增殖促進劑。
17.如權利要求16所述的藥物形態，其特征是該細胞增殖促進劑為神經鞘氨醇磷酸膽堿。
18.一種藥物組合物，其包含一種如權利要求1至17中任一權利要求所述的藥物形態及一種藥學可接受的賦形劑。
19.權利要求1至17中任一權利要求所述的一種藥物形態用于生產一種植入片的用途。
20.權利要求1至17中任一權利要求所述的一種藥物形態用于制備欲放置在接觸傷口的位置的組合物的用途。
21.權利要求1至17中任一權利要求所述的一種藥物形態用于制備一種治療皮膚損傷的藥物的用途。
22.如權利要求21所述的用于制備一種藥物的用途，所述藥物用于治療燒傷，尤其是二度和三度燒傷，潰瘍、真皮和真皮表皮損傷、褥瘡、皮膚潰瘍或靜脈曲張性潰瘍。
23.如權利要求1至17中任一權利要求所述的一種藥物形態用于制備一種用于神經組織、神經肌肉組織或神經上皮組織的再生的藥物的用途。
全文摘要
本發明涉及一種藥物形態，其包含一種支持材料和至少一種細胞調節因子和/或細胞增殖促進劑，優選為一種生長因子，其特征是以重量計，至少90％的支持材料由一種基于亞甲基丙二酸酯(methylidene malonate)的組合物組成，其包含以重量計，0至10％的一種或多種分子式為(I)的亞甲基丙二酸酯，其中A和B獨立地為基團(a)或(b)，其中，R
文檔編號A61P9/00GK1446108SQ0181385
公開日2003年10月1日 申請日期2001年8月6日 優先權日2000年8月7日
發明者尼可·布魯－馬尼耶茲, 伊古尼·米西亞金, 伊利亞·法泰, 派崔克·庫富爾, 帕斯考·布雷東 申請人:法商佛梭公司