生物產物的單一容器制造方法
【專利摘要】在僅使用壓縮氣體進行混合和氣化的柔性一次性生物反應器中執行在單一容器中從細胞生長到產物純化的制造生物產物的方法。使用多孔隔膜來進行所述氣化和混合以及在同一容器中分離用于采集和純化生物產物的色譜介質。所述封閉容器可用于任何環境中，而沒有污染所述產物的風險或所述產物污染環境的風險。此容許以盡可能最低的成本在任何地點大量制造危險物質、藥物和疫苗。可廣泛應用于在反恐怖主義和生物防御操作中以及在流行病管理中。
【專利說明】生物產物的單一容器制造
【背景技術】
[0001]已用多種形式生產生物反應器，其通常是細胞培養物在其中生長的室。通常，使用生物反應器使哺乳動物細胞培養物生長，其中細胞產生細胞外組份，例如抗體或重組蛋白質。還使用生物反應器進行病毒產生。執行分離工藝以從生物反應器濃縮并純化所需組份，其可用作(例如)治療劑或診斷劑。生物反應器是復雜的機械裝置，其主要提供液體的混合與氣化以使生物培養物生長；在這個步驟后實施若干個其它單元處理，包括分離細胞、硝化以減少營養培養基的體積、加載到色譜柱上以及若干個分離步驟。近年來，人們已逐漸了解到在較短周轉時間中產生多種生物產物，特別是因為其涉及對抗恐怖主義相關需求所需的產物；這還包括對快速研發并制造疫苗和抗體的需求。當前方法需要利用無塵室、較大資本投資和冗長繁瑣的工藝來制造這些產物。業內非常需要創造生物反應器系統，其將能在最適條件下產生生物產物，能將生物產物制造的所有步驟組合在同一容器內，且購買及操作成本最低。另外，其將是一個封閉系統，可在任何地方安裝并使用而無需無塵室，且其中將保護操作者免受產品侵襲。此一發明將改變藥物發現和制造過程，從而使得可能以可承受的成本向人類提供新就生藥物。獨立地，所述發明將滿足許多反恐怖主義行動以及傳染病控制的重要需求。
[0002]混合和氣化是當今每種可用生物反應器執行的主要功能。一般來說，提供單獨的機械裝置來執行這些功能，但在一些情況下，使用鼓泡反應器，其中向上移動的氣團也提供混合功能。由于氣化要求與混合功能之間的不平衡，不可能理想地將兩種功能組合成一種，也就是使用氣化來混合流體。生物反應器中的多種反應需要在可保護產物免受環境侵襲并保護人員免受產物 侵襲的環境中執行；這要求建立無塵室設施，其構筑和驗證可耗費數百萬美元。另外，生物藥物純化中需要的許多步驟是獨立于產生生物產物時的階段執行，例如從分泌產物的CHO細胞或以包涵體形式產生產物的細菌純化。
[0003]將生物產物制造中的所有步驟(從細胞生長以分泌生物產物到分離并純化生物產物)組合在在整個操作期間保持封閉的同一容器內的系統將改變研發并制造生物藥物的方式。因為這個系統將容許快速部署所述制造，所以所述系統將最適于需要快速制造產物的情況，例如在反恐怖主義行動中以及在保護公眾免受傳染病侵襲時。在不受控環境中制造生物藥物的能力將使得可能以其當前成本的一部分來制造多種產物，增加其可用性，且封閉系統提供的保護將允許制造原本無法安全制造的生物產物。
[0004]關于將產物的采集和純化組合在生物反應器內的方面是新穎的突破性技術。盡管生物反應器僅用于使細菌或其它細胞生長的目的，但可將其作用擴展到包括其它可在生物反應器內完成的工藝。業內需要研發生物反應器用于表達生物產物并將其與營養培養基中的其它組份分離，通過使生物產物與色譜介質在生物反應器內結合將表達和分離步驟組合在生物反應器內，棄去營養培養基并洗脫呈濃縮溶液形式的生物產物；這將消除生物產物的分離和純化中的至少三個步驟，即過濾或離心以移除細胞培養物，執行超濾以減小體積，和通過從生物反應器選擇性洗脫以純化生物產物；最后一個步驟使生物反應器成為色譜柱。[0005]過濾、色譜和純化的耗時且昂貴的步驟減慢制造工藝，且為了建立cGMP級制造操作，特別是無塵室環境而顯著增加資本成本要求。

【發明內容】

