一種葡萄果中原花青素提取物的制備方法及應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于生物美容領域，具體涉及一種葡萄果中原花青素提取物的制備方法及 應用。
【背景技術】
[0002] 葡萄，又稱提子，是葡萄屬的一種常見落葉木質藤本植物，是漿果類水果中營養價 值極高的一種水果類物質，原產于亞洲西部地區。《神農本草經》中載文稱，葡萄具有"久食， 親身不老延年"的功效，葡萄是一種具有抗貧血、抗炎和美容養顏功效的水果。葡萄中含有 的花青素等多酚類化學成份，這些成分具有突出的抗氧化性，能夠消除人體自由基，抑制體 內脂質過氧化，達到增強皮膚免疫力、防止紫外線、美白、祛斑及減少皺紋、收斂毛孔和保濕 的效果。目前現有的專利和技術的關注點都集中在葡萄籽中原花青素的提取，而葡萄皮和 葡萄果肉以及葡萄籽中都有原花青素類物質的存在，而實際上葡萄皮和葡萄果實中的原花 青素含量也不低，但由于葡萄果通常用來釀酒，該部分的原花青素基本被廢棄，實際上原花 青素的含量和價值不亞于釀酒。
[0003] 目前針對原花青素的提取方法中主要有：一、水溶液浸泡法，在水溶液中利用加熱 浸泡，然后用非極性大孔樹脂吸附，用乙醇洗脫、濃縮得到粗提物，粗提物蒸干得到粉末狀 結晶。然而本方法提取得到的產品純度較低，回收率也較低，其使用受到一定的限制。二、 有機溶劑萃取法，根據相似相溶原理，選用水、乙醇、乙酸乙酯和丙酮等萃取劑進行提取。然 而本方法分離過程的工藝流程復雜，操作時間長，對化學結構相似的化合物分離純化能力 有限，而且使用的溶劑種類多、用量大，容易對環境造成污染。三、微波輔助提取法，根據物 質組分不同的微波吸收能力差異使得基體物質的某些區域或萃取體系中的某些組分被選 擇性加熱，從而使得萃取物質從基質活體系中分離，計入介電常數較小、微波吸收能力相對 較差的萃取液中。四、超臨界流體萃取法，利用超臨界流體作為萃取劑液體和固體中提取某 些成分，達到分離和提純的目的。然而本方法需要特定的設備，設備運行及維護成本較高， 而且對不同成分的提取率有著很大的差異。

【發明內容】

[0004] 本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供葡萄果中原花青素提取物的制備方 法，該方法能夠高效地提取葡萄果中原花青素，并應用于抗衰老美容化妝品中。
[0005] 本發明的目的通過以下技術方案來實現：
[0006] -種葡萄果中原花青素提取物的制備方法，包括以下步驟：
[0007] (1)準備葡萄皮和葡萄果肉：將葡萄果剔除葡萄籽得到葡萄皮和葡萄果肉；
[0008] 葡萄籽自身帶有一層外殼保護結構，在提取原花青素的過程中需要去除該部分結 構，在去除的過程中可能導致部分原花青素損失，因此工藝相對復雜，不僅需要相應的設 備，而且在去殼的過程有引進雜質的風險，而葡萄果實和葡萄皮由于自身結構不同，不存在 該問題，因此原材料的初步處理工藝上不同，只需要進行一步的溶劑萃取，無需進行二次溶 劑萃取，而且減少了萃取劑的應用就降低了引進雜質的風險。
[0009] (2)萃取原花青素：按體積比為（0. 5-2) : (0. 5-2) : (0. 5-2)配置甲醇、乙醇和水溶 液成混合溶液，將混合溶液與步驟（1)準備的葡萄皮和葡萄果肉混合，反應12-36小時；
[0010] 本發明采用甲醇、乙醇和水的混合溶液來萃取原花青素，且為了更好的提高提取 效率，甲醇、乙醇和水體積比為（〇. 5-2) : (0. 5-2) : (0. 5-2)，該比例的混合溶液對提取葡萄 果實中的原花青素更加有效。
[0011] 乙醇作為一種無毒萃取劑，在工業應用上范圍較廣，但是乙醇對原花青素的提取 率相對沒有甲醇等物質高，因此將甲醇和乙醇及水等混合一起既可以提高萃取率時又能降 低甲醇的殘留，同時又能夠降低可能殘留的甲醇對人體帶來的毒副作用；經實驗證明最佳 比例為1 :1，而現有對比技術中的其溶劑的成份較為復雜，容易引進雜質，而且其成份中醚 類及烷烴類分子量較大，在萃取時會降低原花青素的萃取率。而且本發明跟現有技術相比 不需要進行二次萃取，因此在溶劑成份和比例上，包括萃取效果和萃取次數上都相對現有 技術更具優勢。
[0012] (3)步驟⑵反應后，將反應物進行固液分離得到提取液，在 (-0. 30MPa)-(-0. 05MPa)的條件下，對提取液用水凍溶，并濃縮；
