一種木蝴蝶總黃酮的提取純化方法及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及化學及醫藥技術領域，尤其涉及中藥材木蝴蝶總黃酮的提取純化方法 及其應用。
【背景技術】
[0002] 肝癌是全世界最常見的惡性腫瘤之一，我國的肝癌發病率和死亡率均占腫瘤中的 第二位。因其起病隱匿，進展迅速，發現時已多屬中晚期，故而手術治療效果差，放化療又都 有明顯不良反應，導致肝癌患者生存質量差，生存期短。而以中醫藥為主的綜合治療對控制 肝癌患者病情發展，改善生活質量，延長生存期有著重要意義。
[0003] 木蝴蝶為紫葳科植物木蝴蝶的干燥成熟種子，始載于《滇南本草》，記載其功能主 治"定喘、消痰、破盅積、氣盅之毒、補虛、寬中、進食";趙學敏著"治疏氣痛、肝氣痛、下部濕 熱"；《中藥大辭典》記載"清肺熱，利咽喉，治急慢性支氣管炎、咽喉腫痛、扁桃體炎"；《中國 藥典》記載"清肺、利咽、疏肝和胃，用于清肺利咽、疏肝和胃"。中醫理論認為，木蝴蝶性味 苦、甘、涼，入肺、肝、胃經，主治以咳嗽為主癥的上呼吸道感染、急性支氣管炎、慢性咽炎、肺 炎后期等癥；現代醫學研宄表明，木蝴蝶有抗癌、抗誘變、抗氧化、抗菌、抗炎等作用。
[0004] 木蝴蝶藥材中的化學成分復雜，含有黃酮類、對羥基苯乙醇、環己醇及揮發油等物 質。黃酮類成分為木蝴蝶藥材的主要有效成分，而有關木蝴蝶總黃酮抗肝癌的研宄迄今為 止尚未見報道。

【發明內容】

[0005] 本發明的目的在于提供一種木蝴蝶總黃酮的提取純化方法及其應用，該方法適用 于不同產地的木蝴蝶藥材，提取純化后的木蝴蝶總黃酮平均純度均可達90%以上，用于制 備治療肝癌的藥物。
[0006] 為實現本發明的上述目的，本發明提供一種木蝴蝶總黃酮的提取純化方法，包括 以下步驟。
[0007] 步驟1、取木蝴蝶藥材粉碎，加10-30倍量50-95%的乙醇，回流提取1-3次，每次 1-5h，過濾，合并濾液，作為提取液，備用。
[0008] 步驟2、將步驟1中的提取液，加熱濃縮至濃度為0. 02-0. 12 g/mL，再用HC1和 NaOH溶液調節pH值為2-7,作為上樣液。
[0009] 步驟3、上樣液純化：將步驟2中的上樣液，上HPD-100大孔樹脂，所述木蝴蝶藥材 與樹脂用量比為〇. 1-1. 〇g/mL，用2-10BV水除雜后，再用5-15BV的20-95%乙醇洗脫，得 富集物，將富集物減壓干燥至粉末或浸膏，即得。
[0010] 本發明采用質譜表征的手段對木蝴蝶抗肝腫瘤有效組分總黃酮類進行物質解析， 包括以下步驟：采用HPLC-EIS-MS等現代質譜研宄技術與分析手段，對步驟3中提取純化得 到的木蝴蝶總黃酮進行表征，通過木蝴蝶總黃酮的保留時間、質譜分子量棒狀圖和紫外吸 收光譜圖與相應的對照品進行比較，確定木蝴蝶總黃酮的化學成分。
[0011] 所述木蝴蝶總黃酮包括5種化學成分，分別為：木蝴蝶苷B、木蝴蝶苷A、白楊 素-7-0--D-葡萄糖醛酸苷、黃芩素、白楊素。
[0012] 所述木蝴蝶總黃酮的提取純化方法適用于云南、廣西、貴州、湖南、四川、安徽等不 同產地的木蝴蝶藥材，經提取純化后，總黃酮平均純度均可達90%以上，具有很好的普適 性。
[0013] 本發明還提供木蝴蝶總黃酮在制備治療肝癌藥物中的應用。
[0014] 所述木蝴蝶總黃酮可加入藥學上可接受的輔料或載體，制成不同劑型的治療肝癌 的藥物。
[0015] 與現有技術相比本發明的有益效果。
