專利名稱：雞新城疫、h9亞型禽流感二聯滅活疫苗的制備方法
技術領域：
本發明涉及家禽類生物制藥技術領域，尤其涉及一種雞新城疫、H9亞型禽 流感二聯滅活疫苗的制備方法。
背景技術：
新城疫俗稱雞瘟，是由雞新城疫病毒引起的一種高度接觸性傳染病，主要 經呼吸道和消化道感染，各種年齡的雞均可感染，以雛雞最為嚴重，發病率和 死亡率可達80%以上；禽流感是由A型流感病毒引起的一種禽類的感染/或疾病
綜合癥。感染后的舍飼禽包括家禽可表現出臨診癥狀、呼吸系統疾病、產蛋量 下降、致死率很高的急性出血性疾病，也可表現為亞臨診癥狀、輕的呼吸系統 感染到無癥狀帶毒等多種流行形式。根據禽流感致病性的不同，可以將禽流感
分為高致病性禽流感、低致病性禽流感和無致病性禽流感。最近國內外由H5N1 血清型引起的禽流感稱高致病性禽流感，發病率和死亡率都很高，危害巨大。 1998年9月以來，在部分地區的雞場，雞群先后出現了呼吸道癥狀，普遍腹瀉， 產蛋下降，產軟皮蛋，初步診斷為中等毒力以下H9亞型禽流感。近幾年，H5 亞型禽流感的疫苗廣泛免疫接種，而H9亞型禽流感受到忽視，致使H9亞型禽 流感又呈流行趨勢。
聯苗是指不同種微生物或其代謝產物組成的疫苗，聯苗可簡化接種程序， 減少接種動物應激反應的次數，此外對于產蛋雞，尤其是種雞應盡可能避免或減 少在產蛋期間做免疫接種，而雞新城疫、禽流感二聯滅活疫苗使用劑量與單苗 相當，但其效力與單苗相同，具有使用簡便、接種程序簡單等優點，減少疫苗的 免疫次數，避免家禽產生不必要的應激，達到事半功倍的效果，聯苗復配最關 鍵的是抗原最佳配比問題。

發明內容
為了解決現有技術不足，本發明的目的是提供一種雞新城疫、H9亞型禽流 感二聯滅活疫苗的制備方法，以預防目前雞新城疫、禽流感H9亞型引起的發病率高、死亡率高的問題，使二種抗原間的免疫干擾盡最大可能降低，降低畜禽 死亡率，減少養殖專業戶的損失，造福人類。
為了實現上述發明目的，本發明采用如下技術方案
所述雞新城疫、H9亞型禽流感二聯滅活疫苗的制備方法，其制備步驟為
① 、生產用毒種的制備將NDV La Sota株用滅菌的生理鹽水作10—4稀釋， 將AIVHL株毒種用滅菌的生理鹽水作1(T3稀釋，分別接種9 10日齡SPF雞胚， 孵育，收獲；
② 、制苗用病毒液的制備將NDV La Sota株生產毒種用滅菌的生理鹽水 作10—4稀釋，將AIVHL株生產毒種用滅菌的生理鹽水作10—3稀釋，分別接種9 IO日齡易感雞胚，孵育，收獲。收獲的病毒液分別作2倍濃縮、滅活；
◎、取滅活的濃縮2倍NDV La Sota株病毒液和AIV HL株病毒液等量混合， 取混合后的病毒液97 99份(體積份)，加入吐溫-80 1 3份(體積份)，混合制 成水相；取白油96份(體積份)、司本-80 4份(體積份)、硬脂酸鋁2份(體積份) 制成油相；
、將水相與油相混合，混合之比為1:1.5 2.5， 一起混合乳化，分裝， 貼簽，裝箱、入庫。
所述對病毒液進行濃縮是指采用纖維膜超濾濃縮法，該方法可提高免疫抗 原在疫苗終產品的濃度達2倍以上，纖維膜超濾濃縮裝置，設有二級孔徑不同 的纖維濾柱， 一級濾柱的纖維可濾除部分細菌和雜質，二級超濾株的中空纖維 可截留病毒粒子。
所述滅活是對NDV La sota和AIVHL株采用0. 05 0. 15%甲醛溶液，在35 38"C進行12 17小時滅活。
本發明所采用的NDV La Sota株、AIV HL株毒種均購自中國獸醫藥品監察所。
由于采用了上述的技術方案，本發明具有如下積極效果① 、其濃縮工藝可提高免疫抗原在疫苗終產品的濃度，本發明經過長期實驗 采用纖維膜超濾濃縮法，可是使效價達大幅提高。
② 、本發明中NDVLa sota和AIVHL株采用0. 05 0. 15%甲醛溶液，在35 38'C滅活12 17小時，可徹底滅活病毒，并不影響其免疫原性。
③ 、本發明采用的佐劑是白油、吐溫-80、司盤-80等。實驗證明含油相和水 相乳化劑的疫苗比僅含油相的疫苗免疫效果好，可使抗原充分混合均勻，不易 分層，在37"C條件下更穩定，黏度也低。
具體實施例方式
實施例1:
雞新城疫、H9亞型禽流感二聯滅活疫苗的制備方法，其制備步驟為 ①、生產用毒種的制備將NDV La Sota株用滅菌的生理鹽水作10—4稀釋， 將AIV HL株毒種用滅菌的生理鹽水作10—3稀釋，分別接種9 10日齡SPF雞胚， 孵育，收獲；②、制苗用病毒液的制備將NDV La Sota株生產毒種用滅菌的 生理鹽水作10—4稀釋，將AIV HL株生產毒種用滅菌的生理鹽水作10—3稀釋，分 別接種9 10日齡易感雞胚，孵育，收獲，對收獲的病毒液分別采用纖維膜超濾 濃縮法，作2倍濃縮，對NDV La sota和AIVHL株采用0. 05%甲醛溶液，在35 。C進行17小時滅活；③、取滅活的濃縮2倍NDV La Sota株病毒液和AIV HL 株病毒液等量混合，取混合后的病毒液97(體積份)份，加入吐溫-80 3份(體 積份)，混合制成水相；取白油96份(體積份)、司本-804份(體積份)、硬脂酸 鋁2份(體積份)制成油相；④、將水相與油相混合，混合之比為1:1.5， 一起混 合乳化，分裝，貼簽，裝箱、入庫。 實施例2:
雞新城疫、H9亞型禽流感二聯滅活疫苗的制備方法，其制備步驟為 、生產用毒種的制備將NDV La Sota株用滅菌的生理鹽水作10—4稀釋， 將AIV HL株毒種用滅菌的生理鹽水作10—3稀釋，分別接種9 10日齡SPF雞胚， 孵育，收獲；②、制苗用病毒液的制備將NDV La Sota株生產毒種用滅菌的生理鹽水作10—4稀釋，將AIV HL株生產毒種用滅菌的生理鹽水作10—3稀釋，分 別接種9 10日齡易感雞胚，孵育，收獲，對收獲的病毒液分別采用纖維膜超濾 濃縮法，作2倍濃縮，對NDVLasota和AIVHL株采用O. 1%甲醛溶液，在37°。 進行16小時滅活；③、取滅活的濃縮2倍NDV La Sota株病毒液和AIV HL株 病毒液等量混合，取混合后的病毒液98(體積份)份，加入吐溫-80 2份(體積份)， 混合制成水相；取白油96份(體積份)、司本-80 4份(體積份)、硬脂酸鋁2份(體 積份)制成油相；④、將水相與油相混合，混合之比為1:2.0， 一起混合乳化， 分裝，貼簽，裝箱、入庫。 實施例3:
雞新城疫、H9亞型禽流感二聯滅活疫苗的制備方法，其制備步驟為 ①、生產用毒種的制備將NDV La Sota株用滅菌的生理鹽水作10—4稀釋， 將AIVHL株毒種用滅菌的生理鹽水作10—3稀釋，分別接種9 10日齡SPF雞胚， 孵育，收獲；②、制苗用病毒液的制備將NDV La Sota株生產毒種用滅菌的 生理鹽水作10—4稀釋，將AIV HL株生產毒種用滅菌的生理鹽水作10—3稀釋，分 別接種9 10日齡易感雞胚，孵育，收獲，對收獲的病毒液分別采用纖維膜超濾 濃縮法，作2倍濃縮，對NDV La sota和AIVHL株采用0. 15%甲醛溶液，在38 。C進行14小時滅活；③、取滅活的濃縮2倍NDV La Sota株病毒液和AIV HL 株病毒液等量混合，取混合后的病毒液99(體積份)份，加入吐溫-80 1份(體積 份)，混合制成水相；取白油96份(體積份)、司本-80 4份(體積份)、硬脂酸鋁 2份(體積份)制成油相；@、將水相與油相混合，混合之比為1:2.5， 一起混合 乳化，分裝，貼簽,裝箱、入庫。
權利要求
1、雞新城疫、H9亞型禽流感二聯滅活疫苗的制備方法，其特征是，其制備步驟為①、生產用毒種的制備將NDV La Sota株用滅菌的生理鹽水作10-4稀釋，將AIV HL株毒種用滅菌的生理鹽水作10-3稀釋，分別接種9～10日齡SPF雞胚，孵育，收獲；②、制苗用病毒液的制備將NDV La Sota株生產毒種作用滅菌的生理鹽水作10-4稀釋，將AIV HL株生產毒種作用滅菌的生理鹽水作10-3稀釋，分別接種9～10日齡易感雞胚，孵育，收獲；收獲的病毒液分別作2倍濃縮、滅活；③、取滅活的濃縮2倍NDV La Sota株病毒液和AIV HL株病毒液等量混合，取混合后的病毒液97～99(體積份)份，加入吐溫-80 1～3份(體積份)，混合制成水相；取白油96份(體積份)、司本-804份(體積份)、硬脂酸鋁2份(體積份)制成油相；④、將水相與油相混合，混合之比為1∶1.5～2.5，一起混合乳化，分裝，貼簽，裝箱、入庫。
2、根據權利要求1所述的雞新城疫、H9亞型禽流感二聯滅活疫苗的制備方 法，其特征在于所述滅活是對NDV La sota和AIVHL株采用0. 05 0. 15%甲 醛溶液，在35 38"C進行12 17小時滅活。
全文摘要
雞新城疫、H9亞型禽流感二聯滅活疫苗的制備方法，其特征是，其制備步驟為①生產用毒種的制備②制苗用病毒液的制備③取滅活的濃縮2倍NDV La Sota株病毒液和AIV HL株病毒液等量混合，取混合后的病毒液97～99(體積份)份，加入吐溫-80 1～3份(體積份)，混合制成水相；取白油96份(體積份)、司本-80 4份(體積份)、硬脂酸鋁2份(體積份)制成油相；④將水相與油相混合，混合之比為1∶1.5～2.5，一起混合乳化即制成。該方法制成的禽流感二聯滅活疫苗能有效解決預防目前雞新城疫、禽流感H9亞型引起的發病，并且效果好等優點。
文檔編號A61K39/295GK101607084SQ20081005004
公開日2009年12月23日 申請日期2008年6月18日 優先權日2008年6月18日
發明者喬榮岑, 習向鋒, 孫進忠, 榮駿弓, 閔亞杰 申請人:洛陽普萊柯生物工程有限公司