一種大鼠單肺肺纖維化模型的建立方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于動物疾病模型領域，具體涉及一種大鼠單肺肺纖維化模型的建立方法。
【背景技術】
[0002]目前，隨著中國空氣污染程度的加重，尤其是霧霾肆虐給國人健康帶來嚴重隱患。霧霾中的顆粒物會可直接進入肺部，對肺泡和血管內皮造成緩慢持續的損傷，誘發肺部疾病的發生，如肺纖維化、慢性阻塞性等。肺纖維化是一種原因不明的彌漫性肺部疾病，為彌漫性肺泡炎、肺泡單位結構紊亂和肺纖維化，最終導致肺臟結構和功能的嚴重破壞。目前，由于肺纖維化的發病機制及病程尚不明確，臨床上尚無有效的治療方法，病死率較高。因此制作與人類特發性肺纖維化的病理過程相似的動物模型，對研宄其發病機制、體內篩選治療肺纖維化藥物顯得尤為重要。理想的實驗動物疾病模型及其特定的病理生理特征是研宄相應疾病的重要基礎，在闡明疾病分子病理機制、評價診斷治療效果中發揮巨大作用，然而疾病本身的復雜性決定了實驗動物模型往往只能模擬疾病某一病理階段/過程或某種特定病理學特征，與反映臨床疾病實際病理生理狀況尚存距離，而以疾病物理特征為背景的動物疾病模型更為罕見。由于博萊霉素(BLM)對肺的毒性機理比較明確，成為目前制備動物肺纖維化模型最常用的誘導劑。目前制備大鼠肺纖維化模型主要是通過口腔氣管給藥和腹腔給藥兩種方法。由于口腔氣管給藥不易操作，而且是藥物通過氣管進入雙肺；而腹腔給藥需要給藥時間較長(大概持續給藥10天)，注射博萊霉素的劑量也比口腔氣管高(腹腔每天15mg/kg，氣管是一次5mg/kg)。對于在同一個體上實現一側肺部發生纖維化而對側肺部正常的動物模型未有報道。本研宄采用博萊霉素誘導大鼠單肺肺纖維化模型，為實現在同一個體上評價藥物治療肺纖維化的同時對正常肺部的毒性研宄，肺纖維化和正常肺部組織基因表達譜分析、肺部代償性增生的誘導機制等提供可靠的動物實驗模型。

【發明內容】

[0003]本發明的目的是解決目前現有技術的不足，提供一種大鼠單肺肺纖維化模型的建立方法。
[0004]本發明的另一目的是提供向左肺部灌注的控制方法。
[0005]本發明的另一目的是提供一種建立大鼠單肺肺纖維化模型過程中大鼠的固定方法。
[0006]本發明的另一目的是一種利用博萊霉素使大鼠肺纖維化的用途。
[0007]本發明采用的技術方案為:一種大鼠單肺肺纖維化模型的建立方法，其特征在于，具體步驟包括:
[0008]第一步:首先對大鼠稱進行體重，腹腔注射水合氯醛麻醉，固定在操作臺上，對其頸部進行碘伏消毒，用手術剪剪開頸部皮膚，剝離露出氣管，固定臺豎起與桌面成80-70°夾角，然后向右傾斜與桌面成70-60°夾角。
[0009]第二步:根據大鼠體重抽取相應體積的博萊霉素溶液，然后用針頭刺入氣管內，緩慢注入博萊霉素溶液，注射完畢后，用Matrigel封閉氣管針孔，然后縫合皮膚，大鼠生長21天以后，得到單肺肺纖維化模型。
[0010]優選地，大鼠為雄性，體重在150-200g。
[0011]優選地，所述第二步中注射博萊霉素誘導大鼠單肺肺纖維化的劑量，為每千克大鼠注射1.8mg的博萊霉素。
[0012]優選地，所述第二步中從頸部氣管內向左側肺部注射博萊霉素溶液的速度控制在60-50 μL/min。
[0013]本發明中在同一只大鼠上實現一側肺發生纖維化而另一側肺正常。
[0014]本發明中摸索出麻醉單肺纖維化大鼠的麻醉藥劑量:應該是正常大鼠使用劑量的2/3，即 10%水合氯醛:0.2ml/100go
