高效液相色譜法測定利格列汀對映異構體含量的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種高效液相色譜法測定利格列汀對映異構體含量，屬于化學檢測領 域。
【背景技術】
[0002] 利格列汀是一種二肽肽酶-4(DPP_4)抑制劑，適用作為2型糖尿病成年中膳食和運 動的輔助治療改善血糖控制。利格列汀于2011年5月獲得美國FDA批準上市，2011年6月在歐 洲獲準上市，是一種具有新型作用機制的2型糖尿病(T2DM)治療藥物。臨床試驗結果證實， 利格列汀單用或與其他抗糖尿病藥物聯用，均能有效降低T2DM患者的糖化血紅蛋白水平、 空腹血漿葡萄糖濃度和餐后2h血漿葡萄糖濃度，對體重無明顯影響，發生低血糖的風險低， 肝功能下降和腎功能不全的T2DM患者無需調整給藥劑量，具有較好的安全性及耐受性。
[0003] 但是利格列汀的對映異構體的含量對利格列汀的質量及用藥安全有很大的影響， 為控制質量，本文建立了測定利格列汀對映異構體含量的方法。
[0004] 目前，一般使用物質的旋光特性來控制對映異構體，但缺點是無法得到定量結果。 本文建立的方法，通過正相色譜柱很好的分離利格列汀及對映異構體，同時還能保證良好 的線性范圍，良好的穩定性，較好的準確度和精確度，而且研究的方法可以操作簡單、快速 完成測試，測定結果準確可靠，從而可以有效的控制利格列汀原料藥的質量，保證用藥的安 全性和可靠性。
[0005] 因此，本研究采用高效液相色譜法，建立了一種阿哌沙班原料藥中對映異構體的 測定方法。

【發明內容】

[0006] 本發明的目的是提供一種操作簡單、快速，測定結果準確可靠的利格列汀原料藥 中對映異構體的測定方法，來解決對映異構體含量的檢測。
[0007] 本發明采用的技術方案為:高效液相色譜法測定利格列汀原料藥中的對映異構體 含量，其創新點在于:包括樣品配制、樣品測定和結果計算步驟;所述樣品配制步驟如下：
[0008] (1)樣品溶液配制:取測試樣品l〇mg，精密稱定，置50ml量瓶中，用稀釋劑溶解并稀 釋至刻度，搖勻即得。
[0009] (2)對映異構體儲備溶液配制：取利格列汀對映異構體對照品25mg，精密稱定，置 25ml量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液lml，置20ml量瓶中，用 稀釋劑稀釋至刻度，搖勻即得。
[0010] ⑶系統適用性溶液溶液配制：取利格列汀對照品l〇mg，精密稱定，置50ml量瓶中， 精密量取雜質貯備液lml，置此量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。
[0011] (4)空白溶液(稀釋液)配制:正己烷:乙醇:三氟乙酸=60:40:0.1 (v/v)。
[0012] (5)利格列汀與對映異構體峰的分離度2 1.5;利格列汀峰的拖尾因子< 1.5;
[0013]
[0014] "，~HJ I1 HH,~~…1〇丄一一丄一~、淚色譜儀（配 DAD檢測器）；大賽璐AD-H 250 X 4.6mm，5μπι正相色譜柱；30 °C柱溫；10μ1進樣量；230nm檢測 波長；1.〇1111/111；[11流速;20111；[11運行時間 ；正己燒：乙醇：甲醇：二乙胺=50:30 :20:0.1流動相 系統;所述含量測定步驟為以面積歸一法計算樣品中對映異構體含量。
[0015] 有益效果:高效液相色譜法測定利格列汀原料藥中對映異構體的含量，操作簡單、 快速，測定結果準確可靠，從而能有效地控制該藥的質量。
【具體實施方式】
[0016] 高效液相色譜法測定利格列汀對映異構體含量的方法，具體在于:樣品配制、樣品 測定和含量計算步驟;所述樣品配制步驟如下：
[0017]
[0018] 實施例1
[0019]本發明發法專屬性試驗：
[0020]通過進樣含有所有潛在雜質的供試品溶液作為專屬性溶液，考察方法的專屬性。 通過專屬性試驗確定各潛在雜質在該測定條件下的相對保留時間、分離度，確保所關注的 雜質能夠被檢測，確保空白溶液在利格列汀及對映異構體保留時間處無干擾，確保利格列 汀峰的峰純度是純的。
[0021 ]結果:空白溶液中，對映異構體及利格列汀峰保留時間處無干擾峰;所有峰均與利 格列汀峰分離，且分離度2 1.5;用DAD檢測器檢測利格列汀的峰純度，是純的。
[0022] 對映異構體出峰時間為11.9min;利格列汀出峰時間為14.5;已知雜質出峰時間為 7.3min;對映異構體與相鄰峰的分離度為5.9;利格列汀與相鄰峰的分離度為2.8.