[0006]本發明在一個方面中提供制備多種生物產物的方法。所述方法包含提供生物反應器，所述生物反應器適于容納預定體積的營養培養基且包含:(a)容器，其具有至少一個內壁；(b)隔膜，其定位在所述容器內并界定下部室和上部室；(c)所述隔膜具有多個孔以在所述下部室與所述上部室之間提供流體連通；(d)至少一個營養培養基入口 ；(c)至少一個營養培養基出口 ；(d)至少一個氣體入口 ；(e)至少一個氣體出口。所述生物反應器是通過以下方式操作:(f)添加營養培養基和(g)生物培養物，(h)調節營養培養基的溫度，(i)開始氣體流動以攪動營養培養基并將氣體吸收到營養培養基中，且將生物反應器操作足夠長時間以容許生物培養物產生所需生物產物。盡管可在此時停止所述工藝，但其可通過以下方式繼續進行:(i)在生物反應器中添加色譜介質以結合所分泌的生物產物，然后(k)使其經受若干個洗滌和純化步驟以通過僅使用一個封閉容器獲得純凈形式的生物產物。
[0007]上述制備生物產物的方法是在密封容器、優選地二維柔性袋內部執行，這將容許在較不受控的環境中實施這些操作。此外，這可保護操作者免受生物產物侵襲以免所述產物對人類具有任何有害效應。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0008]圖1是本發明優選實施例的生物反應器的側面剖視圖。
[0009]圖2是本發明優選實施例的生物反應器中隔膜的局部視圖。
【具體實施方式】
[0010]在一個方面中，本發明提供適于從預定體積的營養培養基制備純化生物產物的生物反應器，以及其相關使用方法。
[0011]首先看圖1，其展示本發明生物反應器的優選實施例的側視圖。在此實施例中提供容器4，其具有至少一個內壁和任選地附加在垂直結構15上的容器4的載體16。
[0012] 容器4提供貯器，營養培養基處于其中，且在其中進行所需生物產物的生長。容器具有隔膜13，其定位在容器內并界定下部室12和上部室20，所述隔膜具有多個孔5，所述孔在下部室與上部室之間提供流體連通。另外，隔膜13分成簇17達到容器底部以防止其在加壓期間鼓脹。容器4包含若干個端口，包括氣體入口 9，該氣體入口進一步包含消毒過濾器7和閥8。氣體入口 7連接到壓縮氣體源。一旦打開氣體源，氣體立即經由氣體入口 9在通過消毒過濾器7后進入下部室12。由于隔膜13中的多個孔5具有較小直徑，使得氣體穿過隔膜13的流動受阻，從而導致下部室12內部積累壓力。一旦下部室中達到臨界壓力，氣體就穿透多個孔5并進入上部室20中，且橫穿通過容器4的內容物，最終打破容器中液體14的表面并最終經由氣體出口 2離開容器。容器還包括閥10，其控制經由液體出口 11移除營養培養基和生物培養物。上部室20進一步包含液體入口 I以將營養培養基和生物培養物引入容器4中，且具有歧管19以容許連接件18連接到緩沖液、營養培養基、生物培養物和色譜介質；任選地提供采樣端口 3以定期移除營養培養基來分析其內容物。[0013]仍參見圖1，容器4、特別是如本文進一步闡述的柔性容器需要載體來支撐，后者優選地包含平臺16和側壁15。平臺和側壁可包括任何適宜材料，例如金屬或堅硬聚合物，只要其足夠堅硬以支撐柔性容器即可。合意地且如圖1中所展示，平臺(和容器)相對于底板或其它表面有所上升。這允許入口和出口位于側面上或是容器支撐在平臺上。例如且如此實施例中所闡釋，需要容器4的至少一個氣體入口 9位于容器中可與平臺共同延伸的部分上，其中平臺包括開口，經過所述開口允許氣體經過氣體入口 9通過平臺并進入容器4中。如果需要，容器4支撐在平臺表面16上，所述平臺表面16又是由垂直結構15來支撐。載體表面16的下表面另外包括用于容器4的加熱或冷卻構件6。
[0014]氣體入口 9具有另一控制閥8，其位于容器4與消毒過濾器7之間；控制閥8位于壓縮氣體源與消毒過濾器7之間。
[0015]硬質載體平臺16另外含有加熱元件6，其附接到與接觸容器4的一側相對的一側，以容許將營養培養基保持在所需溫度下，最有可能在37°C下。
