3-脫氧葡糖醛酮的天然產物抑制劑的制作方法
【專利摘要】本發明公開了組合物，其具有抑制果糖賴氨酸酶催產生3-脫氧葡糖醛酮(3DG)的抑制劑和/或3DG失活劑作為其組分，并且其可有效用于治療或預防通過抑制這種3DG產生可減輕的病癥或疾病狀態。還公開了這種組合物的使用方法，例如，改善衰老皮膚的外觀、質地和/或彈性。
【專利說明】3-脫氧葡糖醛酮的天然產物抑制劑
[0001]本申請是申請日為2009年5月29日、發明名稱為“3_脫氧葡糖醛酮的天然產物抑制劑”、申請號為2009801281052的發明專利申請的分案申請。

【技術領域】
[0002]本發明涉及3-脫氧葡糖醛酮的天然產物抑制劑。
[0003]相關申請的交叉引用
本申請要求美國臨時專利申請61/057，398 (2008年5月30日申請)的權益，本文結合其全部公開內容作為參考。
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【背景技術】
氨基酸賴氨酸是哺乳動物中必需的氨基酸，并且存在回收賴氨酸并因此其可被重復利用的生物化學途徑。美國專利6，004，958 (Brown等人)公開了由果糖賴氨酸(FL)酶催回收賴氨酸的Amadori途徑，同時伴隨產生3-脫氧葡糖醒酮(3DG)。正如在國際公開WO03/089601所公開的那樣，在皮膚中也發現了 3DG和該酶。由于在葡萄糖和含有賴氨酸的蛋白的ε-NH2基團之間的可逆反應，賴氨酸在身體內被糖化。這種方法通過希夫堿中間體來進行，該中間體重排變成更穩定的FL，一種“Amadori產物”。通過飲食引進的熟的動物產品也可以提供糖化蛋白。糖化蛋白最終降解產生FL。果糖胺-3-激酶(F3K)在FL的3’ -OH上將其磷酸化，形成果糖賴氨酸-3磷酸鹽(FL3P)，然后其自發地分解為賴氨酸、Pi和3DG。由此，F3K可以使身體回收賴氨酸，然而，這種方法產生3DG，其是高度反應性的二醛分子。已經證明，在初期不可逆轉的步驟中，在形成蛋白交叉連接基(其是晚期糖化最終產物(AGEs)的特征)的過程中，3DG化學上可以與蛋白賴氨酸殘基相互作用。
[0005]美國專利6，004，958 (Brown等人)和國際申請公開WO 03/089601描述了一類化合物，其可以抑制FL酶轉化為FL3P，抑制由FL的去醣化而形成賴氨酸，抑制3DG的形成，以及提供了 3DG的失活作用和3DG的解毒作用。也已經對代表該類別的具體化合物進行了描述(Brown等人，國際公開WO 98/33492)。例如，人們發現，尿或血漿3DG可以被葡甲胺、山梨糖醇賴氨酸、甘露糖醇賴氨酸和半乳糖醇賴氨酸還原。在同一文獻中，還發現，糖化蛋白含量高的飲食對腎有害，并且導致出生率降低。在同一文獻中，還公開的是，FL途徑與腎臟致癌作用有關。在同一文獻中，進一步的，先前的研究表明，飲食和3DG可以在與這種途徑有關的致癌作用中起一定作用(參見國際公開WO 00/24405 ；W0 00/62626 ；W0 98/33492)。
[0006]3DG是高度反應性的分子，可以通過至少兩種途徑將其在身體內解毒。在一種途徑中，3DG被醛還原酶還原成3-脫氧果糖(3DF)，然后3DF可有效地通過尿排泄(Takahashi等人1995，B1chemistry 34:1433-8)。另一個解毒反應是通過氧醒脫氫酶將3DG氧化為 3_ 脫氧 _2_ 酮葡糖酸(DGA) (Fujii 等人 1995，B1chem.B1phys.Res.Commun.210:852-7)。
[0007]迄今為止的研究結果表明，這些酶中的一種(醛還原酶)對糖尿病產生不利影響。當從患有糖尿病的大鼠肝臟中分離這種酶時，這種酶在賴氨酸的67、84和140位置上被糖化，并且與正常未改性的酶相比較，具有催化作用降低的效果(Takahashi等人1995，B1chemistry 34:1433-8)。由于糖尿病患者比血糖正常個體具有更高比例的糖化蛋白，所以他們具有更高水平的3DG，其立刻趨向于使醛還原酶失活，并且降低該酶通過還原成3DF來解毒這種反應性分子的能力。有支持性的證據表明，在糖尿病人中，3DG至3DF的這種解毒作用受到削弱，這是由于糖尿病人的尿和血漿3DG解毒為3DF的比例顯著地不同于非糖尿病個體(Lal等人1997，Arch.B1chem.B1phys.342:254-60)。醒還原酶的超表達保護PC12細胞免于丙酮醛或3DG的細胞毒素效果(Suzuki等人1998，J.B1chem.123:353-7)。
