本發(fa)明(ming)涉及一種含脲橋(qiao)的苯甲(jia)酰胺類衍生物即(ji)3-溴-N-((2-胺基甲(jia)酰基苯基)胺基甲(jia)酰基)-1-(3-氯吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-甲(jia)酰胺類化合(he)物在制備抗癌藥物中的應用。
背景技術：
在(zai)過去幾十年，雜環化(hua)合物(wu)(wu)(wu)擁有廣泛(fan)和多(duo)樣的(de)生(sheng)物(wu)(wu)(wu)活(huo)(huo)性(xing)(xing)，特別是吡(bi)啶(ding)和吡(bi)唑(zuo)化(hua)合物(wu)(wu)(wu)。許多(duo)文(wen)獻(xian)(xian)都報道了吡(bi)唑(zuo)類化(hua)合物(wu)(wu)(wu)表現出(chu)廣泛(fan)的(de)生(sheng)物(wu)(wu)(wu)活(huo)(huo)性(xing)(xing)，包括抗結(jie)核活(huo)(huo)性(xing)(xing)，抗腫瘤(liu)活(huo)(huo)性(xing)(xing)，殺(sha)(sha)(sha)菌活(huo)(huo)性(xing)(xing)，抗炎(yan)活(huo)(huo)性(xing)(xing)，抗氧化(hua)活(huo)(huo)性(xing)(xing)，抑制膽堿酯酶活(huo)(huo)性(xing)(xing)，殺(sha)(sha)(sha)蟲(chong)活(huo)(huo)性(xing)(xing)等。吡(bi)唑(zuo)環存在(zai)于許多(duo)合成藥物(wu)(wu)(wu)或殺(sha)(sha)(sha)蟲(chong)劑中(zhong)。此(ci)外(wai)，吡(bi)啶(ding)類衍生(sheng)物(wu)(wu)(wu)也展現出(chu)優(you)秀的(de)生(sheng)物(wu)(wu)(wu)活(huo)(huo)性(xing)(xing)，比如殺(sha)(sha)(sha)菌活(huo)(huo)性(xing)(xing)，除草活(huo)(huo)性(xing)(xing)，殺(sha)(sha)(sha)蟲(chong)活(huo)(huo)性(xing)(xing)等。目前許多(duo)文(wen)獻(xian)(xian)也報道了吡(bi)唑(zuo)連吡(bi)啶(ding)結(jie)構(gou)，而酰胺(an)類化(hua)合物(wu)(wu)(wu)在(zai)新農藥的(de)創制中(zhong)占有重要地位(wei)，而其對抗癌藥物(wu)(wu)(wu)中(zhong)的(de)作用未(wei)見相關報道。
技術實現要素：
針對(dui)現有(you)技術(shu)中存在的上述問題，本(ben)發明目的是提供一種(zhong)含(han)脲橋(qiao)的苯甲(jia)酰胺類衍生物(wu)(wu)即3-溴-N-((2-胺基甲(jia)酰基苯基)胺基甲(jia)酰基)-1-(3-氯(lv)吡啶(ding)-2-基)-1H-吡唑-5-甲(jia)酰胺類化合物(wu)(wu)在制備抗癌藥物(wu)(wu)中的應用。
所述的一種含脲(niao)橋的苯(ben)甲(jia)酰(xian)胺(an)類衍生物在制備抗癌藥(yao)物中的應用，其特征在于所述含脲(niao)橋的苯(ben)甲(jia)酰(xian)胺(an)類衍生物為3-溴-N-((2-胺(an)基(ji)甲(jia)酰(xian)基(ji)苯(ben)基(ji))胺(an)基(ji)甲(jia)酰(xian)基(ji))-1-(3-氯吡啶(ding)-2-基(ji))-1H-吡唑-5-甲(jia)酰(xian)胺(an)類化合(he)物，其結構式(shi)(shi)如式(shi)(shi)(I)所示：
式(I)中：R1為甲基、鹵素或氫，R2為氫或鹵素，R3為C1～C9的烷(wan)基。
所述的應用，其特征在于R1為甲基、氫或氯；R2為氫、溴或氯；R3選自(zi)甲基(ji)(ji)、正(zheng)丙(bing)基(ji)(ji)、異丙(bing)基(ji)(ji)、環丙(bing)基(ji)(ji)、環己基(ji)(ji)、正(zheng)丁(ding)基(ji)(ji)或叔(shu)丁(ding)基(ji)(ji)。
所述的應用，其特征在于R1為甲基，R2為氯，R3為叔丁基。
所(suo)述的應用，其特征(zheng)在于癌(ai)細胞為(wei)肺癌(ai)、肝癌(ai)和腸癌(ai)。
所(suo)述的含脲橋的苯甲酰胺類衍生(sheng)物的制備方法，其(qi)特征在(zai)于包(bao)括如下步驟：
