本(ben)發明涉(she)及(ji)一(yi)種腺苷鈷胺(an)晶型及(ji)其制備方法與應用，屬于結(jie)晶技術領(ling)域。

背景技術：

腺(xian)苷(gan)鈷(gu)胺(cobamamide也稱(cheng)為adocbl或(huo)(huo)coenzymeb12，又稱(cheng)脫氧(yang)(yang)腺(xian)苷(gan)鈷(gu)胺素)，為暗紅色結晶或(huo)(huo)粉末，極具引濕性，見光(guang)極易分解。略溶(rong)于水(shui)，在乙(yi)醇中幾乎(hu)不(bu)溶(rong)，在丙(bing)酮或(huo)(huo)乙(yi)醚中不(bu)溶(rong)。其化(hua)學名(ming)稱(cheng)為5,6-二甲(jia)基(ji)苯并咪(mi)唑(zuo)基(ji)-5`-脫氧(yang)(yang)腺(xian)嘌呤核苷(gan)基(ji)鈷(gu)胺，分子式為c72h100con18o17p，結構(gou)式如(ru)式1所示。

目(mu)前(qian)，腺(xian)苷鈷(gu)胺在(zai)國際上用(yong)作(zuo)生化試(shi)劑和實驗試(shi)劑，只在(zai)我國用(yong)作(zuo)藥(yao)(yao)(yao)品，已應(ying)用(yong)多(duo)(duo)年(nian)，腺(xian)苷鈷(gu)胺原料藥(yao)(yao)(yao)和片劑收載于(yu)中(zhong)國藥(yao)(yao)(yao)典2010版和2015版。腺(xian)苷鈷(gu)胺早期主要(yao)用(yong)于(yu)治療(liao)惡性貧(pin)血(xue)，亦可與葉酸合(he)用(yong)，用(yong)于(yu)治療(liao)各種(zhong)巨幼(you)細(xi)胞貧(pin)血(xue)，抗葉酸藥(yao)(yao)(yao)引起(qi)的(de)貧(pin)血(xue)等。近(jin)年(nian)來(lai)，腺(xian)苷鈷(gu)胺適應(ying)范(fan)圍不(bu)斷擴展(zhan)，被(bei)用(yong)于(yu)包(bao)括(kuo)神經根(gen)炎(yan)(yan)，多(duo)(duo)發性神經炎(yan)(yan)、末梢神經炎(yan)(yan)、眼肌麻痹，肝病，癌癥(zheng)，慢性萎縮性胃炎(yan)(yan)，生殖系統疾(ji)病治療(liao)等領域，在(zai)臨床應(ying)用(yong)過程(cheng)中(zhong)展(zhan)現了(le)顯著的(de)治療(liao)效(xiao)果(guo)(①劉瀾波.臨床合(he)理用(yong)藥(yao)(yao)(yao)雜志,2017,10(2c):43-44.②鄂瑞芳(fang).現代藥(yao)(yao)(yao)物與臨床,2017,32(1):46-50.)，是(shi)極具(ju)前(qian)景的(de)多(duo)(duo)種(zhong)疾(ji)病的(de)治療(liao)藥(yao)(yao)(yao)物。

腺(xian)(xian)苷(gan)鈷(gu)(gu)(gu)胺(an)在制備和存儲過程中，易產生氰鈷(gu)(gu)(gu)胺(an)、羥鈷(gu)(gu)(gu)胺(an)等雜質(zhi)(①楊洪(hong)淼.中國生化(hua)藥物(wu)雜志,2015,35(6):157-164.②晏(yan)敏紅(hong).海峽藥學,2013,25(8):62-65)，這些(xie)雜質(zhi)與腺(xian)(xian)苷(gan)鈷(gu)(gu)(gu)胺(an)結構類(lei)似，同屬(shu)于(yu)鈷(gu)(gu)(gu)胺(an)素類(lei)化(hua)合物(wu)。鈷(gu)(gu)(gu)胺(an)素類(lei)化(hua)合物(wu)易于(yu)形成類(lei)質(zhi)同晶物(wu)(grubergk.vitaminb12andb12-proteins,wiley-vch,wein-heim,1998,p335ff.)，也就是說雜質(zhi)易于(yu)與腺(xian)(xian)苷(gan)鈷(gu)(gu)(gu)胺(an)共(gong)同結晶析出而難以除(chu)去(qu)。目(mu)前，有關(guan)腺(xian)(xian)苷(gan)鈷(gu)(gu)(gu)胺(an)的精制方法多采用樹(shu)脂吸附的方法，而通(tong)過重(zhong)結晶過程除(chu)去(qu)腺(xian)(xian)苷(gan)鈷(gu)(gu)(gu)胺(an)雜質(zhi)具有極大的技術難度(du)。

我國藥典2015版列出的(de)(de)腺苷鈷胺原料藥的(de)(de)要求是雜質含量不(bu)得(de)高于1％，該雜質含量用于注射(she)劑制備(bei)時，明顯偏高，在(zai)我國對藥品(pin)質量評價體系不(bu)斷完(wan)善、評價標準不(bu)斷提高的(de)(de)大(da)背景下，尋找能夠降低雜質的(de)(de)、操作簡便的(de)(de)、符合綠色化(hua)學理念的(de)(de)精制方法具有(you)重要的(de)(de)價值(zhi)。

圍繞著(zhu)降低(di)腺(xian)苷鈷胺雜質(zhi)(zhi)的(de)目的(de)，我們(men)考察(cha)了(le)(le)不同的(de)重結晶(jing)條件對降低(di)雜質(zhi)(zhi)的(de)影響，研究過程中(zhong)發(fa)現了(le)(le)新的(de)腺(xian)苷鈷胺晶(jing)型，而且，發(fa)現該晶(jing)型的(de)制備條件具(ju)有有效降低(di)雜質(zhi)(zhi)的(de)作用(yong)。

腺(xian)苷(gan)鈷胺(an)具強的(de)(de)引濕(shi)性，因此，其(qi)與(yu)水(shui)(shui)分(fen)子(zi)(zi)(zi)的(de)(de)結(jie)合(he)(he)情況是(shi)需要首先考慮(lv)的(de)(de)問題(ti)。文獻調研(①savageh.actacrystallographica,1984,40(a1):c24-c24.②bouquierejp.actacrystallographica,1993,49(1):79-89.③bouquierejp.actacrystallographica,sectionb:structurescience,1994,b50(5):566-578.)證實(shi)(shi)，從丙(bing)酮-水(shui)(shui)混合(he)(he)溶劑(ji)中(zhong)析(xi)出的(de)(de)腺(xian)苷(gan)鈷胺(an)以水(shui)(shui)合(he)(he)物的(de)(de)形式(shi)存(cun)在，1分(fen)子(zi)(zi)(zi)腺(xian)苷(gan)鈷胺(an)可(ke)結(jie)合(he)(he)17個水(shui)(shui)分(fen)子(zi)(zi)(zi)，這(zhe)些(xie)水(shui)(shui)分(fen)子(zi)(zi)(zi)以兩種(zhong)形式(shi)存(cun)在，一(yi)種(zhong)形式(shi)是(shi)有(you)(you)序(xu)(xu)(xu)(xu)水(shui)(shui)，這(zhe)部(bu)分(fen)水(shui)(shui)分(fen)子(zi)(zi)(zi)有(you)(you)序(xu)(xu)(xu)(xu)排列于溶劑(ji)口(kou)袋中(zhong)，另一(yi)種(zhong)形式(shi)是(shi)無序(xu)(xu)(xu)(xu)水(shui)(shui)，這(zhe)部(bu)分(fen)水(shui)(shui)分(fen)子(zi)(zi)(zi)無序(xu)(xu)(xu)(xu)排列于溶劑(ji)通道中(zhong)(圖1所示)。兩種(zhong)結(jie)合(he)(he)形式(shi)的(de)(de)水(shui)(shui)分(fen)子(zi)(zi)(zi)與(yu)腺(xian)苷(gan)鈷胺(an)的(de)(de)化學鍵(jian)的(de)(de)結(jie)合(he)(he)方(fang)式(shi)不同，因此，腺(xian)苷(gan)鈷胺(an)存(cun)在著分(fen)兩次脫水(shui)(shui)的(de)(de)化學結(jie)構(gou)基礎。通過實(shi)(shi)驗和tg-dsc檢測，發現(xian)腺(xian)苷(gan)鈷胺(an)在100℃以下脫去無序(xu)(xu)(xu)(xu)水(shui)(shui)，200℃以上脫去有(you)(you)序(xu)(xu)(xu)(xu)水(shui)(shui)，隨后(hou)發生完全分(fen)解(圖例可(ke)參看附(fu)圖5)。

