三七在制備預防和/或治療小膠質細胞介導疾病藥物的新用圖
【技術領域】
[0001] 本發明涉及三七的新用途，特別是三七提取物的新用途，即在制備預防和/或治 療抗小膠質細胞介導疾病藥物方面的新用途。
【背景技術】
[0002] 小膠質細胞（microglia)的異常激活在多發性硬化等疾病中都發揮重要作用，是 上述疾病病理發展過程中造成神經損傷的主要病因之一。在病理狀態下，微環境的微小變 化即可激活小膠質細胞，激活的小膠質細胞可以上調許多神經毒性因子的分泌水平，如一 氧化氮（NO)、活性氧簇（R0S)和類花生酸類（如前列腺素E2)等，從而導致繼發性腦損害。 因此，抑制小膠質細胞的過度活化，可以有效防治、多發性硬化等疾病。
[0003] 三七主要成分包括三七皂苷R1、人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rbl與人參 皂苷Rd。三七具有活血祛瘀，通脈活絡的功效，對高脂血癥、高粘血癥、對高血壓有較好的治 療效果，同時具有抗心肌缺血、抗動脈粥樣硬化、抗血栓、抗心腦缺血等作用，臨床主要以全 成分制備成制劑。
[0004] 三七對心腦血管疾病具有預防與治療作用已有廣泛的公開；專利申請 CN101116669公開了人參皂苷Rg3、人參皂苷Rh2與人參皂苷III幾種組合物在預防放化療 后引起的白細胞降低的輔助用藥；專利申請CN 1305479C公開了人參皂苷Rg5、Rkl、Rg3、 Rh2、Rg5等低極性人參皂苷組合物及其具抗癌活性的特征。
[0005] 其中單體成分人參皂苷Rgl對蛋白質或脂質的生物合成作用與對DNA的生物合成 的作用有大致相同傾向，能減少酰膽堿引起的豚鼠離體子宮的收縮，對大鼠有減慢心率和 雙向性血壓作用（先升后降），有舒張動物血管和抗疲勞作用。
[0006] 人參皂苷Re能抑制中樞神經，促進DNA，RNA合成；具有升高血漿皮質酮的作用， 擴張血管；能減少乙酰膽堿引起的豚鼠離體子宮的收縮；對大鼠有減慢心率和雙相性血壓 (先升后降）作用；對貓的行為和腦電圖顯示中等的抑制；有抗疲勞作用。
[0007] 人參皂苷Rbl對中樞神經系統、心血管系統、消化系統、免疫系統、內分泌系統、泌 尿生殖系統有廣泛的作用，從而可提高人體力、智力的活動能力，增強機體對有害刺激的非 特異性抵抗力。
[0008] 人參皂苷 Rd(Ginsenoside Rd，分子量：947. 12,分子式：C48H82018, CAS 號： 52705-93-8)。從五加科植物人參[Panax ginseng C.A.Mey er(P.schinseng Nees)] 或三七[Panax Notoginseng(Burk. )F. H. Chen]等的根、花蕾、葉、蘆頭、莖或萌蘆科 (Cucurbifaceae)絞股藍[Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Mak.]的葉中提取得到，以 三七含量最為豐富。人參皂苷Rd易溶于水、甲醇、乙醇，不溶于乙醚、苯。文獻報道，人參皂 苷Rd具有防治中風（藥學學報，2005,40 (12) : 1144-1146)、血栓形成（中國藥理學通報， 2005，11 :1400-1401)等心腦血管疾病的作用。
[0009]
[0010] 但目前沒有文獻報道三七或三七提取物可抑制小膠質細胞相關的免疫毒性，亦沒 有報道公開三七或三七提取物能防治肌萎縮性脊髓側索硬化癥、艾滋病相關癡呆、瘋牛病 等疾病。

【發明內容】

[0011] 本發明的目的是提供三七在制備預防和/或治療小膠質細胞介導疾病藥物的新 用途；
[0012] 本發明的另一目的是提供三七提取物在制備預防和/或治療小膠質細胞介導疾 病藥物的新用途；