1)把(ba)草酰(xian)氯(lv)(lv)滴(di)入式(shi)(Ⅱ)所示(shi)的3-溴-1-(3-氯(lv)(lv)吡啶(ding)-2-基)-1H-吡唑-5-甲酸和(he)有機(ji)(ji)溶劑A的懸浮液中，然后(hou)加(jia)入兩滴(di)DMF，反應混(hun)合物(wu)室溫反應10-13h，減壓脫溶得(de)到酰(xian)氯(lv)(lv)殘液，把(ba)酰(xian)氯(lv)(lv)殘液溶于(yu)有機(ji)(ji)溶劑B中，在冰(bing)鹽冷卻(que)下，慢慢滴(di)加(jia)到4.5-5.5倍(bei)量的氨水和(he)水的混(hun)合物(wu)中，有大量白色固體生(sheng)成，在冰(bing)水冷卻(que)下攪拌30min，抽濾得(de)到產品(pin)如式(shi)(Ⅲ)所示(shi)的化合物(wu)3-溴-1-(3-氯(lv)(lv)吡啶(ding)-2-基)-1H-吡唑-5-甲酰(xian)胺；
2)把取代鄰氨基苯甲酸和二氯亞砜混合，加熱回流反應2-2.2h，反應完畢后脫去溶劑得到酰氯殘液，把酰氯殘液溶于有機溶劑C中，在冰鹽冷卻下，加入NH2-R3，攪拌30min脫溶得如式(Ⅳ)所示的取代鄰氨基苯甲酰胺NH2-R3中的R3為C1～C9的(de)烷基；
3)向圓底燒瓶中加入(ru)步(bu)驟1)得(de)(de)到的(de)(de)3-溴-1-(3-氯(lv)(lv)吡(bi)啶-2-基(ji)(ji)(ji))-1H-吡(bi)唑-5-甲酰(xian)(xian)(xian)胺和有(you)機溶(rong)劑D，攪(jiao)拌(ban)均勻(yun)后，加入(ru)草酰(xian)(xian)(xian)氯(lv)(lv)回流11-12h，減壓脫去過量(liang)的(de)(de)草酰(xian)(xian)(xian)氯(lv)(lv)及有(you)機溶(rong)劑D得(de)(de)中間體異氰酸(suan)酯粗品，把異氰酸(suan)酯粗品溶(rong)于(yu)有(you)機溶(rong)劑E中，在室溫下(xia)滴(di)加入(ru)步(bu)驟2)得(de)(de)到的(de)(de)取代鄰氨基(ji)(ji)(ji)苯甲酰(xian)(xian)(xian)胺的(de)(de)乙腈溶(rong)液(ye)中，室溫攪(jiao)拌(ban)反應(ying)10-12h，有(you)大量(liang)白色固體析(xi)出，抽濾的(de)(de)固體，用乙醇洗滌固體或重結晶能得(de)(de)到目標產物3-溴-N-((2-胺基(ji)(ji)(ji)甲酰(xian)(xian)(xian)基(ji)(ji)(ji)苯基(ji)(ji)(ji))胺基(ji)(ji)(ji)甲酰(xian)(xian)(xian)基(ji)(ji)(ji))-1-(3-氯(lv)(lv)吡(bi)啶-2-基(ji)(ji)(ji))-1H-吡(bi)唑-5-甲酰(xian)(xian)(xian)胺類化合物，
所(suo)述的(de)(de)(de)(de)含脲橋的(de)(de)(de)(de)苯甲酰胺類衍(yan)生物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)制備方法，其特征在于步驟1)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)3-溴(xiu)-1-(3-氯(lv)吡(bi)(bi)啶(ding)-2-基(ji)(ji))-1H-吡(bi)(bi)唑(zuo)(zuo)-5-甲酸(suan)和草酰氯(lv)的(de)(de)(de)(de)物(wu)(wu)質(zhi)的(de)(de)(de)(de)量(liang)之比(bi)為1:1～5，優(you)(you)選(xuan)(xuan)(xuan)(xuan)為1:2；所(suo)述有(you)機(ji)溶(rong)劑A與有(you)機(ji)溶(rong)劑B相同，均選(xuan)(xuan)(xuan)(xuan)自甲醇(chun)(chun)、乙醇(chun)(chun)、THF、二(er)氯(lv)甲烷(wan)(wan)、二(er)氯(lv)乙烷(wan)(wan)、DMF和乙腈中(zhong)的(de)(de)(de)(de)一種(zhong)或(huo)多種(zhong)混合物(wu)(wu)，有(you)機(ji)溶(rong)劑A優(you)(you)選(xuan)(xuan)(xuan)(xuan)為二(er)氯(lv)甲烷(wan)(wan)，有(you)機(ji)溶(rong)劑B優(you)(you)選(xuan)(xuan)(xuan)(xuan)為THF；有(you)機(ji)溶(rong)劑A的(de)(de)(de)(de)用量(liang)以3-溴(xiu)-1-(3-氯(lv)吡(bi)(bi)啶(ding)-2-基(ji)(ji))-1H-吡(bi)(bi)唑(zuo)(zuo)-5-甲酸(suan)的(de)(de)(de)(de)物(wu)(wu)質(zhi)的(de)(de)(de)(de)量(liang)計(ji)為0.1～1mmol/ml，優(you)(you)選(xuan)(xuan)(xuan)(xuan)為0.2mmol/ml；有(you)機(ji)溶(rong)劑B的(de)(de)(de)(de)用量(liang)以3-溴(xiu)-1-(3-氯(lv)吡(bi)(bi)啶(ding)-2-基(ji)(ji))-1H-吡(bi)(bi)唑(zuo)(zuo)-5-甲酸(suan)的(de)(de)(de)(de)物(wu)(wu)質(zhi)的(de)(de)(de)(de)量(liang)計(ji)為1～10mmol/ml，優(you)(you)選(xuan)(xuan)(xuan)(xuan)為1mmol/ml；水(shui)的(de)(de)(de)(de)量(liang)以3-溴(xiu)-1-(3-氯(lv)吡(bi)(bi)啶(ding)-2-基(ji)(ji))-1H-吡(bi)(bi)唑(zuo)(zuo)-5-甲酸(suan)的(de)(de)(de)(de)物(wu)(wu)質(zhi)的(de)(de)(de)(de)量(liang)計(ji)為0.1～1mmol/ml，優(you)(you)選(xuan)(xuan)(xuan)(xuan)為0.1mmol/ml。