[0015]本發明中觀察到大鼠正常肺部功能的代償性增加，表現為正常肺部體積和重量增加，為研宄肺部代償性增生機組提供了理想的實驗動物模型。
[0016]本發明中大鼠單肺肺纖維化模型的癥狀與臨床人類特發性肺纖維化的病理過程相似:呼吸快而短促等，為篩選新藥物對肺纖維化療效提供實驗動物模型。
[0017]另外，本發明提供一種利用博萊霉素使大鼠肺纖維化的用途，其特征在于，建立博萊霉素誘導單肺肺纖維化大鼠注射劑量，即每千克大鼠注射1.Smg的博萊霉素；或者建立博萊霉素誘導雙肺肺纖維化大鼠注射劑量，即每千克大鼠注射3.6mg的博萊霉素。
[0018]另外，本發明提供一種建立大鼠單肺肺纖維化模型過程中大鼠的固定方法，其特征在于建立從頸部氣管內向單肺注射溶液的固定方式:大鼠仰臥固定于固定臺上，把固定臺豎起與桌面成80-70°夾角，然后向右傾斜與桌面成70-60°夾角。
[0019]本發明采用通過氣管向左肺內博萊霉素建立大鼠單肺肺纖維化模型，觀察大鼠左肺發生纖維化的分子和結構變化情況，為進一步的肺纖維化實驗研宄奠定基礎，本發明模型的建立方法具有如下優點:
[0020]1、本發明采用目前經典的肺纖維化的誘導劑:博萊霉素，其誘導肺部發生纖維化的病理過程與人類特發性肺纖維化的病理過程非常相似，有利于研宄肺部發生纖維化的分子表達變化和結構改變的機制。
[0021 ] 2、本發明建立向大鼠左肺灌注溶液的固定角度和把液體完全注射到左肺部的控制流速，為后續其它溶液向肺部灌注提供了方法。
[0022]3、本發明建立起麻醉單肺肺纖維化大鼠的麻醉劑的使用劑量，避免麻醉過度導致的大鼠死亡或麻醉不足而引起的固定困難。
[0023]4、本發明的動物模型可作為研宄單肺發生纖維化，呼吸功能調整過程中對側肺部出現代償性增生的生理生化指標的變化。
[0024]5、本發明的動物模型可作為針對治療肺纖維化藥物篩選和安全性評價的試驗動物，通過觀察治療肺纖維化過程，對對側肺部有無毒性等。
[0025]6、本發明的動物模型可為肺部成像儀器設備研制研宄提供了一個較為理想可靠的動物模型。
【附圖說明】
[0026]圖1為大鼠左單肺內注射不同溶液21d后肺部CT掃描圖；其中:圖1A空白對照組大鼠左肺內注射生理鹽水溶液21d后肺部CT掃描圖；圖1B處理模型組大鼠左肺內注射博萊霉素溶液21d后肺部CT掃描圖；
[0027]圖2為大鼠左單肺內注射不同溶液21d后肺部解剖圖；其中:圖2A空白對照組大鼠左肺內注射生理鹽水溶液21d后肺部解剖圖；圖28處理模型組大鼠左肺內注射博萊霉素溶液2Id后肺部解剖圖；
[0028]圖3為大鼠左單肺內注射不同溶液21d后肺部病理切片圖；其中:圖3A空白對照組大鼠左肺內注射生理鹽水溶液21d后左肺部病理切片圖；圖38空白對照組大鼠左肺內注射博萊霉素溶液21d后右肺部病理切片圖；圖3C空白對照組大鼠左肺內注射博萊霉素溶液21d后左肺部病理切片圖；
[0029]圖4為大鼠左單肺內注射不同溶液21d后肺部羥脯氨酸含量檢測；其中:圖4中空白對照組大鼠左肺內注射生理鹽水溶液21d后左肺內羥脯氨酸含量；圖4中空白對照組大鼠左肺內注射博萊霉素溶液21d后右肺內羥脯氨酸含量；圖4中空白對照組大鼠左肺內注射博萊霉素溶液21d后左肺內羥脯氨酸含量。
【具體實施方式】
[0030]以下結合附圖以及具體實施例，對本發明進行詳細說明如下。
[0031]實施例1:大鼠單肺肺纖維化模型的建立方法
[0032](I)材料來源
[0033]SD大鼠:雄性SD大鼠購自安徽醫科大學實驗動物中心，無特