本發明(ming)屬于藥物(wu)組(zu)(zu)合物(wu)領域，涉及治(zhi)療乳腺癌的藥物(wu)組(zu)(zu)合物(wu)，尤其涉及一種含有辛伐他汀與(yu)組(zu)(zu)蛋白去(qu)乙酰化酶抑制劑(ji)的藥物(wu)組(zu)(zu)合物(wu)，以(yi)及在制備(bei)治(zhi)療三陰性(xing)乳腺癌藥物(wu)中的應用。

背景技術：

據世界衛生組織調(diao)查報告顯(xian)示，全球腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)癥(zheng)狀況日益(yi)嚴重(zhong)，未來20年新患者的(de)(de)(de)人數將(jiang)由(you)目(mu)前(qian)的(de)(de)(de)每年1410萬(wan)(wan)(wan)增(zeng)加到2170萬(wan)(wan)(wan)，因(yin)腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)癥(zheng)而死(si)亡的(de)(de)(de)人數也(ye)將(jiang)由(you)目(mu)前(qian)的(de)(de)(de)每年820萬(wan)(wan)(wan)增(zeng)加至1300萬(wan)(wan)(wan)。目(mu)前(qian)已(yi)上市的(de)(de)(de)抗腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)較多，如烷化(hua)劑(ji)藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)、抗代(dai)謝藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)、抗腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)抗生素、免疫調(diao)節劑(ji)等，但是大(da)多藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)由(you)于毒性較大(da)，導致病人不耐(nai)受。隨著(zhu)腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)分子生物(wu)(wu)(wu)(wu)學(xue)(xue)的(de)(de)(de)研(yan)究(jiu)進(jin)(jin)展，腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)分子靶向治療已(yi)成為(wei)腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)研(yan)究(jiu)的(de)(de)(de)熱(re)點(dian)，在多種腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)的(de)(de)(de)治療中發(fa)揮(hui)了(le)重(zhong)要的(de)(de)(de)作用(yong)。然而，研(yan)究(jiu)顯(xian)示，大(da)部分腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)的(de)(de)(de)生物(wu)(wu)(wu)(wu)學(xue)(xue)行(xing)為(wei)并非由(you)單一信(xin)號傳導通路(lu)所(suo)(suo)支配，而是多個信(xin)號傳導通路(lu)共同(tong)起作用(yong)的(de)(de)(de)，因(yin)此合(he)理的(de)(de)(de)將(jiang)多藥(yao)(yao)(yao)制成藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)組合(he)進(jin)(jin)行(xing)聯合(he)用(yong)藥(yao)(yao)(yao)，結果顯(xian)示具有單用(yong)藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)不可比擬的(de)(de)(de)優(you)越性，所(suo)(suo)述藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)組合(he)進(jin)(jin)行(xing)聯合(he)用(yong)藥(yao)(yao)(yao)針(zhen)對(dui)多靶點(dian)進(jin)(jin)行(xing)靶向治療將(jiang)不僅旨在減少或延(yan)緩耐(nai)藥(yao)(yao)(yao)性的(de)(de)(de)出現(xian)、降低(di)毒性，而且(qie)通過多種藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)對(dui)腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)細胞(bao)殺傷的(de)(de)(de)協同(tong)作用(yong)取得更好的(de)(de)(de)療效，因(yin)此，采用(yong)藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)組合(he)進(jin)(jin)行(xing)多靶點(dian)藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)治療已(yi)成為(wei)腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)藥(yao)(yao)(yao)物(wu)(wu)(wu)(wu)干預領域發(fa)展的(de)(de)(de)新方向。

已知腫(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)的(de)(de)種類繁多,各種腫(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)癥的(de)(de)特性(xing)不盡相同，重(zhong)要(yao)信(xin)號(hao)分(fen)(fen)子(zi)(zi)及(ji)信(xin)號(hao)途徑也不同，如(ru)其中的(de)(de)腫(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)癥中Cyclin D1、CDK4、AKT或(huo)(huo)MYC等(deng)表達失(shi)控，這些重(zhong)要(yao)分(fen)(fen)子(zi)(zi)可能成(cheng)為治(zhi)療(liao)靶標；有些分(fen)(fen)子(zi)(zi)，如(ru)ZAP-70、p-AKT、Cyclin D1的(de)(de)短小(xiao)變體、cyclin D2、cyclin D3等(deng)，它們(men)的(de)(de)表達和腫(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)癥的(de)(de)惡化有很強的(de)(de)相關性(xing)，這樣的(de)(de)分(fen)(fen)子(zi)(zi)或(huo)(huo)幾(ji)個分(fen)(fen)子(zi)(zi)的(de)(de)組合同樣可以成(cheng)為治(zhi)療(liao)靶標；但是(shi)，該些分(fen)(fen)子(zi)(zi)本身(shen)的(de)(de)活性(xing)、穩定性(xing)及(ji)它們(men)的(de)(de)下游信(xin)號(hao)均依賴于(yu)Hsp90的(de)(de)分(fen)(fen)子(zi)(zi)伴(ban)侶功能。

研究顯示(shi)，所述Hsp90是高度保守的(de)、以二聚(ju)體存(cun)在的(de)ATP依賴型的(de)分(fen)(fen)子(zi)(zi)伴侶，在腫(zhong)瘤細(xi)胞中大量(liang)表達，其主(zhu)要功(gong)(gong)能(neng)是幫(bang)助細(xi)胞里蛋白質的(de)折疊,保持蛋白有(you)正(zheng)(zheng)確的(de)空間結構而(er)發揮(hui)正(zheng)(zheng)常的(de)生理活性,需要Hsp90維持功(gong)(gong)能(neng)的(de)蛋白分(fen)(fen)子(zi)(zi)通常 被稱為Hsp90的(de)Client protein(或稱分(fen)(fen)子(zi)(zi)伴侶底物)；一(yi)旦Hsp90不能(neng)發揮(hui)正(zheng)(zheng)常的(de)分(fen)(fen)子(zi)(zi)伴侶功(gong)(gong)能(neng),這些分(fen)(fen)子(zi)(zi)伴侶底物的(de)穩定性將被破壞并很快通過(guo)蛋白酶(mei)體途(tu)徑被降解。

研究(jiu)顯示，腫(zhong)瘤(liu)(liu)中(zhong)被誘(you)導的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)Hsp90對維持(chi)腫(zhong)瘤(liu)(liu)相關(guan)蛋白結(jie)(jie)構(gou)及活(huo)性(xing)是不可或缺的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)，如(ru)(ru)腫(zhong)瘤(liu)(liu)蛋白激(ji)酶(mei)、核內激(ji)素轉錄因子(zi)(zi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)組裝(zhuang)和(he)(he)拆分(fen)等；含Hsp90的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)子(zi)(zi)伴(ban)(ban)侶(lv)復(fu)(fu)合(he)(he)(he)物(wu)(wu)，經過多步驟的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)ATP結(jie)(jie)合(he)(he)(he)、水(shui)解循環，Hsp90α在(zai)ATP和(he)(he)ADP之間實現空間轉換，完成(cheng)hsp90與(yu)分(fen)子(zi)(zi)伴(ban)(ban)侶(lv)底(di)(di)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)結(jie)(jie)合(he)(he)(he)與(yu)分(fen)離，最(zui)終導致分(fen)子(zi)(zi)伴(ban)(ban)侶(lv)底(di)(di)物(wu)(wu)以高活(huo)性(xing)狀態存(cun)在(zai)；ATP結(jie)(jie)合(he)(he)(he)部位在(zai)Hsp90的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)N-端(duan)(duan)疏水(shui)區(qu)域，ATP和(he)(he)N-端(duan)(duan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)結(jie)(jie)合(he)(he)(he)引起Hsp90空間結(jie)(jie)構(gou)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)變化(hua)(hua)，影響(xiang)Hsp90和(he)(he)輔助伴(ban)(ban)侶(lv)分(fen)子(zi)(zi)如(ru)(ru)p23和(he)(he)p50p50cdc37(如(ru)(ru)果底(di)(di)物(wu)(wu)是信號(hao)蛋白激(ji)酶(mei)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)話)形成(cheng)伴(ban)(ban)侶(lv)機(ji)器(chaperone machine)，直接影響(xiang)與(yu)腫(zhong)瘤(liu)(liu)轉移相關(guan)信號(hao)分(fen)子(zi)(zi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)活(huo)性(xing)和(he)(he)穩(wen)定性(xing)；Hsp90本(ben)身具有(you)ATPase的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)功能，ATP與(yu)Hsp90結(jie)(jie)合(he)(he)(he)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)復(fu)(fu)合(he)(he)(he)物(wu)(wu)在(zai)這種ATPase作用下(xia)，水(shui)解成(cheng)ADP結(jie)(jie)合(he)(he)(he)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)Hsp90復(fu)(fu)合(he)(he)(he)物(wu)(wu)，該(gai)種復(fu)(fu)合(he)(he)(he)物(wu)(wu)沒有(you)分(fen)子(zi)(zi)伴(ban)(ban)侶(lv)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)功能，底(di)(di)物(wu)(wu)分(fen)子(zi)(zi)在(zai)泛素化(hua)(hua)E3連結(jie)(jie)酶(mei)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)幫(bang)(bang)助下(xia)被26S蛋白酶(mei)體(ti)降解，對腫(zhong)瘤(liu)(liu)細(xi)胞而(er)言，維持(chi)腫(zhong)瘤(liu)(liu)細(xi)胞生(sheng)存(cun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)重要(yao)蛋白及蛋白激(ji)酶(mei)多數需要(yao)Hsp90分(fen)子(zi)(zi)伴(ban)(ban)侶(lv)功能的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)幫(bang)(bang)助，所以，Hsp90對腫(zhong)瘤(liu)(liu)細(xi)胞至關(guan)重要(yao)。