所述的含脲橋的苯甲酰胺類衍生物的制備方法，其特征在于步驟2)中取代鄰氨基苯甲酸、二氯亞砜和NH2-R3的(de)(de)物(wu)質(zhi)量之比為1：1～5：1～2，優(you)選為1：2：1；所述有(you)機溶劑(ji)C選自甲(jia)醇、乙醇、THF、二(er)氯甲(jia)烷(wan)、二(er)氯乙烷(wan)、DMF和(he)乙腈(jing)中的(de)(de)一(yi)種或多種混(hun)合物(wu)，優(you)選為THF；有(you)機溶劑(ji)C的(de)(de)用量以取代鄰氨基苯甲(jia)酸的(de)(de)物(wu)質(zhi)的(de)(de)量計為1～10mmol/ml，優(you)選1mmol/ml。
所(suo)(suo)述的(de)(de)(de)含脲橋的(de)(de)(de)苯甲(jia)酰(xian)(xian)胺(an)類衍生(sheng)物(wu)的(de)(de)(de)制備方法，其特(te)征(zheng)在于(yu)步驟3)中3-溴-1-(3-氯(lv)(lv)吡(bi)(bi)啶(ding)-2-基(ji)(ji)(ji))-1H-吡(bi)(bi)唑-5-甲(jia)酰(xian)(xian)胺(an)、草(cao)酰(xian)(xian)氯(lv)(lv)和(he)取(qu)代鄰氨(an)基(ji)(ji)(ji)苯甲(jia)酰(xian)(xian)胺(an)的(de)(de)(de)物(wu)質(zhi)的(de)(de)(de)量(liang)(liang)(liang)之比為(wei)(wei)1：1～5：1～2，優(you)選(xuan)為(wei)(wei)1:2:1；所(suo)(suo)述有(you)機(ji)(ji)溶(rong)劑(ji)D和(he)有(you)機(ji)(ji)溶(rong)劑(ji)E均選(xuan)自甲(jia)醇(chun)、乙醇(chun)、THF、二(er)氯(lv)(lv)甲(jia)烷、二(er)氯(lv)(lv)乙烷、DMF和(he)乙腈中的(de)(de)(de)一種或多種混合物(wu)，有(you)機(ji)(ji)溶(rong)劑(ji)D優(you)選(xuan)為(wei)(wei)1,2-二(er)氯(lv)(lv)乙烷；所(suo)(suo)述有(you)機(ji)(ji)溶(rong)劑(ji)優(you)選(xuan)為(wei)(wei)乙腈；有(you)機(ji)(ji)溶(rong)劑(ji)D的(de)(de)(de)用量(liang)(liang)(liang)以3-溴-1-(3-氯(lv)(lv)吡(bi)(bi)啶(ding)-2-基(ji)(ji)(ji))-1H-吡(bi)(bi)唑-5-甲(jia)酰(xian)(xian)胺(an)的(de)(de)(de)物(wu)質(zhi)的(de)(de)(de)量(liang)(liang)(liang)計為(wei)(wei)0.1～1mmol/ml；優(you)選(xuan)為(wei)(wei)0.2mmol/ml；有(you)機(ji)(ji)溶(rong)劑(ji)E的(de)(de)(de)用量(liang)(liang)(liang)以3-溴-1-(3-氯(lv)(lv)吡(bi)(bi)啶(ding)-2-基(ji)(ji)(ji))-1H-吡(bi)(bi)唑-5-甲(jia)酰(xian)(xian)胺(an)的(de)(de)(de)物(wu)質(zhi)的(de)(de)(de)量(liang)(liang)(liang)計為(wei)(wei)0.1～1mmol/ml；優(you)選(xuan)為(wei)(wei)0.5mmol/ml。
本發明(ming)的反應過程如下：
與(yu)現有技術相比，本(ben)發(fa)(fa)明(ming)的有益效(xiao)果主要體現在(zai)：本(ben)發(fa)(fa)明(ming)提供(gong)了(le)一種3-溴-N-((2-胺(an)基(ji)(ji)(ji)甲酰(xian)基(ji)(ji)(ji)苯基(ji)(ji)(ji))胺(an)基(ji)(ji)(ji)甲酰(xian)基(ji)(ji)(ji))-1-(3-氯吡啶-2-基(ji)(ji)(ji))-1H-吡唑-5-甲酰(xian)胺(an)類(lei)化合(he)(he)物(wu)(wu)在(zai)制備(bei)抗癌(ai)藥物(wu)(wu)中的應用(yong)，本(ben)發(fa)(fa)明(ming)得到(dao)的11個化合(he)(he)物(wu)(wu)中對肺癌(ai)、肝(gan)(gan)癌(ai)和腸癌(ai)均有一定活動，化合(he)(he)物(wu)(wu)I-8對肝(gan)(gan)癌(ai)表現出的活性為(wei)45.29％，化合(he)(he)物(wu)(wu)I-9對腸癌(ai)表現出的活性為(wei)33.95％，為(wei)新抗癌(ai)藥物(wu)(wu)的研(yan)發(fa)(fa)提供(gong)了(le)基(ji)(ji)(ji)礎。
