專利名稱：表鬼臼脂素糖苷的磷酸和磺酸酯的制備方法
本申請是中國專利申請第89107533.X號的分案申請。
本發明涉及在糖上具有不同取代基的4'-脫甲基表鬼臼脂素糖苷的制備方法，它們作為抗腫瘤劑的應用和含有它們的藥用組合物。
4'-脫甲基表鬼臼脂素糖苷(式Ⅰ)是由天然存在的木酚素、鬼臼脂素(Ⅱ)衍生得到的抗腫瘤劑。它們的合成方法已在美國專利3，524，844
(Keller-Juslen等)中敘述。式(Ⅰ)化合物中，已確定表鬼臼毒吡喃葡糖甙(Ⅰa)和表鬼臼毒噻吩糖苷(Ⅰb)在臨床上對許多種類腫瘤是有效的，這些腫瘤包括小肺細胞、卵巢、睪丸、乳房、膀胱、腦、非淋巴細胞白血病和何杰金氏病。
美國專利4，547，567和4，716，221公開了式(Ⅲ)化合物，
式中X1和X2之一為OH，另一個為氨基、一烷基氨基或二烷基氨基。通常認為上述衍生物具有較高的水溶性。
Seligman等(Cancer Chemotherapy Reports Part I，1975，59233-242)報道了鬼臼脂素磷酸酯二鈉鹽(Ⅳ)的制備方法。但是，該磷酸酯不會被前列腺酸磷酸酯酶水解，并且與母體鬼臼脂素相比未顯示毒性降低。
本發明提供了式(Ⅴ)抗腫瘤化合物，
式中R2為H，R1系選自(C1-10)烷基;(C2-10)鏈烯基;(C5-6)環烷基;2-呋喃基;2-噻吩基;(C6-10)芳基;(C7-14)芳烷基;和(C8-14)芳鏈烯基，其中每一個芳環可以是未被取代的，或者用一個或多個選自鹵素、(C1-8)烷基、(C1-8)烷氧基、羥基、硝基和氨基的基團取代;或R1和R2各自為(C1-8)烷基;或者R1和R2與它們所連接的碳結合形成(C5-6)環烷基;R3和R4系選自OH、-OSO2R6、-OSO3H及其藥用鹽，-OP(X)(OH)2及其藥用鹽和-OP(X)(OR7)2基團，其中R6為氫、(C1-5)烷基、苯基、(C1-5)烷基取代的苯基或苯基(C1-5)烷基;R7為磷酸酯保護基;X為氧或硫，但必須R3和R4不全是OH;R5為H或酚保護基。
優先選用的實例是其中R4為OH，R3為上述定義的式Ⅴ化合物。
另一方面，本發明提供了式(Ⅵ)化合物及其藥用鹽，
式中R1、R2和R5同上定義;R6為H或其鹽，或為R7。
除非另有說明，這里所用的術語有“磷酸酯”、“磷酸化作用”和有關術語，包括“硫代磷酸酯”，“硫代磷酸化作用”等等;“鹵素”和“鹵化物”是指氯、溴和碘;“烷基”是指直鏈和支鏈的碳鏈;符號“-L”表示離去基團，如氯化物，這在酯化反應中常會遇到。
起始物質4'-脫甲基表鬼臼脂素糖苷(Ⅰ)可以按美國專利3，524，844中所述的方法制備。為了有效地使糖部分的羥基衍生，首先需要保護活性的酚基。可以應用已知的方法，例如形成醚、醛縮醇或酯的方法保護式(Ⅰ)的4'-酚基。酚保護基的選擇不具體地加以限制，可以是本技術領域已知的常用保護基。保護基的選擇、保護酚基和脫去酚保護基的方法參見專題文獻，例如“Protective Groups in Organic Chemistry”，J.F.M.Mcomie，ED.，Plenum Press，1973。合適的酚保護基的實例有(但不限于這些)叔丁基、芐基、2-四氫吡喃基、2，2，2-三氯乙氧基羰基和芐氧基羰基;優先選用芐氧基羰基。
然后，可以用文獻中已知的常規方法將受保護的4'-脫甲基表鬼臼脂素糖苷(Ⅰ)糖部分的羥基轉變成本發明的磷酸酯、硫酸酯或磺酸酯。該反應通常是非區位專一的，并生成2″-，3″-和2″-，3″-雙衍生物的混合物，在磷酸化作用的情況下磷酸酯二聚物(式Ⅵ)也同樣生成混合物。用本領域公認的技術(例如柱層析)，可將產品混合物分離成各個獨立的成分。在反應結果中，反應混合物的分離不是關鍵性的。