[0013] 在負壓情況下，會產生強烈的空化效應和機械震動，造成葡萄細胞壁快速破碎，加 速胞內物質的向介質釋放、擴散和溶解，促進提取的過程，達到較好的提取效率。隨著負壓 的增加，葡萄果實細胞和葡萄皮中的原花青素的提取率會有增加，但是隨著負壓達到一定 的臨界值后就會開始下降，所以要選擇一個最佳的負壓值。而凍溶是因為在低溫情況下，細 胞的一些生物活性能夠得到保存，包括原花青素的生物化學結構能夠更加的穩定，同時提 取率更加的高。
[0014] 本發明采用負壓低溫凍溶法結合非持續微波法提取葡萄中的原花青素。本發明在 (-0. 30MPa)-(-0. 05MPa)的條件下，對提取液用小于等于0°C;這種非持續性的微波處理能 夠盡量降低葡萄果實和葡萄皮中細胞的細胞膜破碎速度，降低提取樣品引入雜質的幾率， 再結合反應液的溫度，提高提取效率。
[0015] (4)微波提取原花青素：在400-650W微波條件下對提取液處理6-15min，離心；
[0016] (5)濃縮：將步驟⑷離心后的上清液進行濃縮，得到濃縮的原花青素提取液。
[0017] 優選的，步驟（1)中將所述葡萄皮和葡萄果肉搗碎。
[0018] 優選的，步驟（2)中所述甲醇、乙醇和水的體積比為1:1:1，所述混合溶液與步驟 (1)準備的葡萄皮和葡萄果肉混合后反應24小時。
[0019] 優選的，步驟（3)中將所述固液分離得到提取液在_〇.lOMPa下用0°C以下的水凍 溶；所述步驟（4)中在550W微波條件下對所述提取液處理。
[0020] 優選的，步驟（4)中對所述提取液處理采用進行短時間多次微波處理方式，每次 微波時間為〇. 3-0. 8S，時間間隔為0. 3-0. 8S。
[0021] 優選的，步驟（4)中每次微波時間為0. 5S，時間間隔為0. 5S，提取液溫度超過設 定的報警溫度40-50°C則反應停止；所述微波處理過的提取液在2000-4000r/min下離心 5-20min。這種非持續性的微波處理能夠盡量降低葡萄果實和葡萄皮中細胞的細胞膜破碎 速度，降低提取樣品引入雜質的幾率，再結合反應液的溫度，在超過一定設定溫度的情況 下，可提前結束微波處理，因為較高的溫度會破壞原花青素的化學結構，故要設置一定的溫 度，提前停止是因為在該溫度下細胞膜的通透性已經很大，再高的溫度可能會讓細胞膜通 透性活性完全死亡，釋放大量的其它雜質類物質，增加了分離提取的難度。
[0022] 本發明還提供了所述方法制得的葡萄果中原花青素提取物制成原花青素凍干粉 的方法，包括以下步驟：
[0023] (1)過濾：收集濃縮的原花青素提取液，用孔徑小于0. 45yM的濾膜過濾；
[0024] (2)濃縮：濃縮上清液；
[0025] (3)過濾：將濃縮的上清液采用孔徑小于0.22yM的濾膜過濾；
[0026] (4)凍干處理：凍干溫度為（_20°C)-(_35°C)，真空度為50_200Pa，凍干時間為 24-36小時，即得到原花青素凍干粉。
[0027] 本發明提供了所述方法制得的原花青素凍干粉在抗衰老護膚品中應用。本發明 將去籽后葡萄皮和葡萄果實中的原花青素化合物應用于抗衰老美容行業中，如面膜等化妝 品，能夠達到保持面部肌膚彈性、去皺等效果，同時也可以將其應用在保健品中。
[0028] 優選的，所述抗衰老護膚品為面膜、爽膚水、面霜、乳液、眼霜、洗面乳。
[0029] 優選的，所述原花青素凍干粉在抗衰老護膚品中的添加量為1-1000Ug/ml。
【具體實施方式】
[0030] 為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合實施例，對本發明 進行進一步詳細說明。
[0031] 實施例1
[0032] 1.葡萄皮和葡萄果肉的準備
[0033]1)選取新鮮的葡萄（在市場上采購即可），用自來水清洗干凈后再用去離子水清 洗一遍，然后剔除葡萄中的葡萄籽。
[0034] 2)將剔除葡萄籽的葡萄果放在不銹鋼容器中，然后用器械盡可能地搗碎徹底。
[0035] 2?加入混合有機溶劑萃取原花青素
[0036] 1)按照體積比為1 :1 :1的比例加入甲醇、乙醇和水溶液，充分攪拌混勻有機溶劑 和搗碎后的去籽葡萄。
[0037] 2)靜置24小時后處理。
[0038] 3?負壓凍溶
[0039]1)靜置結束后對其進行抽濾處理，進行固液分離。
[0040] 2)在-0. 10mPa的負壓條件下，用0°C冷水凍溶，蒸發回收甲醇及乙