具體實施方式
下面結合具體(ti)實(shi)施例對本發明(ming)進(jin)行進(jin)一步描述，但本發明(ming)的保(bao)護范圍(wei)并不僅(jin)限于(yu)此：
實施例1
(1)3-溴-1-(3-氯吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(an)式(shi)(Ⅲ)的(de)合成：
把(ba)草酰(xian)(xian)氯(lv)(10mmol)滴(di)入(ru)3-溴-1-(3-氯(lv)吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-甲(jia)酸(Ⅱ)(5mmol)和(he)二(er)氯(lv)甲(jia)烷(50mL)的(de)懸浮液(ye)中(zhong)，然后加入(ru)兩滴(di)DMF。反應混合物(wu)室溫反應12h，減(jian)壓(ya)脫溶(rong)(rong)得(de)到酰(xian)(xian)氯(lv)的(de)殘液(ye)。把(ba)酰(xian)(xian)氯(lv)殘液(ye)溶(rong)(rong)于10mL THF中(zhong)，在(zai)冰鹽(yan)冷卻下，慢慢滴(di)加到5倍量(liang)(liang)的(de)氨水和(he)100mL水的(de)混合物(wu)中(zhong)，有大(da)量(liang)(liang)白色(se)固體(ti)生(sheng)成，在(zai)冰水冷卻下攪拌30min，抽濾得(de)到產品式(Ⅲ)所示3-溴-1-(3-氯(lv)吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-甲(jia)酰(xian)(xian)胺(an)，收率84.2％。
(2)取代鄰(lin)氨基苯甲酰胺式(shi)(Ⅳ)的合成：
把3-甲基-2-氨基苯甲酸(5mmol)和二氯亞砜(10mmol)混合，加熱回流反應2h，反應完畢后脫去溶劑得到酰氯的殘液。把酰氯殘液溶于(10ml)THF中，在冰鹽冷卻下，加入NH2-CH(CH3)2(5mmol)，攪拌(ban)30min脫溶得(Ⅳ)2-氨基-N-異(yi)丙基-3-甲基苯甲酰胺，收率58％。
(3)目標(biao)化合物式(I)的合成：
向(xiang)50mL圓底燒瓶中加(jia)入(ru)(ru)3-溴(xiu)-1-(3-氯(lv)(lv)吡(bi)啶-2-基)-1H-吡(bi)唑(zuo)-5-甲酰胺(an)(1.5g,5mmol)，25mL 1,2-二(er)氯(lv)(lv)乙(yi)(yi)烷，攪拌均勻后，加(jia)入(ru)(ru)草酰氯(lv)(lv)(1.3g,10mmol)，回流12h，減壓脫去過量的草酰氯(lv)(lv)及溶(rong)(rong)劑(ji)得(de)中間體異(yi)氰酸(suan)酯的粗品。把上(shang)述粗品溶(rong)(rong)于10mL乙(yi)(yi)腈中，在室溫下滴(di)加(jia)入(ru)(ru)(Ⅳ)2-氨(an)基-N-異(yi)丙基-3-甲基苯甲酰胺(an)(5mmol)的乙(yi)(yi)腈(30mL)溶(rong)(rong)液中，室溫攪拌反應12h，有大(da)量白(bai)色(se)固(gu)(gu)體析出，抽濾的固(gu)(gu)體，用乙(yi)(yi)醇洗滌固(gu)(gu)體或重(zhong)結晶得(de)到(I-1)所(suo)示3-溴(xiu)-1-(3-氯(lv)(lv)吡(bi)啶-2-基)-N-((2-(異(yi)丙基氨(an)基甲酰基)-6-甲基苯基)氨(an)基甲酰基)-1H-吡(bi)唑(zuo)-5-甲酰胺(an)的純品，收(shou)率77.8％。
3-溴-1-(3-氯吡啶-2-基)-N-((2-(異丙基氨基甲酰基)-6-甲基苯基)氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酰胺m.p.184-186℃；1H NMR(DMSO,400MHz)δ:1.01(d,6H,J＝6.8Hz,CH(CH3)2),2.16(s,3H,CH3),3.84-3.92(m,1H,NHCH),7.21-7.32(m,3H,Ar－H),7.65(s,1H,pyrazolyl—H),7.69(dd,1H,J＝4.8,8.4Hz,pyridyl—H),8.03(d,1H,J＝7.6,NHCH),8.26(d,1H,J＝8.0Hz,pyridyl—H),8.55(d,1H,J＝4.8Hz,pyridyl—H),9.80(br,1H,CONHCO),11.35(br,1H,NHCO).
