一種人免疫球蛋白的IgM組分及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及血液制品的制備方法，特別設及一種人免疫球蛋白的IgM組分及其制 備方法。
【背景技術】
[0002] 富含IgM的人免疫球蛋白制劑，主要成分由IgGJgM組成，用于抗細菌感染及自身 免疫疾病的治療，由人血漿分離制備而成。由于人血漿中IgA含量很高，而且IgM和IgA的 很多理化性質相似，二者的分離非常困難，導致富含IgM免疫球蛋白制劑中含有大量IgA， 而大量IgA的存在會導致選擇性IgA缺乏病患者過敏，嚴重的可致休克或死亡。
[0003] 目前最常用的一種富含IgM的人免疫球蛋白制劑，其組分為12%IgM、12%IgA、 76%IgG，其IgA的含量高達12%，與IgM含量相當，存在嚴重的安全隱患，副作用大。
[0004] 急需提供一種IgA含量低的富含IgM的人免疫球蛋白制劑。

【發明內容】

[0005] 為了解決上述問題，本發明提供了一種新的IgM組分及其制備方法，還提供IgA含 量低的富含IgM的人免疫球蛋白制劑及其制備方法。
[0006] IgM組分：是指從血漿中分離的富含IgM的組分。 陽007] 本發明人免疫球蛋白的IgM組分，它含有如下重量百分比的成分：IgM:66. 18~ 86. 3%、IgA:4. 6 ~12. 46%、IgG:6. 5 ~21. 36%。
[0008] 優選地，它含有如下重量百分比的成分：IgM:86. 3%、IgA:4. 6%、IgG:9. 1%。
[0009] 本發明制備前述人免疫球蛋白的IgM組分的方法，它包括如下步驟：
[0010] (1)溶解：將Cohn組分I+II+III或者Cohn組分II+III溶于注射用水中；
[0011] (2)辛酸沉淀：用辛酸或辛酸鹽沉淀雜質，過濾，得濾液；
[0012] (3)第一步陰離子交換層析：將步驟（2)所得溶液調節抑至5. 0-5. 3,用陰離子交 換層析純化，收集流穿液；
[0013] (4)第二步陰離子交換層析：將步驟（3)所得流穿液調節抑至6. 2-6. 5,上陰 離子交換層析柱，梯度洗脫：用含有100mM-150mM氯化鋼的醋酸鹽緩沖液洗脫，再用含有 200mM-300mM氯化鋼的醋酸鹽緩沖液洗脫，收集洗脫液，即為IgM組分。
[0014] 所述步驟（1)為：取Cohn組分I+II+III或者Cohn組分II+III，加入注射用水中， 5°C攬拌至其溶解，調節抑為4. 2,再在25°C水浴加熱攬拌化。
[0015] 所述步驟（2)為：加入濃度為的辛酸或辛酸鹽，調節抑為5. 0-5. 2,于 25 °C水浴加熱攬拌化，8 °C靜置化，過濾，得濾液。
[0016] 所述步驟（2)中獲得濾液后進行超濾濃縮，得濃縮液。
[0017] 步驟（3)中，所述溶液的抑調節至5. 3。 陽018] 步驟（3)中，所述陰離子交換層析的填料為CaptoQ、GigacapQ或者化OS地ere Q。
[0019] 步驟（4)中，所述流穿液調節抑至6. 2。
[0020] 步驟（4)中，所述梯度洗脫是：用含有120mM或者150mM氯化鋼的醋酸鹽緩沖液洗 脫，再用含有250mM或者300mM氯化鋼的醋酸鹽緩沖液洗脫，收集洗脫液。
[0021] 采用本發明前述IgM組分與IgG組分，可W按照任意體積比配置成富含IgM的人 免疫球蛋白制劑。
[0022] 然而，富含IgM的人免疫球蛋白制劑的IgM理論值通常為12%，采用本發明IgM組 分與IgG組分配置IgM理論值為12%的制劑時，實際得到的制劑，其IgM均會比12%略高， 通常在12%~14之間，IgA均小于2%，剩余活性成分為IgG。
[0023] 本發明具體實施例中，配置IgM理論值為12%的制劑，配置得到的富含IgM的人 免疫球蛋白制劑的實際檢測值為：IgM:12. 3~13. 8%、IgA:0. 7~1. 5%、IgG:85. 5~ 86. 2%。
[0024] 因此，本發明富含IgM的人免疫球蛋白制劑，它是W如下重量百分比的組分為活 性成分：IgM:大于12%、IgA:小于2%、IgG:84~88%，加上藥學上可接受的輔料制備而 成的制劑。優選地，它是W如下重量百分比的組分為活性成分：IgM:12. 3~13. 8%、IgA: 0. 7~1. 5%、IgG:85. 5~86. 2%，加上藥學上可接受的輔料制備而成的制劑。進一步優選 地，它是W如下重量百分比的組分為活性成分：IgM:13. 8%、IgA:0. 7%、IgG:85. 5%。
[00巧]本發制備前述富含IgM的人免疫球蛋白制劑的方法，步驟如下：取前述IgM組分， 加入IgG組分，混勻，透析，濃縮，除菌過濾，分裝、凍干，即可。