[0013] 本發明的另一目的是提供三七醇提物在制備預防和/或治療小膠質細胞介導疾 病藥物的新用途；
[0014] 本發明的另一目的是提供用于制備預防和/或治療小膠質細胞介導疾病藥物的 三七提取物的制備方法。
[0015] 本發明的目的是通過下列的技術方案實現的：
[0016] 本發明原料來源：三七為五加科植物Panax notoginseng(Burk. )F. H. Chen的干 燥根。
[0017] 發明人在研宄小膠質細胞介導疾病的治療過程中發現，三七及三七提取物能減少 活化小膠質細胞NO等細胞毒性炎癥介質的產生，抑制小膠質細胞激活誘導細胞死亡，從而 為三七及三七提取物應用于活化小膠質細胞介導的神經毒性作用所引起的腦部炎癥相關 疾病，如肌萎縮性脊髓側索硬化癥、艾滋病相關癡呆、瘋牛病等疾病的防治提供了直接有力 的實驗依據和理論基礎，既有很強的科學性和創新性，又有很高的開發應用價值。
[0018] 因此，本發明所述小膠質細胞介導疾病包括多發性硬化、肌萎縮性脊髓側索硬化 癥、艾滋病癡呆癥、瘋牛病。
[0019] 本發明采用獨特提取、純化工藝所得三七提取物，控制提取物中人參皂苷Rd含量 不低于30%，用此三七提取物制備的藥物，預防和/或治療小膠質細胞介導疾病效果更顯 著。
[0020] 本發明藥物臨床應用時，服用量最佳治療效果為每日劑量以人參皂苷Rd計為 10 ~100mg/kg 體重。
[0021] 本發明還提供三七提取物與醫藥學上可接受的載體配合制成在制備治療和/或 預防小膠質細胞介導疾病藥物方面的新用途。三七提取物配合醫藥學上可接受的載體和藥 用輔料按照藥學領域常規方法制備為口服、注射或粘膜給藥，可以制成片劑、膠囊、粉劑、顆 粒、錠劑等劑型。
[0022] 本發明專利臨床應用的安全性較高，在治療小膠質細胞介導疾病的藥物治療中不 失為一種好藥，其拓寬了治療小膠質細胞介導疾病的新方法，同時為患者解決了現有技術 治療小膠質細胞介導疾病時出現的不良反應。
[0023] 因此，申請人提供三七及三七提取物能夠用于治療小膠質細胞介導疾病藥物方面 的新用途。特別是三七醇提物用于治療小膠質細胞介導疾病藥物方面的新用途。
[0024] 本發明還公開了預防和/或治療小膠質細胞介導疾病藥物所用三七提取物的制 備方法，包括以下步驟：
[0025] 1)取三七藥材加水或體積百分比濃度為25~96%的乙醇提取，將提取液回收乙 醇，得二七提取液；
[0026] 2)三七提取液脫脂后，經D型大孔樹脂純化后，濃縮，減壓干燥，制成干燥品；
[0027] 3)干燥品加體積百分比濃度為95. 0%以上的乙醇溶解，濾去不溶物，然后經過單 分散聚合硅膠層析柱吸附洗脫純化，用紫外檢測器在線檢測洗脫液紫外吸光度，檢測波長 為203nm，收集主含人參皂苷Rd的洗脫液，回收溶媒并濃縮、減壓干燥，即得。
[0028] 優選地，步驟1)中所得三七提取液含固形物5 - 25%。
[0029] 優選地，步驟2)經D型大孔樹脂純化時，用水：95%乙醇按梯度洗脫法洗去除Rd 外的三七三醇苷類成分以及多數三七二醇苷類成分，再單獨以70~95%乙醇洗脫以人參 皂苷Rd為主的皂苷類成分，收集洗脫液并脫色后，回收溶媒。
[0030] 優選地，步驟3)濾去不溶物是采用1~50 y m濾膜過濾。
[0031] 優選地，步驟3)經單分散聚合硅膠層析柱吸附后，洗脫純化是用水：體積百分比 濃度為95. 0 %~99. 9%乙醇按梯度洗脫法洗脫純化。
[0032] 優選地，紫外檢測器在線檢測采用的檢測波長為203nm。
[0033] 本發明提供的三七、三七提取物用于治療小膠質細胞介導疾病藥物方面的新用途 具有以下優點：