有關腺苷鈷胺晶體結構(gou)及晶型的研究現狀如下：

文(wen)獻(matterncft.journalofbiologicalchemistry,1960,235(2):489-491)報(bao)道了(le)腺(xian)苷鈷(gu)胺(an)(an)的(de)單晶(jing)(jing)(jing)結構，該檢測用的(de)單晶(jing)(jing)(jing)的(de)制備條件(jian)為(wei)：4℃，為(wei)含87.5％(體(ti)(ti)積(ji))丙酮的(de)水溶(rong)液。由于(yu)在(zai)x-射線下，光(guang)敏感的(de)腺(xian)苷鈷(gu)胺(an)(an)發生部分(fen)分(fen)解(jie)，因此所獲(huo)得的(de)數(shu)(shu)據需要(yao)較多的(de)數(shu)(shu)學處理(li)，獲(huo)得的(de)單晶(jing)(jing)(jing)為(wei)正交晶(jing)(jing)(jing)系(xi)p212121。然后，文(wen)獻(ouyangl.inorganicchemistry2004,43,1235-1241)重新(xin)確定(ding)了(le)從水與丙酮混合溶(rong)劑中得到的(de)腺(xian)苷鈷(gu)胺(an)(an)的(de)單晶(jing)(jing)(jing)結構，其晶(jing)(jing)(jing)體(ti)(ti)為(wei)正交晶(jing)(jing)(jing)系(xi)p212121，但是，該文(wen)獻未提供粉末衍(yan)射數(shu)(shu)據。我們重復(fu)該實驗(yan)過程獲(huo)得的(de)腺(xian)苷鈷(gu)胺(an)(an)晶(jing)(jing)(jing)體(ti)(ti)，其粉末衍(yan)射(p-xrd)圖(tu)譜見圖(tu)2，該晶(jing)(jing)(jing)體(ti)(ti)的(de)x-射線粉末衍(yan)射在(zai)衍(yan)射角2θ＝6.9±0.1，7.9±0.1，9.8±0.1，13.2±0.1，14.3±0.1，16.2±0.1，18.1±0.1，19.0±0.1，20.1±0.1，21.2±0.1處有特征(zheng)峰。為(wei)敘述方(fang)便，我們將(jiang)其定(ding)義為(wei)a晶(jing)(jing)(jing)型腺(xian)苷鈷(gu)胺(an)(an)。

專(zhuan)利(li)jp47022716公布于1972年，該專(zhuan)利(li)公布了在(zai)17℃以(yi)上和17℃以(yi)下水(shui)(shui)中重(zhong)結(jie)晶(jing)(jing)(jing)獲得(de)(de)的(de)腺苷鈷胺的(de)2個(ge)晶(jing)(jing)(jing)型(xing)(xing)。該專(zhuan)利(li)提供了兩(liang)個(ge)晶(jing)(jing)(jing)型(xing)(xing)和丙(bing)酮-水(shui)(shui)混合體系中獲得(de)(de)的(de)晶(jing)(jing)(jing)型(xing)(xing)的(de)x-粉(fen)末(mo)衍射(she)圖譜，但是，圖譜質(zhi)量較(jiao)差，僅能看出較(jiao)強(qiang)峰(feng)(feng)的(de)特征。從該專(zhuan)利(li)附圖中可以(yi)看出，丙(bing)酮-水(shui)(shui)中結(jie)晶(jing)(jing)(jing)所獲得(de)(de)結(jie)晶(jing)(jing)(jing)的(de)粉(fen)末(mo)衍射(she)主(zhu)峰(feng)(feng)2θ＝6.9(強(qiang)度100)，與(yu)晶(jing)(jing)(jing)型(xing)(xing)a最強(qiang)峰(feng)(feng)一致，17℃以(yi)上結(jie)晶(jing)(jing)(jing)獲得(de)(de)的(de)晶(jing)(jing)(jing)型(xing)(xing)的(de)粉(fen)末(mo)衍射(she)主(zhu)峰(feng)(feng)2θ＝9.1，17.0，17℃以(yi)下結(jie)晶(jing)(jing)(jing)獲得(de)(de)的(de)晶(jing)(jing)(jing)型(xing)(xing)的(de)粉(fen)末(mo)衍射(she)主(zhu)峰(feng)(feng)2θ＝6.6，13.0。兩(liang)個(ge)從單一溶劑水(shui)(shui)中析出的(de)晶(jing)(jing)(jing)型(xing)(xing)的(de)粉(fen)末(mo)衍射(she)特征峰(feng)(feng)與(yu)本發明區別明顯，且(qie)未涉(she)及(ji)降低雜質(zhi)的(de)作(zuo)用，故不再贅述。

專利zl104130303有關腺苷(gan)鈷胺化合(he)物及其(qi)藥物組合(he)物，提及一(yi)種從(cong)異丙醇、吡啶(ding)和乙醚的混合(he)溶劑中(zhong)獲得的腺苷(gan)鈷胺晶(jing)體，該專利說明(ming)書附上(shang)了(le)粉末衍射(she)圖譜，同樣采用cu-kα靶輻射(she)，其(qi)衍射(she)角2θ＝6.1±0.1，11.2±0.1，17.0±0.1，19.1±0.1，21.0±0.1，22.2±0.1，23.5±0.1處有特(te)征峰。為敘述(shu)方(fang)便，我們將其(qi)定義為b晶(jing)型腺苷(gan)鈷胺。

綜上所述，目前(qian)，已(yi)經報道了(le)從(cong)混合溶(rong)劑(ji)(ji)中析出(chu)了(le)兩(liang)種腺苷鈷(gu)胺晶(jing)(jing)型(xing)，晶(jing)(jing)型(xing)a從(cong)丙(bing)酮(tong)-水混合溶(rong)劑(ji)(ji)中析出(chu)，該晶(jing)(jing)型(xing)為人們(men)認識已(yi)久，但(dan)是對光、熱、酸堿均(jun)不(bu)穩定(ding)。晶(jing)(jing)型(xing)b的穩定(ding)性較晶(jing)(jing)型(xing)a得到了(le)提高，但(dan)其制備過程(cheng)(zl104130303)存在(zai)著三個不(bu)足之處：