[0008]已經研究了醛還原酶的工作機理。這些研究表明，這種重要的解毒酶被醛糖還原酶抑制劑(ARIs)所抑制(Barski 等人 1995，B1chemistry 34:11264-75)。ARIs 目前處于臨床研究中，研究其降低某些糖尿病并發癥的潛力。已經證明這些化合物(作為一類)對短期糖尿病并發癥具有一些效果，但它們對長期糖尿病并發癥缺乏臨床效果，并且它們使飼喂高蛋白食物的大鼠的腎臟功能變差。這種發現與新發現的賴氨酸回收的代謝途徑一致。
[0009]氨基胍(AG)，其是通過形成快速排泄的共價衍生物而將3DG進行藥理學解毒的藥劑，(Hirsch 等人 1992，Carbohydr.Res.232:125-30)，可以在動物模型中降低 AGEs 相關的視網膜、神經、動脈和腎病變(Brownlee, 1994, Diabetes 43:836-41; Brownlee等人1986, Science 232:1629-32;等人 1991，Metabolism 40:1016-9; Soulis-Liparota 等人 1991，Diabetes 40:1328-34，和 Edelstein 等人 1992，Diabetologia 35:96-7)。
[0010]過去的研究集中于3DG在糖尿病中的作用。與非糖尿病個體相比較，糖尿病人的血楽■中(Niwa 等人 1993，B1chem.B1phys.Res.Commun.196:837-43; Wells-Knecht等人 1994， Diabetes 43:1152-6)和尿中(Wells-Knecht 等人 1994， Diabetes43:1152-6)的3DG和3DF(3DG的解毒產物)的水平提高。此外，與非糖尿病患者相比，發現患有腎病的糖尿病患者的血衆3DG水平提高(Niwa等人1993，B1chem.B1phys.Res.Commun.196:837-43)。
[0011]最近的研究(比較患有胰島素依賴性糖尿病(IDDM)和非胰島素依賴性糖尿病(NIDDM)的患者)證明，兩種類型病人的血液和尿中的3DG和3DF水平都提高。由此，在糖尿病人中，還原解毒3DG(轉化為3DF)的正常途徑受到削弱(Lal等人1995，Arch.B1chem.B1phys.318:191-9)。甚至表明，在生理條件下體外培養葡萄糖和蛋白可以產生3DG。
[0012]繼而，已經表明3DG使蛋白糖化和交聯，形成可檢測出的AGE產物(Baynes等人1984，Methods Enzymol.106:88-98; Dyer等人 1991，J.B1l.Chem.266:11654-60)。
[0013]此外，與對照大鼠的腎相比，在糖尿病大鼠的腎中已經發現了 3DG改性的蛋白的水平提高(Niwa等人1997，J.Clin.1nvest.99:1272-80)。3DG具有使酶(例如谷胱甘肽還原酶，中心抗氧化酶)失活的能力。還已經表明，糖尿病個體中的血色素-AGE水平提高(Makita等人1992，Science 258:651-3)，并且在實驗模型中已經顯示其它AGE蛋白隨時間而聚集，在糖尿病大鼠的視網膜、晶狀體和腎皮質中，經過5-20周的周期，提高5-50倍(Brownlee, 1994，Diabetes 43:836-41)。另外，在糖尿病的胚胎病中，3DG是導致胚胎畸形的致畸因子(Eriksson等人1998，Diabetes 47:1960-6)。這看起來是由3DG的積聚所引起，其導致過氧化物介導的胚胎病。
[0014]無酶催化的糖化(其中還原糖與自由氨基共價連接、并且最終形成AGEs)在自然老化期間發生，并且在糖尿病中得到促進(Bierhaus等人1998，Card1vasc.Res.37:586-600)。蛋白的交聯和隨后AGEs的形成是不可逆過程，其改變蛋白、脂質組分和核苷酸的結構和功能性質(Bierhaus等人1998，Card1vasc.Res.37:586-600)。人們相信這些過程有助于一些糖尿病并發癥的發展，包括腎病、視網膜病和神經病(Rahbar等人1999，B1chem.B1phys.Res.Commun.262:651-6)。
