用于人體血清免疫球蛋白溶液制劑的儲存穩定劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及藥物添加劑，具體是靜脈注射用的人體血清免疫球蛋白溶液制劑的儲 存使用的穩定劑。
【背景技術】
[0002] 人體血清免疫球蛋白（IgG)制劑主要用于原發性和繼發性免疫球蛋白缺乏癥，以 及其他的自身免疫性疾病，如原發性血小板減少性紫癜、川崎病等。
[0003] IgG是從人血漿中純化得到，其由B細胞和漿細胞接觸抗原后產生，其分子量大 約為150KDa，由四條肽鏈組成，兩條完全相同的輕鏈（L)和重鏈（H)通過兩個二硫鍵共價相 連，除此之外，以非共價交聯形成一個均勻對稱的Y型二聚物。輕鏈由兩個同源結構域組 成，重鏈由四個同源結構域組成，這些結構域的特征是包含2個β -折疊結構，包括3到5 個反相平行鏈，通過一個二硫鍵來維持結構穩定。這些結構域對熱敏感，在室溫儲存下 其二級結構可發生改變，導致形成多聚體，免疫球蛋白制劑儲存過程多聚體不斷增加，藥效 逐漸降低，通過靜脈注射后，多聚體還會產生副作用。
[0004] CN103282042A公開一種具有組氨酸的、且在弱酸性至中性pH下儲存穩定的免疫 球蛋白水性制劑，包括免疫球蛋白，從50mM至500mM的組氨酸，從OmM至IOmM的堿金屬陽 離子，以及從5. 5至7. 0的pH，可使免疫球蛋白在弱酸性至中性條件下穩定。但在高溫、高 濃度或者儲存時間較長時，免疫球蛋白聚合程度仍然較高。

【發明內容】

[0005] 本發明的目的是提供一種可減少或避免人體血清免疫球蛋白溶液制劑在儲存過 程發生聚合的穩定劑，通過添加穩定劑，可減少免疫球蛋白因高溫、高濃度或儲存時間較長 而發生的聚合，提高藥物的有效性。
[0006] 本發明的儲存穩定劑是免疫球蛋白溶液制劑中含有L-半胱氨酸或其鹽酸鹽、谷 胱甘肽的一種或以上的巰基保護劑，其濃度為3 - 20mmol/L ;含有麥芽糖或海藻糖的一種 或以上的糖穩定劑，其濃度為150- 600mmol/L ;以及含有脯氨酸或其鹽、甘氨酸或其鹽、絲 氨酸或其鹽的一種或以上的氨基酸穩定劑，其濃度為12 - 150mmol/L。
[0007] 優選的是，巰基保護劑的摩爾濃度為4一8mmol/L，糖穩定劑的摩爾濃度為250- 400mmol/L，氨基酸穩定劑的摩爾濃度為20-80mmol/L〇
[0008] 免疫球蛋白溶液制劑的pH值優選為4一 6。
[0009] 本發明所使用巰基保護劑可保護免疫球蛋分子內二硫鍵，維持其三級和四級結 構，糖穩定劑用于保護免疫球蛋白分子中β折疊的二級結構穩定，氨基酸穩定劑可促進免 疫球蛋白分子間的均勻分離，穩定其天然構象。由此可避免或減少免疫球蛋白溶液制劑在 長期儲存過程進一步聚合，提高儲存穩定性，在室溫及室溫以下環境中制劑儲存2年后，免 疫球蛋白多聚聚體小于1%，在37°C環境中制劑儲存2年后，免疫球蛋白多聚體小于2%。
【具體實施方式】
[0010] 實施例1 取經病毒滅活后的人體血清免疫球蛋白層析溶液(純度99. 2%，濃度0. 37mmol/L)，超 濾濃縮配制成濃度為l〇wt%的免疫球蛋白溶液，取IL樣品，添加葡萄糖至230mmol/L，調節 pH至4. 1作為空白對照樣品，另取3L，添加谷胱甘肽至6mmol/L，麥芽糖至300mmol/L，脯氨 酸至50mmol/L，調節pH至4. 1，分成樣品1、樣品2、樣品3各1L。制品于室溫儲存條件下對 分子大小分布進行考察。
[0011] 分子大小分布采用高效液相色譜法進行檢查：用親水硅膠高效體積排阻色譜柱 (SEC，排阻極限300kD，粒度ΙΟμπι)，柱直徑7. 5mm，長60cm;以含1%異丙醇，pH值7. 0， 0· 2mol/L磷酸鹽緩沖液(取0· 5mol/L磷酸二氫鈉200ml、0. 5mol/L磷酸氫二鈉420ml、異丙 醇15. 5ml及水914. 5ml均勻混合）為流動相；檢測波長為280nm ;流速為每分鐘0. 6ml ;分 別取每1ml含蛋白質為12mg的免疫球蛋白、人血白蛋白溶液各20 μ 1，分別注入色譜柱，記 錄色譜圖，免疫球蛋白對照單體峰與裂解體峰的分離應大于1. 5,人血白蛋白對照品單體峰 與二聚體峰的分離度應大于1. 5,拖尾因子按人血白蛋白單體峰計算應為0. 95- 1. 40。按 面積歸一法計算，色譜圖中單體加二聚體峰的含量，即為免疫球蛋白單體加二聚體含量。
[0012] 儲存3、6、9、12和24個月時測定免疫球蛋白單體加二聚體含量，結果如下表。
【主權項】
1. 一種用于人體血清免疫球蛋白溶液制劑的儲存穩定劑，其特征在于：所述免疫球蛋 白溶液制劑中含有L-半胱氨酸或其鹽酸鹽、谷胱甘肽的一種或以上的巰基保護劑，其濃度 為3-20mmol/L ;含有麥芽糖或海藻糖的一種或以上的糖穩定劑，其濃度為150-600mmol/ L ;以及含有脯氨酸或其鹽、甘氨酸或其鹽、絲氨酸或其鹽的一種或以上的氨基酸穩定劑，其 濃度為 12 -150mmol/L〇
2. 根據權利要求1所述儲存穩定劑，其特征在于，所述巰基保護劑的濃度為4一 10mmol/L〇
3. 根據權利要求1所述儲存穩定劑，其特征在于，所述糖穩定劑的濃度為250- 400mmol/L〇
4. 根據權利要求1所述儲存穩定劑，其特征在于，所述氨基酸穩定劑的濃度為20- 80mmol/L〇
5. 根據權利要求1所述儲存穩定劑，其特征在于，所述免疫球蛋白溶液制劑pH=4- 6。
【專利摘要】本發明公開一種可減少或避免人體血清免疫球蛋白溶液制劑在儲存過程發生聚合的穩定劑，免疫球蛋白溶液制劑中含有L-半胱氨酸或其鹽酸鹽、谷胱甘肽的一種或以上的巰基保護劑，其濃度為3-20mmol/L；含有麥芽糖或海藻糖的一種或以上的糖穩定劑，其濃度為150-600mmol/L；以及含有脯氨酸或其鹽、甘氨酸或其鹽、絲氨酸或其鹽的一種或以上的氨基酸穩定劑，其濃度為12-150mmol/L，通過添加穩定劑，可減少免疫球蛋白因高溫、高濃度或儲存時間較長而發生的聚合，提高藥物的有效性。
【IPC分類】A61K9-08, A61K47-16, A61K47-26, A61K47-20
【公開號】CN104826117
【申請號】CN201510221517
【發明人】黃錦程, 陳成坤, 王文杰, 黃邦春, 周仁花, 吳艷親
【申請人】廣東衛倫生物制藥有限公司
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年5月5日