(1)采(cai)用(yong)吡(bi)啶(ding)(ding)和乙(yi)醚做溶(rong)劑(ji)，吡(bi)啶(ding)(ding)氣味濃烈(lie)，有強烈(lie)刺激性，能(neng)麻(ma)醉中樞神經系統，高濃度吸入后，對人體產(chan)(chan)生(sheng)(sheng)嚴重危害，且吡(bi)啶(ding)(ding)沸(fei)點(dian)較(jiao)高，為(wei)115℃，難(nan)以(yi)除去，會帶來(lai)溶(rong)劑(ji)殘留問題。另一溶(rong)劑(ji)乙(yi)醚極(ji)易(yi)(yi)揮發，存放時易(yi)(yi)產(chan)(chan)生(sheng)(sheng)過氧化物(wu)，使用(yong)時易(yi)(yi)導致操(cao)作人員(yuan)產(chan)(chan)生(sheng)(sheng)麻(ma)醉癥(zheng)狀，安(an)全(quan)隱患問題嚴重。

(2)制備(bei)過程需(xu)要3～6分鐘降溫至-15～-10℃，在-15℃靜置10～12小時(shi)。需(xu)要降溫和低(di)溫操作。

(3)在重復該專利(li)方法時，發現腺苷鈷胺(an)原(yuan)料并未完全(quan)溶(rong)解，實驗過程幾乎無降低雜質的(de)作用。

雜(za)質(zhi)(zhi)的(de)研(yan)(yan)究及控制(zhi)(zhi)是確(que)保藥(yao)品安全的(de)關鍵要(yao)素之(zhi)一，是藥(yao)品研(yan)(yan)發中(zhong)(zhong)尤(you)其是注射劑研(yan)(yan)發過程中(zhong)(zhong)風險控制(zhi)(zhi)意識的(de)重要(yao)體現，目(mu)前(qian)，我(wo)國2015版(ban)藥(yao)典(dian)規定的(de)腺苷(gan)(gan)鈷胺(an)原料藥(yao)雜(za)質(zhi)(zhi)含量(liang)不超過1％，市售腺苷(gan)(gan)鈷胺(an)的(de)雜(za)質(zhi)(zhi)含量(liang)普遍大于0.7％，存著在通(tong)過進一步的(de)精制(zhi)(zhi)，達到降(jiang)低(di)雜(za)質(zhi)(zhi)的(de)空間。我(wo)們通(tong)過重結晶(jing)技術的(de)研(yan)(yan)究，獲得了(le)一種以(yi)較(jiao)高收率獲得新(xin)的(de)晶(jing)型且進一步降(jiang)低(di)腺苷(gan)(gan)鈷胺(an)雜(za)質(zhi)(zhi)的(de)方(fang)(fang)法，目(mu)前(qian)，尚(shang)未有類(lei)似方(fang)(fang)法的(de)報道。

技術實現要素：

為了解決(jue)現有(you)技術的(de)問題，本發(fa)明(ming)的(de)第(di)一(yi)個目的(de)提供一(yi)種腺苷鈷(gu)胺新(xin)晶(jing)型(xing)，所獲(huo)得的(de)新(xin)晶(jing)型(xing)穩定性得到(dao)提高，更有(you)利于產(chan)品的(de)存貯(zhu)和(he)降低后續的(de)制劑難度。

本發明的(de)(de)(de)第二個目(mu)的(de)(de)(de)是在于提供一種有較高收率的(de)(de)(de)、條件溫和的(de)(de)(de)新(xin)晶型的(de)(de)(de)制備方(fang)法(fa)，該(gai)制備方(fang)法(fa)可(ke)有效降低(di)腺(xian)苷鈷胺原料藥雜質含量(liang)，可(ke)用(yong)于腺(xian)苷鈷胺的(de)(de)(de)精(jing)制。

本(ben)發明(ming)所述的(de)制備(bei)方法獲得(de)了一種新的(de)腺苷鈷胺晶(jing)(jing)(jing)(jing)型，使用cu-kα靶輻射，其(qi)單晶(jing)(jing)(jing)(jing)衍射圖(tu)譜見(jian)圖(tu)3，為(wei)單斜(xie)晶(jing)(jing)(jing)(jing)系p21。c晶(jing)(jing)(jing)(jing)型與文獻報道的(de)單晶(jing)(jing)(jing)(jing)構型相(xiang)比，為(wei)不同的(de)晶(jing)(jing)(jing)(jing)系，其(qi)晶(jing)(jing)(jing)(jing)體數據對比見(jian)表1。

本發明所述的(de)制備方法獲得(de)了一種腺(xian)苷鈷胺(an)晶(jing)型，采(cai)用(yong)cu-kα靶輻射(she)，其(qi)x-射(she)線粉(fen)末衍射(she)在衍射(she)角2θ＝5.1±0.1，6.3±0.1，7.0±0.1，7.6±0.1，8.0±0.1，8.6±0.1，9.4±0.1，13.2±0.1，13.8±0.1，15.0±0.1，17.5±0.1，19.1±0.1，21.4±0.1，23.5±0.1，25.3±0.1處(chu)有特征峰(feng)，如(ru)圖4所示。命名為c晶(jing)型腺(xian)苷鈷胺(an)。

文獻(xian)報道的(de)(de)a，b晶型(xing)和本發(fa)明制備(bei)的(de)(de)晶型(xing)的(de)(de)x-粉(fen)末衍射的(de)(de)2θ角(jiao)(jiao)度(du)(du)和相(xiang)對強(qiang)度(du)(du)對比匯(hui)總于表(biao)2。從表(biao)中可(ke)以看出(chu)，三種晶型(xing)的(de)(de)2θ角(jiao)(jiao)度(du)(du)和相(xiang)對強(qiang)度(du)(du)的(de)(de)區別(bie)明顯，可(ke)以判斷為不同(tong)晶型(xing)。

本(ben)發明(ming)的(de)腺(xian)苷鈷胺晶型(c晶型)的(de)制備方法(fa)，其(qi)步驟(zou)如下(xia)：

(1)采用潛溶劑溶解(jie)腺苷(gan)鈷胺粗品(pin)；

紅燈照明條件下；室溫，將腺(xian)苷(gan)鈷胺粗品(pin)加(jia)入到(dao)5-7倍質(zhi)量的水中，攪拌(ban)5-30分鐘至糊狀，保持攪拌(ban)，向上述糊狀物(wu)中加(jia)入潛溶劑(ji)，觀察到(dao)10min內，腺(xian)苷(gan)鈷胺完全溶解，得(de)到(dao)澄清溶液；

(2)采用(yong)反溶劑重結晶法得到(dao)腺(xian)苷鈷胺精(jing)制品；

紅燈照明條件下(xia)；向上(shang)述溶液(ye)中(zhong)加入反溶劑(ji)，得到(dao)懸浮(fu)液(ye)，室溫，靜置過夜，抽濾，異(yi)丙醇洗滌，在20～25℃，真空干燥(zao)3～8小時，得到(dao)腺苷鈷胺晶型(xing)；我們命名為c晶型(xing)。

所述的步驟(1)中的潛(qian)溶(rong)劑(ji)為(wei)水(shui)(shui)與溶(rong)劑(ji)丙酮(tong)(tong)或乙(yi)腈(jing)的混合(he)溶(rong)劑(ji)，優(you)選丙酮(tong)(tong)。水(shui)(shui)與丙酮(tong)(tong)或乙(yi)腈(jing)的體積比(bi)為(wei)1：0.3～0.5；優(you)選體積比(bi)為(wei)水(shui)(shui)：丙酮(tong)(tong)＝1：0.4。

所述的(de)(de)步驟(2)中的(de)(de)反溶劑為(wei)異(yi)(yi)丙(bing)醇(chun)(chun)或叔丁醇(chun)(chun)，優選為(wei)異(yi)(yi)丙(bing)醇(chun)(chun)。反溶劑一次性加(jia)入(ru)體(ti)系中，加(jia)入(ru)的(de)(de)量為(wei)步驟(1)中溶解腺苷鈷胺時(shi)加(jia)入(ru)的(de)(de)水的(de)(de)體(ti)積(ji)的(de)(de)1～5倍(bei)；優選為(wei)水：異(yi)(yi)丙(bing)醇(chun)(chun)＝1：2.6。