正(zheng)因為Hsp90的(de)(de)(de)(de)(de)N-端(duan)含(han)有ATP的(de)(de)(de)(de)(de)結(jie)合部位(wei)，影響ATP與(yu)Hsp90結(jie)合的(de)(de)(de)(de)(de)小分(fen)(fen)子(zi)(zi)化(hua)合物(wu)(wu)可以抑制(zhi)Hsp90的(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)(fen)子(zi)(zi)伴(ban)侶(lv)(lv)(lv)功(gong)能，ATP的(de)(de)(de)(de)(de)結(jie)合部位(wei)是(shi)目前(qian)篩選Hsp90抑制(zhi)劑的(de)(de)(de)(de)(de)主(zhu)要(yao)靶(ba)標；中間段(duan)(duan)是(shi)分(fen)(fen)子(zi)(zi)伴(ban)侶(lv)(lv)(lv)底物(wu)(wu)和(he)Hsp90相(xiang)(xiang)互作用(yong)的(de)(de)(de)(de)(de)部位(wei)，許多腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)相(xiang)(xiang)關(guan)(guan)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)激酶,如(ru)(ru)AKT、c-Raf、c-Src等都和(he)Hsp90的(de)(de)(de)(de)(de)中端(duan)部位(wei)作用(yong)；C-端(duan)的(de)(de)(de)(de)(de)末尾含(han)有一(yi)(yi)個MEEVD片段(duan)(duan)，這一(yi)(yi)片段(duan)(duan)對Hsp90和(he)含(han)有TPR結(jie)構的(de)(de)(de)(de)(de)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)相(xiang)(xiang)互作用(yong)至關(guan)(guan)重(zhong)要(yao)，除去這一(yi)(yi)片段(duan)(duan)會(hui)抑制(zhi)Hsp90的(de)(de)(de)(de)(de)ATPase活(huo)性；研究顯(xian)示，Hsp90結(jie)構的(de)(de)(de)(de)(de)任何(he)變化(hua)都可能影響Hsp90的(de)(de)(de)(de)(de)功(gong)能，更可能干(gan)擾Hsp90和(he)分(fen)(fen)子(zi)(zi)伴(ban)侶(lv)(lv)(lv)底物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)結(jie)合，最終引起分(fen)(fen)子(zi)(zi)伴(ban)侶(lv)(lv)(lv)底物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)降解(jie)。在腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)細胞(bao)中,越(yue)來越(yue)多的(de)(de)(de)(de)(de)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)被發現是(shi)Hsp90的(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)(fen)子(zi)(zi)伴(ban)侶(lv)(lv)(lv)底物(wu)(wu)，尤其(qi)是(shi)與(yu)腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)轉移相(xiang)(xiang)關(guan)(guan)的(de)(de)(de)(de)(de)信號(hao)分(fen)(fen)子(zi)(zi)，如(ru)(ru)c-Raf、AKT、ZAP-70、IKKα；ER(endoplasmic reticulum)的(de)(de)(de)(de)(de)轉膜激酶，如(ru)(ru)IRE1(inositol requiring enzyme 1)和(he)PERK(double-stranded RNA-activated protein kinase-like ER kinase)；cell cycle調控蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)，如(ru)(ru)cdk4、cyclin D、p21、chk1及wee1等。這些腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)相(xiang)(xiang)關(guan)(guan)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)都是(shi)Hsp90的(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)(fen)子(zi)(zi)伴(ban)侶(lv)(lv)(lv)底物(wu)(wu),它們和(he)許多腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)的(de)(de)(de)(de)(de)發生、轉移有直接(jie)的(de)(de)(de)(de)(de)關(guan)(guan)系(xi)，因此(ci)，腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)中Hsp90和(he)許多腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)相(xiang)(xiang)關(guan)(guan)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)形成(cheng)復合物(wu)(wu)，主(zhu)導它們的(de)(de)(de)(de)(de) 功(gong)能，已成(cheng)為抗腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)研究的(de)(de)(de)(de)(de)熱門靶(ba)標分(fen)(fen)子(zi)(zi)。此(ci)外，有研究報道，正(zheng)常生理條(tiao)件下的(de)(de)(de)(de)(de)腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)細胞(bao)Hsp90表達水平高達總蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)的(de)(de)(de)(de)(de)4％,明顯(xian)地比正(zheng)常細胞(bao)的(de)(de)(de)(de)(de)1-2％高得多,這種表達水平的(de)(de)(de)(de)(de)差異使Hsp90成(cheng)為一(yi)(yi)個很好的(de)(de)(de)(de)(de)抗腫(zhong)(zhong)(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)藥(yao)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)篩選靶(ba)標。

已知格爾德(de)霉素(su)(su)(Geldanamycin，GAA)是一種天然的(de)Hsp90抑(yi)制(zhi)劑，特異性地(di)干擾糖皮質激素(su)(su)受(shou)體(GR)/HSP復合物(wu)(wu)(wu)的(de)形(xing)成(cheng)，GAA的(de)衍生物(wu)(wu)(wu)17-AAG和(he)17-DMAG與hsp90有很強的(de)親和(he)力(li)，它們和(he)hsp90的(de)ATP/ADP結(jie)合部(bu)位結(jie)合，從而阻止hsp90和(he)底物(wu)(wu)(wu)相結(jie)合，使(shi)底物(wu)(wu)(wu)被蛋白酶體降解(jie)，Hsp90的(de)ATP結(jie)合部(bu)位理所當然地(di)成(cheng)為篩(shai)選Hsp90抑(yi)制(zhi)劑的(de)模型；

以Hsp90的ATP結合部位為篩選模型,Novartis、Merck等制藥公(gong)司已篩選到一些Hsp90抑(yi)制劑,如17-AAG、17-DMAG和AUY922都促使(shi)腫(zhong)瘤(liu)蛋白迅速被蛋白酶體(ti)途徑降解,達到殺死腫(zhong)瘤(liu)細(xi)胞的目的，其中(zhong)有些已進入臨床(chuang)試驗(yan)，但目前的Hsp90抑(yi)制劑中(zhong)尚無成為臨床(chuang)用藥者。