磷酸化作用可以通過受保護的4'-酚(Ⅰ)和磷酰鹵(P(X)(CL)3)反應完成，反應在惰性有機溶劑(例如二氯甲烷或乙腈)中，在酸受體(最好為叔胺堿，例如吡啶或二異丙基乙胺)存在下進行。生成的中間體二氯磷酸酯的混合物可在應有的位置進行水解，得到磷酸單酯;如果在堿(例如碳酸氫鈉等)存在下進行水解，則得到相應磷酸單酯的鹽。然后脫去4'-酚保護基，得到本發明的磷酸酯。
用式R7OH醇(其中R7是磷酸酯保護基)處理，還可以將中間體二氯磷酸酯轉變成磷酸三酯。磷酸酯保護基包括(但不限于這些)用一個或多個鹵原子有選擇取代的(C1-5)烷基;用一個或多個選自(C1-5)烷基、鹵素和硝基有選擇取代的苯基;苯基(C1-5)烷基，其中苯環按以上所述有選擇地取代。在惰性有機溶劑中，在酸受體存在下使4'-酚受保護的(Ⅰ)和式(R7O)2P(X)-L化合物反應，也可以得到磷酸三酯。可以有選擇地脫去磷酸三酯上的R7基團，得到磷酸單酯，將該磷酸單酯與堿(例如碳酸氫鈉)反應，可以容易地使其轉變為藥用鹽。因此，磷酸三酯上的R7基團可以這樣選擇，以致于它可以和酚保護基同時脫去，或它可以有選擇地脫去而不影響其它基團。
于室溫下，使受保護的4'-酚(Ⅰ)與三氧化硫或其復合物(如三氧化硫-吡啶復合物)在惰性有機溶劑中反應，可以制得本發明的硫酸酯。應用本技術領域熟知的常用方法脫去酚基，得到產物。使硫酸酯衍生物與所需要的陽離子反應，可以容易地將硫酸酯衍生物轉變成它的藥用鹽。
將受保護的4'-酚(Ⅰ)與式R6SO2-L化合物反應，同樣可以得到本發明的磺酸酯。反應是在惰性有機溶劑中、于酸受體存在下、在室溫至約-20℃下完成的。脫去酚保護基，得到最終產物。
當然，合成本發明化合物不限制于以上概述的方法和試劑，還可以包括能夠在4'-脫甲基表鬼臼脂素糖苷的糖部分引入磷酸酯和磺酸酯基的其它方法。當然，反應條件將隨選用的起始物質而改變，并且反應條件可以由有經驗的熟練技術人員確定。
本發明的化合物可用于抑制哺乳動物(包括人)的惡性腫瘤的生長。一些化合物，尤其是磷酸酯和硫酸酯，可以看作為4'-脫甲基表鬼臼脂素糖苷的前體藥物，在體內通過宿主內原的因素或外原提供的因素使它們轉變成有效的母體藥物。上述前體藥物可以單獨服用，也可以與能在體內釋放有效成分的試劑(例如能使磷酸酯或硫酸酯基團裂解的酶)并用。合適的酶的實例有磷酸酯酶(例如堿性磷酸酯酶)和硫酸酯酶(例如芳基硫酸酯酶)。上述酶可以連結到腫瘤特定的抗體上，形成酶-抗體共軛物，于是在服用前體藥物之前、在服用前體藥物的同時或在服用前體藥物之后將該酶-抗體共軛物引入到帶有腫瘤的宿主中。在服用本發明的硫酸酯前體藥物中，前體藥物加上抗體-酶共軛物是優先選用的方式。抗體-酶共軛物、它們的制備和應用方法已分別在我們的共同未決專利申請211，301(申請日期1988年6月29日)以及它的原申請及在先主要的原申請[161，068(申請日期1988年2月26日)，081，382(申請日期1987年8月4日)]中詳細地公開。上述申請做為本申請的參考文獻。
評價本發明具有代表性的化合物對鼠移植的P388白血病的抗腫瘤活性。給五周齡的雌性CDF小白鼠腹膜內注射含有106淋巴白血病P388細胞。每天單次劑量經腹膜內注射受試化合物，觀察動物45天。測定處理組動物與未處理的對照組動物平均存活時間(MST)之比增加的百分率，并以%T/C表示。%T/C值為125或125以上的化合物被認為是有顯著的抗腫瘤作用。表Ⅰ顯示體內評價的結果;表Ⅰ只給出了最大的%T/C和具有最大效果的劑量。