本發明腺苷鈷胺精制過程(cheng)的(de)溶(rong)解與析出狀態，取(qu)樣拍照見圖15。

本發明的(de)(de)制備方法所用的(de)(de)原(yuan)料(liao)為(wei)(wei)市售的(de)(de)腺(xian)苷鈷胺(an)(an)，其(qi)p-xrd圖(tu)(tu)譜(pu)與a晶型腺(xian)苷鈷胺(an)(an)一致(圖(tu)(tu)2)，其(qi)tg-dsc熱(re)分(fen)析圖(tu)(tu)譜(pu)見(jian)圖(tu)(tu)5，電鏡(jing)(sem)圖(tu)(tu)譜(pu)見(jian)圖(tu)(tu)6，紅外圖(tu)(tu)譜(pu)(ir)見(jian)圖(tu)(tu)7，含(han)量(hplc)圖(tu)(tu)譜(pu)見(jian)圖(tu)(tu)8。從(cong)tg-dsc圖(tu)(tu)譜(pu)可(ke)以(yi)看出，a晶型腺(xian)苷鈷胺(an)(an)在206±2℃出現一個特征放熱(re)峰，并且，100℃以(yi)下(xia)，發生無序水的(de)(de)脫去伴(ban)隨失重約12％，在206℃發生有序水的(de)(de)脫去，隨后(hou)發生分(fen)解。從(cong)sem可(ke)以(yi)看出，用來做原(yuan)料(liao)的(de)(de)市售腺(xian)苷鈷胺(an)(an)粒度(du)大小不一，外觀呈不規則片狀。按(an)照中國藥(yao)典2015版檢測方法，hplc檢測主成分(fen)含(han)量為(wei)(wei)99.24％，總雜(za)質為(wei)(wei)0.76％。

本發(fa)(fa)明(ming)所制備得到的(de)c晶(jing)型腺苷鈷胺(an)，其(qi)tg-dsc圖(tu)(tu)譜(pu)如圖(tu)(tu)9所示(shi)，sem圖(tu)(tu)譜(pu)見圖(tu)(tu)10，紅(hong)外(wai)圖(tu)(tu)譜(pu)(ir)見圖(tu)(tu)11，hplc圖(tu)(tu)譜(pu)見圖(tu)(tu)12。其(qi)dsc圖(tu)(tu)譜(pu)分(fen)(fen)析結果顯示(shi)，在(zai)210±2℃出現一個特征(zheng)吸熱峰。在(zai)100℃以下發(fa)(fa)生無序水的(de)脫去并伴隨失重約(yue)12％。從sem可(ke)以看出，本發(fa)(fa)明(ming)所制備的(de)腺苷鈷胺(an)粒度均勻(yun)，外(wai)觀呈規則塊(kuai)狀。按照中國藥典2015版檢測方法，hplc檢測主成分(fen)(fen)含量為99.51％，總雜質為0.49％。

我國2015版藥(yao)典要求在(zai)60℃，減壓(ya)干(gan)燥(zao)至恒(heng)重(zhong)時，腺(xian)苷(gan)鈷胺(an)(an)原料藥(yao)干(gan)燥(zao)失(shi)重(zhong)不得(de)超(chao)過(guo)12％，實驗證實在(zai)該(gai)條件下，脫去的(de)(de)為無(wu)(wu)(wu)序(xu)水(或(huo)其(qi)它(ta)(ta)(ta)溶(rong)(rong)(rong)劑(ji))，因此，腺(xian)苷(gan)鈷胺(an)(an)原料藥(yao)可失(shi)去的(de)(de)無(wu)(wu)(wu)序(xu)水(或(huo)其(qi)它(ta)(ta)(ta)溶(rong)(rong)(rong)劑(ji))含(han)量應為12％以下。需要進(jin)一(yi)步說(shuo)明的(de)(de)一(yi)個(ge)問題是，腺(xian)苷(gan)鈷胺(an)(an)以水合物(wu)或(huo)溶(rong)(rong)(rong)劑(ji)化(hua)(hua)物(wu)形式存在(zai)，不同(tong)無(wu)(wu)(wu)序(xu)水(或(huo)其(qi)它(ta)(ta)(ta)溶(rong)(rong)(rong)劑(ji))含(han)量的(de)(de)c晶(jing)(jing)型(xing)(xing)腺(xian)苷(gan)鈷胺(an)(an)是否具有相同(tong)的(de)(de)粉(fen)末衍(yan)(yan)射特征？通(tong)過(guo)改變干(gan)燥(zao)溫度和(he)時間，獲得(de)多個(ge)不同(tong)無(wu)(wu)(wu)序(xu)水(或(huo)其(qi)它(ta)(ta)(ta)溶(rong)(rong)(rong)劑(ji))含(han)量的(de)(de)c晶(jing)(jing)型(xing)(xing)腺(xian)苷(gan)鈷胺(an)(an)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)，進(jin)行tg-dsc和(he)x-粉(fen)末衍(yan)(yan)射分(fen)(fen)析，發(fa)(fa)現本發(fa)(fa)明方(fang)法所(suo)制得(de)的(de)(de)的(de)(de)c晶(jing)(jing)型(xing)(xing)腺(xian)苷(gan)鈷胺(an)(an)其(qi)粉(fen)末衍(yan)(yan)射特征與含(han)水(或(huo)其(qi)它(ta)(ta)(ta)溶(rong)(rong)(rong)劑(ji))量無(wu)(wu)(wu)關。為方(fang)便說(shuo)明，選擇有代(dai)表性的(de)(de)三個(ge)不同(tong)含(han)水(或(huo)其(qi)它(ta)(ta)(ta)溶(rong)(rong)(rong)劑(ji))量的(de)(de)c晶(jing)(jing)型(xing)(xing)腺(xian)苷(gan)鈷胺(an)(an)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)a，b，c附圖(tu)(tu)(tu)說(shuo)明。圖(tu)(tu)(tu)13為三個(ge)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)的(de)(de)tg-dsc分(fen)(fen)析圖(tu)(tu)(tu)譜(pu)，圖(tu)(tu)(tu)14為三個(ge)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)的(de)(de)x-粉(fen)末衍(yan)(yan)射圖(tu)(tu)(tu)譜(pu)。從圖(tu)(tu)(tu)13-14可以看出，三個(ge)c晶(jing)(jing)型(xing)(xing)腺(xian)苷(gan)鈷胺(an)(an)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)在(zai)100℃以下，分(fen)(fen)別失(shi)重(zhong)5.2％，7.4％和(he)9.3％，但均在(zai)210±2℃出現特征吸(xi)熱(re)峰，三個(ge)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)的(de)(de)p-xrd在(zai)2θ角度和(he)相對強度方(fang)面完全一(yi)致(zhi)。以上研(yan)究證實，本方(fang)法制備(bei)的(de)(de)腺(xian)苷(gan)鈷胺(an)(an)c晶(jing)(jing)型(xing)(xing)的(de)(de)無(wu)(wu)(wu)序(xu)水(或(huo)其(qi)它(ta)(ta)(ta)溶(rong)(rong)(rong)劑(ji))不在(zai)晶(jing)(jing)胞中占(zhan)位，對其(qi)p-xrd特征峰無(wu)(wu)(wu)影響。也就是說(shuo)，本發(fa)(fa)明所(suo)制備(bei)的(de)(de)腺(xian)苷(gan)鈷胺(an)(an)晶(jing)(jing)型(xing)(xing)，隨著干(gan)燥(zao)條件的(de)(de)變化(hua)(hua)，當無(wu)(wu)(wu)序(xu)水含(han)量發(fa)(fa)生(sheng)變化(hua)(hua)時，其(qi)晶(jing)(jing)型(xing)(xing)的(de)(de)的(de)(de)x-粉(fen)末衍(yan)(yan)射特征不發(fa)(fa)生(sheng)變化(hua)(hua)。

