鞣漆樹果α-糖苷酶抑制活性提取物及其組合物的醫藥用途和制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬醫藥技術領域，具體涉及一種鞣漆樹果a -糖苷酶抑制活性提取物及其 組合物的制備方法以及它在降血糖、減肥、降血脂、治療糖尿病等方面的醫藥用途。
【背景技術】
[0002] 親漆樹果TPAois coriariar)為漆樹科（ylaacart/iaceae)植物親樹（7P&/51 coriariaZ.)的果實。為小型核果，扁圓形，直徑3-5毫米，表皮棕紅色至暗紅色，果皮易 破碎，在放大鏡下可見短絨毛，核圓扁形或腎形，直徑2毫米，光滑堅硬，黃綠色至棕綠色， 臍點位于核的側面，微凹，長圓形。主治功能：清熱解毒，降壓安神，用于熱病高血壓及食欲 不振。
[0003] 本發明通過大規模、系統地活性篩選，意外地發現維吾爾藥鞣漆樹果提取物及其 部分化學組分，具有顯著地a -糖苷酶抑制活性，該活性提取物及其組合物有望應用于降 血糖、減肥、降血脂、糖尿病等方面。

【發明內容】

[0004] 本發明所解決的技術問題是提供一種鞣漆樹提取物。
[0005] 本發明還提供了以鞣漆樹提取物為主要活性成分的組合物。
[0006] 本發明同時提供了鞣漆樹提取物及其組合物的制備和應用。
[0007] 本發明是通過如下技術方案實現的： 維吾爾藥鞣漆樹果經甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱， 用石油醚-丙酮混合溶劑梯度洗脫(石油醚：丙酮，比例見表1)，各石油醚-丙酮比例混合 溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外篩選體系測試其a -糖苷酶抑制活性，意外地發現先 用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚：丙酮，100:8,體積比）洗脫，繼用石油醚-丙酮混合溶劑 (石油醚：丙酮，100:12,體積比）洗脫洗脫，石油醚：丙酮100:12洗脫得到的洗脫液經回收 有機溶劑，干燥，即為a-糖苷酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脫部位，沒有a-糖苷 酶抑制活性的作用。特別地，優選為先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚：丙酮，1〇〇: 8,體積 比）洗脫10倍柱體積，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚：丙酮，100:12,體積比）洗脫20 倍柱體積，洗脫液干燥后所得提取物為a-糖苷酶抑制活性的提取物。a-糖苷酶抑制活性 的提取物可以通過以上方法得到富集，從而與其他雜質類成分分離開。該鞣漆樹果a-糖 苷酶抑制活性提取物從未見文獻報道，其薄層譜色譜（TLC)分析表征如圖1，TLC分析條件 為：GF 254硅膠板，展開系統：石油醚：乙酸乙酯：丙酮= (3:1:1)，顯色方法：香草醛-硫酸顯 色。
[0008] 維吾爾藥鞣漆樹果經甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠 柱，用石油醚-丙酮混合溶劑梯度洗脫(石油醚：丙酮，比例見表1)，各石油醚-丙酮比例 混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外篩選體系測試其a -糖苷酶抑制活性，意外地發 現先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚：丙酮，100:20,體積比）洗脫，繼用石油醚-丙酮混 合溶劑(石油醚：丙酮，100:100,體積比）洗脫洗脫，石油醚：丙酮100:100洗脫得到的洗脫 液經回收有機溶劑，干燥，即為a-糖苷酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脫部位，沒有 a-糖苷酶抑制活性的作用。即，具有a-糖苷酶抑制活性的提取物，可以通過以上方法得 到富集，從而與其他雜質類成分分離開。該鞣漆樹果a-糖苷酶抑制活性提取物從未見文 獻報道，其薄層譜色譜（TLC)分析表征如圖2, TLC分析條件為：GF254硅膠板，展開系統：石 油醚：乙酸乙酯：丙酮=(3:1:1)，顯色方法：香草醛-硫酸顯色。
[0009] 具體，發現過程如下： 1、鞣漆樹果經甲醇超聲提取物的制備 取維吾爾藥鞣漆樹果20 g，經100 mL甲醇超聲提取15 min，提取液濃縮后，得提取物 3冊0534樣品2.8711§，留樣0.1436 §，上樣量2.7275 §，拌樣硅膠3§，空白硅膠15§，石 油醚-丙酮系統洗脫。
[0010] 2、石油醚-丙酮混合溶劑梯度洗脫方法和結果 取維吾爾藥鞣漆樹果20 g，經100 mL甲醇超聲提取15 min，提取液濃縮后，得提取物 SN0053A樣品2. 8711 g，留樣0. 1436 g，上樣量2. 7275 g，甲醇溶解，共用甲醇15 mL。上 硅膠柱色譜，拌樣硅膠3 g，空白硅膠15 g，玻璃柱內徑2.5 cm，石油醚-丙酮系統梯度洗 脫(條件見表1)，柱體積45 mL，每個梯度洗脫300mL，各個濃度提取洗脫液的洗脫物，回收 溶劑，即得，石油醚-丙酮梯度洗脫提取物，TLC分析結果見圖3。
[0011] 表 1
3、抑制a-糖苷酶活性篩選方法和結果 1) 實驗條件 a、 材料：DMSO(二甲基亞砜）（科密歐公司）；KH2P04、K2HP04 *31120(廣東汕頭市西隴化 工廠）；ff-glucosidase酶（美國Sigma公司）；PNPG(美國Sigma公司） b、 實驗儀器：多功能酶標儀Bio-RadModel680 型（Bio-RadLaboratoriesInc.) 2) 實驗方法和過程 樣品處理：將1 mg待測樣品溶于20 二甲基亞砜（DMS0)作為母液，取1 母液 加入99兒緩沖鹽配成500々g.mr1的樣品溶液。
[0012] 在96孔板中依次加入ff-glucosidase酶PBS溶液20 使其終濃度為0. 07u/ mL，樣品濃度為500 .mL-1的PBS溶液10 #L。冰浴5分鐘，加入底物PBS溶液20 使其終濃度為2. 5mmol/1，用濃度為0. 1M、pH 6. 84的PBS溶液補足體積為100 #L。加 過樣的96孔板在37°C水浴30分鐘。于405nm處測定反應物的吸光度，并以阿卡波糖作 為陽性對照。樣品抑制c-glucosidase酶活性比率用加樣品較空白對照的直的比值來 表示。樣品抑制百分率按以下公式計算： 酶活性抑制率％=[A空白_(A樣品-A背景）]/A空白X100 式中Aee :不加樣品反應后的吸收值； :加入樣品反應后的吸收值； :只加樣品的吸收值。
[0013] 3)實驗結果 表2