‘蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)’是(shi)(shi)一(yi)(yi)種蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)轉(zhuan)錄后(hou)修(xiu)(xiu)飾(shi)(shi)，一(yi)(yi)般是(shi)(shi)指蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)質(zhi)鏈上(shang)的(de)(de)(de)Lys(K)的(de)(de)(de)氨基接上(shang)一(yi)(yi)個(ge)(ge)乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)基基團，而不(bu)(bu)是(shi)(shi)指蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)鏈末(mo)端其他氨基；組(zu)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)轉(zhuan)移酶(mei)(HATs)和(he)組(zu)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)去乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)酶(mei)(HDACs)是(shi)(shi)分(fen)別控(kong)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)組(zu)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)N-端Lys乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)和(he)去乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)的(de)(de)(de)、功能(neng)相反的(de)(de)(de)兩(liang)類(lei)酶(mei)；乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)修(xiu)(xiu)飾(shi)(shi)是(shi)(shi)由(you)HDAC和(he)HAT調(diao)控(kong)的(de)(de)(de)可逆過程,受環境、營(ying)養、藥物(wu)等(deng)多(duo)種因素影(ying)(ying)響(xiang)，乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)直接導致(zhi)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)質(zhi)功能(neng)的(de)(de)(de)差異；一(yi)(yi)般而言，乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)促(cu)進轉(zhuan)錄因子的(de)(de)(de)轉(zhuan)錄活性，如(ru)p53、E2F1、FATA1、RelA、YY1、Bcl-6等(deng)；有(you)(you)關蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)的(de)(de)(de)研(yan)(yan)(yan)(yan)究(jiu)(jiu)(jiu)顯示(shi)，首(shou)先在組(zu)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)中發(fa)現乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)修(xiu)(xiu)飾(shi)(shi)，后(hou)來(lai)在非(fei)組(zu)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)中同樣(yang)發(fa)現乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)修(xiu)(xiu)飾(shi)(shi)，乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)對(dui)非(fei)組(zu)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)P53和(he)FoxO1的(de)(de)(de)功能(neng)影(ying)(ying)響(xiang)研(yan)(yan)(yan)(yan)究(jiu)(jiu)(jiu)使(shi)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)成為(wei)研(yan)(yan)(yan)(yan)究(jiu)(jiu)(jiu)的(de)(de)(de)熱點之一(yi)(yi)；在細(xi)(xi)胞(bao)中，蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)質(zhi)是(shi)(shi)主要的(de)(de)(de)信息調(diao)控(kong)和(he)傳(chuan)遞的(de)(de)(de)分(fen)子，任何修(xiu)(xiu)飾(shi)(shi)都(dou)會對(dui)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)的(de)(de)(de)功能(neng)產生或正或負(fu)面(mian)的(de)(de)(de)影(ying)(ying)響(xiang)，合理(li)利用這些負(fu)面(mian)影(ying)(ying)響(xiang)對(dui)腫瘤細(xi)(xi)胞(bao)可能(neng)是(shi)(shi)致(zhi)命(ming)的(de)(de)(de)；HDAC分(fen)為(wei)HDAC-I、II、III三類(lei)，到目前為(wei)止發(fa)現有(you)(you)18個(ge)(ge)不(bu)(bu)同的(de)(de)(de)HDAC蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)，有(you)(you)研(yan)(yan)(yan)(yan)究(jiu)(jiu)(jiu)已發(fa)現多(duo)個(ge)(ge)可以抑(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)HDAC-I/II/III的(de)(de)(de)抑(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)，但僅HDAC-I/II抑(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)在腫瘤防治(zhi)方面(mian)有(you)(you)潛在價值；另(ling)有(you)(you)研(yan)(yan)(yan)(yan)究(jiu)(jiu)(jiu)表(biao)明(ming)，HDAC抑(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)如(ru)SAHA(vorinostat)、LAQ824、LBH 589均增(zeng)加p21、p27的(de)(de)(de)表(biao)達(da)，也誘(you)導促(cu)凋(diao)亡蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)如(ru)Bax、Bak和(he)Bim的(de)(de)(de)表(biao)達(da)，同時影(ying)(ying)響(xiang)抗凋(diao)亡蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)如(ru)Bcl-xl、XIAP、AKT、c-Raf和(he)survivin的(de)(de)(de)水平；組(zu)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)去乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)酶(mei)抑(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)具(ju)有(you)(you)抑(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)腫瘤細(xi)(xi)胞(bao)增(zeng)殖、細(xi)(xi)胞(bao)周期阻(zu)滯、誘(you)導細(xi)(xi)胞(bao)分(fen)化(hua)(hua)(hua)及促(cu)進細(xi)(xi)胞(bao)凋(diao)亡的(de)(de)(de)作用，其中SAHA和(he)LBH589已上(shang) 市，此外MS-275、Trichostatin(TSA)、FK228及西達(da)苯胺等(deng)多(duo)種組(zu)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)(dan)白(bai)去乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)酶(mei)抑(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)進入臨床研(yan)(yan)(yan)(yan)究(jiu)(jiu)(jiu)；然而，實踐(jian)顯示(shi)HDAC抑(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)缺少專(zhuan)一(yi)(yi)性，對(dui)腫瘤細(xi)(xi)胞(bao)的(de)(de)(de)殺傷無專(zhuan)一(yi)(yi)性。

有(you)(you)研究公開了腫(zhong)(zhong)瘤病人和小(xiao)鼠腫(zhong)(zhong)瘤樣品，其(qi)中顯(xian)示(shi)腫(zhong)(zhong)瘤細(xi)胞而非正常細(xi)胞中的(de)(de)Hsp90是以乙(yi)酰化(hua)修飾形式存在，hsp90的(de)(de)乙(yi)酰化(hua)和腫(zhong)(zhong)瘤大小(xiao)相(xiang)對(dui)應(ying)，與腫(zhong)(zhong)瘤惡化(hua)程度相(xiang)對(dui)應(ying)；目前(qian)，Hsp90抑(yi)(yi)制劑的(de)(de)篩(shai)選(xuan)多數是基(ji)于(yu)大腸桿菌表(biao)達(da)的(de)(de)Hsp90的(de)(de)ATP結合片(pian)段為模型(xing)篩(shai)選(xuan)，該篩(shai)選(xuan)模型(xing)缺乏對(dui)Hsp90的(de)(de)乙(yi)酰化(hua)修飾問(wen)題的(de)(de)考慮，造(zao)成篩(shai)選(xuan)到的(de)(de)小(xiao)分(fen)子化(hua)合物對(dui)腫(zhong)(zhong)瘤Hsp90抑(yi)(yi)制效(xiao)果有(you)(you)限，以及缺乏腫(zhong)(zhong)瘤細(xi)胞選(xuan)擇性。