實施例2
將實(shi)(shi)施例(li)1步驟(zou)(2)中3-甲(jia)基-2-氨(an)(an)基苯(ben)甲(jia)酸(suan)換成(cheng)5mmol的5-氯(lv)(lv)-2-氨(an)(an)基苯(ben)甲(jia)酸(suan)，其他(ta)操作同實(shi)(shi)施例(li)1，獲得(I-2)所示3-溴(xiu)-N-((4-氯(lv)(lv)-2-(異丙基氨(an)(an)基甲(jia)酰基)苯(ben)基)氨(an)(an)基甲(jia)酰基)-1-(3-氯(lv)(lv)吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-甲(jia)酰胺，83.6％。
3-溴-N-((4-氯-2-(異丙基氨基甲酰基)苯基)氨基甲酰基)-1-(3-氯吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺m.p.204-206℃；1H NMR(DMSO,400MHz)δ:1.03(d,6H,J＝6.4Hz,CH(CH3)2),3.80-3.88(m,1H,CH(CH3)2),7.51-7.52(m,2H,Ar－H),7.60(s,1H,pyrazolyl—H),7.68(dd,1H,J＝4.8,8.0Hz,pyridyl—H),8.13(d,1H,J＝9.6Hz,Ar－H),8.25(d,1H,J＝8.0Hz,pyridyl—H),8.46(d,1H,J＝8.0Hz,NHCH),8.54(d,1H,J＝4.8Hz,pyridyl—H),11.06(br,1H,CONHCO),11.41(br,1H,NHCO).
實施例3
將實施例1步驟(2)中3-甲基-2-氨基苯甲酸換成5mmol的5-氯-3-甲基-2-氨基苯甲酸，NH2-CH(CH3)2換成5mmol的NH2-CH3，其(qi)他操(cao)作同實施例1，獲得(I-3)所示3-溴-N-((4-氯(lv)-2-甲基(ji)(ji)(ji)-6-(甲基(ji)(ji)(ji)氨(an)基(ji)(ji)(ji)甲酰基(ji)(ji)(ji))苯基(ji)(ji)(ji))氨(an)基(ji)(ji)(ji)甲酰基(ji)(ji)(ji))-1-(3-氯(lv)吡(bi)啶-2-基(ji)(ji)(ji))-1H-吡(bi)唑(zuo)-5-甲酰胺，68.3％。
3-溴-N-((4-氯-2-甲基-6-(甲基氨基甲酰基)苯基)氨基甲酰基)-1-(3-氯吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺m.p.201-206℃；1H NMR(DMSO,400MHz)δ:2.16(s,3H,CH3),2.63(d,3H,J＝4.4Hz,NHCH3),7.32(d,1H,J＝2.4Hz,Ar－H),7.45(d,1H,J＝2.4Hz,Ar－H),7.64(s,1H,pyrazolyl—H),7.69(dd,1H,J＝4.8,8.0Hz,pyridyl—H),8.27(d,1H,J＝8.0Hz,pyridyl—H),8.36(q,1H,J＝4.4Hz,NHCH3),8.56(d,1H,J＝4.8Hz,pyridyl—H),9.93(br,1H,CONHCO),11.39(br,1H,NHCO).
實施例4
將實施例1步驟(2)中3-甲基-2-氨基苯甲酸換成5mmol的5-氯-3-甲基-2-氨基苯甲酸，NH2-CH(CH3)2換成5mmol的NH2-CH3CH2CH3，其他操(cao)作同實施(shi)例1，獲得(I-4)所示3-溴(xiu)-N-((4-氯(lv)-2-甲(jia)基-6-(正丙基氨基甲(jia)酰基)苯基)氨基甲(jia)酰基)-1-(3-氯(lv)吡(bi)啶-2-基)-1H-吡(bi)唑-5-甲(jia)酰胺，86.4％。
3-溴-N-((4-氯-2-甲基-6-(正丙基氨基甲酰基)苯基)氨基甲酰基)-1-(3-氯吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺m.p.186-189℃；1H NMR(DMSO,400MHz)δ:0.81(t,3H,J＝7.6Hz,CH2CH3),1.39(q,2H,J＝7.2Hz,CH2CH3),2.16(s,3H,CH3),3.02-3.07(m,2H,NHCH2),7.28(d,1H,J＝2.4Hz,Ar－H),7.45(d,1H,J＝2.0Hz,Ar－H),7.64(s,1H,pyrazolyl—H),7.69(dd,1H,J＝4.8,8.0Hz,pyridyl—H),8.27(d,1H,J＝8.0Hz,pyridyl—H),8.34(t,1H,J＝4.8Hz,NHCH2),8.56(d,1H,J＝4.4Hz,pyridyl—H),9.82(br,1H,CONHCO),11.39(br,1H,NHCO).
