一種富含IgM的人免疫球蛋白制劑及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及血液制品的制備方法，特別涉及一種富含IgM的人免疫球蛋白制劑及 其制備方法。
【背景技術】
[0002] 富含IgM的人免疫球蛋白制劑，主要成分由IgG、IgM組成，用于抗細菌感染及自身 免疫疾病的治療，由人血漿分離制備而成。由于人血漿中IgA含量很高，而且IgM和IgA的 很多理化性質相似，二者的分離非常困難，導致富含IgM免疫球蛋白制劑中含有大量IgA， 而大量IgA的存在會導致選擇性IgA缺乏病患者過敏，嚴重的可致休克或死亡。
[0003] 目前最常用的一種富含IgM的人免疫球蛋白制劑，其組分為12% IgM、12% IgA、 76% IgG，其IgA的含量高達12%，與IgM含量相當，存在嚴重的安全隱患，副作用大。
[0004] 急需提供一種IgA含量低的富含IgM的人免疫球蛋白制劑。

【發明內容】

[0005] 為了解決上述問題，本發明提供了一種新的IgA含量低的富含IgM的人免疫球蛋 白制劑及其制備方法。
[0006] 本發明富含IgM的人免疫球蛋白制劑，它是以如下重量百分比的組分為活性成 分：IgM :大于12 %、IgA :小于2 %、IgG :84~88 %，加上藥學上可接受的輔料制備而成的制 劑。優選地，它是以如下重量百分比的組分為活性成分：IgM :12. 3~13. 8%、IgA :0. 7~ 1. 5%、IgG :85. 5~86. 2%，加上藥學上可接受的輔料制備而成的制劑。進一步優選地，它 是以如下重量百分比的組分為活性成分：IgM :13. 8%、IgA :0. 7%、IgG :85. 5%。
[0007] 本發制備前述富含IgM的人免疫球蛋白制劑的方法，步驟如下：取前述IgM組分， 加入IgG組分，混勻，透析，濃縮，除菌過濾，分裝、凍干，即可。所述IgM組分含有如下重量 百分比的成分：IgM :66· 18 ~86. 3%、IgA :4· 6 ~12. 46%、IgG :6· 5 ~21. 36% ;所述 IgG 組分中IgG含量為彡99%。
[0008] IgM組分：是指從血漿中分離的富含IgM的組分。
[0009] 優選地，所述IgM組分含有如下重量百分比的成分：IgM :86. 3%、IgA :4. 6%、IgG : 9. 1%〇
[0010] 本發明制備前述人免疫球蛋白的IgM組分的方法，它包括如下步驟：
[0011] (1)溶解：將Cohn組分I + II + III或者Cohn組分II + III溶于注射用水中；
[0012] (2)辛酸沉淀：用辛酸或辛酸鹽沉淀雜質，過濾，得濾液；
[0013] (3)第一步陰離子交換層析：將步驟（2)所得溶液調節pH至5. 0-5. 3,用陰離子交 換層析純化，收集流穿液；
[0014] (4)第二步陰離子交換層析：將步驟（3)所得流穿液調節pH至6. 2-6. 5,上陰 離子交換層析柱，梯度洗脫：用含有100mM-150mM氯化鈉的醋酸鹽緩沖液洗脫，再用含有 200mM-300mM氯化鈉的醋酸鹽緩沖液洗脫，收集洗脫液，即為IgM組分。
[0015] 所述步驟（1)為：取Cohn組分I + II + III或者Cohn組分II + III，加入注射用水 中，5°C攪拌至其溶解，調節pH為4. 2,再在25°C水浴加熱攪拌2h。
[0016] 所述步驟（2)為：加入濃度為10mM-15mM的辛酸或辛酸鹽，調節pH為5. 0-5. 2,于 25°C水浴加熱攪拌2h，8°C靜置2h，過濾，得濾液。
[0017] 所述步驟（2)中獲得濾液后進行超濾濃縮，得濃縮液。
[0018] 步驟（3)中，所述溶液的pH調節至5. 3。
[0019] 步驟（3)中，所述陰離子交換層析的填料為Capto Q、Gigacap Q或者Unosphere Q0
[0020] 步驟⑷中，所述流穿液調節pH至6. 2。
[0021 ] 步驟（4)中，所述梯度洗脫是：用含有120mM或者150mM氯化鈉的醋酸鹽緩沖液洗 脫，再用含有250mM或者300mM氯化鈉的醋酸鹽緩沖液洗脫，收集洗脫液。
[0022] 所述IgG組分可以按照常規方法制備，也可以按照如下方法制備：
[0023] (1)溶解：將Cohn組分I + II + III或者Cohn組分II + III溶于注射用水中；
[0024] (2)辛酸沉淀：用辛酸或辛酸鹽沉淀雜質，過濾，得濾液；
[0025] (3)第一步陰離子交換層析：將步驟（2)所得溶液調節pH至5. 0-5. 3,用陰離子交 換層析純化，收集流穿液；
[0026] (4)第二步陰離子交換層析：將步驟（3)所得流穿液調節pH至6. 2-6. 5,上陰離子 交換層析柱，收集流穿液即可。