[0016] 本發明提供的木蝴蝶總黃酮的提取純化方法及其應用，采用乙醇回流、大孔樹脂 吸附對木蝴蝶總黃酮進行分離提取純化，盡可能的去除非黃酮類雜質，最終富集得到高純 度的總黃酮，體外藥效試驗中對肝癌細胞的增殖有顯著抑制作用，呈明顯的量效關系，同時 隨著總黃酮純度的增加，藥效顯著增強；本發明經一次分離提取純化就可使木蝴蝶總黃酮 純度達到90%以上，且適用于不同產地的木蝴蝶藥材，為木蝴蝶總黃酮的藥理作用和作用 機制的研宄奠定基礎。另外，本發明提供的木蝴蝶總黃酮在制備治療肝癌藥物中的應用及 其物質解析研宄，擴大了木蝴蝶的應用范圍，明確木蝴蝶發揮抗腫瘤藥效的物質基礎，為開 發以木蝴蝶總黃酮富集物的臨床應用、抗肝癌新藥研發及工業生產奠定物質基礎和實驗依 據。
【附圖說明】
[0017] 圖1為本發明木蝴蝶黃酮類成分質譜圖。
[0018] 圖2為混合對照品質譜圖。
[0019] 圖3為木蝴蝶總黃酮富集物與混合對照品中木蝴蝶苷B棒狀對比圖。
[0020] 圖4為木蝴蝶總黃酮富集物與混合對照品中木蝴蝶苷A棒狀對比圖。
[0021] 圖5為木蝴蝶總黃酮富集物與混合對照品中白楊素-7-0-0 -D-葡萄糖醛酸苷棒 狀對比圖。
[0022] 圖6為木蝴蝶總黃酮富集物和混合對照品中黃芩素棒狀對比圖。
[0023] 圖7為木蝴蝶總黃酮富集物與混合對照品中白楊素棒狀對比圖。
[0024]圖8為木蝴蝶總黃酮富集物中木蝴蝶苷B的紫外吸收光譜圖。
[0025] 圖9為木蝴蝶苷B對照品的紫外吸收光譜圖。
[0026]圖10為木蝴蝶總黃酮富集物中木蝴蝶苷A的紫外吸收光譜圖。
[0027] 圖11為木蝴蝶苷A對照品的紫外吸收光譜圖。
[0028]圖12為木蝴蝶總黃酮富集物中白楊素-7-0-0-D-葡萄糖醛酸苷的紫外吸收光譜 圖。
[0029] 圖13為白楊素-7-0-0 -D-葡萄糖醛酸苷對照品的紫外吸收光譜圖。
[0030]圖14為木蝴蝶總黃酮富集物中黃芩素的紫外吸收光譜圖。
[0031] 圖15為黃芩素對照品的紫外吸收光譜圖。
[0032] 圖16為木蝴蝶總黃酮富集物中白楊素的紫外吸收光譜圖。
[0033] 圖17為白楊素對照品的紫外吸收光譜圖。
【具體實施方式】
[0034] 下面結合具體實施例進一步詳細說明本發明。
[0035] 1、木蝴蝶總黃酮提取工藝研宄。
[0036] 1. 1正交試驗設計。
[0037] 選擇乙醇濃度A、提取時間B、溶劑用量(物料比)C、提取次數D為考察因素，每個因 素選擇三個水平，采用L 9(34)設計正交試驗，優選最佳提取條件。用加權綜合評分，以木蝴 蝶總黃酮含量為主指標(權重系數為〇. 6)，出膏率(權重系數為0. 4)為次指標，即綜合評分 作為考察指標確定木蝴蝶總黃酮最佳提取工藝。正交試驗L9(34)因素水平表見表1，正交 試驗設計表及直觀分析結果見表2,以綜合評分為指標正交試驗方差分析結果見表3。
[0038] 表1 :正交試驗L9 (34)因素水平表。
[0040] 注：總黃酮評分（X)=(總黃酮提取量/最大總黃酮提取量）X0. 6;干膏收率評分 (Y)=(干膏收率/最大干膏收率）X0. 4 ;綜合評分(W) =X+Y。
[0041] 表3 :以綜合評分為指標正交試驗方差分析。
[0042]注：F0. 05=19. 00 ;* 為 P〈0. 05。
[0043] 以表2及表3對實驗結果進行評價，結果表明，影響提取工藝的因素主次順序為： D>A>B>C，其中提取次數（D)對藥材提取率影響最大，且有顯著性意義（P〈0.05)，故結合實 際生產，確定提取條件為A 2BiC2D3，即以15倍量60%乙醇回流提取3次，每次1 h。
[0044] 2、木蝴蝶中總黃酮純化工藝研宄。
[0045] 2. 1樹脂靜態吸附與解吸試驗。
[0046] 將各型大孔吸附樹脂用95%乙醇浸泡24 h，上柱，用乙醇洗至滴入水中無混濁，再 用水洗至無醇味。按照總黃酮的最優提取純化方法，即以15倍量60%乙醇回流提取3次， 每次1 h，制成0.1 g/mL生藥濃度的上樣溶液，考察不同類型樹脂對木蝴蝶總黃酮靜態吸附 量、解吸量、解析率的