實施例5
將實(shi)施例1步驟(2)中3-甲(jia)(jia)(jia)基(ji)(ji)-2-氨(an)基(ji)(ji)苯(ben)甲(jia)(jia)(jia)酸換(huan)成5mmol的(de)5-氯(lv)(lv)-3-甲(jia)(jia)(jia)基(ji)(ji)-2-氨(an)基(ji)(ji)苯(ben)甲(jia)(jia)(jia)酸，其他操作同實(shi)施例1，獲得(de)(I-5)所示3-溴(xiu)-N-((4-氯(lv)(lv)-2-(異丙基(ji)(ji)氨(an)基(ji)(ji)甲(jia)(jia)(jia)酰(xian)基(ji)(ji))-6-甲(jia)(jia)(jia)基(ji)(ji)苯(ben)基(ji)(ji))氨(an)基(ji)(ji)甲(jia)(jia)(jia)酰(xian)基(ji)(ji))-1-(3-氯(lv)(lv)吡啶-2-基(ji)(ji))-1H-吡唑-5-甲(jia)(jia)(jia)酰(xian)胺，收率82,3％。
3-溴-N-((4-氯-2-(異丙基氨基甲酰基)-6-甲基苯基)氨基甲酰基)-1-(3-氯吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺m.p.202-203℃；1H NMR(DMSO,400MHz)δ:1.01(d,6H,J＝6.4Hz,CH(CH3)2),2.16(s,3H,CH3),3.82-3.91(m,1H,CH(CH3)2),7.25(s,1H,Ar－H),7.43(s,1H,Ar－H),7.65(s,1H,pyrazolyl—H),7.69(dd,1H,J＝4.8,8.0Hz,pyridyl—H),8.15(d,1H,J＝7.6Hz,NHCH),8.26(d,1H,J＝8.0Hz,pyridyl—H),8.55(d,1H,J＝4.4Hz,pyridyl—H),9.77(br,1H,CONHCO),11.41(br,1H,NHCO).
實施例6
將實施例1步驟(2)中3-甲基-2-氨基苯甲酸換成5mmol的5-氯-3-甲基-2-氨基苯甲酸，NH2-CH(CH3)2換成5mmol的NH2-CHCH2CH2，其他(ta)操作(zuo)同實施(shi)例1，獲得(I-6)所示3-溴(xiu)-N-((4-氯(lv)-2-(環丙基(ji)(ji)(ji)氨(an)基(ji)(ji)(ji)甲酰(xian)基(ji)(ji)(ji))-6-甲基(ji)(ji)(ji)苯基(ji)(ji)(ji))氨(an)基(ji)(ji)(ji)甲酰(xian)基(ji)(ji)(ji))-1-(3-氯(lv)吡(bi)啶-2-基(ji)(ji)(ji))-1H-吡(bi)唑(zuo)-5-甲酰(xian)胺，收率(lv)80.6％。
3-溴-N-((4-氯-2-(環丙基氨基甲酰基)-6-甲基苯基)氨基甲酰基)-1-(3-氯吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺m.p.195-198℃；1H NMR(DMSO,400MHz)δ:0.36-0.40(m,2H,CH2CH2),0.58-0.63(m,2H,CH2CH2),2.15(s,3H,CH3),2.62-2.68(m,1H,CH),7.27(s,1H,Ar－H),7.44(s,1H,Ar－H),7.66(s,1H,pyrazolyl—H),7.69(dd,1H,J＝4.8,8.0Hz,pyridyl—H),8.27(d,1H,J＝8.0Hz,pyridyl—H),8.37(d,1H,J＝4.0Hz,NHCH),8.56(d,1H,J＝4.8Hz,pyridyl—H),9.78(br,1H,CONHCO),11.42(br,1H,NHCO).
實施例7
將實施例1步驟(2)中3-甲基-2-氨基苯甲酸換成5mmol的5-氯-3-甲基-2-氨基苯甲酸，NH2-CH(CH3)2換成5mmol的NH2-CH2CH2CH2CH3，其(qi)他操作(zuo)同實施(shi)例(li)1，獲得(I-7)所示3-溴(xiu)-N-((2-(正丁(ding)基氨基甲酰基)-4-氯-6-甲基苯基)氨基甲酰基)-1-(3-氯吡(bi)啶-2-基)-1H-吡(bi)唑-5-甲酰胺(an)，收率73.6％。
3-溴-N-((2-(正丁基氨基甲酰基)-4-氯-6-甲基苯基)氨基甲酰基)-1-(3-氯吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺m.p.191-193℃；1H NMR(DMSO,400MHz)δ:0.82(t,3H,J＝7.2Hz,CH2CH3),1.20-1.29(m,2H,CH2CH3),1.33-1.39(m,2H,CH2CH2CH3),2.16(s,3H,CH3),3.09(q,2H,J＝6.8Hz,NHCH2),7.27(d,1H,J＝2.4Hz,Ar－H),7.44(d,1H,J＝2.0Hz,Ar－H),7.65(s,1H,pyrazolyl—H),7.69(dd,1H,J＝4.8,8.0Hz,pyridyl—H),8.26(d,1H,J＝7.6Hz,pyridyl—H),8.32(t,1H,J＝5.6Hz,NHCH2),8.56(d,1H,J＝4.8Hz,pyridyl—H),9.81(br,1H,CONHCO),11.39(br,1H,NHCO).