本申請前期研究表明，不(bu)同部位(wei)(wei)的(de)(de)(de)乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)(hua)對(dui)hsp90的(de)(de)(de)功(gong)(gong)能影響(xiang)不(bu)同，不(bu)一(yi)定導致(zhi)腫(zhong)瘤(liu)(liu)細胞(bao)的(de)(de)(de)死亡；hsp90中(zhong)(zhong)7個(ge)位(wei)(wei)點可以被HDAC抑制劑(ji)誘導產(chan)生乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)(hua)，分(fen)(fen)別(bie)是K69、K100、K292、K327、K478、K546和(he)K558，經過乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)(hua)模(mo)擬(ni)突變K/Q分(fen)(fen)析發(fa)現(xian)，在(zai)C-端的(de)(de)(de)乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)(hua)都(dou)是破壞hsp90的(de)(de)(de)功(gong)(gong)能，但在(zai)中(zhong)(zhong)間段乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)(hua)則有不(bu)同，K292位(wei)(wei)于hsp90中(zhong)(zhong)端起始(shi)部位(wei)(wei)的(de)(de)(de)鏈接(hinge)區域，該鏈接區域在(zai)各種(zhong)物種(zhong)中(zhong)(zhong)是高度保(bao)守的(de)(de)(de)，但K292乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)(hua)極大(da)地增強(qiang)了(le)hsp90與ATP、激(ji)酶(mei)伴(ban)侶(lv)分(fen)(fen)子(zi)p50cdc37及泛(fan)素化(hua)(hua)(hua)(hua)E3連結酶(mei)CHIP的(de)(de)(de)結合，這意味(wei)著(zhu)hsp90如果在(zai)K292位(wei)(wei)點上單乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)(hua)的(de)(de)(de)話，將(jiang)使失活的(de)(de)(de)蛋白激(ji)酶(mei)更(geng)快地降解，hsp90發(fa)揮分(fen)(fen)子(zi)伴(ban)侶(lv)功(gong)(gong)能時對(dui)ATP的(de)(de)(de)濃度要求降低，其分(fen)(fen)子(zi)伴(ban)侶(lv)功(gong)(gong)能更(geng)強(qiang)大(da)，這將(jiang)大(da)大(da)增強(qiang)腫(zhong)瘤(liu)(liu)細胞(bao)的(de)(de)(de)抗藥性(xing)和(he)蛋白激(ji)酶(mei)的(de)(de)(de)信號，更(geng)有利于腫(zhong)瘤(liu)(liu)細胞(bao)的(de)(de)(de)生長，促使腫(zhong)瘤(liu)(liu)細胞(bao)的(de)(de)(de)轉(zhuan)移擴散(san)；另一(yi)個(ge)事實是，hsp90的(de)(de)(de)K292乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)(hua)和(he)腫(zhong)瘤(liu)(liu)大(da)小及腫(zhong)瘤(liu)(liu)的(de)(de)(de)惡化(hua)(hua)(hua)(hua)程(cheng)度有著(zhu)緊密的(de)(de)(de)相(xiang)關(guan)性(xing)，如果腫(zhong)瘤(liu)(liu)中(zhong)(zhong)乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)(hua)破壞hsp90的(de)(de)(de)分(fen)(fen)子(zi)伴(ban)侶(lv)功(gong)(gong)能，腫(zhong)瘤(liu)(liu)細胞(bao)死亡；基(ji)于此，提出“乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)(hua)Hsp90是腫(zhong)瘤(liu)(liu)癥治(zhi)療的(de)(de)(de)新(xin)靶標(biao)”的(de)(de)(de)概念(nian),進(jin)而建(jian)立(li)乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)(hua)Hsp90抑制劑(ji)的(de)(de)(de)篩選模(mo)型，發(fa)現(xian)乙(yi)(yi)酰(xian)(xian)(xian)化(hua)(hua)(hua)(hua)hsp90抑制劑(ji)對(dui)腫(zhong)瘤(liu)(liu)的(de)(de)(de)防(fang)治(zhi)具有重要意義。

基(ji)于上述研究發現，本發明擬提供一種含有含有辛伐他(ta)汀與組(zu)蛋白(bai)去乙酰化(hua)酶抑制劑(ji)的(de)的(de)藥物(wu)(wu)組(zu)合物(wu)(wu)，以及(ji)在制備治(zhi)療三陰性乳腺癌(ai)藥物(wu)(wu)中的(de)應用。

技術實現要素：

本發明(ming)的(de)目的(de)是基于現有(you)技(ji)術的(de)研究基礎(chu)，提(ti)供一(yi)種含(han)有(you)辛伐(fa)他(ta)汀與(yu)組蛋白去乙(yi)酰(xian)化(hua)酶抑制(zhi)劑(ji)的(de)藥(yao)物(wu)(wu)組合物(wu)(wu)，及其(qi)在制(zhi)備(bei)治療三陰(yin)性(xing)乳(ru)腺癌藥(yao)物(wu)(wu)中的(de)應用(yong)。  更具體涉及一(yi)種含(han)有(you)辛伐(fa)他(ta)汀作為乙(yi)酰(xian)化(hua)hsp90抑制(zhi)劑(ji)和去乙(yi)酰(xian)化(hua)酶抑制(zhi)劑(ji)LBH589的(de)藥(yao)物(wu)(wu)組合物(wu)(wu)，及其(qi)在制(zhi)備(bei)治療三陰(yin)性(xing)乳(ru)腺癌藥(yao)物(wu)(wu)中的(de)應用(yong)

本(ben)發明中還提(ti)供了一種篩(shai)選乙(yi)酰化(hua)hsp90抑(yi)制劑的方法。

本發明基(ji)于現(xian)有技術的(de)研究(jiu)基(ji)礎，用K292Q突變模擬K292位點乙(yi)酰(xian)(xian)化的(de)hsp90，建立(li)穩(wen)定(ding)表(biao)達Flag-hsp90-K292Q及HA-p50CDC37的(de)細(xi)胞株，然后用細(xi)胞株的(de)裂解液(ye)經Alpha Technology技術比(bi)較熒光信(xin)號(hao)強弱，篩選乙(yi)酰(xian)(xian)化hsp90抑(yi)制(zhi)劑；熒光信(xin)號(hao)越弱，說明小分子化合(he)物(wu)抑(yi)制(zhi)乙(yi)酰(xian)(xian)化hsp90-p50cdc37結合(he)的(de)能力越高，由此(ci)提出了辛伐他汀強烈抑(yi)制(zhi)乙(yi)酰(xian)(xian)化hsp90的(de)分子伴侶功能；

鑒于(yu)辛伐他(ta)(ta)汀是(shi)他(ta)(ta)汀類羥甲(jia)基戊二酰(xian)(xian)輔酶A還(huan)原酶抑制(zhi)(zhi)劑，抑制(zhi)(zhi)內源(yuan)性膽固醇的(de)合成，原為(wei)血脂調節劑，研究(jiu)(jiu)發現他(ta)(ta)汀類藥物(wu)還(huan)能抑制(zhi)(zhi)多(duo)種(zhong)腫瘤(liu)(liu)(liu)細胞增殖、誘導腫瘤(liu)(liu)(liu)細胞分化(hua)，和(he)(he)誘導腫瘤(liu)(liu)(liu)細胞凋亡(wang)，降低腫瘤(liu)(liu)(liu)細胞侵襲及轉移能力，而對正常細胞無(wu)明(ming)顯(xian)的(de)毒副作用(yong)(yong)；本發明(ming)經(jing)研究(jiu)(jiu)顯(xian)示，辛伐他(ta)(ta)汀抑制(zhi)(zhi)hsp90-p50cdc37復(fu)合物(wu)的(de)形成，同樣抑制(zhi)(zhi)乙(yi)酰(xian)(xian)化(hua)hsp90與p50cdc37復(fu)合物(wu)形成的(de)功能，從而使hsp90失去(qu)對腫瘤(liu)(liu)(liu)中(zhong)蛋白(bai)激酶的(de)分子伴侶功能；同時經(jing)研究(jiu)(jiu)顯(xian)示，去(qu)乙(yi)酰(xian)(xian)化(hua)酶抑制(zhi)(zhi)劑LBH589可以誘導細胞中(zhong)hsp90在K292位的(de)乙(yi)酰(xian)(xian)化(hua)而增強(qiang)其與cdc37復(fu)合物(wu)的(de)形成，本發明(ming)中(zhong)采用(yong)(yong)含有辛伐他(ta)(ta)汀和(he)(he)組(zu)(zu)蛋白(bai)去(qu)乙(yi)酰(xian)(xian)化(hua)酶抑制(zhi)(zhi)劑的(de)組(zu)(zu)合物(wu)，使其中(zhong)的(de)辛伐他(ta)(ta)汀和(he)(he)去(qu)乙(yi)酰(xian)(xian)化(hua)酶抑制(zhi)(zhi)劑LBH589聯用(yong)(yong)，具有破壞hsp90和(he)(he)p50cdc37復(fu)合物(wu)的(de)形成的(de)作用(yong)(yong)。

本(ben)發(fa)明的含(han)有(you)辛(xin)伐他(ta)汀(ting)和組蛋白去乙酰(xian)化酶抑制劑的組合物中，所述辛(xin)伐他(ta)汀(ting)可以為辛(xin)伐他(ta)汀(ting)及其(qi)衍生物及其(qi)結構類(lei)似物。