表Ⅰ 對P388白血病的抗腫瘤作用化合物 劑量(mg/kg/天) MST的% T/C表鬼臼毒吡喃葡糖甙 120 250Ⅺ 120 185Ⅻ 30 120ⅩⅢ 30 125ⅩⅦ 60 195ⅩⅧ 30 115ⅩⅨ 30 100ⅩⅩⅢ 120 175ⅩⅩⅣ 60 130ⅩⅩⅥ 30 130ⅩⅩⅦ 120 105ⅩⅩⅧ 10 105用B16黑素瘤細胞研究本發明化合物的細胞毒性。在補充胎牛血清(10%)和卡那霉素(60mcg/ml)的伊格爾基本必需培養液中使B16黑素瘤細胞生長到對數生長期。收集腫瘤細胞并移植到帶有試驗物質的96孔微量滴定板內，接種物數量為3.0×104細胞/ml。在5%CO2和95%空氣的濕潤大氣壓下保溫72小時。用中性紅使細胞染色后，于540nm處用比色法測定對上述細胞系的細胞毒作用，并記錄抑制50%細胞生長的濃度(IC50)。IC50值高于100μg/ml一般認為沒有細胞毒作用。
表Ⅱ 在體外對B16黑素瘤的細胞毒性化合物 IC50(ug/ml)表鬼臼素吡喃葡糖甙 0.21Ⅺ 2.2Ⅻ 20ⅩⅢ 37ⅩⅦ 0.07ⅩⅧ 5.4ⅩⅨ 30ⅩⅩⅢ 0.32ⅩⅩⅣ 29ⅩⅩⅥ 8.0本發明提供了抑制黑素瘤腫瘤的方法，該方法包括給帶有腫瘤的宿主服用抑制腫瘤有效劑量的式Ⅴ或Ⅵ抗腫瘤化合物。為此，可以通過普通的途徑(例如靜脈、肌內、瘤內、動脈內、淋巴內或經口)給藥，但是也不僅限于這些途徑。在某些情況下，藥物可以與在體內能夠使藥物活化的抗體-酶共軛物一起服用。
另一方面，本發明還提供了包括式Ⅴ或Ⅵ化合物及藥用載體的藥用組合物。可以將抗腫瘤組合物制成適用于所需給藥途徑的制劑形式。所述組合物的實例包括用于口服的固體組合物，其制劑有例如片劑、膠囊劑、小丸劑、粉劑和顆粒劑;適用于口服的液體組合物，其制劑有例如溶液劑、懸浮劑、糖漿劑和馳劑，以及適用于非經腸道給藥的制劑，例如無菌溶液劑、懸浮劑或乳劑。也可以將它們制成無菌固體組合物的形式，在應用前將該無菌固體組合物直接溶于滅菌水、生理鹽水或其它無菌可注射的介質中。
給予哺乳動物宿主的最佳劑量和方式可以由熟習本技術領域的工作人員容易地確定。當然，應該懂得，使用的實際劑量將根據具體配制的組合物、應用的具體化合物、應用的方式和具體的部位、需治療的宿主和疾病的情況而改變。要考慮到能改變藥物作用的許多因素，這些因素包括年齡、體重、性別、飲食、服藥時間、給藥途徑、排泄速度、患者的狀況、藥物配方、反應敏感性以及疾病的嚴重程度。
下述實施例只是為了詳細敘述本發明，不應將其解釋為對本發明范圍的限制，本發明的范圍由附在本申請后的權利要求書單獨地限定。
實施例1a.4'-O-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙(Ⅶ)的制備在30分鐘內將氯甲酸芐酯(1.98ml，15mmol)加到由表鬼臼毒吡喃葡糖甙(5.88g，10mmol)、吡啶(10ml)以及二氯甲烷(100ml)組成的混合物中，溫度保持在-15℃。混合物在-15℃另外攪拌1小時，依次用5%鹽酸、碳酸氫鈉水溶液和水洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥。蒸發溶劑得到8.05g粗產物，再經硅膠柱(5%甲醇-二氯甲烷)純化，得6.93g(96%)的4'-O-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙，為無色半固體狀物。
熔點152-155℃IR γmax(液體石蠟)cm-13200-3600(OH)，1760(內酯和4'-O-芐氧基羰基)，1600(芳族的)。
1H NMR(60MHz，CDCl3)δ7.36(5H，s，OCO2CH2Ph)，6.81(1H，s，5-H)，6.50(1H，s，8-H)，6.25(2H，s，2′-and 6′-H)，5.94(2H，br.s，O-CH2-O)，5.23(2H，s，-OCO2CH2Ph)，4.89(1H，d，J＝4Hz，4-H)，3.66(6H，s，3′，5′-OCH3)，2.8-3.0(2H，m，2″，3″-OH，D2O交換)，1.38(3H，d，J＝5Hz，7″-CH3).