[0027] 所述步驟（1)為：取Cohn組分I + II + III或者Cohn組分II + III，加入注射用水 中，5°C攪拌至其溶解，調節pH為4. 2,再在25°C水浴加熱攪拌2h。
[0028] 所述步驟（2)為：加入濃度為10mM-15mM的辛酸或辛酸鹽，調節pH為5. 0-5. 2,于 25°C水浴加熱攪拌2h，8°C靜置2h，過濾，得濾液。
[0029] 所述步驟（2)中獲得濾液后進行超濾濃縮，得濃縮液。
[0030] 步驟（3)中，所述溶液的pH調節至5. 3。
[0031] 步驟（3)中，所述陰離子交換層析的填料為Capto Q、Gigacap Q或者Unosphere Q0
[0032] 本發明方法可以有效分離IgA和IgM，制得的IgM組分中，IgA含量低，進而使得用 該IgM組分配制的富含IgM的人免疫球蛋白制劑的，IgA含量也非常低，副作用小，安全性 高，臨床應用前景良好。
[0033] 顯然，根據本發明的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離 本發明上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0034] 以下通過實施例形式的【具體實施方式】，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說 明。但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發明上述內容 所實現的技術均屬于本發明的范圍。
【附圖說明】
[0035] 圖1本發明富含IgM免疫球蛋白制劑的制備工藝流程圖
【具體實施方式】
[0036] 實施例1用本發明富含IgM的免疫球蛋白制劑的制備
[0037] 1、實驗材料
[0038] Cohn組分I + I + I或者組分I + I :按照《醫學生物制品學》（人民衛生出版 社），第二版，1194頁記載的低溫乙醇沉淀法制備。
[0039] 鹽酸、辛酸、Capto Q 填料、Gigacap Q 填料、Unosphere Q 填料、Macrocap Q、娃藻 土和Beckman IMAGE IgA檢測試劑盒，均為市售品。
[0040] 2、實驗方法
[0041 ] 流程圖如圖1所示：
[0042] 2. 1分離純化方法：
[0043] 4kg組分I+II+III沉淀溶解于40L 5°C注射用水中，攪拌lh，使用0. 5M醋酸調整 pH至4. 20, 25°C水浴加熱攪拌2h，以增加所需的IgG的溶解度，充分溶解。
[0044] 在混懸液直接加入辛酸至終濃度15mM，使用0· 5M NaOH調pH至5. 20, 25°C水浴加 熱攪拌2h，8°C靜置2h ;
[0045] 過濾，采用截留分子量為的超濾器進行超濾濃縮，使濃縮液的體積 為濃縮前的1/2-1/3 ;
[0046] 將濃縮液調節pH至5. 3,用Capto Q填料進行第一步陰離子交換層析，收集流穿 液；
[0047] 將層析流穿液的pH調至6. 2,進行第二步陰離子交換層析，所用填料為Macrocap Q，收集層析流穿液，即得IgG組分；
[0048] 用 pH 6. 230mM NaAc+120mM NaCl 緩沖液過柱，洗脫，即得 IgA 組分；用 pH 6. 230mM NaAc+250mM NaCl緩沖液過柱，洗脫，即得IgM組分。
[0049] 2. 2 配制
[0050] 測定IgM組分與IgG組分中的IgG、IgM、IgA的含量，根據檢測值計算合適的混合 比例（以終產品的IgM理論值為12%，計算IgM組分與IgG組分的混合比例），將上述IgM 組分與IgG組分按計算的體積比例混合，混合液用截留分子量為的超濾器濃 縮，并用8-10倍體積注射用水透析，最終濃縮至蛋白質含量50mg/ml。濃縮液中加入麥芽糖 使濃度為10 %，調PH至3. 8-4. 4,除菌過濾，于24°C低pH孵放21天，除菌分裝，經凍干，即 得富含IgM免疫球蛋白制劑成品，抗補體活性檢測結果〈50%。
[0051] 3、產品檢驗
[0052] 檢測結果見下表。
[0053]
[0054] ND:未檢測到·
[0055] 由上表可以看出，本發明方法分離的IgM組分中，IgA濃度僅為0. 416mg/ml，所占 比僅為10. 5%，非常低。
[0056] 本發明富含IgM的免疫球蛋白制劑中，IgM含量為12. 3%，IgA含量為1.52%，IgG 含量為86. 2 %，其中的IgA含量非常低，副作用小，安全性高。
[0057] 實施例2用本發明富含IgM的免疫球蛋白制劑的制備
[0058] 1、實驗材料
[0059] Cohn組分I + I + I或者組分I + I :按照《醫學生物制品學》（人民衛生出版 社），第二版，1194頁記載的低溫乙醇沉淀法制備。
[0060] 鹽酸、辛酸、Capto Q 填料、Gigacap Q 填料、Unosphere Q