本(ben)發明所述(shu)的腺苷鈷胺(an)的精制方法為采用潛溶(rong)劑(ji)(ji)-反溶(rong)劑(ji)(ji)重(zhong)結(jie)晶(jing)法。所謂潛溶(rong)劑(ji)(ji)是指藥物在(zai)(zai)混(hun)合(he)溶(rong)劑(ji)(ji)中的溶(rong)解(jie)度(du)一(yi)般是各單(dan)一(yi)溶(rong)劑(ji)(ji)溶(rong)解(jie)度(du)的相加平均值(zhi)，在(zai)(zai)混(hun)合(he)溶(rong)劑(ji)(ji)中各溶(rong)劑(ji)(ji)在(zai)(zai)某一(yi)比例時，藥物的溶(rong)解(jie)度(du)比在(zai)(zai)各單(dan)純溶(rong)劑(ji)(ji)中溶(rong)解(jie)度(du)出現(xian)極(ji)大值(zhi)，這種現(xian)象稱為潛溶(rong)(cosolvency)，這種溶(rong)劑(ji)(ji)稱為潛溶(rong)劑(ji)(ji)(cosolvent)。

選(xuan)用市售的a晶型(xing)腺(xian)(xian)苷鈷(gu)(gu)(gu)胺(an)(an)，通過大量實驗研究發現(xian)，難溶(rong)(rong)(rong)性藥(yao)(yao)物腺(xian)(xian)苷鈷(gu)(gu)(gu)胺(an)(an)在水-丙酮體(ti)(ti)系，或(huo)者水-乙(yi)腈體(ti)(ti)系可(ke)形成潛溶(rong)(rong)(rong)，表3列出了腺(xian)(xian)苷鈷(gu)(gu)(gu)胺(an)(an)在這兩(liang)種體(ti)(ti)系中(zhong)的溶(rong)(rong)(rong)解(jie)度(中(zhong)國藥(yao)(yao)典(dian)2015版溶(rong)(rong)(rong)解(jie)度測定方法(fa))。從表中(zhong)可(ke)以看出，腺(xian)(xian)苷鈷(gu)(gu)(gu)胺(an)(an)在水中(zhong)略(lve)溶(rong)(rong)(rong)，不溶(rong)(rong)(rong)于丙酮或(huo)乙(yi)腈中(zhong)，但是，當水-丙酮體(ti)(ti)系，或(huo)者水-乙(yi)腈體(ti)(ti)系的體(ti)(ti)積(ji)比(bi)達到1：0.3～0.4時，此時，腺(xian)(xian)苷鈷(gu)(gu)(gu)胺(an)(an)溶(rong)(rong)(rong)解(jie)度比(bi)在單一水溶(rong)(rong)(rong)劑中(zhong)溶(rong)(rong)(rong)解(jie)度增大10倍以上。

采用潛溶(rong)(rong)原理，在少量(liang)的(de)水-丙酮混(hun)合(he)溶(rong)(rong)劑(ji)中，可(ke)以溶(rong)(rong)解大(da)量(liang)的(de)腺(xian)苷鈷(gu)胺(an)，再結合(he)異丙醇作為反溶(rong)(rong)劑(ji)的(de)操作，可(ke)快速(su)析出腺(xian)苷鈷(gu)胺(an)c晶(jing)型，收率大(da)于(yu)98％，規模可(ke)實(shi)現單批次精制腺(xian)苷鈷(gu)胺(an)50克，達到了(le)工業生產(chan)的(de)級別(bie)。

經(jing)過實驗(yan)驗(yan)證，獲得的(de)腺苷(gan)鈷(gu)胺c晶(jing)型(xing)溶解于以(yi)上所述的(de)潛溶劑(ji)后，以(yi)丙酮為反溶劑(ji)時(shi)(shi)(shi)，可(ke)析出a晶(jing)型(xing)，即以(yi)丙酮為反溶劑(ji)時(shi)(shi)(shi)，c晶(jing)型(xing)會轉化(hua)(hua)為與市售品(pin)相同(tong)的(de)a晶(jing)型(xing)，但該過程未發生雜質含(han)量的(de)變化(hua)(hua)，只發生了(le)晶(jing)型(xing)的(de)轉化(hua)(hua)。也就是說，當(dang)必須使(shi)用a晶(jing)型(xing)為原(yuan)料(liao)藥時(shi)(shi)(shi)，可(ke)通(tong)過c晶(jing)型(xing)的(de)制備達到降低雜質的(de)目的(de)，然(ran)后將(jiang)c晶(jing)型(xing)轉化(hua)(hua)為a晶(jing)型(xing)。

本發明方法具有(you)以下有(you)益效果(guo)：

潛溶劑(ji)-反(fan)(fan)溶劑(ji)重(zhong)結晶法用(yong)于難(nan)溶性(xing)藥物腺苷(gan)鈷(gu)胺精(jing)(jing)制(zhi)時，可用(yong)少量(liang)低毒性(xing)溶劑(ji)、溫和的(de)(de)反(fan)(fan)應條件(jian)和大于98％的(de)(de)收(shou)率獲得較高純(chun)度的(de)(de)腺苷(gan)鈷(gu)胺精(jing)(jing)制(zhi)品(pin)。本發明(ming)所制(zhi)備(bei)的(de)(de)腺苷(gan)鈷(gu)胺c晶型粒(li)度均勻，外(wai)觀(guan)呈(cheng)規(gui)則(ze)塊狀，按照中國藥典2015版的(de)(de)檢測方(fang)法進行(xing)含量(liang)分析(xi)，得到的(de)(de)主(zhu)成分含量(liang)大于99.5％，總雜質小于0.5％，顯著(zhu)優(you)于精(jing)(jing)制(zhi)前，為解(jie)決鈷(gu)胺素類化合物存(cun)在(zai)的(de)(de)類質同晶問題，提供了可選擇的(de)(de)有效方(fang)法。

本發(fa)(fa)明所獲得的腺苷(gan)鈷(gu)(gu)胺(an)c晶(jing)(jing)型(xing)(xing)，單晶(jing)(jing)結構及x-粉末衍射特(te)征未見文獻報道。本發(fa)(fa)明所制備的腺苷(gan)鈷(gu)(gu)胺(an)c晶(jing)(jing)型(xing)(xing)穩定性(xing)研究數據見表4-6，從實驗結果可以(yi)(yi)看出，5小時(shi)以(yi)(yi)內，市售品(pin)的a晶(jing)(jing)型(xing)(xing)發(fa)(fa)生迅速降解，而自(zi)制品(pin)c晶(jing)(jing)型(xing)(xing)僅發(fa)(fa)生輕微的含量下降，可見c晶(jing)(jing)型(xing)(xing)穩定性(xing)較商品(pin)化的a晶(jing)(jing)型(xing)(xing)明顯(xian)提高(gao)；c晶(jing)(jing)型(xing)(xing)腺苷(gan)鈷(gu)(gu)胺(an)對(dui)高(gao)溫、高(gao)濕的穩定性(xing)也顯(xian)著高(gao)于a晶(jing)(jing)型(xing)(xing)腺苷(gan)鈷(gu)(gu)胺(an)。