b.4'-O-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙的磷酸化將三氯氧磷(280μl，3mmol)慢慢加到冷至0℃的4'-O-芐氧基羰基表臼毒吡喃葡糖甙(1.511g，2.1mmol)在無水二氯甲烷(10ml)和吡啶(10ml)的溶液中，并將混合物在0℃攪拌45分鐘。然后加入芐醇(620μl，6mmol)，使反應混合物溫熱到室溫，攪拌2小時后用二氯甲烷(50ml)稀釋，用水洗滌，經硫酸鈉干燥。溶劑經真空蒸發，得2.40g粗的半固體產物，其中含有三種成分(硅膠薄層層析Rf0.66，0.54，0.46)，用硅膠層析分離(1%甲醇-二氯甲烷)。合并Rf＝0.66的部分，并經真空蒸發，得到435mg(21%)4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-磷酸二芐基酯(Ⅷ)。同樣Rf＝0.54和0.46的部分分別提供352mg(21%)雙(4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-O-)磷酸芐基酯(Ⅸ)和262mg(13%)4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-磷酸二芐基酯(Ⅹ)。
IR νmax(液體石蠟)cm-1Ⅷ 3300(寬峰)1760，1600Ⅸ 3300(寬峰)1760，1600Ⅹ 3350、1760、1600c.制備3″-和2″-表鬼臼毒吡喃葡糖甙磷酸二鈉和雙(表鬼臼毒吡喃葡糖甙基-3″-)磷酸酯鈉
4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-磷酸二芐基酯(270mg)的甲醇(20ml)和乙酸乙酯(20ml)溶液中含有10%鈀碳(50mg)，在1個大氣壓下將該溶液氫化1小時。催化劑經過濾除去，濾液在真空下濃縮，得到188mg半固體，將它與乙酸乙酯一起研磨，得到145mg(79%)表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-二氫磷酸酯，為淺棕色粉末狀物。將135mg該產品溶于碳酸氫鈉水溶液中(33.6mg在2ml水中)，并冷凍干燥，得到140mg表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-磷酸酯二鈉(化合物Ⅺ)，為灰色粉末。純度測定95%，高效液相色譜法(Lichrosorb RP-18，70%甲醇-水)。
熔點262-263℃(分解)IR νmax(液體石蠟)cm-13377(寬峰)、1762、1615UV λmax(甲醇)nm(ε)238(肩峰)，13，000)，285(4，010)SIMS m/z713(M+H)+根據上述方法，將97mg 4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-磷酸二芐基酯氫化，得到70mg(約100%)表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-磷酸酯二鈉(化合物ⅩⅡ)，為灰色粉末狀物。
純度測定95%，高效液相色譜法。
熔點255-257℃(分解)IR νmax(KBr)cm-13460，1772、1615UV λmax nm(ε)240(肩峰，12，600)，
284(3，740)SIMS m/z713(M+H)+，735(M+Na)+。
同樣地，將135mg雙(4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-)磷酸芐基酯氫化，得60mg(58%)雙(表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-)磷酸酯鈉(化合物ⅩⅢ)，為淺灰色粉末狀物。
純度測定95%，高效液相色譜法熔點265-266℃(分解)IR νmax(KBr)cm-13460，1772，1620。
UV λmax(甲醇)nm(ε)240(肩峰，24，600)285(7，730)SIMS m/z1262(M+H)+，1285(M+Na)+。
