一種免疫球蛋白e免疫比濁法檢測試劑盒的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及臨床體外檢測試劑技術領域，特別涉及一種免疫球蛋白E免疫比濁法 檢測試劑盒。
【背景技術】
[0002] 免疫球蛋白為五類，即免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白 M(IgM)、免疫球蛋白D(IgD)和免疫球蛋白E。其主要作用是與抗原起免疫反應，生成抗 原-抗體復合物，從而阻斷病原體對機體的危害，使病原體失去致病作用。另一方面，免疫 球蛋白有時也有致病作用。臨床上的過敏癥狀如花粉引起的支氣管痙攣，青霉素導致全身 過敏反應，皮膚蕁麻疹（俗稱風疹塊）等。免疫球蛋白制劑能增強人體抗病毒的能力，可作 藥用。如注射人血清或人胎盤中提取的丙種球蛋白制劑可防治麻疹、傳染性肝炎等傳染病。
[0003] 免疫球蛋白E(IgE)是一類具有δ鏈的親同種細胞抗體，是參與過敏性鼻炎、過敏 性哮喘和濕疹等發病機制調節的主要抗體。自1966年日本學者Ishizaka發現IgE以來， 有關IgE的研究已取得重大進展，并先后在肥大細胞、嗜堿細胞、嗜酸細胞和巨噬細胞表面 發現了 IgE受體，還分別從各種過敏性疾病患者包括過敏性哮喘患者血清中分離出針對多 種花粉、塵螨、霉菌和動物皮毛的特異性IgE，近年證實許多細胞因子如IL-4、γ-干擾素均 參與了 IgE合成的調節。IgE抗體既能啟動速發相過敏反應，也可誘發遲發相過敏反應。
[0004] IgE是由兩條輕鏈和兩條重鏈組成的對熱極不穩定的一種分泌型免疫球蛋白，它 是由鼻咽、扁桃體、支氣管、胃腸粘膜等處固有層的漿細胞產生，是介導I型變態反應的主 要抗體，最明顯的基本生物學特性是親同種細胞性。在5種免疫球蛋白中，IgE半衰期最短， 并且具有最高的分解率和最低的合成率，因此血清中含量最低，通常男性略高于女性，過敏 體質或超敏患者，血清中IgE明顯高于正常人，外源性哮喘患者較正常人高數倍，故IgE在 血清中含量過高，常提示遺傳過敏體質，或I型變態反應的存在。血清中IgE含量的升高分 為單純性升高和多種型升高。單純性升高，一般是由于IgE型多發性骨髓瘤所致。多種型 升高是由于特異反應性疾病（特異反應性支氣管哮喘、過敏性鼻炎、特異反應性皮炎、過敏 性支氣管肺曲霉菌病）、寄生蟲感染、T細胞功能不全癥（高IgE綜合征、濕疹血小板減少多 次感染綜合征、胸腺發育不全綜合征、選擇性IgA缺乏癥、重癥復合免疫功能缺陷）、軟組織 嗜酸性肉芽腫（木村病），Hodgkig病（霍奇金病），急性肝炎，肝硬化，原發性肝癌，風濕性 關節炎，川崎病，小兒腹瀉等疾病所致。血清中IgE含量減少一般由多發性骨髓瘤（IgE型 除外、低或無 γ-球蛋白癥（原發性或繼發性），共濟失調-毛細血管擴張癥，重癥復合性免 疫功能缺陷、慢性副鼻竇腫瘤，類肉瘤樣病，慢性淋巴細胞性白血病、矽肺，石棉肺引起的。
[0005] 目前，實驗室常用的IgE測定方法有HPLC及ELISA法。HPLC具有特異性強、靈敏 度高、重復性好等優點，現在公認其為測定血漿IgE濃度的首選方法，但因 HPLC需要的設備 復雜且昂貴，難以適應常規臨床化學實驗室應用，而ELISA法操作過程有些繁瑣，反應需要 時間，不能一蹴而就。免疫球蛋白E免疫比濁法檢測試劑盒基于IgE抗體與IgE抗原間的 反應，形成免疫復合物，在570nm波長處檢測其濁度變化，其變化程度與樣本中的IgE含量 成正比。該方法是一種無需預處理樣本，技術和設備要求不高，而精密度和特異性更高的分 析方法。由于該方法不需要昂貴的設備，可以實現自動化，且可測定大量標本，因此受到臨 床廣泛推廣。但是普通的免疫球蛋白E免疫比濁法檢測試劑穩定性不好，準確度和靈敏度 也不高，因而限制了其在臨床上的推廣應用。