[0023] 實施例2
[0024]本發明方法的準確度試驗：
[0025] 方法的準確度通過考察樣品中加入不同濃度的對映異構體的準確度來實現的。考 察對應異構體的濃度包括定量限濃度、0.5μg/ml對映異構體(0.25%)、1.Oμg/ml對映異構 體(0.5% )、1.5μg/ml對映異構體(0.75% )。每個濃度重復3次，回收率均符合100 ± 10%，相 對標準偏差< 5%。
[0026] 準確度由測量值/真實值X 100%計算所得。
[0027]
[0028] 實施例3
[0029]本發明方法的重復性試驗：
[0030] 通過方法重復性和中間精密度兩項來進行精密度試驗。方法重復性通過重復配制 同一批供試品6次，每次進樣2針，計算每份溶液中利格列汀的含量并考察結果的相對標準 偏差，RSD不超過10%;中間精密度通過不同的分析人員、在不同的工作日、用不同的儀器來 重復進行"方法重復性"驗證，RSD不超過10% ;并且方法重復性和中間精密度結果的相對偏 差不超過10%，符合要求。 ^0ΛΟ? ?
[0032]
[0033] 實施例4
[0034] 本發明方法的檢測限試驗：
[0035] 根據對映異構體峰的響應，進樣對映異構體低濃度的溶液，獲得信噪比約為3:1的 溶液濃度，按照信噪比3:1計算對映異構體的檢測限。
[0036] L0037J 買施例5
[0038]本發明方法的定量性試驗
[0039] 根據對映異構體峰的響應，進樣對映異構體低濃度的溶液，獲得信噪比約為10:1 的溶液濃度，按照信噪比10:1計算對映異構體的定量限。
[0040]
[0041 ] 實施例6
[0042] 本發明方法的線性和范圍
[0043] 方法的線性通過考察至少7個不同濃度溶液的線性來實現。以測得的峰面積對濃 度作圖，呈良好的線性，并同時確定測定的范圍。
[0044]
[0045]
[0046] 實施例7
[0047] 本發明方法的溶液穩定性
[0048] 配制專屬性溶液進行溶液穩定性試驗（至少48小時）。分別在0,3,6,12,24及48小 時進樣檢測。X小時與0小時溶液中對映異構體含量的絕對偏差均不大于0.05%，溶液在48h 內穩定性很好。
[0049]
[0050] 實施例8
[0051]本發明方法的耐用性試驗
[0052] 通過改變流速、柱溫、流動相比例等參數來考察測試方法的耐受性。每次測試僅改 變其中一個參數，參數改變范圍為±10%，其結果與不改變參數時所測結果進行比較。對映 異構體和利格列汀的保留時間的偏差不大于15%，利格列汀拖尾因子均不大于1.5,分離度 均不小于1.5,符合要求。
[0053]
【主權項】
1. 高效液相色譜法測定利格列汀對映異構體含量的方法，其特征是樣品配制、樣品測 定和含量計算步驟;所述樣品配制步驟如下： 樣品溶液配制：取測試樣品l〇mg，精密稱定，置50ml量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻 度，搖勻即得； 對映異構體儲備溶液配制：取利格列汀對映異構體對照品25mg，精密稱定，置25ml量 瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻;精密量取上述溶液lml，置20ml量瓶中，用稀釋劑 稀釋至刻度，搖勻即得； 系統適用性溶液溶液配制：取利格列汀對照品l〇mg，精密稱定，置50ml量瓶中，精密量 取雜質貯備液lml，置此量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻即得； 空白溶液或稀釋液配制：正己烷：乙醇:三氟乙酸=60:40: 0.1 (v/v); 5)利格列汀與對映異構體峰的分離度2 1.5;利格列汀峰的拖尾因子< 1.5;2. 根據權利要求1所述的高效液相色譜法測定利格列汀對映異構體含量的方法，其特 征在于:所述的樣品測定步驟為選用Agilent 1200具自動進樣器的高效液相色譜儀且配 DAD檢測器;大賽璐AD-H 250 X 4.6mm，5μπι正相色譜柱;30 °C柱溫；10μ1進樣量;230nm檢測波 長；1.〇1111/111；[11流速；2〇111；[11運行時間；正己燒：乙醇：甲醇：二乙胺=50:30:20:0.1流動相系 統;所述含量測定步驟為以面積歸一法計算樣品中對映異構體含量。
【專利摘要】本發明涉及一種高效液相色譜法測定利格列汀對映異構體含量。包括樣品配制、樣品測定和結果計算步驟；取測試樣品10mg，置50ml量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。取利格列汀對映異構體對照品25mg，置25ml量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液1ml，置20ml量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻即得。取利格列汀對照品10mg，置50ml量瓶中，精密量取雜質貯備液1ml，置此量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。正己烷:乙醇:三氟乙酸=60:40:0.1（v/v）。有益效果：高效液相色譜法測定利格列汀原料藥中對映異構體的含量，操作簡單、快速，測定結果準確可靠，從而能有效地控制該藥的質量。
【IPC分類】G01N30/06, G01N30/02
【公開號】CN105675754
【申請號】CN201610044595
【發明人】黃駿, 海宏, 臧亞
【申請人】江蘇寶眾寶達藥業有限公司
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2016年1月22日