[0026] 所述IgG組分可W按照常規方法制備，也可W按照如下方法制備：
[0027](1)溶解：將Cohn組分I+II+III或者Cohn組分II+III溶于注射用水中；
[0028](2)辛酸沉淀：用辛酸或辛酸鹽沉淀雜質，過濾，得濾液；
[0029] (3)第一步陰離子交換層析：將步驟（2)所得溶液調節抑至5. 0-5. 3,用陰離子交 換層析純化，收集流穿液；
[0030] (4)第二步陰離子交換層析：將步驟（3)所得流穿液調節抑至6. 2-6. 5,上陰離子 交換層析柱，收集流穿液即可。
[0031] 所述步驟（1)為：取Cohn組分I+II+III或者Cohn組分II+III，加入注射用水中， 5°C攬拌至其溶解，調節抑為4. 2,再在25°C水浴加熱攬拌化。
[0032] 所述步驟（2)為：加入濃度為的辛酸或辛酸鹽，調節抑為5. 0-5. 2,于 25 °C水浴加熱攬拌化，8 °C靜置化，過濾，得濾液。
[0033] 所述步驟（2)中獲得濾液后進行超濾濃縮，得濃縮液。
[0034] 步驟（3)中，所述溶液的抑調節至5. 3。 陽03引步驟（3)中，所述陰離子交換層析的填料為CaptoQ、GigacapQ或者化OS地ere Q。
[0036] 本發明方法可W有效分離IgA和IgM,制得的IgM組分中，IgA含量低，進而使得用 該IgM組分配制的富含IgM的人免疫球蛋白制劑的，IgA含量也非常低，副作用小，安全性 高，臨床應用前景良好。
[0037] 顯然，根據本發明的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離 本發明上述基本技術思想前提下，還可W做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0038]W下通過實施例形式的【具體實施方式】，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說 明。但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于w下的實例。凡基于本發明上述內容 所實現的技術均屬于本發明的范圍。
【附圖說明】
[0039] 圖1本發明富含IgM免疫球蛋白制劑的制備工藝流程圖
【具體實施方式】 W40] 實施例1用本發明人免疫球蛋白的IgM組分的制備
[0041] 1、實驗材料
[0042] Cohn組分I+II+III或者組分II+III:按照《醫學生物制品學》（人民衛生出版 社），第二版，1194頁記載的低溫乙醇沉淀法制備。
[0043]鹽酸、辛酸、CaptoQ填料、GigacapQ填料、Unos地ereQ填料、Macrocap Q、娃藻 ±和Beckman IMAGE IgA檢測試劑盒，均為市售品。
[0044] 2、實驗方法 W45] 流程圖如圖1所示：
[0046] 2. 1分離純化方法：
[0047] 4kg組分I+II+III沉淀溶解于40L 5°C注射用水中，攬拌比，使用0.5M醋酸調整 抑至4. 20, 25°C水浴加熱攬拌化，W增加所需的IgG的溶解度，充分溶解。
[0048] 在混懸液直接加入辛酸至終濃度15mM，使用0. 5M化0H調抑至5. 20, 25°C水浴加 熱攬拌化，8°C靜置化；
[0049] 過濾，采用截留分子量為的超濾器進行超濾濃縮，使濃縮液的體積 為濃縮前的1/2-1/3 ;
[0050] 將濃縮液調節抑至5. 3,用CaptoQ填料進行第一步陰離子交換層析，收集流穿 液；
[0051] 將層析流穿液的抑調至6. 2,進行第二步陰離子交換層析，所用填料為Macrocap Q，收集層析流穿液，即得IgG組分； 陽05引 用抑6. 2 30mMNaAc+120mM化C1緩沖液過柱，洗脫，即得IgA組分；用抑6. 2 30mMNaAc巧50mM化C1緩沖液過柱，洗脫，即得IgM組分。
[0053] 2. 2 配制
[0054] 測定IgM組分與IgG組分中的IgG、IgM、IgA的含量，根據檢測值計算合適的混合 比例（W終產品的IgM理論值為12%，計算IgM組分與IgG組分的混合比例），將上述IgM 組分與IgG組分按計算的體積比例混合，混合液用截留分子量為的超濾器濃 縮，并用8-10倍體積注射用水透析，最終濃縮至蛋白質含量50mg/ml。濃縮液中加入麥芽糖 使濃度為10%，調抑至3. 8-4. 4,除菌過濾，于24°C低抑解放21天，除菌分裝，經凍干，即 得富含IgM免疫球蛋白制劑成品，抗補體活性檢測結果< 50%。 陽05引 3、產品檢驗
[0056] 檢測結果見下表。
[0057]
陽05引 ND