一種鍵合型固定相手性色譜柱的制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及手性色譜柱領域，具體設及一種鍵合型固定相手性色譜柱的制備方 法。
【背景技術】
[0002] 多糖類手性固定相在用于手性對映體分離與制備方面顯示了巨大的優勢，具有廣 泛的應用前景。目前，商品化的多糖衍生物手性固定相多是采用物理涂覆的方法將多糖衍 生物固著在硅膠的表面，因此存在著手性固定相流失的問題，同時也不耐受大部分較強的 極性溶劑，給實際使用帶來諸多限制。針對運些問題，后續出現了鍵合型的多糖類手性固定 相，W克服上述的問題。
[0003]目前的鍵合型固定相手性色譜柱的制備方法為先制備鍵合型固定相，再將固定相 裝填至手性柱中，制備步驟繁多、時間長、操作復雜，如中國專利CN 100387333C公開的制 備方法。固定相的制備過程中，首先將鍵合有不飽和雙鍵的多糖衍生化物涂覆至硅膠表面， 涂覆過程中涂層厚度難W控制，硅膠上涂覆的多糖衍生化物涂層厚度不均勻，鍵合后的娃 膠粒徑和比表面積變化較大、不均勻，運種現象在小粒徑硅膠填料中更加突出，由此得到的 手性色譜柱固定相不均一，另外，多糖衍生化物涂層較厚的硅膠填料在裝填時還容易產生 變形或者脫落，W上運些現象嚴重影響了手性色譜柱的柱效及分離能力。

【發明內容】

[0004] 為克服現有鍵合型固定相手性色譜柱在固定相制備、裝填中存在的缺陷，本發明 的目的是提供一種鍵合型固定相手性色譜柱的制備方法。
[0005] 本發明提供的制備方法包括W下步驟：
[0006] S1 :制備鍵合有不飽和雙鍵的硅膠，并將所述硅膠裝填至手性色譜柱中；
[0007] S2 :制備鍵合有不飽和雙鍵的多糖衍生化物；
[000引S3 :將所述多糖衍生化物W溶液形式注入步驟S1所得的手性色譜柱中使其吸附 于所述硅膠的表面，再向所述手性色譜柱中注入引發劑溶液，使所述硅膠的不飽和雙鍵與 所述多糖衍生化物的不飽和雙鍵進行聚合反應形成鍵合型固定相。
[0009] 本發明所述的硅膠可W為現有的適用于手性色譜柱的任意類型硅膠，尤其為小粒 徑硅膠；優選地，本發明所述的硅膠可W為多孔球形硅膠，其孔徑為10~200納米，粒徑為 1. 5~50微米。
[0010] 本發明制備方法步驟S1中所述的鍵合有不飽和雙鍵的硅膠可W為現有鍵合型固 定相制備方法制備的帶有不飽和雙鍵的硅膠；優選地，可通過W下物質與硅膠反應制得： 乙締基Ξ乙氧基硅烷、丫-甲基丙締酷氧基丙基Ξ甲氧基硅烷或丫-甲基丙締酷氧基丙基 Ξ乙氧基硅烷。制備方法可W為將反應物置于甲苯等惰性溶劑中加熱反應一定時間，反應 完畢后洗涂并干燥所得產物。
[0011] 本發明制備方法步驟S1中硅膠的裝填方法可W為現有任意裝填方法，如渺漿法 等。
[0012] 本發明制備方法步驟S2中所述的鍵合有不飽和雙鍵的多糖衍生化物可w為現有 鍵合型固定相制備方法制備的帶有不飽和雙鍵的多糖衍生化物；優選地，可由多糖和衍生 化試劑、含不飽和雙鍵試劑反應制得。制備方法可W為將反應物置于化晚等惰性溶劑中加 熱反應一定時間，反應完畢后洗涂并干燥所得產物。
[0013] 其中，本發明制備方法所述的多糖包括但不限于纖維素、淀粉、殼聚糖、木聚糖或 葡萄糖。
[0014] 其中，本發明制備方法所述衍生化試劑包括但不限于苯基異氯酸醋、3, 5-二甲基 苯基異氯酸醋、3, 5-二氯苯基異氯酸醋或對甲基-苯基異氯酸醋。
[0015] 其中，本發明制備方法所述含不飽和雙鍵試劑述包括但不限于丙締酷氯、甲基丙 締酷氯、乙基丙締酷氯、3-苯基丙締酷氯或3-乙氧基丙締酷氯。