[0016]圖2顯示隔膜13的局部視圖，其中多個孔5均勻地或以特定圖案分布在隔膜13的整個水平表面上。更特定來說，隔膜13包含大小與容器4的底部尺寸大致相同的柔性塑料片，且所述塑料片已通過機械構件(例如使用激光束)打孔以產生按比例遍布整個表面的孔。隔膜夾在柔性袋的頂部層與底部層之間，且以成簇形式17附接到底部表面以防止兩個層在加壓期間分離。下部室中的壓力將氣體從孔5迫出成為營養培養基內部的小氣泡；應理解，營養培養基將存在于容器4的兩個室中。
[0017]一般實施例
[0018]在第一實施例中， 本發明提出不管氣化要求如何，不向容器施加任何外側運動且不將任何機械裝置附接到容器(在袋的內部或外部)，都能使所有類型的細胞和生物體生長的生物反應器。
[0019]在第二實施例中，本發明通過提供在生物反應器中通過將生物產物結合到色譜介質來捕獲所述生物產物以采集生物產物的便捷方式，從而提出生物反應器的另一功能。不需要機械裝置。因此，本發明將藥物的生物制造中的至少一個重要步驟與上游處理組合。
[0020]在第三實施例中,本發明提出在生物反應器內從營養培養基和生物培養物分離生物產物的方法，從而消除了離心營養培養基以移除生物培養物和過濾營養培養基以減小其體積的需要。
[0021 ] 在第四實施例中，本發明提出在生物反應器中純化生物產物的方法,其中將生物產物選擇性結合到色譜介質并逐漸將其洗脫執行的是通常在色譜柱中執行的相同功能。因此，在所述情況下，本發明起類似色譜柱的作用。
[0022]在第五實施例中，本發明通過消除一些最昂貴且耗時的步驟來提供顯著降低重組藥物制造成本的方式。
[0023]在第六實施例中，本發明提供制造危險生物物質的方式，其沒有任何特殊限制且還保護生物產物免受環境和人員侵襲。
[0024]現有技術
[0025]本發明是鼓泡反應器類型，其還用作分離式生物反應器。
[0026]授予富里(Furey)的美國專利7，875，448教示一次性生物反應器，其包含:容器，其用于容納流體培養物；第一擴散器，其安置在所述容器內；出口管，其用于從所述容器的底部吸取培養物；入口管，其用于使至少一部分培養物從出口管經由所述擴散器返回所述容器，所述第一擴散器安置在所述容器底部上方且在所述容器容納流體培養物時完全安置在培養物內，其中所述第一擴散器將返回所述容器的所述培養物分散成比無所述第一擴散器情況下使用所述入口管所出現更寬的分布流，其中所述第一擴散器將來自容器外部來源的氣體與在所述分散到所述容器中之前的所述返回的培養物組合。本發明權利要求書沒有繼續研究這種生物反應器，因為沒有流體培養物(本發明的營養培養基和生物培養物混合物)的再循環；擴散器在美國專利7，875，448中被描述為篩網，而本發明使用多孔隔膜來產生壓力以將氣體轉移到容器中。另外，現有技術僅闡述使細胞在營養培養基中生長的方法，而本發明使用多孔隔膜充當過濾器來執行若干種其它功能。
[0027]授予賀治(Hodge)的美國專利7，629，167教示生物反應器系統，其包含:一次性容器，其用于容納用于處理的生物材料，所述一次性容器包含包括至少一個輸入端口的單一室；配件，其包含與輸入端口相連的多孔表面且所述表面經配置以容許入口氣體流通過并在將入口氣體流添加到單一室內部之前控制氣泡的大小和分布，其中多孔表面的孔徑選自大孔、微米孔、亞微米孔、納米孔和其組合；一次性混合系統，其包含定位于多孔表面上方并在單一室內在單一室的下部的葉輪，所述葉輪經配置以通過磁性耦合到葉輪且在單一室的下部外部的電動機驅動，從而使得含于單一室內的生物材料得到混合且增加氣泡循環；至少一個排出端口 ；至少一個采集端口 ；用于支撐一次性容器的結構；一個或一個以上傳感器，其用于感測容器內生物材料的一個或一個以上參數；和加熱器，其用于加熱一次性容器的內容物，所述加熱器具有恒溫器。這個專利不構成本發明的現有技術，因為此處提供的多孔表面與氣體入口相連且不提供如本發明所主張的分散遍布容器底部的物流。