本(ben)發明(ming)所獲得的(de)腺苷鈷胺c晶(jing)型(xing)(xing)，溶解度與a晶(jing)型(xing)(xing)相近，a晶(jing)型(xing)(xing)溶解時采用(yong)的(de)潛溶劑(ji)的(de)條(tiao)件對c晶(jing)型(xing)(xing)完(wan)全適用(yong)。也就是本(ben)發明(ming)的(de)制備條(tiao)件可用(yong)于腺苷鈷胺的(de)二次(ci)重結(jie)晶(jing)，實驗發現(xian)，二次(ci)結(jie)晶(jing)具有(you)進一步降低雜質(zhi)的(de)作用(yong)。

表1a、c晶型的單晶數據

表2腺(xian)苷鈷胺三種晶型的x-粉(fen)末衍射對比

表3腺(xian)苷鈷胺原料(liao)在水-丙酮、水-乙(yi)腈中的溶解度(25℃±2℃)

附圖說明

圖1腺苷鈷胺水(shui)合(he)物水(shui)分子(zi)分布圖；

圖2a晶型腺苷(gan)鈷(gu)胺x-粉末衍射圖；

圖(tu)3c晶型腺苷鈷胺單(dan)晶衍射圖(tu)；

圖(tu)4c晶型腺苷鈷胺x-粉末衍(yan)射圖(tu)；

圖5a晶型腺苷鈷胺tg-dsc圖；

圖6a晶型(xing)腺苷鈷胺sem圖(放大(da)1000倍)；

圖7a晶型(xing)腺苷鈷(gu)胺hplc圖；

圖(tu)8a晶型腺苷(gan)鈷胺ir圖(tu)；

圖(tu)(tu)9c晶型(xing)腺苷鈷胺tg-dsc圖(tu)(tu)；

圖10c晶(jing)型腺苷鈷胺sem圖(放大1000倍)；

圖11c晶型腺(xian)苷鈷(gu)胺ir圖；

圖12c晶型(xing)腺苷鈷胺hplc圖；

圖13a無序水(shui)含(han)量為(wei)5.2％的c晶(jing)型腺苷鈷胺的tg-dsc圖；

圖(tu)13b無(wu)序水含量為7.4％的c晶(jing)型腺(xian)苷鈷(gu)胺的tg-dsc圖(tu)；

圖(tu)13c無(wu)序(xu)水(shui)含量為9.3％的(de)c晶型腺苷鈷胺的(de)tg-dsc圖(tu)；

圖14不同無序水含量的(de)c晶型腺苷(gan)鈷胺的(de)x-粉末衍射圖；

圖15腺苷鈷胺精制過程的溶解與析出圖示。

具體實施方式

下(xia)面結合具體實施例對本(ben)發(fa)明(ming)作進一步(bu)的說明(ming)。

本發明制備及(ji)檢(jian)測晶型(xing)所用(yong)的儀(yi)器的結構及(ji)性能如(ru)下：

紅燈為5w康(kang)帥(shuai)(shuai)照明(ming)led紅燈球泡，廈門康(kang)帥(shuai)(shuai)電子有限公司。

x-射線單晶衍射分析采用rigakuxtalabpromm007x射線衍射儀，cu-kα靶，在150k下收(shou)集數據。

x-射線粉末(mo)衍射分析采用brukerd8advance型(xing)x射線衍射儀，cu-kα靶，鎳單(dan)色器，工作電壓(ya)40kv，工作電流40ma，步(bu)長0.02o。

tga-dsc分析，采用(yong)美國ta公司q600熱重分析儀，升(sheng)溫速率10k/min。n2保護以20ml/min的速率通過dsc小室。

sem分析，冷場發射掃(sao)描電子顯微鏡，德(de)國zeiss公司，型號zeisssupra55，分辨率：1.0nm(15kv)/1.7nm(1kv)，加(jia)速電壓(ya)：0.1kv-30kv。

ir分析，紅外(wai)色譜儀，賽(sai)默飛世(shi)爾科技(中國)有限公司，型號5225veronardmadison，wi.53711。kbr壓片(pian)。

hplc分析(xi)，agilent公司，型號(hao)1260，色(se)譜柱(zhu)為intertsustainc18，檢測方法為中國藥典(dian)2015版第二部，腺苷(gan)鈷胺(an)。

實驗例1：

紅燈照明條件下，室溫(wen)(wen)。將市售腺(xian)苷(gan)鈷胺1g加(jia)入到(dao)7ml水(shui)中(zhong)，攪拌(ban)(ban)5分鐘至糊狀，保持(chi)攪拌(ban)(ban)，向(xiang)上(shang)述糊狀物中(zhong)加(jia)入3.5ml丙酮，1分鐘內，腺(xian)苷(gan)鈷胺完全溶(rong)解(jie)，得到(dao)澄清溶(rong)液。向(xiang)上(shang)述溶(rong)液中(zhong)加(jia)入35ml異丙醇(chun)，同時(shi)攪拌(ban)(ban)5min，攪拌(ban)(ban)速率(lv)控制(zhi)在400r/min，此時(shi)體系渾濁。然后，室溫(wen)(wen)靜置過夜，抽濾析出(chu)的晶(jing)體，濾餅(bing)用異丙醇(chun)洗滌(3*10ml)，25℃真空(kong)干燥7小時(shi)，得到(dao)c晶(jing)型腺(xian)苷(gan)鈷胺0.982g，收率(lv)98.2％。

所獲得(de)c晶型腺(xian)苷鈷(gu)胺的x-粉(fen)末衍射圖(tu)譜與圖(tu)4一致，tg-dsc圖(tu)譜與圖(tu)9一致。按照中國藥典(dian)2015版的檢測方法進行含量分析，得(de)到(dao)的腺(xian)苷鈷(gu)胺含量為99.5％，總雜質(zhi)為0.5％。

實驗例2：

紅燈照(zhao)明條件下，室溫。將市(shi)售腺(xian)苷(gan)(gan)鈷胺(an)10g加入(ru)到60ml水中(zhong)(zhong)，攪拌(ban)(ban)10分鐘至糊狀，保持(chi)攪拌(ban)(ban)，向(xiang)上(shang)述糊狀物中(zhong)(zhong)加入(ru)24ml丙酮，3分鐘內，腺(xian)苷(gan)(gan)鈷胺(an)完(wan)全溶(rong)(rong)解(jie)，得(de)到澄清(qing)溶(rong)(rong)液。向(xiang)上(shang)述溶(rong)(rong)液中(zhong)(zhong)加入(ru)156ml異丙醇，同(tong)時攪拌(ban)(ban)5min，攪拌(ban)(ban)速率控制(zhi)在(zai)300r/min，此時體(ti)(ti)系渾濁。然后，室溫靜置過夜，抽(chou)濾(lv)析出的晶體(ti)(ti)，濾(lv)餅用異丙醇洗滌(3*20ml)，25℃真空干(gan)燥(zao)7小時，得(de)到c晶型腺(xian)苷(gan)(gan)鈷胺(an)9.930g，收率99.3％。

所(suo)獲得c晶型腺苷鈷胺的x-粉(fen)末衍射圖(tu)譜(pu)與(yu)圖(tu)4一(yi)(yi)致，tg-dsc圖(tu)譜(pu)與(yu)圖(tu)9一(yi)(yi)致。按照中國藥典2015版(ban)的檢(jian)測方法(fa)進行含(han)量(liang)分(fen)析，得到的腺苷鈷胺含(han)量(liang)為99.6％，總雜質(zhi)為0.5％。