實施例8
將實施例1步驟(2)中3-甲基-2-氨基苯甲酸換成5mmol的5-氯-3-甲基-2-氨基苯甲酸，NH2-CH(CH3)2換成5mmol的NH2-C(CH3)3，其他操作同(tong)實施(shi)例1，獲得(de)(I-8)所示(shi)3-溴-N-((2-(叔丁基(ji)氨基(ji)甲(jia)酰基(ji))-4-氯-6-甲(jia)基(ji)苯基(ji))氨基(ji)甲(jia)酰基(ji))-1-(3-氯吡啶-2-基(ji))-1H-吡唑(zuo)-5-甲(jia)酰胺，收率79。5％。
3-溴-N-((2-(叔丁基氨基甲酰基)-4-氯-6-甲基苯基)氨基甲酰基)-1-(3-氯吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺m.p.187-189℃；1H NMR(DMSO,400MHz)δ:1.19(s,9H,C(CH3)3),2.15(s,3H,CH3),7.18(d,1H,J＝2.0Hz,Ar－H),7.39(d,1H,J＝2.0Hz,Ar－H),7.67(s,1H,pyrazolyl—H),7.69(dd,1H,J＝4.8,8.0Hz,pyridyl—H),7.82(s,1H,NHC(CH3)3),8.25(d,1H,J＝8.0Hz,pyridyl—H),8.54(d,1H,J＝4.8Hz,pyridyl—H),9.73(br,1H,CONHCO),11.43(br,1H,NHCO).
實施例9
將實施例1步驟(2)中3-甲基-2-氨基苯甲酸換成5mmol的5-氯-3-甲基-2-氨基苯甲酸，NH2-CH(CH3)2換成5mmol的NH2-Cy，其他操作同實施例1，獲(huo)得(I-9)所(suo)示3-溴-N-((4-氯-2-(環己基(ji)氨基(ji)甲(jia)酰基(ji))-6-甲(jia)基(ji)苯基(ji))氨基(ji)甲(jia)酰基(ji))-1-(3-氯吡啶-2-基(ji))-1H-吡唑-5-甲(jia)酰胺，收率(lv)80.5％
3-溴-N-((4-氯-2-(環己基氨基甲酰基)-6-甲基苯基)氨基甲酰基)-1-(3-氯吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺m.p.205-210℃；1H NMR(DMSO,400MHz)δ:1.04-1.72(m,10H,cyclohexyl－H),2.15(s,3H,CH3),3.54-3.61(m,1H,cyclohexyl－H),7.25(d,1H,J＝2.0Hz,Ar－H),7.43(d,1H,J＝2.0Hz,Ar－H),7.66(s,1H,pyrazolyl—H),7.69(dd,1H,J＝4.8,8.0Hz,pyridyl—H),8.14(d,1H,J＝7.6,NHCH),8.26(d,1H,J＝8.0Hz,pyridyl—H),8.55(d,1H,J＝4.8Hz,pyridyl—H),9.76(br,1H,CONHCO),11.40(br,1H,NHCO).
實施例10
將(jiang)實施例(li)1步驟(2)中3-甲(jia)基(ji)-2-氨基(ji)苯甲(jia)酸換成5mmol的5-溴-3-甲(jia)基(ji)-2-氨基(ji)苯甲(jia)酸，獲得(I-10)所示(shi)3-溴-N-((4-溴-2-(異(yi)丙基(ji)氨基(ji)甲(jia)酰基(ji))-6-甲(jia)基(ji)苯基(ji))氨基(ji)甲(jia)酰基(ji))-1-(3-氯吡(bi)啶-2-基(ji))-1H-吡(bi)唑-5-甲(jia)酰胺(an)，收率81.9％。
3-溴-N-((4-溴-2-(異丙基氨基甲酰基)-6-甲基苯基)氨基甲酰基)-1-(3-氯吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺m.p.186-188℃；1H NMR(DMSO,400MHz)δ:1.01(d,6H,J＝6.4Hz,CH(CH3)2),2.15(s,3H,CH3),3.82-3.91(m,1H,CH(CH3)2),7.37(s,1H,Ar－H),7.56(s,1H,Ar－H),7.65(s,1H,pyrazolyl—H),7.69(dd,1H,J＝4.8,8.0Hz,pyridyl—H),8.15(d,1H,J＝7.6Hz,NHCH),8.26(d,1H,J＝8.0Hz,pyridyl—H),8.55(d,1H,J＝4.8Hz,pyridyl—H),9.77(br,1H,CONHCO),11.41(br,1H,NHCO).
