Ca6抗原特異性細胞毒性偶聯物及其應用方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及鼠抗-CA6糖表位（glycotope)單克隆抗體及其人源化或表面重構形 式（humanized or resurfaced versions)。本發明也涉及抗-CA6糖表位單克隆抗體的表 位結合片段（epitope-binding fragments)，以及抗-CA6糖表位單克隆抗體的人源化或表 面重構形式的表位結合片段。
[0002] 本發明進一步涉及包含細胞結合劑和細胞毒性劑的細胞毒性偶聯物，包含所述偶 聯物的治療組合物，應用所述偶聯物來抑制細胞生長和治療疾病的方法，及包含所述細胞 毒性偶聯物的試劑盒。具體而言，細胞結合劑為識別并結合CA6糖表位的單克隆抗體或其 表位結合片段，或其人源化或表面重構形式。
【背景技術】
[0003] 對開發特異性地破壞目標癌細胞而不傷害周圍的、非癌細胞和組織的抗癌治療劑 已經有很多的嘗試。這樣的治療劑有潛力極大改善人類患者中癌癥的治療。
[0004] -個有前景的方法是連接細胞結合劑例如單克隆抗體與細胞毒性藥物（Sela等， 在 Immunoconjugates 189_216(C.Vogel，ed· 1987) ;Ghose 等，在 Targeted Drugs 1_22(Ε· Goldberg，ed. 1983) ;Diener 等，在 Antibody mediated delivery systems 1-23(J. RodwelI, ed. 1988) ;Pietersz 等，在 Antibody mediated delivery systems 25-53(J. Rodwell，ed. 1988) ;Bumol 等，在六111:;[130(17 1116(11&七6(1(161;[￥6^878七61118 55-79(]\ Rodwell，ed. 1988)。取決于對細胞結合劑的選擇，基于在這樣的細胞的表面上所表達的分 子的表達情況，這些細胞毒性偶聯物可以被設計為僅僅識別和結合特定類型癌細胞。
[0005] 細胞毒性藥物，例如甲氨蝶呤、柔紅霉素、阿霉素、長春新堿、長春堿、美法侖、絲裂 霉素 C和苯丁酸氮芥已被用在這樣的細胞毒性偶聯物中，其被連接到各種鼠單克隆抗體 上。在一些情形中，藥物分子通過中間載體分子被連接到抗體分子上，中間載體分子例如血 清白蛋白（Garnett 等，46Cancer Res. 2407-2412 (1986) ;0hkawa 等，23 Cancer Tmmunol. Immunother. 81-86 (1986) ;Endo 等，47Cancer Res. 1076-1080 (1980))、葡聚糖（Hurwitz 等，2 Appl.Biochem. 25-35 (1980) ;Manabi 等，34 Biochem. Pharmacol. 289-291 (1985); Dillman 等，46 Cancer Res. 4886-4891 (1986) ;Shoval 等，85?1'〇。.似1:1.八。已(1· Sci. 8276-8280 (1988))、或聚谷氨酸（Tsukada 等，73 J. Natl. Cane. Inst. 721-729 (1984); Kato 等，27 J.Med.Chem. 1602-1607(1984) Jsukada 等，52 fc.J. Cancer 111-116(1985))。
[0006] 已經顯現出一些前景的特異性偶聯物的例子為C242抗體和美登素衍生的DMl的 偶聯物，C242抗體針對CanAg，CanAg為表達在結腸直腸和胰腺腫瘤上的抗原（Liu等，Proc Natl Acad Sci USA，93 :8618-8623 (1996))。對該偶聯物的體外評價顯示，它對表達在細胞 表面上的CanAg的結合親和力很高，其表觀Kd值為3X 10 _nM，而且它對CanAg陽性細胞的 細胞毒性效力高，IC5tl為6 X 10-ηΜ。此細胞毒性是抗原依賴性的，因為其被過量的非偶聯抗 體阻斷，而且因為抗原陰性細胞對該偶聯物的敏感性要低大于100倍。對各自的靶細胞具 有高親和力以及具有高抗原選擇性細胞毒性的抗體-DMl偶聯物的其它例子包括下列物質 的偶聯物：huN901，其為抗人CD56抗體的人源化形式；huMy9-6,其為抗CD33抗體的人源化 形式；huC242,其為抗CanAg Mucl表位的抗體的人源化形式；huJ591，其為抗PSM的脫免疫 抗體（deimmunized antibody);曲妥珠單抗，其為抗Her2/neu的人源化抗體；和比伐珠單 抗（bivatuzumab)，其為抗Q)44v6的人源化抗體。
[0007] 在不斷改進用于治療癌癥患者的方法中，開發特異性識別特定類型癌細胞的其它 的細胞毒性偶聯物將是重要的。
[0008] 為了此目標，本發明涉及抗體的開發，所述抗體識別并結合表達在癌細胞表面上 的分子/受體，和涉及新型細胞毒性偶聯物的開發，所述偶聯物包含細胞結合劑例如抗體 和細胞毒性劑，所述細胞毒性劑特異靶向表達在癌細胞表面上的分子/受體。
[0009] 更具體而言，本發明涉及位于由癌細胞表達的Mucl粘蛋白受體上的新CA6唾液酸 糖表位（sialoglycotope)的表征，和涉及抗體的預備，優選人源化抗體，其識別Mucl粘蛋 白的新CA6唾液酸糖表位，而且在存在細胞毒性劑的情況下，可以被用來抑制表達CA6糖表 位的細胞的生長。 發明概述
[0010] 本發明包括抗體或其表位結合片段，所述抗體特異性識別并結合Mucl粘蛋白受 體的新型CA6唾液酸糖表位。在另一個實施方案中，本發明包括人源化抗體或其表位結合 片段，其識別Mucl粘蛋白受體的新型CA6唾液酸糖表位（"CA6糖表位"）。
[0011] 在優選的實施方案中，本發明包括鼠抗-CA6單克隆抗體DS6("DS6抗體"）和DS6 抗體的表面重構或人源化形式，其中，在輕鏈和重鏈兩者中，抗體或其表位結合片段的暴露 于表面的殘基被取代，以便更為接近地類似于已知的人抗體表面。本發明的人源化抗體及 其表位結合片段具有改進的性質，因為與完全的鼠形式相比，它們在其被給予的人對象中 具有更少的免疫原性（或完全是非免疫原性的）。因此，本發明的人源化DS6抗體及其表位 結合片段特異性識別Mucl粘蛋白受體上的新型唾液酸糖表位，即CA6糖表位，而對人是沒 有免疫原性的。該人源化抗體及其表位結合片段可以與藥物例如美登素類（maytansinoid) 偶聯，通過將該藥物定向于Mucl CA6唾液酸糖表位，形成對抗原表達細胞具有特異細胞毒 性的藥物前體。因此可以使用包含這樣的抗體和小的、高毒性藥物（例如美登素類、紫杉烷 類（taxanes)及CC-1065類似物）的細胞毒性偶聯物作為治療劑，用于治療腫瘤，例如乳腺 和卵巢腫瘤。
[0012] 本發明的DS6抗體的人源化形式在以下方面在本文中被完整表征：輕鏈和重鏈可 變區的各自氨基酸序列，輕鏈和重鏈可變區基因的DNA序列，互補決定區（CDRs)的鑒定，其 表面氨基酸的鑒定和其以重組形式表達的方法的公開。
[0013] 在一個實施方案中，提供人源化DS6抗體或其表位結合片段，其具有包含互補決 定區（⑶Rs)的重鏈，所述互補決定區（⑶Rs)具有SEQ ID NOS : 1-3所示的氨基酸序列。