[0034] 1、本發明所用三七及三七提取物為天然中藥，安全無毒，可長期服用。在"三七提 取物對小膠質細胞細胞活力的影響"實驗中發現：三七提取物對小膠質細胞活力無抑制作 用，不會引起小膠質細胞死亡。
[0035] 2、"三七提取物對激活小鼠小膠質細胞系BV-2產生炎癥介質（NO)水平的影響"實 驗中發現三七提取物干預能明顯抑制LPS引起的NO的釋放，實驗數據表明三七提取物對激 活的小膠質細胞細胞具有明顯的抑制作用。
[0036] 3、本發明所述三七提取物制備方法以D型大孔樹脂吸附后，先用水：95%乙醇梯 度洗脫去除Rd外的三七三醇苷類成分以及多數三七二醇苷類成分，再單獨以70~95%乙 醇洗脫以人參皂苷Rd為主的皂苷類成分，可以在前期獲得人參皂苷Rd較高的洗脫液，再通 過進一步的純化處理，獲得用于治療小膠質細胞介導疾病有顯著效果的三七提取物。
【具體實施方式】
[0037] 下面通過實施例進一步說明本發明。應該理解的是，本發明的實施例是用于說明 本發明而不是對本發明的限制。根據本發明的實質對本發明進行的簡單改進都屬于本發明 要求保護的范圍。除非另有說明，本發明中的乙醇量的百分數是體積百分數，v/v表示溶液 的體積比。
[0038] 實施例1 :三七提取物的制備
[0039] 1)取三七藥材加水提取，提取液濃縮成含固形物25%的三七提取液；
[0040] 2)三七提取液脫脂后，經D型大孔樹脂純化，用水：95%乙醇按梯度洗脫法洗去除 Rd外的三七三醇苷類成分以及多數三七二醇苷類成分，再單獨以70 %乙醇洗脫以人參皂 苷Rd為主的皂苷類成分，收集洗脫液并脫色后，回收溶媒后，濃縮，減壓干燥，制成干燥品；
[0041] 3)干燥品加濃度為95. 0%乙醇溶解，用50 y m濾膜濾去不溶物，然后經過單分散 聚合硅膠層析柱吸附后，用水：濃度為95.0%乙醇梯度洗脫法洗脫純化，用紫外檢測器在 線檢測洗脫液紫外吸光度，檢測波長為203nm，收集主含人參皂苷Rd的洗脫液，回收溶媒并 濃縮、減壓干燥，即得三七提取物。
[0042] 采用HPLC法測定，人參皂苷Rd含量為30 %。
[0043] 實施例2 :三七提取物的制備
[0044] 1)取三七藥材加濃度為25%的乙醇提取，將提取液回收乙醇，得含固形物20%的 二七提取液；
[0045] 2)三七提取液脫脂后，經D型大孔樹脂純化，用水：95%乙醇按梯度洗脫法洗去除 Rd外的三七三醇苷類成分以及多數三七二醇苷類成分，再單獨以95 %乙醇洗脫以人參皂 苷Rd為主的皂苷類成分，收集洗脫液并脫色后，回收溶媒后，濃縮，減壓干燥，制成干燥品；
[0046] 3)干燥品加濃度為96%乙醇溶解，用45 y m濾膜濾去不溶物，然后經過單分散聚 合硅膠層析柱吸附后，用水：濃度為97%乙醇按梯度洗脫法洗脫純化，用紫外檢測器在線 檢測洗脫液紫外吸光度，檢測波長為203nm，收集主含人參皂苷Rd的洗脫液，回收溶媒并濃 縮、減壓干燥，即得。
[0047] 采用HPLC法測定，人參皂苷Rd含量為52%。
[0048] 實施例3 :三七提取物的制備
[0049] 1)取三七藥材加濃度為96%乙醇提取，將提取液回收乙醇，得含固形物5%的 二七提取液；
[0050] 2)三七提取液脫脂后，經D型大孔樹脂純化，用水：95%乙醇按梯度洗脫法洗去除 Rd外的三七三醇苷類成分以及多數三七二醇苷類成分，再單獨以95 %乙醇液洗脫以人參 皂苷Rd為主的皂苷類成分，收集洗脫液并脫色后，回收溶媒后，濃縮，減壓干燥，制成干燥 品；
[0051] 3)干燥品加濃度為98. 0%乙醇溶解，用1 y m濾膜濾去不溶物，然后經過單分散聚 合硅膠層析柱吸附后，用水：濃度為98%乙醇按梯度洗脫法洗脫純化，用紫外檢測器