本發明藥物(wu)組合物(wu)中的(de)(de)辛伐他汀的(de)(de)結構式如(ru)式I所示：

本發明(ming)的藥(yao)物(wu)(wu)組合物(wu)(wu)中，所述辛伐他汀組分包(bao)括但不限(xian)于辛伐他汀藥(yao)物(wu)(wu)本身，還可以是其(qi)可藥(yao)用的鹽、水合物(wu)(wu)、類似物(wu)(wu)或(huo)衍(yan)生物(wu)(wu)等。

本(ben)發明中(zhong)，所述組(zu)蛋白(bai)去(qu)乙(yi)酰化(hua)酶(mei)抑制劑(ji)可以(yi)為任何(he)結構(gou)類(lei)型的組(zu)蛋白(bai)去(qu)乙(yi)酰化(hua)酶(mei)抑制劑(ji)的藥(yao)物(wu)，如(ru)苯甲(jia)酰胺類(lei)、脂(zhi)肪酸類(lei)等，具體可以(yi)是(shi)但不限于如(ru)：panobinostat(LBH589)、vorinostat(SAHA)、Trichostatin(TSA)。

本發明藥物組合物中組蛋白去乙酰化酶抑制劑優選為LBH589，SAHA和TSA，其中，LBH589由Novartis公司研發，通用名為panobinostat，已通過FDA批準上市，商品名為Farydak^TM，其結構式(shi)如II所示：

其中SAHA是第(di)一(yi)個批準上市的HDAC抑制劑，由默克公司開發，通用(yong)名為vorinostat，用(yong)于治療皮膚(fu)T細(xi)胞淋巴瘤，其結(jie)構式如(ru)III所示：

本發明藥物(wu)(wu)組合(he)物(wu)(wu)中，所述的(de)組蛋白去乙酰化酶(mei)抑制劑組分包括但不(bu)限(xian)于(yu)上述藥物(wu)(wu)本身(shen)，還可以是它們的(de)可藥用的(de)鹽(yan)、水合(he)物(wu)(wu)、類似物(wu)(wu)或(huo)衍(yan)生(sheng)物(wu)(wu)等；也可以是式I的(de)羥基和式II或(huo)式III的(de)羥肟酸(suan)基團形(xing)成羥肟酸(suan)酯(zhi)的(de)形(xing)式將兩藥偶(ou)聯在一(yi)起(qi)。

本發明的(de)含(han)有辛伐他汀和組(zu)蛋白去乙(yi)酰(xian)化(hua)酶抑制劑(ji)的(de)藥物(wu)組(zu)合物(wu)可以用于制備治療各種腫(zhong)瘤的(de)藥物(wu)，所述腫(zhong)瘤包括但不限于三陰性乳腺腫(zhong)瘤。

本發(fa)明藥(yao)(yao)物(wu)組合物(wu)在制(zhi)備治療三陰性乳腺腫瘤藥(yao)(yao)物(wu)中，組蛋白去乙(yi)酰化酶抑制(zhi)劑(ji)LBH589與辛伐他汀的摩爾比為1:1-20。

優選的，本發明藥(yao)物(wu)(wu)組(zu)合物(wu)(wu)在制備治療三陰性(xing)乳腺(xian)腫瘤藥(yao)物(wu)(wu)中(zhong)，所(suo)述(shu)SAHA和辛伐他汀(ting)的摩(mo)爾比為1:1-15。

本(ben)發明(ming)(ming)中，含有辛(xin)伐他(ta)(ta)汀和組(zu)蛋白去乙(yi)酰(xian)化(hua)酶(mei)抑制(zhi)(zhi)劑(ji)組(zu)合(he)(he)物(wu)在(zai)用(yong)(yong)(yong)于(yu)治療三陰性乳腺腫(zhong)瘤的(de)應(ying)用(yong)(yong)(yong)中，將(jiang)(jiang)本(ben)發明(ming)(ming)組(zu)合(he)(he)物(wu)制(zhi)(zhi)成同時(shi)給藥(yao)的(de)藥(yao)劑(ji)方案中，辛(xin)伐他(ta)(ta)汀和組(zu)蛋白去乙(yi)酰(xian)化(hua)酶(mei)抑制(zhi)(zhi)劑(ji)可(ke)(ke)以在(zai)同一(yi)種制(zhi)(zhi)劑(ji)如片(pian)劑(ji)或(huo)膠(jiao)囊中，也(ye)可(ke)(ke)以將(jiang)(jiang)辛(xin)伐他(ta)(ta)汀和組(zu)蛋白去乙(yi)酰(xian)化(hua)酶(mei)抑制(zhi)(zhi)劑(ji)分(fen)別做成制(zhi)(zhi)劑(ji)，如分(fen)別做成片(pian)劑(ji)或(huo)膠(jiao)囊，并(bing)采用(yong)(yong)(yong)本(ben)領域常(chang)規的(de)方式將(jiang)(jiang)它們包(bao)裝或(huo)結合(he)(he)在(zai)一(yi)起，使用(yong)(yong)(yong)者按照藥(yao)品說明(ming)(ming)書(shu)的(de)指示同時(shi)服用(yong)(yong)(yong)；

本發明中(zhong)，在將本發明組(zu)(zu)合(he)物(wu)制成(cheng)(cheng)先(xian)后(hou)給(gei)藥(yao)(yao)的(de)(de)(de)藥(yao)(yao)劑(ji)方案中(zhong)，可以將辛(xin)伐他汀和組(zu)(zu)蛋白去乙酰化酶抑制劑(ji)分(fen)別做(zuo)成(cheng)(cheng)不同(tong)的(de)(de)(de)制劑(ji)，并采用本領域常規的(de)(de)(de)方式將它們包裝或結(jie)合(he)在一(yi)(yi)起(qi)，使用者然后(hou)按照藥(yao)(yao)品(pin)說明書指示的(de)(de)(de)先(xian)后(hou)順序進行服(fu)用，或將上(shang)述組(zu)(zu)合(he)物(wu)中(zhong)的(de)(de)(de)兩種(zhong)成(cheng)(cheng)分(fen)制成(cheng)(cheng)一(yi)(yi)種(zhong)控釋的(de)(de)(de)制劑(ji)，先(xian)釋放(fang)組(zu)(zu)合(he)物(wu)中(zhong)的(de)(de)(de)一(yi)(yi)種(zhong)成(cheng)(cheng)分(fen)、然后(hou)再(zai)釋放(fang)組(zu)(zu)合(he)物(wu)中(zhong)的(de)(de)(de)另一(yi)(yi)種(zhong)成(cheng)(cheng)分(fen)，使用者只需要(yao)服(fu)用該控釋組(zu)(zu)合(he)物(wu)制劑(ji)；

本(ben)發(fa)明(ming)中，在將本(ben)發(fa)明(ming)組(zu)合物制備(bei)成(cheng)(cheng)交叉給(gei)藥(yao)的藥(yao)劑(ji)(ji)方(fang)案中，可以將辛伐他汀和組(zu)蛋白去乙酰化酶抑(yi)(yi)制劑(ji)(ji)分別做成(cheng)(cheng)不同(tong)的制劑(ji)(ji)，并采用(yong)本(ben)領域常規的方(fang)式將它們包裝(zhuang)或結合在一起，使(shi)用(yong)者(zhe)然(ran)后按照藥(yao)品說(shuo)明(ming)書指示的交叉順序服用(yong)，或者(zhe)將該藥(yao)物組(zu)合物制備(bei)成(cheng)(cheng)辛伐他汀和組(zu)蛋白去乙酰化酶抑(yi)(yi)制劑(ji)(ji)交叉釋放的控釋制劑(ji)(ji)。

