重組人鈣調磷酸酶b亞基的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及蛋白領域，特別涉及重組人鈣調蛋白磷酸酶B亞基的應用。
【背景技術】
[0002] 鈣調磷酸酶(Calcineurin，CN)是目前所知唯--種依賴Ca2VCaM(鈣調素）的蛋白 磷酸酶，由A，B亞基以1:1的比例組成。A亞基(CNA)是催化亞基，B亞基(CNB)是調節亞基。CN 在免疫激活通路中發揮重要作用，是T細胞活化的關鍵酶。CN作為大分子酶蛋白，易失活，不 穩定，而CNB作為該酶的調節亞基，能促進CNA的活性，且相對分子質量小，性質穩定。由研究 表明CNB能刺激T細胞和NK細胞增殖以及增強NK細胞的殺傷活性，增強巨噬細胞吞噬能力等 免疫功能，且重組人1丐調磷酸酶B亞基（Recombinant human Calcineurin B subunit, rhCNB)是開發中的基因工程創新腫瘤藥物。
[0003] 但目前未見rhCNB對胃癌細胞MGC-803殺傷或抑制作用的相關報道。

【發明內容】

[0004] 有鑒于此，本發明提供重組人鈣調磷酸酶B亞基的應用。本發明采用IVI S Kinetics小動物活體成像系統，研究注射用rhCNB對BALB/c裸小鼠荷人胃癌細胞MGC-803原 位癌的治療作用，進一步考察受試物注射用rhCNB對特定類型腫瘤細胞的殺傷和(或)抑制 作用，探索受試物產生藥效作用的時效和量效關系，為藥物的有效性和其它毒理學相關試 驗提供依據。
[0005] 為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：
[0006] 本發明提供了rhCNB在制備殺傷和/或抑制胃癌細胞MGC-803的藥物中的應用。 [0007]在本發明的一些具體實施方案中，rhCNB在制備殺傷和/或抑制胃癌細胞MGC-803 的藥物中的應用中所述rhCNB的給藥劑量為不少于I Omg/kg。
[0008] 在本發明的一些具體實施方案中，rhCNB在制備殺傷和/或抑制胃癌細胞MGC-803 的藥物中的應用中所述rhCNB的給藥劑量為I Omg/kg~160mg/kg。
[0009] 在本發明的一些具體實施方案中，rhCNB在制備殺傷和/或抑制胃癌細胞MGC-803 的藥物中的應用中所述rhCNB的給藥濃度為0.5mg/mL~2mg/mL。
[0010]在本發明的一些具體實施方案中，rhCNB在制備殺傷和/或抑制胃癌細胞MGC-803 的藥物中的應用中所述rhCNB的給藥方式為靜脈注射給藥;每日給藥1次，連續給藥15日或 者首次給藥劑量為l〇mg/kg，每3日提高1倍劑量遞增給藥，依次為I Omg/kg、20mg/kg、40mg/ kg、80mg/kg、160mg/kg。
[0011] 本發明還提供了 rhCNB在制備治療BALB/c裸小鼠荷人胃癌細胞MGC-803原位癌移 植瘤的藥物中的應用。
[0012] 在本發明的一些具體實施方案中，rhCNB在制備治療BALB/c裸小鼠荷人胃癌細胞 MGC-803原位癌移植瘤的藥物中的應用中所述rhCNB的給藥劑量為不少于10mg/kg。
[0013] 在本發明的一些具體實施方案中，rhCNB在制備治療BALB/c裸小鼠荷人胃癌細胞 MGC-803原位癌移植瘤的藥物中的應用中所述rhCNB的給藥劑量為lOmg/kg~160mg/kg。
[0014] 在本發明的一些具體實施方案中，rhCNB在制備治療BALB/c裸小鼠荷人胃癌細胞 MGC-80 3原位癌移植瘤的藥物中的應用中所述rhCNB的給藥濃度為0.5mg/mL~2mg/mL。
[0015] 在本發明的一些具體實施方案中，rhCNB在制備治療BALB/c裸小鼠荷人胃癌細胞 MGC-803原位癌移植瘤的藥物中的應用中所述rhCNB的給藥方式為靜脈注射給藥;每日給藥 1次，連續給藥15日或者首次給藥劑量為10mg/kg，每3日提高1倍劑量遞增給藥，依次為 IOmg/kg、20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg、160mg/kg。