[0028]授 予戈格萊(Gaugler)等人的美國專利6，432，698教示提供用于培養微生物和細胞的一次性生物反應器。所述生物反應器適合不熟悉微生物學或無菌技術的個體使用。其是由柔性或半柔性防水片形成容器來構造，所述容器經設計以向在其中培養的微生物提供混合和氣體交換。混合和氣體交換是通過使氣體從具有楔形或圓形底部的容器的最低頂點處的單一位置或從橫跨平底容器的多個位置鼓泡穿過培養物來實現。這個專利不構成現有技術，因為本發明提供氣體從整個容器底部的擴散。
[0029]美國專利5，081，036教示:1.氣升式生物反應器，其用于使在液體生長培養基中釋放生物產物的細胞生長，所述生物反應器包含:a.生長室，其用于接收細胞和液體生長培養基并提供用于細胞生長的環境，所述生長室具有界定中間區域的內側壁；b.構件，其用于將氣體流溫和鼓泡向上穿過所述生長室的中間區域，由此使液體生長培養基溫和向上循環穿過所述生長室的中間區域，且隨后沿所述生長室的內側壁向下返回；和(3.不銹鋼細絲海綿，其位于所述生長室內以在所述生物反應器正在操作中時切斷存于所述生物反應器中的液體生長培養基的溫和循環的至少一部分，所述不銹鋼海綿的表面積和細絲間隔足以促進將氣體流的至少一部分吸收到液體生長培養基中并使細胞陷入或附著在海綿內，且維持液體培養基的溫和循環。這篇關于氣升式生物反應器的參考文獻不構成本發明的現有技術。
[0030]在美國專利數據庫中檢索提供"制備式"功能的鼓泡反應器找到一篇參考文獻。授予唐斯(Downs)的美國專利6，723，555教示發酵設備，其經構筑以使用多個發酵器皿產生已知且可重復量的無污染發酵產物。為有助于與其它產物處理步驟相容的進一步處理，發酵設備具有在容器框架中排列的樣品器皿陣列。容器框架經配置以在發酵期間容納樣品器皿并將器皿陣列輸送到另一處理站或從另一處理站輸送器皿陣列。對應于樣品器皿陣列中的樣品器皿數目，套管陣列經配置以使得可將每一套管置于樣品器皿內部。將套管陣列附接到氣體分布器，其將氧和/或一種或一種以上其它氣體從氣體源經過套管遞送到樣品器皿中。由于每一個別樣品器皿的發酵體積小于整體發酵設備，所以發酵產物產率可預測且可有效優化細胞生長速率、這篇參考文獻不構成本發明的現有技術。
[0031]授予漢森(Hansen)等人的美國專利7，699，976教示上流式生物反應器,其包括具有經配置用于上流式操作的入口和出口的器皿。隔膜定位在器皿內且界定下部室和上部室。隔膜包括在上部室與下部室之間提供流體連通的孔隙。生物反應器還包括用于釋放下部室中的壓力積累的構件。在一種配置中，隔膜包括可釋放部分，其具有打開位置和關閉位置。可釋放部分經配置以響應下部室中的壓力積累而移動到打開位置。在打開位置中，下部室與上部室之間的流體連通增加。或者，下部室可包括由壓力積累選擇性開動的壓力釋放管線。壓力釋放機構可防止生物反應器阻塞和/或防止高壓對生物反應器造成災難性損壞。這篇參考文獻不構成本發明的現有技術，因為本發明中提供的隔膜在使用期間未被突破。
[0032]在美國專利數據庫中檢索提供"分離式"功能的鼓泡反應器未找到參考文獻。
[0033]阿貢實驗室(Argonne)的科學家(www.anl.gov)最近使用電動力輸送有機酸離開生物催化劑跨越離子交換膜并進入濃縮室中，與用于處理酸的正常代謝過程極為類似。為了以成本有效的方式提供電流，研究者轉向電脫離子(EDI)。EDI是公認的用于產生高純水的商業技術。先前，阿貢實驗室的科學家改良EDI以使得其可用于對化學和農業產物進行脫鹽。為此，研究者將松散的離子交換色譜介質珠粒模制成多孔色譜介質晶片，從而使得與常用處理相比，能在稀釋水平下以高能效捕獲帶電鹽和酸，且顯著減少廢物流。這成為阿貢實驗室的分離式生物 反應器的基礎。