實驗例3：

紅燈照明條件下，室溫。將(jiang)市售腺苷鈷胺(an)50g加(jia)入(ru)到(dao)(dao)250ml水(shui)中，攪(jiao)拌(ban)30分鐘至糊狀(zhuang)(zhuang)，保(bao)持(chi)攪(jiao)拌(ban)，向上(shang)述(shu)糊狀(zhuang)(zhuang)物中加(jia)入(ru)75ml丙酮，10分鐘內，腺苷鈷胺(an)完全(quan)溶解，得到(dao)(dao)澄(cheng)清溶液(ye)。向上(shang)述(shu)溶液(ye)中加(jia)入(ru)250ml異丙醇，同(tong)時(shi)攪(jiao)拌(ban)1min，攪(jiao)拌(ban)速率控制在100r/min，此時(shi)體(ti)系逐漸渾濁。然后，室溫靜(jing)置過夜，抽濾析出的(de)晶(jing)體(ti)，濾餅用異丙醇洗滌(3*50ml)，25℃真空干燥(zao)7小時(shi)，得到(dao)(dao)c晶(jing)型腺苷鈷胺(an)49.200g，收率98.4％。

該條(tiao)件(jian)下(xia)所獲的(de)晶體粒度可達0.2mm，可用于x-單(dan)晶衍射檢測(ce)，其單(dan)晶衍射圖(tu)譜見(jian)圖(tu)3，所獲得c晶型腺苷鈷胺的(de)x-粉(fen)末衍射圖(tu)譜與圖(tu)9一(yi)致，tg-dsc圖(tu)譜與圖(tu)5一(yi)致。按照中(zhong)國藥典2015版的(de)檢測(ce)方法進行含量(liang)分析(xi)，得到的(de)腺苷鈷胺含量(liang)為(wei)(wei)99.5％，總雜(za)質為(wei)(wei)0.5％。

將本實驗例所獲得的c晶(jing)(jing)型(xing)(xing)腺苷(gan)鈷胺(an)進行穩(wen)定性(xing)研(yan)究，實驗結果(guo)見表4-6所示，從實驗結果(guo)可(ke)以看出，5小(xiao)時以內，市(shi)售品(pin)的a晶(jing)(jing)型(xing)(xing)發生迅速降(jiang)解，而自制品(pin)c晶(jing)(jing)型(xing)(xing)僅發生輕微的含量(liang)下降(jiang)，可(ke)見c晶(jing)(jing)型(xing)(xing)穩(wen)定性(xing)較(jiao)商品(pin)化的a晶(jing)(jing)型(xing)(xing)明顯提(ti)高；c晶(jing)(jing)型(xing)(xing)腺苷(gan)鈷胺(an)對(dui)高溫、高濕(shi)的穩(wen)定性(xing)也(ye)顯著高于a晶(jing)(jing)型(xing)(xing)腺苷(gan)鈷胺(an)。

表4腺苷鈷胺光照實驗結(jie)果對(dui)比

注：樣(yang)品分攤至培養皿中，厚度約為4mm，置于5000lx的光櫥中，按(an)照實驗方案取(qu)樣(yang)后(hou)，采(cai)用中國藥典2015版第(di)二部腺苷鈷(gu)胺檢測(ce)方法(fa)檢測(ce)含量(liang)。

表5腺苷鈷胺高溫實驗結果對比

注(zhu)：樣品(pin)分(fen)攤至(zhi)培(pei)養皿中(zhong)，厚度約為4mm,置于60℃恒溫干燥箱中(zhong)，按照實(shi)驗方案取樣后(hou)，采用中(zhong)國藥典2015版第(di)二部腺苷(gan)鈷胺檢測(ce)方法(fa)檢測(ce)含量。

表(biao)6腺苷鈷(gu)胺高濕實(shi)驗(yan)結果對比

注：樣(yang)品分攤至培(pei)養皿(min)中(zhong)(zhong)，厚度約(yue)為(wei)4mm,置(zhi)于高(gao)濕(shi)(相對(dui)濕(shi)度75％)條件下，按照實(shi)驗方(fang)案取樣(yang)后，采(cai)用(yong)中(zhong)(zhong)國藥典2015版(ban)第二部(bu)腺苷鈷胺檢測方(fang)法檢測含量。

實驗例4：

紅燈照(zhao)明條件(jian)下(xia)，室溫(wen)。將市售(shou)腺(xian)苷鈷(gu)胺(an)(an)2g加入到14ml水中(zhong)，攪拌(ban)10分(fen)鐘至糊狀，保(bao)持攪拌(ban)，向(xiang)上(shang)述糊狀物中(zhong)加入6ml乙腈，3分(fen)鐘內，腺(xian)苷鈷(gu)胺(an)(an)完全溶(rong)解(jie)，得(de)到澄清溶(rong)液(ye)(ye)。向(xiang)上(shang)述溶(rong)液(ye)(ye)中(zhong)加入35ml異(yi)丙(bing)(bing)醇，同時(shi)攪拌(ban)5min，攪拌(ban)速率控制在600r/min，此時(shi)體系(xi)渾濁。然(ran)后，室溫(wen)靜置過夜(ye)，抽濾析(xi)出的晶(jing)(jing)體，濾餅用異(yi)丙(bing)(bing)醇洗(xi)滌(3*15ml)，25℃真空干燥8小時(shi)，得(de)到c晶(jing)(jing)型(xing)腺(xian)苷鈷(gu)胺(an)(an)1.966g，收(shou)率98.3％。

所獲得c晶型腺苷鈷(gu)胺的(de)x-粉末衍射圖譜與圖4一致(zhi)，tg-dsc圖譜與圖9一致(zhi)。按照中國(guo)藥典2015版的(de)檢測方法進行含量分析，得到的(de)腺苷鈷(gu)胺含量為99.6％，總雜(za)質為0.5％。

實驗例5：

紅(hong)燈照(zhao)明條件下(xia)，室(shi)溫(wen)。將市售(shou)腺苷(gan)鈷胺(an)5g加入(ru)(ru)到36ml水中(zhong)，攪(jiao)拌16分鐘至糊狀(zhuang)，保(bao)持攪(jiao)拌，向上述糊狀(zhuang)物中(zhong)加入(ru)(ru)15ml乙腈(jing)，10分鐘內，腺苷(gan)鈷胺(an)完(wan)全溶(rong)解，得(de)到澄清溶(rong)液。向上述溶(rong)液中(zhong)加入(ru)(ru)85ml正丙醇，同時(shi)攪(jiao)拌5min，攪(jiao)拌速率(lv)控制在500r/min，此(ci)時(shi)體系渾濁。然(ran)后，室(shi)溫(wen)靜置過(guo)夜，抽濾(lv)析出的晶(jing)體，濾(lv)餅(bing)用異(yi)丙醇洗滌(3*25ml)，25℃真空(kong)干燥7小(xiao)時(shi)，得(de)到c晶(jing)型腺苷(gan)鈷胺(an)4.901g，收率(lv)98.0％。

所獲得c晶型腺苷鈷(gu)胺(an)的(de)x-粉末(mo)衍射圖譜與圖4一(yi)(yi)致，tg-dsc圖譜與圖9一(yi)(yi)致。按照(zhao)中國藥典2015版的(de)檢(jian)測方法進(jin)行含量分析，得到的(de)腺苷鈷(gu)胺(an)含量為99.5％，總雜質為0.5％。

