可用于診斷間日瘧和/或惡性瘧的試劑盒的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明主要涉及試劑盒。具體而言，本發明涉及可用于檢測間日追原蟲感染和/ 或惡性追原蟲感染的試劑盒，屬于醫療器械領域。
【背景技術】
[0002] 追疾仍然是全球公共衛生的緊要問題，每年死亡率達0. 7 - 2. 7百萬，其中75% W 上為非洲兒童。在過去的35年，追疾的發病率增長了 2-3倍。在1955年，世界衛生組織 (WHO)開始了一項通過應用氯哇進行臨床治療和應用DDT (二氯二苯Η氯己焼)控制蚊群而 根除追疾的宏大計劃。在20世紀60年代后期逐步停止，送項計劃雖然在全世界許多國家 引起重要且持續的疾病負擔減輕。然而，在許多國家追疾仍有復發，其主要是由于耐藥寄生 蟲的出現和傳播導致的。耐殺蟲劑蚊子的出現，人口密度的增加（自1963年，世界人口已經 翻了一番)，全球變暖(送種帶菌者擴散至W前沒有到達的范圍)，持續貧窮，政治動蕩，W及 由于傳染性疾病導致的生產力的損失，所有的送些因素破壞了治療和控制追疾的穩定的公 共衛生基礎的維持。
[0003] 追疾寄生蟲屬于追原蟲屬，能后感染許多脊椎動物宿主，包括多種非人類靈長類 物種。四種追原蟲屬寄生于人類：惡性追原蟲（Plasmodium, fal? ciparum)、 Η 日 追原蟲（Ρ. malariae)、 卵形 追原蟲（Ρ. ovale) 和間日 追原蟲 (P. vivax)。其中，惡性追原蟲和間日追原蟲分別與大部分追疾的發病率和死亡率相關。
[0004] 由于追疾治療藥物的特殊性，精確快速的診斷不僅能及時發現并治療追疾患者， 大大降低病死率，也能通過早期排除追疾，及時挽救感染了其它傳染性疾病患者的生命。W 此同時，精確快速的早期診斷也是對追疾實時流行病監測和控制的必要手段。到目前為止， 對可疑病人采血制作厚薄血片經染色后顯微鏡檢查法(簡稱鏡檢法）一直被認為是追疾診 斷的"金標準"，其優點是費用低，能鑒定追原蟲蟲種，但是也存在著缺陷，即需要非常專業 的檢驗人員，當原蟲密度較低時，可出現假陰性，引起誤診或漏診，同時還需要顯微鏡、染色 液等一些輔助設備。隨著臨床機構，特別是一些現代化程度高的醫院，由于檢驗人員更依賴 儀器設備，對鏡檢能力的掌握明顯下降；而在一些欠發達地區，由于種種原因，未能配備鏡 檢相關的設備和試劑。送些因素限制了臨床對追疾快速有效的診斷。因此，研究新的追疾 快速診斷方法成為目前研究的熱點。

【發明內容】

[0005] 本發明的目的在于提供新的用于診斷追疾，特別是可用于診斷間日追、惡性追或 混合追，或者用于區分間日追、惡性追與混合追的試劑盒。
[0006] 本發明人提供了 8條多膚。令人驚奇的是，本發明人發現，雖然所述8條多膚單獨 診斷追疾時的靈敏度均在33%~84. 7%之間，遠遠未達到作為檢測工具的要求，但在W受試 者來源的生物樣本是否對所述8條多膚中的至少兩組或兩組W上有響應作為判定受試者 是否已被追原蟲感染的指標的情況下，卻可高達98%的靈敏度（且假陽性率低至0. 8%) 診斷追疾。
[0007] 此外，本發明人還發現，通過將上述8條多膚與其他2條多膚的組合作為檢測分 子，不僅能夠診斷追疾，還能進一步診斷間日追、惡性追或混合追，或者用于區分間日追、 惡性追與混合追。
[000引因此，本發明包括： 1. 一種試劑盒，其包括一個或多個固體載體，W及獨立地連接于所述一個或多個固體 載體上的下述多膚集合1 : 沈Q ID NO ;1所示的多膚； 沈Q ID NO ;2所示的多膚； 沈Q ID NO ;3所示的多膚； 沈Q ID NO ;4所示的多膚； 沈Q ID NO ;5所示的多膚； 沈Q ID NO ;6所示的多膚； SEQ ID NO ;7所示的多膚；和 沈Q ID NO ;8所示的多膚。
[000引 2.根據項1所述的試劑盒，其用于診斷追疾。
[0010] 3.根據項1或2所述的試劑盒，其中，所述多膚集合1還包括下述多膚集合2 : SEQ ID NO ;9所示的多膚；和 SEQ ID NO ; 10所示的多膚。
[0011] 4.根據項3所述的試劑盒，其用于診斷間日追、惡性追或混合追，或者用于區分 間日追、惡性追與混合追。