研究者還認識到，盡管將酶直接固定在膜上可提供極佳產物分離，但酶密度不足會限制總體性能。為增大密度，科學家將酶固定技術整合到多孔色譜介質晶片中并創造出可有效產生并移除有機酸的材料。在阿貢實驗室設計它的分離式生物反應器時，研究者將酶捕獲色譜介質珠粒納入色譜介質晶片中。所固定生物催化劑將糖轉化為目標酸，且將產物以電學方式輸送到濃縮槽中。這使得在沒有緩沖或中和的情況下進行反應。阿貢實驗室的固定技術還使得可不拆卸系統就原位剝除并更換已降解的酶。阿貢實驗室關于分離式生物反應器的發明闡述于以下文獻中:US6797140中(電脫離子方法(Electrodeionization method))、US6495014(電脫離子襯底和用于電脫離子處理的裝置(Electrodeionization substrate, and device for electrodeionization treatment))、US24060875A1 (電脫離子方法)、US24115783A1 (電脫離子中的固定生物催化酶(Immobilized biocatalytic enzymes in electrodeionization))、US25056547A1 (陽離子羧酸鹽的使用電脫離子的單級分離和酯化(Single stage separation and esterificationof cation salt carboxylates using electrodeionization))。這些參考文獻都不形成本發明的現有技術。
[0034]闡述分離式生物反應器的美國專利包括:8，007，647，分離式生物反應器中抗衡離子的保留(Retention of counterions in the separative bioreactor) ;7, 981，261,用于分離帶電載體并減少光腐蝕的整合裝置和襯底以及用于光電化學產生電流和光催化產生氧的方法(Integrated device and substrate for separating charged carriers andreducing photocorrosion and method for the photoelectrochemical production ofelectricity and photocataiytic production of hydrogen) ；7, 141, 154,陽離子羧酸鹽的使用電脫離子的單級分離和酯化。這些專利都不構成本發明的現有技術。
[0035]美國專利7，977，395，電子和離子傳導性多孔材料和從其制造樹脂晶片的方法(Electronically and ionically conductive porous material and method formanufacture of resin wafers therefrom) ；7, 799, 548,從多孔固體離子交換晶片剝除加遺傳標簽的生物分子的方法(Method of stripping genetically tagged biomolecules fromporous solid ion exchange wafer) ;7, 507，318,使用樹脂晶片的裝置和其應用(Devicesusing resin wafers and applications thereof) ；7, 452, 920,電子和離子傳導性多孔材料和從其制造樹脂晶片的方法；和7，306，934，用于固定生物分子的多孔固體離子交換晶片(Porous solid ion exchange wafer for immobilizing biomolecules)教不多孔固體離子交換晶片，其包含生物分子捕獲色譜介質與離子交換色譜介質的組合，所述組合在所述晶片內形成含有+2價過渡金屬陰離子的帶電捕獲色譜介質。另外，此申請案主張分離式生物反應器，其包含陽極和陰極、多個反應室，至少一些反應室是從多孔固體離子交換晶片形成，所述晶片具有在所述晶片內形成帶電捕獲色譜介質的生物分子捕獲色譜介質與離子交換色譜介質的組合，且具有固定在所述帶電捕獲色譜介質上的加遺傳標簽的生物分子，所述多孔固體離子交換晶片中 的每一者在其內具有插入陽離子交換膜與陰離子交換膜之間的帶電捕獲色譜介質，以及用于在陽極與陰極之間供應電位的機構。這些揭示內容都不是本發明所共有，且本發明中未列舉本發明的基本特征。