【發明內容】

[0006] 針對于現有技術存在的問題，本發明提供了一種免疫球蛋白E免疫比濁法檢測試 劑盒，該試劑盒與常規的試劑盒相比，穩定性和線性范圍比常規的檢測試劑盒要好，分析靈 敏度高，有利于試劑在臨床上的推廣應用。
[0007] 本發明是通過以下措施實現的： 一種免疫球蛋白E免疫比濁法檢測試劑盒，其特征在于，它包含試劑Rl、試劑R2和校準 品，其中試劑Rl組成為：18. 16mmol/L pH 7. 6Tris緩沖液、150mmol/L氯化鈉、6%聚乙二醇 400、0. 1% -2%二氧化硅包覆的磁性納米顆粒；試劑R2組成為：18. 16mmol/L pH 7. 6Tris 緩沖液、30ml/L羊抗人IgE抗體、20-40g/L牛血清白蛋白、0. 05% Kathon-CG。
[0008] 所述二氧化娃包覆的磁性納米顆粒為Fe304/Si0 2復合納米粒子，粒徑為20_50nm。
[0009] 所述試劑Rl和試劑R2在使用時的比例為Rl :R2 = 200 :100。
[0010] 本發明所使用的二氧化硅包覆的磁性納米顆粒是采用以下方法制備的： 采用多元醇法制備Fe3O4納米粒子。取一定的乙酰丙酮鐵和三甘醇加入到回流加熱反 應裝置中，在磁力攪拌和Ar氣保護的條件下，將裝置緩慢加熱至沸騰，并保持回流一段時 間。冷卻后向反應溶液中加入乙酸乙酯使生成的四氧化三鐵納米粒子產生絮凝，磁性分離 黑色產物，清洗數次，分散到乙醇中，即得到穩定的Fe 3O4納米粒子乙醇膠體溶液。之后將所 得Fe3O4納米粒子采用Stober水解法制得SiO 2包覆的Fe 304納米粒子。所得Fe 304/5;102復 合納米粒子的粒徑為20_50nm。
[0011] 本發明所使用的校準品為久峰潤達生物技術有限公司生產的IgE校準品。
[0012] 本發明的試劑盒在具有雙試劑功能的自動生化分析儀上進行，其具體使用方法如 附圖4。 加入生理鹽水、樣本或校準品5 μ 1，之后再加入Rl試劑200 μ 1預孵育5min后讀取吸 光度A1，之后再加入100μΙ的試劑R2反應5min后，讀取吸光度A2,并計算ΔΑ。
[0013] 本發明的有益效果： 本發明提供的免疫球蛋白E免疫比濁法檢測試劑盒，通過在試劑Rl中加入二氧化硅 包覆的磁性納米顆粒，該磁性納米顆粒在靜電吸附的作用下與羊抗人IgE抗體結合，從而 使抗體在磁性納米顆粒上形成凝集，大大的提高了試劑的分析靈敏度。同時在試劑R2中加 入牛血清白蛋白，解決了抗體在稀溶液中不穩定這一難題，在試驗中它能使抗體穩定，且相 對地中性，但不會影響抗體的性質，而Kathon-CG是一種新型高效環保型廣譜殺菌劑、防腐 劑，在該試劑盒中使用Kathon-CG有效解決了 BSA長時間保存易發霉的缺點，因此BSA與 Kathon-CG共同作用有效地增強了試劑盒的穩定性，卻不會對試劑的準確度產生影響，有利 于該試劑在市場中進一步的推廣。
【附圖說明】
[0014] 圖1實施例2準確度驗證實驗檢測結果與對照組檢測結果相關性； 圖2實施例3準確度驗證實驗檢測結果與對照組檢測結果相關性； 圖3實施例4準確度驗證實驗檢測結果與對照組檢測結果相關性； 圖4是本發明的試劑盒在具有雙試劑功能的自動生化分析儀上進行，其具體使用方 法。
【具體實施方式】
[0015] 為了更好的理解本發明，下面結合具體實施例來進一步詳細說明。
[0016] 實施例1 一種常規的免疫球蛋白E免疫比濁法檢測試劑盒，它包括試劑RU試劑R2、校準品。
[0017] 其中試劑Rl組成為：