實施例2a.4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙的甲苯磺酰化于0℃將4'-二甲氨基吡啶(200mg)和甲苯磺酰氯(870mg，4.6mmol)加到4'-芐氧基羰基表鬼臼吡喃葡糖甙(實施例1步驟a的產品2.2g，3mmol)的無水吡啶(50ml)溶液中，混合物在室溫下攪拌3天。再將分子篩(4A)和另外的甲苯磺酰氯(870mg，4.6mmol)加到混合物中，在室溫下連續攪拌一個星期。在攪拌一星期后濾去沉淀，濾液用CH2Cl2稀釋，用水、5%鹽酸NaHCO3水溶液和水洗滌，經無水硫酸鈉干燥，然后在真空下濃縮，得含有三種成分的粗固體(2.35g)(硅膠薄層層析Rf0.8、0.6和0.4)，用硅膠柱層析分離(2%甲醇-CH2Cl2)。將Rf0.8的部分合并，并在真空下蒸發，得602mg(19%)4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″，3″-二甲苯磺酸酯(ⅩⅣ)，為無色粉末狀物。同樣，Rf0.6和R 0.4的部分分別得到690mg(26%)4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲苯磺酸酯(ⅩⅤ)和156mg(6%)4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-甲苯磺酸酯(ⅩⅥ)，為無色粉末狀物，具有吸濕性。
4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲苯磺酸酯ⅩⅤ熔點145-148℃元素分析，C44H44O17S.3H2O計算值C56.77，H5.41，S3.44實測值C56.84，H4.91，S3.904'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-甲苯磺酸酯ⅩⅥ熔點135-139℃元素分析C44H44O17S.3H2O計算值C56.77，H5.41，S3.44實測值C56.61，H4.89，S3.704'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″，3″-二甲苯磺酸酯(ⅩⅣ)熔點149-152℃b.表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-和2″-甲苯磺酸酯和2″，3″-二甲苯磺酸酯的制備于一個大氣壓和10%鈀碳(40mg)存在下，將4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲苯磺酸酯(47mg，0.05mmol)在乙醇-丙酮(4∶1，2.5ml)中的溶液邊攪拌邊氫化1小時。過濾除去催化劑，濾液在真空中濃縮，得到表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲苯磺酸酯(化合物ⅩⅦ)(42mg，約100%)，為無色粉末狀物，然后在甲醇中重結晶，得到無色的晶體。
純度測定90%，高效液相色譜法。
熔點175-178℃IR νmax(KBr)cm-13500(寬峰)，1780，1600UV λmax(MeoH)nm(ε)245(肩峰，10，260)284(3，900)元素分析，C36H38O15S計算值C58.21，H5.16，S4.32實測值C57.80，H5.14，S4.43根據上述方法，將100mg(0.09mmol)4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-甲苯磺酸酯氫化，得114mg(約100%)表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-甲苯磺酸酯(化合物ⅩⅧ)，為無色粉末狀物，在甲醇中重結晶，得到具有吸濕性的結晶。
純度測定90%，高效液相色譜法。
熔點210-212℃IR νmax(KBr)cm-13500(寬峰)，1780，1600UV λmax(MeoH)nm(ε)243(肩峰，4，560)282(1，450)元素分析，C36H38O15S.H2O計算值C56.83，H5.30，S4.21實測值C56.87，H5.37，S4.19同樣，將80mg(0.08mmol)4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″，3″-二甲苯磺酸酯氫化，得72mg(約100%)表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-，3″-二甲苯磺酸酯(化合物ⅩⅨ)，為無色粉末狀物，在甲醇中重結晶得無色結晶。
純度測定90%，高效液相色譜法。