[0016] 在實驗期間，除陽性對照注射用順鉑高劑量給藥組動物以外，其余動物的一般癥 狀觀察和體重與溶媒對照組比較無明顯差異。連續給藥3次和6次后，各給藥組與溶媒對照 組比較無統計學意義，P值均>0.05。連續給藥6次后的檢測結果顯示:注射用rhCNB各劑量 給藥組和陽性對照給藥組的腫瘤細胞增殖情況均得到了較好的控制，但與溶媒對照組比較 無統計學意義，P值均>0.05。連續給藥9d后檢測結果顯示：注射用rhCNB G(高劑量組）、Z (中劑量組）、D(低劑量組）、DZ(遞增劑量組)給藥組和陽性對照SD、X給藥組對腫瘤細胞增殖 的控制與溶媒對照組比較均具有顯著統計學意義，P〈〇.01，陽性對照B給藥組與溶媒對照組 比較均具有統計學意義，P〈〇.05。連續給藥dl2和dl5次后檢測結果顯示：與溶媒對照組比 較，注射用rhCNB G(高劑量組）、Z(中劑量組）、D (低劑量組）、DZ(遞增劑量組)給藥組和陽性 對照B、SD、X給藥組對腫瘤細胞增殖的控制均具有極顯著統計學意義，p〈0.001。末次給藥后 d7檢測結果顯示：與溶媒對照組比較，注射用rhCNB G(高劑量組）、Z(中劑量組）、D(低劑量 組）、DZ(遞增劑量組)給藥組和陽性對照B給藥組對腫瘤細胞增殖的控制均具有極顯著統計 學意義，？〈0.001。304給藥組具有顯著統計學意義，？〈0.01。
[0017] 在注射用rhCNB對BALB/c裸小鼠荷人胃癌細胞MGC-803原位癌移植瘤的治療作用 中，對腫瘤的有效治療(與溶媒對照組比較，P〈〇.05)時間在連續給藥6次以后，在整個給藥 期間，腫瘤能得到有效的控制。停藥1周后，對腫瘤仍然具有持續有效的治療效果(與溶媒對 照組比較，P〈〇.001)，優于陽性對照注射用順鉑和注射用羥喜樹堿，與注射用重組人白介 素-2相當。
【附圖說明】
[0018] 為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現 有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。
[0019] 圖丨示實驗各組腫瘤生物發光檢測數據;其中橫坐標"卜7"分別表示"給藥前、 首次給藥后(13、(16、(19、(112、(115和末次給藥后恢復期(17"；"6-注射用^^呢高劑量組(4〇1^/ kg)" "Z-注射用rhCNB中劑量組（20mg/kg)"、"D-注射用rhCNB低劑量組（10mg/kg)"、DZ- 注射用 rhCNB 劑量遞增組（10mg/kg420mg/kg440mg/kg480mg/kg4l60mg/kg，10mg/kg 為 初始劑量，連續給藥3d提高一個劑量，以此類推。)"；縱坐標為生物發光檢測強度；
[0020] 圖2示活體成像圖；其中，"X"表示該動物在恢復期結束前已經死亡；
[0021 ] 圖3示剖檢圖。
【具體實施方式】
[0022]本發明公開了重組人鈣調磷酸酶B亞基的應用，本領域技術人員可以借鑒本文內 容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員 來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。本發明的方法及應用已經通過較佳實施 例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本
【發明內容】
、精神和范圍內對本文所述的方法和 應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。
[0023] 依據"細胞毒類抗腫瘤藥物非臨床研究技術指導原則"和"抗腫瘤藥物藥效學指導 原則"，采用IVIS Kinetics小動物活體成像系統，動態分析注射用rhCNB對BALB/c裸小鼠荷 人胃癌細胞MGC-803原位癌的治療作用。首先建立BALB/c裸小鼠荷人胃癌細胞MGC-803皮下 移植瘤模型，然后建立BALB/c裸小鼠荷人胃癌細胞MGC-803原位移植瘤模型。取建模成功的 裸小鼠90只，按生物發光數值平均分為9個給藥組，包括:注射用rhCNB高劑量組(給藥劑量 為40mg/kg，給藥濃度為2mg/mL)、注射用rhCNB中劑量組(給藥劑量為20mg/kg，給藥濃度為 lmg/mL)、注射用rhCNB低劑量組(給藥劑量為10mg/kg，給藥濃度為0.5mg/mL)、注射用rhCNB 劑量遞增組(首次給藥劑量為l〇mg/kg，每3日提高1倍劑量，依次為10mg/kg、20mg/kg、40mg/ 1^、8〇11^/1^、16〇11^/1^)、陽性對照注射用重組人白介素-2給藥組(給藥劑量為16.4萬11]/ kg，給藥濃度為8200IU/mL)、陽性對照注射用順鉑高劑量給藥組（5mg/kg，給藥濃度為 0.25mg/mL)、陽性對照注射用順鉑低劑量給藥組（lmg/kg，給藥濃度為0.05mg/mL)、陽性對 照注射用羥喜樹堿給藥組(2mg/kg，給藥濃度為0. lmg/mL)和溶媒對照組。實驗各組每日給 藥1次，除陽性對照注射