[0015]在糖尿病大鼠中，抑制AGE的形成降低了腎病的程度(Ninomiya等人2001，Diabetes 50:A178-179)。因此，抑制AGE形成和/或氧化應激的物質似乎限制了糖尿病并發癥的發展，并且可以在糖尿病的治療中為治療干預提供新的方法(Thornalley，1996，Endocrinol.Metab.3:149-166; Bierhaus 等人 1998，Card1vasc.Res.37:586-600)。
[0016]糖尿病個體中的血色素-AGE水平提高(Makita等人1992，Science 258:651-3)，并且在實驗模型中已經顯示其它AGE蛋白隨時間而聚集，在糖尿病大鼠的視網膜、晶狀體和腎皮質中，經過 5-20 周的周期，提高 5-50 倍(Brownlee, 1994，Diabetes 43:836-41)。
[0017]3DG在人臍靜脈內皮細胞中誘導反應性的氧物種，導致氧化性DNA損傷(Shimo i等人2001，Mutat.Res.480-481:371-8)。另外，3DG誘導的反應性氧物種有助于糖尿病并發癥的發展(araki, 1997, Nippon Ronen Igakkai Zasshi 34:716-20)。具體地說，3DG誘導肝素-結合表皮生長因子，其是在動脈粥樣硬化斑塊中大量存在的平滑肌分裂素。這說明3DG的提高可以在糖尿病中引發動脈粥樣化形成(Taniguchi等人1996，Diabetes 45Suppl.3:S81-3; Che 等人 1997，J.B1l.Chem.272:18453-9)。
[0018]最后，已經表明，糖尿病中的3DG血清水平和糖尿病并發癥發展的危險之間具有直接聯系(Kusunoki等人2003，Diabetes Care 26:1889-94)。結果表明，在糖尿病患者中，空腹血清3DG水平提高，并且具有相對更高的3DG水平的患者傾向于患有更嚴重的并發癥，這表明3DG與糖尿病性微血管病變可能有關聯。
[0019]3DG還產生與糖尿病無關的有害影響。例如，據證實，3DG在巨噬細胞衍生的細胞系中誘導細胞程序死亡(Okado等人1996，B1chem.B1phys.Res.Commun.225:219-24)，并且對培養的皮層神經元(Kikuchi 等人 1999，J.Neurosc1.Res.57:280-9)和 PC12 細胞(Suzuki 等人 1998，J.B1chem.123:353-7)具有毒性。最近，對肌萎縮側索硬化(運動神經元病的一種形式)的病因的研究已經說明，3DG的積聚可以由于形成 ROS 而導致神經毒性(Shinpo 等人 2000，Brain Res.861:151-9)。
[0020]先前的研究表明，3DG使蛋白糖化和交聯，產生被稱為AGEs的化合物的復雜混合物(Baynes 等人 1984，Methods Enzymol.106: 88-98; Dyer 等人 1991，J.B1l.Chem.266:11654-60λΑ6Ε8與大部分炎癥性疾病例如動脈粥樣硬化和智力衰退以及糖尿病有關。它們最通常在長時間生存的結構蛋白例如膠原上形成。
[0021]AGEs具有特定的細胞受體，通常稱為RAGE。細胞RAGE在內皮、單核吞噬細胞和胸腺依賴性細胞上的活化引發自由基的形成和炎癥基因介質的表達(Hofmann等人1999，Cell 97:889-901)。這種提高的氧化應激導致轉錄因子NF_kB的活化，并且促進與動脈粥樣硬化有關的 NF-kB 基因的表達(Bierhaus 等人 1998，Card1vasc.Res.37:586-600)。
[0022]在與癌的關系中，RAGE活化的阻斷可以抑制與腫瘤增殖和腫瘤細胞的跨內皮遷移有關系的一些機理。這還會降低自發性和植入性腫瘤兩者的生長和轉移病變(Taguchi等人 2000， Nature 405:354-60)。
[0023]AGEs由正常代謝作用產生，并且是非還原糖與蛋白、脂質或核酸的氨基的反應產物。AGEs可以通過各種成分組合與烹調而被引進到食品中。AGEs含量高的食品包括在高溫下(例如焙、烤、油炸和烘)烹調的那些食品。(Goldberg等人2004，J Am Diet Assoc104:1287-1291)。一部分攝食的AGEs被吸收，并且出現在循環中(Koschinsky等人1997，Proc Natl Acad Sci USA 94:6474-6497)。少量的AGE改性的肽可以通過腸內的上皮細胞(Huebschmann等人2006，Diabetes Care 29:1420-1432)。富含糖化蛋白的飲食導致循環AGE 產物的提高(Uribarri 等人 2005.Ann NY Acad Sci 1043:461-466)。