本發明的(de)(de)辛(xin)伐(fa)他汀(ting)(ting)和(he)組(zu)蛋白(bai)(bai)去(qu)乙(yi)酰化(hua)(hua)酶(mei)抑制(zhi)(zhi)劑組(zu)合物(wu)(wu)在制(zhi)(zhi)備治療三(san)陰(yin)性乳腺腫(zhong)瘤(liu)藥(yao)(yao)物(wu)(wu)的(de)(de)應用(yong)中(zhong)，所述(shu)組(zu)合物(wu)(wu)中(zhong)的(de)(de)辛(xin)伐(fa)他汀(ting)(ting)和(he)組(zu)蛋白(bai)(bai)去(qu)乙(yi)酰化(hua)(hua)酶(mei)抑制(zhi)(zhi)劑可以同時使用(yong)或(huo)以任(ren)何先(xian)后的(de)(de)順序使用(yong)，如可以將辛(xin)伐(fa)他汀(ting)(ting)和(he)組(zu)蛋白(bai)(bai)去(qu)乙(yi)酰化(hua)(hua)酶(mei)抑制(zhi)(zhi)劑同時給(gei)(gei)患者(zhe)服(fu)用(yong)；也可以先(xian)將辛(xin)伐(fa)他汀(ting)(ting)藥(yao)(yao)物(wu)(wu)給(gei)(gei)患者(zhe)服(fu)用(yong)、然后服(fu)用(yong)組(zu)蛋白(bai)(bai)去(qu)乙(yi)酰化(hua)(hua)酶(mei)抑制(zhi)(zhi)劑，或(huo)先(xian)服(fu)用(yong)組(zu)蛋白(bai)(bai)去(qu)乙(yi)酰化(hua)(hua)酶(mei)抑制(zhi)(zhi)劑、然后服(fu)用(yong)辛(xin)伐(fa)他汀(ting)(ting)藥(yao)(yao)物(wu)(wu)，對于兩(liang)者(zhe)服(fu)用(yong)的(de)(de)時間間隔沒有(you)特別要(yao)求，但(dan)優選服(fu)用(yong)兩(liang)種藥(yao)(yao)物(wu)(wu)的(de)(de)時間間隔不超過一(yi)天；或(huo)者(zhe)兩(liang)種藥(yao)(yao)物(wu)(wu)交(jiao)替給(gei)(gei)藥(yao)(yao)。

本(ben)(ben)(ben)發(fa)明(ming)中，可將辛(xin)伐(fa)(fa)他汀和(he)組蛋(dan)白(bai)去(qu)乙(yi)酰化酶抑(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)采(cai)用(yong)本(ben)(ben)(ben)領(ling)域常(chang)規(gui)(gui)的(de)(de)方(fang)法制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)備成適于胃(wei)腸(chang)(chang)道給(gei)藥(yao)(yao)或非胃(wei)腸(chang)(chang)道給(gei)藥(yao)(yao)的(de)(de)藥(yao)(yao)物(wu)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)，本(ben)(ben)(ben)發(fa)明(ming)優(you)選將辛(xin)伐(fa)(fa)他汀和(he)組蛋(dan)白(bai)去(qu)乙(yi)酰化酶抑(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)成胃(wei)腸(chang)(chang)道給(gei)藥(yao)(yao)的(de)(de)藥(yao)(yao)物(wu)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)，其制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)形式可以(yi)(yi)為(wei)常(chang)規(gui)(gui)片劑(ji)(ji)或膠(jiao)囊，控釋或緩釋制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)。在(zai)本(ben)(ben)(ben)發(fa)明(ming)辛(xin)伐(fa)(fa)他汀和(he)組蛋(dan)白(bai)去(qu)乙(yi)酰化酶抑(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)組合(he)(he)物(wu)的(de)(de)藥(yao)(yao)物(wu)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)中，根據不同的(de)(de)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)形式和(he)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)規(gui)(gui)格，所(suo)述組合(he)(he)物(wu)在(zai)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)中的(de)(de)含量可以(yi)(yi)質量計為(wei)1％-99％，優(you)選為(wei)10％-90％；制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)使用(yong)的(de)(de)輔(fu)料可采(cai)用(yong)本(ben)(ben)(ben)領(ling)域常(chang)規(gui)(gui)的(de)(de) 輔(fu)料，以(yi)(yi)不和(he)本(ben)(ben)(ben)發(fa)明(ming)組合(he)(he)物(wu)發(fa)生反應(ying)或不影(ying)響(xiang)本(ben)(ben)(ben)發(fa)明(ming)藥(yao)(yao)物(wu)的(de)(de)療效為(wei)前提(ti)；所(suo)述制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)的(de)(de)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)備方(fang)法可采(cai)用(yong)本(ben)(ben)(ben)領(ling)域常(chang)規(gui)(gui)的(de)(de)制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)備方(fang)法進行制(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)備。

本(ben)發明中，所述的(de)(de)組(zu)合(he)物的(de)(de)制備方法沒有(you)限(xian)制，辛伐(fa)他汀和組(zu)蛋白去乙酰化酶抑制劑(ji)(ji)(ji)兩者可(ke)以進行直接混合(he)然(ran)后做(zuo)成制劑(ji)(ji)(ji)，也可(ke)以分別(bie)和/或相應的(de)(de)輔(fu)(fu)料(liao)混合(he)分別(bie)做(zuo)成制劑(ji)(ji)(ji)，然(ran)后再按照本(ben)領域常規的(de)(de)方式(shi)包(bao)裝在一起，或分別(bie)和相應的(de)(de)輔(fu)(fu)料(liao)混合(he)然(ran)后再混合(he)做(zuo)成制劑(ji)(ji)(ji)。

本發明中(zhong)的藥(yao)物(wu)組合(he)物(wu)的給(gei)藥(yao)劑(ji)量根據給(gei)藥(yao)對象、給(gei)藥(yao)途(tu)徑或藥(yao)物(wu)的制劑(ji)形式不(bu)同(tong)可(ke)以進行適(shi)當(dang)的變化(hua)，但以保證該藥(yao)物(wu)組合(he)物(wu)在人體內能夠(gou)達到有效的血藥(yao)濃度(du)為前提。

本發明(ming)(ming)分別進行(xing)了辛伐(fa)他汀和組蛋白去(qu)乙酰(xian)化酶抑(yi)制劑組合(he)抑(yi)制(殺死)MDA-MB-231(乳(ru)(ru)(ru)腺腫(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)(liu)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)株(zhu)(zhu))、MDA-MB-468(乳(ru)(ru)(ru)腺腫(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)(liu)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)株(zhu)(zhu))、BT-483(乳(ru)(ru)(ru)腺腫(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)(liu)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)株(zhu)(zhu))、BT474(乳(ru)(ru)(ru)腺腫(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)(liu)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)株(zhu)(zhu))、MDA-MB-453(乳(ru)(ru)(ru)腺腫(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)(liu)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)株(zhu)(zhu))、MCF-7(乳(ru)(ru)(ru)腺腫(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)(liu)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)株(zhu)(zhu))、MCF-10A(乳(ru)(ru)(ru)腺纖維囊性病上皮細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)株(zhu)(zhu))和A549(肺腫(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)(liu)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)株(zhu)(zhu))的試驗，結果(guo)顯示，本發明(ming)(ming)得(de)辛伐(fa)他汀和組蛋白去(qu)乙酰(xian)化酶抑(yi)制劑組合(he)在治(zhi)療三陰性乳(ru)(ru)(ru)腺腫(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)(liu)和肺腫(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)(liu)的應用中(zhong)具有顯著(zhu)的協同效應；小鼠實驗結果(guo)表明(ming)(ming)，去(qu)乙酰(xian)化酶抑(yi)制劑與辛伐(fa)他汀相互增(zeng)強對方(fang)的抗腫(zhong)瘤(liu)(liu)(liu)(liu)藥(yao)效，降低用藥(yao)劑量，減少副作用的發生。