實驗例6：

紅(hong)燈照明條件下，室溫。將實驗例(li)2制(zhi)備的c晶型腺苷鈷(gu)胺1g加(jia)入到(dao)7ml水中，攪拌15分鐘至糊(hu)(hu)狀，保(bao)持攪拌，向上(shang)述(shu)糊(hu)(hu)狀物中加(jia)入2.6ml乙腈，5分鐘內，腺苷鈷(gu)胺完全溶解，得到(dao)澄清溶液。向上(shang)述(shu)溶液中加(jia)入25ml丙酮(tong)，同時(shi)(shi)攪拌5min，攪拌速率(lv)控制(zhi)在(zai)500r/min，此時(shi)(shi)體系(xi)渾濁。然后，室溫靜置(zhi)過夜(ye)，抽濾(lv)析出的晶體，濾(lv)餅用乙腈洗(xi)滌(3*10ml)，25℃真空干燥(zao)7小時(shi)(shi)，得到(dao)a晶型腺苷鈷(gu)胺0.990g，收率(lv)99.0％。

所獲得(de)a晶型腺苷鈷胺的x-粉末衍射圖譜與圖2一致(zhi)，tg-dsc圖譜與圖5一致(zhi)。按照中國藥典(dian)2015版的檢(jian)測方(fang)法進行含量(liang)分析(xi)，得(de)到的腺苷鈷胺含量(liang)為99.6％，總雜質為0.5％。

實驗例7：

紅(hong)燈照明條件下，室溫。將實驗例2制備的c晶(jing)型(xing)腺(xian)苷鈷(gu)(gu)胺(an)(an)1g加(jia)(jia)入(ru)到(dao)(dao)7ml水中，攪(jiao)拌(ban)25分鐘至(zhi)糊(hu)狀，保持攪(jiao)拌(ban)，向上述糊(hu)狀物中加(jia)(jia)入(ru)3ml丙(bing)酮，5分鐘內，腺(xian)苷鈷(gu)(gu)胺(an)(an)完全溶(rong)解(jie)，得(de)(de)到(dao)(dao)澄清(qing)溶(rong)液。向上述溶(rong)液中加(jia)(jia)入(ru)25ml丙(bing)酮，同時攪(jiao)拌(ban)5min，攪(jiao)拌(ban)速率控制在500r/min，此時體(ti)系渾濁。然后，室溫靜(jing)置(zhi)過(guo)夜(ye)，抽濾析出的晶(jing)體(ti)，濾餅(bing)用丙(bing)酮洗滌(3*10ml)，25℃真空(kong)干燥7小時，得(de)(de)到(dao)(dao)a晶(jing)型(xing)腺(xian)苷鈷(gu)(gu)胺(an)(an)0.991g，收率99.1％。

所獲得a晶型腺苷鈷(gu)(gu)胺(an)的x-粉(fen)末衍射圖譜(pu)(pu)與圖2一致(zhi)，tg-dsc圖譜(pu)(pu)與圖5一致(zhi)。按照(zhao)中(zhong)國藥典2015版的檢(jian)測方法進行含(han)量(liang)分析(xi)，得到的腺苷鈷(gu)(gu)胺(an)含(han)量(liang)為(wei)99.6％，總雜質(zhi)為(wei)0.5％。

實驗例8：

紅燈照明(ming)條(tiao)件下，室溫。將(jiang)實(shi)驗(yan)例2制備的c晶型腺(xian)苷(gan)鈷(gu)(gu)胺1g加入(ru)到(dao)7ml水中(zhong)，攪(jiao)拌(ban)25分(fen)鐘至糊(hu)狀(zhuang)，保持攪(jiao)拌(ban)，向上(shang)述(shu)糊(hu)狀(zhuang)物中(zhong)加入(ru)2.6ml乙(yi)腈，5分(fen)鐘內，腺(xian)苷(gan)鈷(gu)(gu)胺完全溶解，得到(dao)澄清溶液。向上(shang)述(shu)溶液中(zhong)加入(ru)19ml異丙醇(chun)(chun)，同時攪(jiao)拌(ban)5min，攪(jiao)拌(ban)速(su)率(lv)控(kong)制在(zai)500r/min，此時體(ti)系渾濁。然后(hou)，室溫靜置過夜，抽濾(lv)析(xi)出的晶體(ti)，濾(lv)餅(bing)用(yong)異丙醇(chun)(chun)洗(xi)滌(3*10ml)，25℃真空干燥(zao)7小時，得到(dao)c晶型腺(xian)苷(gan)鈷(gu)(gu)胺0.996g，收率(lv)99.6％。

所(suo)獲得c晶(jing)型腺苷鈷胺的x-粉末衍射圖譜與圖4一致，tg-dsc圖譜與圖9一致。按照中國(guo)藥典2015版的檢測方法進行含(han)量(liang)分析，得到的腺苷鈷胺含(han)量(liang)為99.7％，總雜(za)質為0.4％。

實驗例9：

紅燈照明(ming)條件(jian)下，室溫。將(jiang)實驗例(li)2制備的c晶(jing)型腺(xian)苷鈷胺1g加入(ru)到7ml水中，攪(jiao)拌(ban)25分鐘至(zhi)糊狀，保持(chi)攪(jiao)拌(ban)，向上述(shu)糊狀物(wu)中加入(ru)3ml丙酮，5分鐘內，腺(xian)苷鈷胺完全溶解，得到澄清(qing)溶液。向上述(shu)溶液中加入(ru)18ml異(yi)丙醇，同(tong)時攪(jiao)拌(ban)5min，攪(jiao)拌(ban)速率控制在600r/min，此(ci)時體系渾濁。然后(hou)，室溫靜置過夜(ye)，抽濾析出的晶(jing)體，濾餅用異(yi)丙醇洗滌(di)(3*10ml)，25℃真空干(gan)燥7小時，得到c晶(jing)型腺(xian)苷鈷胺0.993g，收率99.3％。

所(suo)獲(huo)得(de)c晶型腺苷(gan)鈷胺的(de)x-粉末衍(yan)射(she)圖(tu)譜與(yu)圖(tu)4一(yi)(yi)致，tg-dsc圖(tu)譜與(yu)圖(tu)9一(yi)(yi)致。按照(zhao)中國(guo)藥典2015版的(de)檢(jian)測方法進行含量(liang)分析(xi)，得(de)到的(de)腺苷(gan)鈷胺含量(liang)為99.7％，總雜質為0.4％。

本(ben)發明公開和(he)(he)提出的(de)腺苷鈷(gu)胺(an)晶型及其(qi)制備(bei)(bei)方法(fa)與應用，本(ben)領域技(ji)術(shu)人(ren)員(yuan)可(ke)通過(guo)借鑒本(ben)文內(nei)容，適當(dang)改(gai)變條件(jian)路線等環(huan)節實現(xian)，盡管本(ben)發明的(de)方法(fa)和(he)(he)制備(bei)(bei)技(ji)術(shu)已(yi)通過(guo)較(jiao)佳實施例子進行了描述(shu)，相(xiang)關(guan)技(ji)術(shu)人(ren)員(yuan)明顯能在不脫離(li)本(ben)發明內(nei)容、精神(shen)和(he)(he)范圍(wei)內(nei)對本(ben)文所(suo)述(shu)的(de)方法(fa)和(he)(he)技(ji)術(shu)路線進行改(gai)動(dong)或(huo)重(zhong)新組合(he)，來實現(xian)最終的(de)制備(bei)(bei)技(ji)術(shu)。特別需要指(zhi)出的(de)是，所(suo)有相(xiang)類似的(de)替換和(he)(he)改(gai)動(dong)對本(ben)領域技(ji)術(shu)人(ren)員(yuan)來說是顯而易見的(de)，他們都被(bei)視(shi)為包括在本(ben)發明精神(shen)、范圍(wei)和(he)(he)內(nei)容中。