熔點169-171℃IR νmax(KBr)cm-13400(寬峰)，1770、1600UV λmax(甲醇)nm(ε)245(肩峰，11，750)284(3，840)實施例3a.4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙的甲磺酰化將甲磺酰氯(270μl，2.8mmol)加到4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙(1.00g，1.4mmol)的無水吡啶(50ml)溶液中，混合物在室溫下攪拌過夜。反應混合物用乙酸乙酯稀釋，用水、5%鹽酸、碳酸氫鈉水溶液和水洗滌，經硫酸鈉干燥，然后過濾。濾液經真空濃縮得到粗固體(1.4g)，其中含有三種成分(硅膠薄層層析Rf0.51，0.44和0.40)，并用硅膠柱層析分離(1%甲醇-二氯甲烷)。將Rf0.51的部分合并，并在真空中蒸發，得440mg(36%)4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″，3″-二甲磺酸酯(ⅩⅩ)。同樣，Rf0.44和0.40的部分分別得到314mg(32%)4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲磺酸酯(ⅩⅪ)和248mg(26%)4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-甲磺酸酯(ⅩⅩⅡ)，為無色粉末狀物。
4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲磺酸酯(ⅩⅪ)溶點167-170℃元素分析C38H40O17S.1/2H2O計算值C56.36，H4.98，S3.96實測值C56.23，H5.06，S4.144'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-二甲磺酸酯(ⅩⅩⅡ)熔點159-161℃(吸濕)元素分析C38H40O17S.3H2O計算值C55.13，H5.11，S3.87實測值C55.29，H5.00，S4.004'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″，3″-二甲磺酸酯熔點226-228℃元素分析，C39H42O19S2.1/2H2O
計算值C52.76，H4.77，S7.22實測值C52.78，H4.77，S7.31b.表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-和2″-甲磺酸酯的制備在1個大氣壓和10%鈀碳(30mg)存在下，將4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲磺酸酯(60mg，0.07mmol)在乙醇-丙酮(4∶1，2.5ml)中的溶液邊攪拌邊氫化反應1小時。濾去催化劑后，濾液在真空下濃縮，得到表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-甲磺酸酯(化合物ⅩⅩⅢ)，為無色粉末狀物。
純度測定90%，高效液相色譜法熔點226-229℃IR νmax(KBr)cm-13500(寬峰)，1770，1610UV λmax(甲醇)nm(ε)740(肩峰，12，900)286(3，950)同樣，將30mg(0.04mmol)4″-芐氧基羰基表臼毒吡喃葡糖甙2″-甲磺酸酯氫化，得23mg(94%)表鬼臼毒吡喃葡糖甙2″-甲磺酸酯(化合物ⅩⅩⅣ)，為無色粉末狀物。
純度測定95%，高效液相色譜法熔點179-181℃IR νmax(KBr)cm-13500(寬峰)，1770，1620UV λmax(甲醇)(ε)240(肩峰12，200)285(3，950)
實施例44'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙(350mg，0.5mmol)和二苯膦酰氯(322mg，1.2mmol)的混合物在室溫下攪拌2天，用二氯甲烷(50ml)稀釋，用水、10%鹽酸和碳酸氫鈉水溶液洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥。溶劑在真空下蒸發，得4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-二苯磷酸酯，為粗的半固體狀物(290mg)。該半固體(190mg)溶液在1個大氣壓和10%鈀碳催化劑存在下邊攪拌邊進行氫化反應。濾去催化劑后，濾液在真空下濃縮，得到131mg粗的半固體狀物，然后在硅膠柱上進行層析(1%甲醇-二氯甲烷)，得59mg(20%)表鬼臼毒吡喃葡糖甙3″-二苯磷酸酯(化合物ⅩⅩⅥ)。