[001引 5.根據項1~4中任一項所述的試劑盒，其中，全部多膚獨立地連接于同一固體載 體上。
[001引 6.下述多膚集合1在巧[J備用于診斷追疾的試劑盒中的用途： 多膚集合1 沈Q ID NO ;1所示的多膚； 沈Q ID NO ;2所示的多膚； 沈Q ID NO ;3所示的多膚； 沈Q ID NO ;4所示的多膚； 沈Q ID NO ;5所示的多膚； 沈Q ID NO ;6所示的多膚； SEQ ID NO ;7所示的多膚；和 沈Q ID NO ;8所示的多膚。
[0014] 7.根據項6所述的用途，其中，所述診斷追疾還包括診斷間日追、惡性追或混合 追，或者用于區分間日追、惡性追與混合追，且所述多膚集合1還包括下述多膚集合2 : SEQ ID NO ;9所示的多膚；和 SEQ ID NO ; 10所示的多膚。
[0015] 發明的縣體連施方式 《化集合巧《化紐 本說明書中，多膚集合1是下述多膚組廣8的全部： 多膚組1 ;SEQ ID N0;1所示的多化其中，SEQ ID N0;1所示的多膚相當于惡性追原蟲 的谷氨酸富含蛋白的871位、00位； 多膚組2 ;SEQ ID NO ;2所示的多膚，其中，SEQ ID NO ;2所示的多膚相當于惡性追原蟲 的谷氨酸富含蛋白的931位、60位； 多膚組3 ;SEQ ID NO ;3所示的多膚，其中，SEQ ID NO ;3所示的多膚相當于惡性追原蟲 的裂殖子表面蛋白9的421位^450位； 多膚組4 ;SEQ ID NO ;4所示的多膚，其中，SEQ ID NO ;4所示的多膚相當于惡性追原蟲 的紅細胞結合蛋白-140的391位"420位； 多膚組5 ;SEQ ID NO ;5所示的多膚，其中，SEQ ID NO ;5所示的多膚相當于惡性追原蟲 的成熟帶蟲紅細胞表面蛋白的601位^630位； 多膚組6 ;SEQ ID NO ;6所示的多膚，其中，SEQ ID NO ;6所示的多膚相當于惡性追原蟲 的細胞粘附相關無性蛋白8的1321位^1350位； 多膚組7 ;SEQ ID NO ;7所示的多膚，其中，SEQ ID NO ;7所示的多膚相當于頂尖膜抗 原-1的451位~480位； 多膚組8 ;SEQ ID NO ;8所示的多膚；其中，SEQ ID NO ;8所示的多膚相當于惡性追原 蟲的成熟帶蟲紅細胞表面蛋白的1076位~1105位。
[0016] 多膚組9;SEQ ID N0;9所示的多膚；其中，SEQ ID N0;9所示的多膚相當于惡性 追原蟲的追原蟲紅細胞膜蛋白1的391位^410位。
[0017] 多膚組10 ;SEQ ID NO ;10所示的多膚；其中，SEQ ID NO ;10所示的多膚相當于間 日追原蟲的環子抱子蛋白的82位^101位。
[001引本說明書中，靈敏度是指：用"金標準"方法確認的陽性樣本中，被其他方法測定為 陽性樣本的比例。假陽性率是指；用"金標準"方法確認的陰性樣本中，被其他方法測定為 陽性樣本的比例。本技術領域檢測間日追原蟲感染或惡性追原蟲感染的"金標準"方法是 鏡檢法。
[0019] 本說明書中，"追疾"是指惡性追和/或間日追。惡性追是指因惡性追原蟲感染而 引起的追疾，間日追是指因間日追原蟲感染而引起的追疾，混合追是指因惡性追原蟲和間 日追原蟲感染(也稱混合感染）而引起的追疾。
[0020] 優選地，多膚集合1是在所述多膚組廣8的全部的基礎上再加上下述多膚組 9 ~10 : 多膚組9 ;SEQ ID NO ;9所示的多膚；W及 多膚組10 ;SEQ ID NO ; 10所示的多膚。
[0021] 如實施例所示，所述多膚集合1對追原蟲感染者的血清呈陽性反應，而對健康正 常人或非間日追原蟲感染者的血清呈陰性反應，因此，所述多膚集合1作為追原蟲感染的 檢測工具是有用的。
[0022] 本說明書中，陽性反應是指：滿足下述"診斷方法"部分中所列的判據；否則為陰 性反應。
[0023] 所述多膚可W適宜采用（1)化學合成方法、或（2)酶反應合成方法等公知方法來 獲得，其中化學合成更為簡便。在化學合成本發明的多膚情況下，通過使用膚合成儀合成或 者半合成該多膚來進行。作為化學合成方法，可w列舉出例如膚固相合成法等。送樣合成 的膚可W采用