附圖說明

圖(tu)1.辛伐他汀對hsp90-cdc37結合(he)的影響。

圖(tu)2.辛(xin)伐他汀與(yu)LBH589對細胞凋亡因子的影響。

圖(tu)3.辛伐他汀及LBH589對hsp90共伴侶(lv)結合的影響。

圖4.辛伐(fa)他汀及LBH589對hsp90伴侶分子的影響(xiang)。

圖5.辛伐他汀(ting)及LBH589對hsp90伴(ban)侶(lv)分(fen)子(zi)磷酸化的影響。

圖6.辛伐(fa)他汀(ting)及LBH589對小鼠中三(san)陰(yin)性乳腺腫瘤(liu)生長(chang)的(de)影響。

圖7.辛伐他(ta)汀(ting)及LBH589對小鼠中三陰性乳腺(xian)腫瘤重量的影(ying)響。

具體實施方式

結合以下實施例對本發(fa)明作進一步的闡述，但本發(fa)明并不受限于此。

實施例1：

為了(le)驗證辛(xin)伐(fa)他汀(ting)(Simvastatin)是(shi)乙酰化(hua)(hua)(hua)hsp90的(de)(de)抑(yi)制劑，將Flag-hs90及Flag-hsp90-K292Q突變體分別轉入HEK293T細胞中(zhong)，用16μM濃度的(de)(de)辛(xin)伐(fa)他汀(ting)處(chu)理24小時后(hou)，檢測Flag-hsp90和(he)蛋白激酶伴侶(lv)分子cdc37的(de)(de)結(jie)合(he)能(neng)力，結(jie)果顯示(shi)，辛(xin)伐(fa)他汀(ting)不(bu)但(dan)可(ke)以(yi)抑(yi)制hsp90與(yu)cdc37的(de)(de)結(jie)合(he)，也可(ke)以(yi)抑(yi)制hsp90乙酰化(hua)(hua)(hua)模擬分子K292Q與(yu)cdc37結(jie)合(he)的(de)(de)能(neng)力，但(dan)是(shi)K292Q模擬乙酰化(hua)(hua)(hua)使(shi)Flag-hsp90與(yu)cdc37的(de)(de)結(jie)合(he)能(neng)力提高約3倍；由于腫瘤(liu)(liu)組(zu)織(zhi)(zhi)中(zhong)hsp90的(de)(de)K292位(wei)點處(chu)于乙酰化(hua)(hua)(hua)狀態而優(you)先(xian)和(he)腫瘤(liu)(liu)組(zu)織(zhi)(zhi)、而非(fei)正(zheng)常(chang)組(zu)織(zhi)(zhi)中(zhong)的(de)(de)cdc37形成復合(he)物，因(yin)此辛(xin)伐(fa)他汀(ting)顯然具有抑(yi)制腫瘤(liu)(liu)組(zu)織(zhi)(zhi)中(zhong)hsp90與(yu)cdc37結(jie)合(he)的(de)(de)能(neng)力；

圖1顯(xian)示了(le)，在(zai)HEK293細胞中(zhong)，K292Q具有比hsp90強得多(duo)的與(yu)cdc37結合的能力(li)，辛伐他(ta)汀(ting)不(bu)但抑制(zhi)hsp90和cdc37復(fu)合物的形成(cheng)，也抑制(zhi)乙酰化hsp90與(yu)cdc37復(fu)合物的形成(cheng)。

實施(shi)例2：辛(xin)伐他汀與LBH589聯用的聯合指(zhi)數測定

細(xi)胞(bao)(bao)(bao)：MDA-MB-231(乳(ru)腺腫(zhong)瘤(liu)(liu)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)株)、MDA-MB-468(乳(ru)腺腫(zhong)瘤(liu)(liu)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)株)、BT483(乳(ru)腺腫(zhong)瘤(liu)(liu)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)株)、BT474(乳(ru)腺腫(zhong)瘤(liu)(liu)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)株)、MDA-MB-453(乳(ru)腺腫(zhong)瘤(liu)(liu)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)株)、MCF-7(乳(ru)腺腫(zhong)瘤(liu)(liu)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)株)、MCF-10A(乳(ru)腺纖維囊(nang)性病上皮細(xi)胞(bao)(bao)(bao)株)和A549(肺(fei)腫(zhong)瘤(liu)(liu)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)株)均來源于(yu)American Type Culture Collection(ATCC)，Rockville，MD，USA；

藥品：辛伐他(ta)汀購(gou)自(zi)Sigma；組蛋白去(qu)乙酰化酶抑(yi)制劑(ji)LBH589和Trichostatin(TSA)均購(gou)自(zi)Selleck Chemicals；

方法：準確稱量(liang)藥物組合物相應組分，分別溶于二甲(jia)基亞(ya)礬配成30mM的貯存液，保存在-20℃冰(bing)箱，使用時用新鮮的培(pei)養(yang)基稀釋到合適(shi)的濃(nong)度(du)，然后分別取1微升混合備用。所有(you)的試驗中(zhong)，二甲(jia)基亞(ya)礬的最終濃(nong)度(du)均低于1‰(V/V)；

將所有的細胞于含10％小牛血清、100kU/L青霉素、100mg/L鏈霉素的DMEM培養基中，37℃，5％CO₂的濕度條件下培養，在加藥的前一天，在96孔板上進行細胞接種2X10⁴/孔，然后(hou)(hou)向細(xi)胞中加入(ru)按上述(shu)方法制備(bei)的藥物組合物溶液，使各組分達到其工作濃(nong)度，然后(hou)(hou)用兩種不同(tong)方法測定聯合指數，結(jie)果(guo)如(ru)表(biao)1和表(biao)2所示；

本(ben)實施例中(zhong)，作(zuo)如下的技(ji)術說明：

A.單層(ceng)細胞生長(chang)抑制試驗

使用兩種細胞生長抑制試驗方法，它們是：1)CCK-8檢測和2)CellTiter-Blue細胞活力檢測，使用孵育特定小時后抑制25％、50％、75％或90％細胞的化合物濃度即IC₂₅、IC₅₀、IC₇₅和IC₉₀來作為(wei)抗(kang)增殖效(xiao)力的度量；

CCK-8細胞計數(shu)(shu)檢測(ce)是測(ce)定細胞增殖(zhi)速率的(de)(de)(de)比(bi)色試驗(yan)，2-(2-甲氧基(ji)-4-硝(xiao)基(ji)苯基(ji))-3-(4-硝(xiao)基(ji)苯基(ji))-5-(2,4-二(er)(er)磺(huang)酸苯)-2H-四唑單鈉鹽在(zai)電子載(zai)體1-甲氧基(ji)-5-甲基(ji)吩(fen)嗪硫酸二(er)(er)甲酯的(de)(de)(de)作用(yong)下(xia)被細胞線粒體中(zhong)的(de)(de)(de)脫氫酶還原為具有高(gao)度水溶性的(de)(de)(de)黃色甲臜(za)產物，生成(cheng)的(de)(de)(de)甲臜(za)物的(de)(de)(de)數(shu)(shu)量與活細胞的(de)(de)(de)數(shu)(shu)量成(cheng)正(zheng)比(bi)，通過(guo)酶聯免疫檢測(ce)儀定量測(ce)定450nm波長(chang)處的(de)(de)(de)光吸(xi)收(shou)值(zhi)，可間(jian)接(jie)反(fan)映活細胞數(shu)(shu)量；

CellTiter-Blue細(xi)胞(bao)(bao)活(huo)(huo)力檢測是通過(guo)利用溶解于(yu)緩沖(chong)溶液(ye)中高純度的(de)刃天(tian)(tian)青檢測活(huo)(huo)性(xing)細(xi)胞(bao)(bao)的(de)數(shu)目，細(xi)胞(bao)(bao)可將(jiang)深藍色的(de)氧(yang)化(hua)型(xing)染(ran)料(刃天(tian)(tian)青)轉化(hua)為紅色的(de)還原(yuan)型(xing)染(ran)料(試鹵(lu)靈(ling))，因為無活(huo)(huo)性(xing)的(de)細(xi)胞(bao)(bao)很快(kuai)喪失(shi)了代謝能力而不能還原(yuan)刃天(tian)(tian)青，也就不能產(chan)生熒光信(xin)號，所(suo)以，該系統特異性(xing)檢測活(huo)(huo)性(xing)細(xi)胞(bao)(bao)，試驗產(chan)生的(de)熒光和比色信(xin)號與樣(yang)品中活(huo)(huo)細(xi)胞(bao)(bao)的(de)數(shu)量成比例；