[0036]總之，文獻中沒有現有技術可對本發明中作出的權利要求造成文義侵害。使用柔性多孔隔膜引入氣體并混合液體以及使用色譜介質采集并純化生物產物是新穎的、不明顯的而且實用的。
【權利要求】
1.一種用于產生并純化生物產物的方法，其包含: a)提供適于容納預定體積的營養培養基的生物反應器，其包含: i)單次使用的柔性容器，其具有至少一個內壁和內體積； ?)隔膜，其定位于所述容器內且界定下部室和上部室，所述隔膜具有大小在Iym到.1000 μ m范圍內的多個孔，所述孔在所述下部室與所述上部室之間提供流體連通； iii)在所述上部室中的至少一個液體入口，其具有達到所述上部室的底部的液浸管且與至少一個緩沖溶液源、至少一個營養培養基源和至少一個生物培養物源流體連通； iv)在所述下部室中的至少一個液體出口，其具有閥以控制流速； V)與壓縮氣體源流體連通且位于所述下部室中的至少一個氣體入口，其進一步包含定位在所述壓縮氣體源與所述容器之間的消毒過濾器； vi)在所述上部室中的至少一個氣體出口，其具有控制氣體的流速的構件； vii)加熱或冷卻所述營養培養基的構件； b)將所述營養培養基經由所述上部室中的所述液體入口引入所述容器中； c)將能在所述營養培養基中生長并在所述營養培養基中分泌生物產物的生物培養物經由所述上部室中的所述液體入口引入所述容器中； d)使用所述加熱或冷卻 構件將所述液體培養基加熱或冷卻到預定溫度； e)將所述下部室中的所述氣體入口連接到壓縮氣體源； f)開始使所述壓縮氣體流動到所述下部室中，其具有足夠壓力以使氣泡穿透所述隔膜中的所述孔，進入所述上部室中且同時打破所述容器中的所述營養培養基的表面； g)使壓縮氣體繼續以預定流速流動預定時間長度； h)以預定時間間隔檢測所述營養培養基中的所述生物培養物的密度和活力； i)以預定時間間隔檢測所述營養培養基中的所述生物產物的濃度； i)在所述營養培養基中的所述生物培養物的活力或所述生物產物的濃度達到預定值時，停止壓縮氣體的流動； k)經由所述液體入口向所述上部室中添加足量的能結合實質上全部的所述生物產物且粒徑大于所述隔膜中的所述孔的直徑的色譜介質； I)開始使壓縮氣體流動到所述下部室中以攪動所述色譜介質；m)如果需要，通過經由所述液體入口添加第一緩沖液來調節所述營養培養基的pH和/或導電率，以引起或增強所述生物產物與所述色譜介質的結合； η)測定所述營養培養基中生物產物的濃度，直到其達到預定的低值為止； ο)打開所述底部室中的所述液體出口 ； P)經由所述下部室中的所述液體出口移除并棄去所述營養培養基和所述生物培養物； q)關閉所述底部室中的所述液體出口 ； r)將能從所述色譜介質解離任何已結合或未結合的污染物的第二緩沖液以足以浸沒所述色譜介質的量經由所述上部室中的所述液體入口添加到所述容器中；s)開始所述壓縮氣體的流動以將所述色譜介質攪動預定時間長度；t)打開所述下部室中的所述液體出口以使所述第二緩沖液流出，并監測污染物水平且棄去所述第二緩沖液；u)如果需要，重復步驟(r)到(t)，以在所述棄去的第二緩沖液中實現污染物的預定低水平； V)將能進一步從所述色譜介質解離所述已結合和未結合的污染物以及1%到5%的所述生物產物的第三緩沖液以足以浸沒所述色譜介質的量經由所述上部室中的所述液體入口添加到所述容器中； w)開始所述氣體流動以將所述色譜介質