純度測定80%，高效液相色譜法熔點126-130℃IR νmax(液體石蠟)cm-13350，1770，1600FAB MS M/Z 820(M+)實施例53″-和2″-表鬼臼毒吡喃葡糖甙硫酸酯鈉鹽的制備在氬氣氛下向4'-芐氧基羰基表鬼臼毒吡喃葡糖甙(500mg，0.69mmol)的無水吡啶(20ml)溶液中加入三氧化硫-吡啶復合物(330mg，2.07mmol)。在室溫下攪拌3小時后，另外再加入三氧化硫-吡啶復合物(250mg，1.59mmol)，在室溫下攪拌15小時。混合物在真空和40℃以下濃縮，得粗制的油狀物(1.2g)，用硅膠柱層析(2%甲醇-二氯甲烷)，得到2″-和3″-硫酸酯的混合物(411mg)。在1個大氣壓和10%鈀碳(400mg)存在下，將混合物(400mg，0.49mmol)乙醇-丙酮(4∶1，15ml)中的溶液邊攪拌邊進行氫化。過濾除去催化劑，濾液在真空下濃縮，得370mg區位異構體的混合物，經C-反相柱層析得到52mg(16%)3″-硫酸酯鹽(ⅩⅩⅦ)，107mg(32%)2″-硫酸酯鹽(ⅩⅩⅧ)，以及138mgⅩⅩⅦ和ⅩⅩⅧ的混合物。使3″-硫酸鹽通過DoWex50W(Na+)樹脂，以水為洗脫劑，水溶性部分經冷凍干燥，得到化合物ⅩⅩⅦ相應的鈉鹽，為無色粉末狀物。同樣，也得到ⅩⅩⅧ的鈉鹽，為無色粉末狀物。
ⅩⅩⅦ熔點223-225℃純度測定90%，高效液相色譜法IR νmax(KBr)cm-13440，1770，1620UV λmax(甲醇)nm(ε)240(肩峰，11，600)284(3，670)SIMS M/Z691(M+H)+，713(M+Na)+ⅩⅩⅧ熔點246-247℃純度測定95%，高效液相色譜法
IR νmax(KBr)cm-13450，1770，1620UV λmax(甲醇)nm(ε)240(肩峰，11，200)285(3，650)SIMS M/Z691(M+H)+，713(M+Na)+實例1-5中制備的化合物其結構如下
實施例號化合物 R1R3R4R51a Ⅶ CH3-OH -OH CBZ*1b Ⅷ CH3(BzO)2PO2- -OH CBZ1b Ⅹ CH3OH (BzO)2PO2- CBZ1c Ⅺ CH3(NaO)2PO2- -OH H1c Ⅻ CH3-OH (NaO)2PO2- H2a ⅩⅣ CH3pCH3-C6H4-SO3- pCH3-C6H4-SO3- CBZ2a ⅩⅤ CH3pCH3-C6H4-SO3- OH CBZ2a ⅩⅥ CH3-OH pCH3-C6H4-SO3- CBZ2b ⅩⅦ CH3pCH3-C6H4-SO3- OH H2b ⅩⅧ CH3OH pCH3-C6H4-SO3- H2b ⅩⅨ CH3pCH3-C6H4-SO3- pCH3-C6H4-SO3- H3a ⅩⅩ CH3CH3SO3- CH3SO3- CBZ3a ⅩⅪ CH3CH3SO3- OH CBZ3a ⅩⅩⅤ CH3OH CH3SO3- CBZ3b ⅩⅩⅢ CH3CH3SO3- OH H3b ⅩⅩⅣ CH3OH CH3SO3- H4 ⅩⅩⅤ CH3(PhO)2PO2OH CBZ4 ⅩⅩⅥ CH3(PhO)2PO2OH H5 ⅩⅩⅦ CH3NaSO4- OH H5 ⅩⅩⅧ CH3OH NaSO4- H
*CBZ=芐氧基羰基 Bz=芐基
實施例化合物 R1R5R81b Ⅸ CH3CBZ Bz1c ⅩⅢ CH3H Na-實施例6用表鬼臼毒噻吩糖苷代替表鬼臼毒吡喃葡糖甙重復實例1-5的一般步驟，得到表鬼臼毒噻吩糖苷化合物Ⅶ-ⅩⅩⅧ的類似物(即R1是2-噻吩基)。
權利要求
1.制備具有下式的化合物的方法，
其中R8是氫或其藥用鹽，或為R7；R2是H，R1系選自(C1-10)烷基和2-噻吩基；R7為芐氧羰基或苯基；R5是氫或芐氧羰基；R3和R4選自OH，和-OP(X)(OR7)2，并且R3和R4不全是OH基，X為氧和R7為芐氧羰基或苯基；該方法包括下列步驟a.保護下式化合物的4′-酚基
其中R1和R2的定義同上；b.將步驟a得到的保護了的4′-酚基化合物與POCl3反應，在原位用R7OH醇處理所生成的中間體；c.任意地除去磷酸酯保護基R7；d.任意地除去4′-酚基保護基，e.分離異構體；和f.任意地將由步驟e得到的產物轉化成其藥用鹽。
全文摘要
本發明涉及在分子中糖的部分有磷酸酯取代基或磺酸酯取代基的4′-脫甲基表鬼臼脂素糖苷的制備方法。該類化合物具有抗腫瘤作用。
文檔編號A61K31/7042GK1071929SQ9211343
公開日1993年5月12日 申請日期1992年11月25日 優先權日1988年10月31日
發明者大沼猛, 山崎哲路, 龜井英夫, 內藤高幸, 馬克·索爾尼爾 申請人:布里斯托爾-米爾斯公司