結果發現： 本發明的最優方案為：維吾爾藥鞣漆樹果經甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分 離，上樣后的硅膠柱，用石油醚-丙酮混合溶劑梯度洗脫（石油醚：丙酮，比例見表1)，各石 油醚-丙酮比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外篩選體系測試其a -糖苷酶抑制 活性，意外地發現先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，1〇〇: 8,體積比）洗脫，繼用石 油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:12,體積比）洗脫洗脫，石油醚：丙酮100:12洗脫 得到的洗脫液經回收有機溶劑，干燥，即為a-糖苷酶抑制活性提取物。該鞣漆樹果a-糖 苷酶抑制活性提取物從未見文獻報道，其薄層譜色譜（TLC)分析表征如圖1。
[0014] 維吾爾藥鞣漆樹果經甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠 柱，用石油醚-丙酮混合溶劑梯度洗脫(石油醚：丙酮，比例見表1 )，各石油醚-丙酮比例混 合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外篩選體系測試其a -糖苷酶抑制活性，意外地發現 先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚：丙酮，100:20,體積比）洗脫，繼用石油醚-丙酮混合 溶劑(石油醚：丙酮，100:100,體積比）洗脫洗脫，石油醚：丙酮100:100洗脫得到的洗脫液 經回收有機溶劑，干燥，即為a-糖苷酶抑制活性提取物。該鞣漆樹果a-糖苷酶抑制活性 提取物從未見文獻報道，其薄層譜色譜（TLC)分析表征如圖2。
[0015] 4、a -糖苷酶抑制活性活性提取物的提取方法研宄 1)提取溶劑的種類研宄 分別用甲醇、丙酮、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、乙醇水混合溶劑等有機 溶劑提取，并測試提取物的a-糖苷酶抑制活性，實驗結果如下： 表3
研宄結果表明：提取用有機溶劑可以為甲醇、石油醚、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混 合溶劑、乙醇水混合溶劑。
[0016] 2)提取溶劑的用量研宄 分別用1、2、5、10、20、30、40、50倍(重量/體積比）有機