攪動預定時間長度；x)打開所述下部室中的所述液體出口以容許所述第三緩沖液流出；y)監測步驟(X)中所述生物產物的濃度并棄去移除的所述第三緩沖液；z)將能從所述色譜介質解離實質上全部的所述生物產物的第四緩沖液從所述上部室中的所述液體入口添加到所述容器中； aa)開始所述氣體流動以將所述色譜介質攪動預定時間長度；bb)打開所述下部室中的所述液體出口以容許所述第四緩沖液流出；cc)監測步驟(bb)中的所述生物產物的濃度并收集移除的所述第四緩沖液；dd)重復步驟(z)到(cc)直到所收集的所述第四緩沖液中的所述生物產物達到預定低濃度； ee)合并所述第四緩沖液的所有所收集的部分。
2.根據權利要求1所述的用于產生并純化生物產物的方法，其中如果需要，使步驟(ee)中的所述合并的部分經受其它純化步驟。
3.根據權利要求1所述的用于產生并純化生物產物的方法，其中所述隔膜中的所述孔相距1/32英寸到I英寸。
4.根據權利要求1所述的用于產生并純化生物產物的方法，其中所述容器實質上為圓柱形、卵形、立方形、圓形、矩形或正方形。
5.根據權利要求1所述的用于產生并純化生物產物的方法，其中所述容器一般為二維柔性袋,其中至少所述容器的內部部分包含生物相容性材料。
6.根據權利要求1所述的用于產生并純化生物產物的方法，其中所述容器進一步包含多個傳感器。
7.根據權利要求1所述的用于產生并純化生物產物的方法，其中所述生物培養物包含細菌、酵母、雜交瘤、桿狀病毒、哺乳動物細胞或植物細胞。
8.根據權利要求1所述的用于產生并純化生物產物的方法，其中所述生物產物選自由以下組成的群組:溶解的包涵體、小蛋白質、釉基質蛋白、融合蛋白、標簽蛋白、激素、副甲狀腺激素、生長激素、促性腺激素、胰島素、ACTH、催乳素、胎盤催乳激素、促黑色素細胞激素、促甲狀腺素、降鈣素、腦啡肽、血管緊張肽、細胞因子、人血清白蛋白、牛血清白蛋白、卵白蛋白、葡萄糖異構酶、α -淀粉酶、內切-葡聚糖酶、生長激素GH、IGF-1、IGF-2、PTH、PGE2、TGF-β、TGF-a、bEGF、EGF、PDGF_AB、PDGF_BB、骨保護素 OPG、骨橋蛋白 0P、FGF_1、FGF_2、甲狀腺激素、BMP-2、BMP-3、BMP-4、BMP-6、BMP-7、VEGF, L25 (OH) 2、維生素 D3、降鈣素、IFN- a、IFN-β、IFN- y、OCN (骨鈣素)、0N(骨結合素)、0P_1 (成骨蛋白-1)、NGF、膠原、纖連蛋白、纖維蛋白原、凝血酶、因子XII1、重組蛋白質、重組抗體和重組肽。
9.根據權利要求1所述的用于產生并純化生物產物的方法,其中所述色譜介質包含離子交換色譜介質、疏水色譜介質、親和色譜介質或其混合物。
10.根據權利要求1所述的用于產生并純化生物產物的方法，其中所述色譜介質包含蛋白質或肽作為配體。
11.根據權利要求1所述的用于產生并純化生物產物的方法，其中所述色譜介質包含對所述生物產物具有特異性親和性的色譜介質。
12.根據權利要求1所述的用于產生并純化生物產物的方法，其中所述色譜介質包含多種色譜介質。
13.根據權利要求1所述的用于產生并純化生物產物的方法，其中所述色譜介質粒子具有大于所述隔膜的孔徑的大小。
14.根據權利要求1所述的用于產生并純化生物產物的方法，其中將來自步驟(ee)的所述生物產物轉移到另一生物反應器中并重復所述步驟(k)到(ee)。
15.根據權利要求1所述的用于產生并純化生物產物的方法，其中所述方法是在符合IS07到IS09清潔空 氣標準的環境中執行。
【文檔編號】C12P1/00GK104024422SQ201280051483
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2012年8月30日 優先權日:2011年9月7日
【發明者】薩爾法拉茨·尼亞齊 申請人:醫用蛋白國際有限責任公司