上述試驗中，用8點或10點藥物滴定在多孔組織培養板中進行試驗，使外側各列保持空置，將細胞以不少于10⁴細胞/mL的密度懸浮于完全培養基中，并加入每孔中，然后加入適當培養基(200μL)，24小時后，將20μL的CellTiter-Blue或CCK-8溶液加入一個板中以測定加入化合物時(T₀)的活性，將該板在37℃孵育適宜的時間，并經Tecan infinite M200Pro使用儀器配套程序i-control在450nm(CCK-8檢測)及560nm激發光激發下在590nm(CellTiter-Blue)測量光密度，T₀板作為在實驗開始階段的初始活性參考，接種完24小時后，開始加入化合物，該時間與T₀測定的時間相同，在96孔板中加入各個化合物的一系列濃度稀釋物，最高濃度位于板邊緣，一式三份地加入稀釋物中的每一種，并將完全培養基加入沒有細胞的空的外側的各列中，化合物單獨加入或與組蛋白去乙酰化酶抑制劑組合加入，接種后將該板在37℃孵育72小時，加入CellTiter-Blue或CCK-8溶液(同T₀板)并在適(shi)宜的時間后讀(du)取，為分(fen)析數(shu)據，從各(ge)實(shi)驗孔(kong)中減去單獨溶媒(背景)的平均(jun)值，并計算化合物各(ge)個(ge)稀釋(shi)物的三個(ge)值的平均(jun)值，使用(yong)以下(xia)公式(shi)計算生長百分(fen)比；

B.聯合指數(CI)

為測定組蛋白去乙酰化酶抑制劑與其它化合物一起是否具有加合作用、協同作用或拮抗作用，測定用于各組合所產生的杭增殖活性的、被稱為聯合指數的參數。CI通過等效線圖解法方程CI＝(D)₁/(D_x)₁+(D)₂/(D_x)₂來測定，組合中的藥物1(D)₁和藥物2(D)₂抑制X％且(D_x)₁和(D_x)₂是也抑制X％的藥物1和藥物2單獨的劑量，對于每種化合物，在各劑量使用在CellTiter-Blue細胞活力檢測和CCK-8細胞計數檢測試驗中所測定的％生長值，CI值小于1表明了協同作用，等于1表明了加合作用，且大于1表明了拮抗作用，CI可在IC₂₅、IC₅₀、IC₇₅和IC₉₀測定。

表(biao)1.辛伐他汀與LBH589聯(lian)用的聯(lian)合指(zhi)數(shu)(shu)，使(shi)用CCK-8細胞計數(shu)(shu)檢測(ce)。

表2.辛伐他汀(ting)與LBH589組合的聯合指(zhi)數，使用CellTiter-Blue細胞活力檢測。

實施例3：辛伐他汀以及與LBH589聯用(yong)對(dui)MDA-MB-231細胞(bao)凋亡及壞死的(de)影響

將(jiang)乳腺腫瘤細(xi)胞MDA-MB-231用不同(tong)濃(nong)度(du)辛伐他(ta)汀(ting)(Simva.)在有(you)/或無LBH589存在下分別處(chu)理(li)24小時，隨后(hou)，用Annexin V細(xi)胞凋(diao)亡試劑(ji)盒處(chu)理(li)，并通過流(liu)式(shi)細(xi)胞儀檢測細(xi)胞凋(diao)亡狀態(tai)，數(shu)值代表細(xi)胞處(chu)于凋(diao)亡及(ji)壞死(si)狀態(tai)比(bi)例(li)的(de)平(ping)均值+S.E.M.，結(jie)(jie)果顯示，辛伐他(ta)汀(ting)與LBH589聯(lian)用，主要引起細(xi)胞的(de)凋(diao)亡，結(jie)(jie)果如表3所(suo)示。

表3.

本實施例(li)中(zhong)，檢測了辛(xin)伐他(ta)(ta)汀(ting)及其與LBH589聯用引(yin)起(qi)的凋(diao)亡蛋(dan)白caspase3的活化及其底物Parp1酶切狀態，結果顯示，辛(xin)伐他(ta)(ta)汀(ting)與LBH589聯用可(ke)以增強(qiang)辛(xin)伐他(ta)(ta)汀(ting)誘導的細胞凋(diao)亡。

實施例4

辛(xin)伐他汀(ting)以及(ji)與LBH589聯用只影(ying)響hsp90與共伴侶的(de)(de)(de)結合，而不(bu)影(ying)響hsp90共伴侶分(fen)(fen)子(zi)及(ji)調節分(fen)(fen)子(zi)的(de)(de)(de)表(biao)達，將乳腺腫瘤細(xi)胞MDA-MB-231用不(bu)同(tong)濃度辛(xin)伐他汀(ting)(Simva.)在/或(huo)無LBH589存(cun)在下(xia)分(fen)(fen)別(bie)處理24小時(shi)，檢測(ce)熱休(xiu)(xiu)克蛋白hsp40、hsp70、hsp90及(ji)共伴侶分(fen)(fen)子(zi)cdc37、HOP、hsp90激(ji)活分(fen)(fen)子(zi)AHA1的(de)(de)(de)表(biao)達水(shui)平，結果(guo)顯示，有(you)無LBH589的(de)(de)(de)存(cun)在，辛(xin)伐他汀(ting)對這(zhe)些蛋白的(de)(de)(de)表(biao)達均無顯著影(ying)響，尤(you)其(qi)(qi)是沒有(you)誘(you)導hsp70等熱休(xiu)(xiu)克蛋白的(de)(de)(de)表(biao)達，減少了產生抗藥性(xing)的(de)(de)(de)一(yi)種可能性(xing)，也是有(you)別(bie)于其(qi)(qi)他hsp90抑制劑(ji)所(suo)在，因而比一(yi)般的(de)(de)(de)hsp90抑制劑(ji)更有(you)優勢；

但是，對hsp90的(de)伴(ban)侶底物分(fen)子的(de)穩(wen)定性，尤其(qi)是對磷酸化底物分(fen)子的(de)穩(wen)定性有顯著影響，同時，Hsf1及磷酸化的(de)Hsf1(活性Hsf1)的(de)穩(wen)定性減弱，所以(yi)Hsp70等熱休克蛋白(bai)的(de)表達(da)不能(neng)被誘導；

辛伐他(ta)汀及(ji)其(qi)與LBH589的(de)聯用側重破(po)壞(huai)hsp90伴侶(lv)底物分子磷酸化的(de)特性(xing)表明，辛伐他(ta)汀及(ji)其(qi)與LBH589的(de)聯用優(you)先破(po)壞(huai)蛋(dan)白(bai)激(ji)酶(mei)的(de)穩(wen)定性(xing)，結(jie)果(guo)證實辛伐他(ta)汀及(ji)其(qi)與LBH589的(de)聯用降低了蛋(dan)白(bai)激(ji)酶(mei)Raf1和CDK4的(de)穩(wen)定性(xing)，但有些激(ji) 酶(mei)的(de)穩(wen)定性(xing)并不受影響，如CDK1。

實施例5

辛伐他汀及其與LBH589的聯用抑制三陰性乳腺腫瘤生長。Balb/c裸鼠接種2x10⁶個MDA-MB-231細胞，接種腫瘤細胞兩周后(腫瘤約長至120mm³)開始口服給藥(yao)，每周兩次，測(ce)量腫瘤體積(ji)、體重和最后腫瘤重量，結果顯(xian)示，辛(xin)伐他(ta)(ta)汀與LBH589的聯(lian)用顯(xian)著抑(yi)(yi)制腫瘤的生長(chang)，抑(yi)(yi)制效(xiao)果明顯(xian)比辛(xin)伐他(ta)(ta)汀及LBH589單獨給藥(yao)對腫瘤的生長(chang)抑(yi)(yi)制強許多：

同樣，辛伐(fa)他汀(ting)、LBH589及辛伐(fa)他汀(ting)與LBH589的(de)聯(lian)用(yong)對(dui)(dui)腫瘤重量的(de)影響，也和對(dui)(dui)腫瘤腫瘤體積的(de)影響有相(xiang)似的(de)效果，而對(dui)(dui)小鼠體重沒有顯著(zhu)影響。