[0016] 本發明制備方法步驟S3中所述的溶液形式的多糖衍生化物可W為多糖衍生化物 與有機溶劑形成的任意濃度的溶液，其中的有機溶劑可W為不與固定相成分發生反應的任 意有機溶劑；優選地，步驟S3中所述的多糖衍生化物可二甲基乙酷胺或二甲基甲酯胺 溶液的形式注入色譜柱中，溶液濃度可W為！~lOOOmg/mL。
[0017] 本發明制備方法步驟S3中所述的引發劑可W為締控聚合反應中使用的任意引發 劑，優選使用偶氮二異下臘或戊二醒。所述引發劑可與有機溶劑形成的任意濃度的溶液，其 中的有機溶劑可W為不與固定相成分發生反應的任意有機溶劑；優選地，引發劑溶液可W 為二甲基乙酷胺或二甲基甲酯胺溶液，溶液濃度可W為！~lOOOmg/mL。
[0018] 本發明制備方法中，多糖衍生化物溶液和引發劑溶液可WW高壓累注入的方法注 入手性色譜柱中。
[0019] 本發明制備方法步驟S3的聚合反應反應溫度可W為50~100°C。
[0020] 本發明制備方法中，為使聚合反應更加徹底，可重復多次注入多糖衍生化物溶液 和引發劑溶液進行多次聚合反應，每次聚合反應的時間可W為40~100分鐘。
[0021] 本發明提供的制備方法具有W下優點：
[0022] 1、應用范圍廣
[0023] 本發明制備方法所制備的手性色譜柱中，通過化學鍵合的方式將多糖類衍生物固 定在色譜基質上形成色譜柱固定相，柱效高，可用于液相色譜對手性對映體的分析與分離， 還可適用于各種強極性溶劑的流動相，如四氨巧喃、二氯甲燒、Ξ氯甲燒等。
[0024] 2、制備簡單，快速
[00巧]本發明的制備方法只需要將不同的溶液注入色譜柱內，吸附和鍵合反應均在色譜 柱內完成，免去了常規制備方法中填料的洗涂和干燥等過程，尤其是避免了鍵合型固定相 的繁瑣的裝柱過程，提高了制備效率。
[0026] 3、固定相品質均一，易于廣品化
[0027] 本發明的制備方法首次將多糖衍生化物與硅膠的吸附和鍵合反應置于色譜柱內 部進行，通過引發劑的作用完成鍵合過程，多糖衍生化物在硅膠的表面吸附容易控制，吸附 層厚度均勻，鍵合反應反應均一、完全，所得的固定相粒徑與比表面積均勻穩定，保證了固 定相的均一性，所得手性色譜柱柱效高、分離效果好。
【附圖說明】
[0028] 圖1A、1B分別為應用例1在不同手性柱條件下得到的色譜圖。
[0029] 圖2A、2B分別為應用例2在不同手性柱條件下得到的色譜圖。
【具體實施方式】
[0030] 為使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將進一步描述本發明的示例 性實施例的技術方案。
[0031] W下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。其中所述化學品如未 特別說明均為市售產品。 陽0巧 實施例1
[0033] 1)硅膠的處理
[0034] 取用20%鹽酸按常規活化方式處理并干燥后的硅膠（平均粒徑約為5微米、孔徑 約為30納米）10克，加入50毫升甲苯，再加入10毫升丫 -甲基丙締酷氧基丙基Ξ乙氧基 硅烷，氮氣保護條件下加熱105度，反應12小時，反應產物依次用甲苯和乙醇洗涂并干燥。
[0035] 2)鍵合硅膠裝柱
[0036] 取2. 1克上述經過硅烷化的且帶有不飽和雙鍵的硅膠，用渺漿法裝柱，制備成 巫4. 6X150毫米液相色譜柱。
[0037] 3)多糖衍生化物的制備 陽03引取3克纖維素，加入150毫升化晚，加入1克3-乙氧基丙締酷氯，氮氣保護下80 攝氏度反應5小時，再加入20毫升3, 5-二甲基苯基異氯酸醋作為衍生化試劑，反應10個 小時，冷卻，用甲醇洗涂，干燥。
[0039] 4)柱內鍵合反應
[0040] 取0. 6克上述帶有不飽和基團