實施例11
將實施例1步驟(zou)(2)中3-甲(jia)(jia)基(ji)(ji)-2-氨基(ji)(ji)苯(ben)(ben)甲(jia)(jia)酸(suan)換成5mmol的3,5-二氯-3-甲(jia)(jia)基(ji)(ji)-2-氨基(ji)(ji)苯(ben)(ben)甲(jia)(jia)酸(suan)，獲(huo)得(I-11)所示(shi)3-溴-1-(3-氯吡(bi)啶-2-基(ji)(ji))-N-((2,4-二氯-6-(異丙(bing)基(ji)(ji)氨基(ji)(ji)甲(jia)(jia)酰(xian)(xian)(xian)基(ji)(ji))苯(ben)(ben)基(ji)(ji))氨基(ji)(ji)甲(jia)(jia)酰(xian)(xian)(xian)基(ji)(ji))-1H-吡(bi)唑(zuo)-5-甲(jia)(jia)酰(xian)(xian)(xian)胺，收率75.8％。
3-溴-1-(3-氯吡啶-2-基)-N-((2,4-二氯-6-(異丙基氨基甲酰基)苯基)氨基甲酰基)-1H-吡唑-5-甲酰胺m.p.192-194℃；1H NMR(DMSO,400MHz)δ:1.01(d,6H,J＝6.8Hz,CH(CH3)2),3.83-3.92(m,1H,CH(CH3)2),7.44(s,1H,Ar－H),7.65(s,1H,pyrazolyl—H),7.69(dd,1H,J＝4.8,8.0Hz,pyridyl—H),7.80(s,1H,Ar－H),8.17(d,1H,J＝7.6Hz,NHCH),8.27(d,1H,J＝8.0Hz,pyridyl—H),8.56(d,1H,J＝4.4Hz,pyridyl—H),9.83(br,1H,CONHCO),11.58(br,1H,NHCO).
實施(shi)例12抗癌活(huo)性(xing)測試(shi)
實驗原理：
四氮唑[MTT,3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide]是一種能接受氫(qing)(qing)原(yuan)子的(de)(de)染料。活(huo)細胞(bao)線粒體中與(yu)NADP相(xiang)關的(de)(de)脫氫(qing)(qing)酶(mei)(mei)在細胞(bao)內可將黃色的(de)(de)MTT轉化成(cheng)不溶(rong)性的(de)(de)藍紫色的(de)(de)formazon，而死細胞(bao)則無此功能。用(yong)DMSO溶(rong)解formazon后，在一定波長下(xia)用(yong)酶(mei)(mei)標(biao)儀(yi)測(ce)定光密度(du)值，即可定量測(ce)出細胞(bao)的(de)(de)存活(huo)率(lv)。
試驗方法：
1、選用對數生長期的貼壁A549、Bel7402和HCT-8三種腫瘤細胞，分別用胰酶消化后，用10％小牛血清的RPMI1640培養液配成15000個/ml的細胞懸液，接種在96孔培養板中，每孔接種190μl，37℃，5％CO2培養24h。
2、實驗組加樣品10μl，每孔終體積為200μl，用1640培養液補足。37℃，5％CO2培養3d。
3、棄(qi)上清液(ye)，每(mei)孔(kong)加入(ru)100μl新鮮配(pei)制(zhi)的0.5mg/ml MTT的無血清培養液(ye)，37℃繼續(xu)培養4h。小心棄(qi)上清，并加入(ru)150μl DMSO溶(rong)解MTT formazon沉淀，用(yong)微型振蕩器混勻(yun)，在酶標儀上測定波長544nm處(chu)的光密度值。
結果評定：
腫瘤細胞生(sheng)長抑制率(lv)(％)＝(OD對照-OD實驗)/(OD對照-OD空白)X 100％
陽性評(ping)價標準：抑制率大于(yu)50％。
活性測試結果見表1
表1目標化合物抗癌活性
從表(biao)中可以看(kan)出(chu)(chu)所有目(mu)標化合物(wu)對(dui)(dui)肺(fei)癌表(biao)現(xian)出(chu)(chu)弱活(huo)(huo)(huo)性(xing)，除(I-8)對(dui)(dui)肝(gan)癌表(biao)現(xian)出(chu)(chu)中等(deng)活(huo)(huo)(huo)性(xing)(45.29％)外，其(qi)他(ta)化合物(wu)都表(biao)現(xian)出(chu)(chu)弱活(huo)(huo)(huo)性(xing)，(I-7)對(dui)(dui)肝(gan)癌沒有活(huo)(huo)(huo)性(xing)。(I-9)對(dui)(dui)腸癌表(biao)現(xian)出(chu)(chu)較(jiao)弱活(huo)(huo)(huo)性(xing)(33.95％)，其(qi)他(ta)化合物(wu)均沒有什么活(huo)(huo)(huo)性(xing)。