[0024]循環AGEs水平還依賴于環境因素和生理狀態。在患有糖尿病的人中，血漿AGE水平由于葡萄糖水平提高而提高，或在患有腎衰竭的患者中，血漿AGE水平由于腎的廓清率降低而提高(Odani 等人 1999，J.Chromatogr B 731:131-140; Odani 等人 B1chemB1phys res Commun 256:89-93)。吸煙者具有更高循環水平的 AGEs (Cerami 等人 1997.Proc Natl Acad Sci USA 94:13915-20)。
[0025]飲食AGEs的攝入與循環AGEs有關，并且繼而這些又與炎癥和氧化應激的標記物有關(Koschinsky 等人 1997，Proc Natl Acad Sci USA 94:6474-6497; Vlassara 等人2002，Proc Natl Acad Sci USA 99:15596-15601; Uribarri 等人 2007.J.Gerontol AB1l Sci Med Sci 62:427)。保持低AGE飲食的小鼠顯示了 AGE積聚降低、氧化應激降低和壽命提高(Cai等人2000，Am J Pathol 170:1893)。攝食高AGE膳食的糖尿病患者顯示血清AGE的水平提高、氧化應激提高和血管功能的削弱(Negrean等人2007.Am J ClinNutr 85:1236-43)。與低AGE飲食的動物相比，攝食高AGE飲食的糖尿病小鼠顯示了削弱的創傷愈合能力(P印pa等人2003..Diabetes 52:2805-13)。通過口腔吸附劑AST-120來吸收一種AGE產物，羧甲基賴氨酸，在患有慢性腎衰竭的非糖尿病患者中降低了 AGE水平(Ueda 等人 2006.Mol Med 12:180-184)。
[0026]由于循環3DG的不利影響，合乎需要的是，通過使從食品或營養增補劑中攝入的3DG最小化，降低3DG接觸量。由于3DG對皮膚細胞具有不利影響，因此，還合乎需要的是，通過降低局部制劑或化妝品中的3DG濃度來減少3DG對皮膚的接觸量。3DG可以被醛還原酶酶催還原成 3DF (Kato 等人 1990，B1chim B1phys Acta 1035:71-76; Liang 等人 1991，Eur J B1chem 197:373-379; Knecht 等人 1992，Arch B1chem B1phys294:130-137;Niwa 1999，J Chromatog B B1med Sci Appl 731:23-36)。然后3DF可以有效地在尿中排泄(Takahashi等人1995，B1chemistry 34:1433-8)。可以用氨基胍、半胱氨酸或卩比卩多醒5’-憐酸鹽使 3DG 化學失活(Nakamura 和 Niwa, 2005, J Am Soc Nephrol, 16:144-150;Igaki 等人 1990，Clin Chem 36:631-634)。
[0027]已經注意到，具有F3K抑制活性的某些藥劑還可以有效治療或預防被稱為“干眼癥”(干性角膜炎)的病癥。參見美國臨時申請61/043，162(2008年4月8日申請)。干眼癥是角膜和結膜表面的慢性干燥，并且由產生的淚水組分減少或濕潤眼睛的淚膜的個別油、水和粘液組分的比例發生改變所引起。該病癥顯現各種癥狀，包括眼睛發紅、眼瘡、眼睛灼痛和眼睛發癢、畏光、視力模糊、異物感和接觸眼鏡不耐受。人們相信，上述藥劑可以促進角膜和結膜表面的濕潤，這是由于杯狀細胞(其是分泌粘蛋白的主要渠道)增加而增加了粘液產生。由于杯狀細胞存在于其它組織(消化道和呼吸上皮)中，所以，增加粘蛋白產生的藥劑可以在治療病癥例如口干燥(口干癥)和便秘方面具有附加的用途。
[0028]


【發明內容】

如上所述，如先前報道的，F3K在賴氨酸回收途徑中的作用可導致高度反應性的3DG的產生，其在AGEs的形成過程中具有主要的作用。
[0029]按照本發明，現在發現，很多種天然產物包含一或多種可抑制FL酶轉化成為FL3P和/或使3DG失活的組分。這種發現可以用下面的方式來付諸實際使用:
-治療或預防需要這種治療或預防的患者的病癥或疾病狀態的方法，這種病癥或疾病狀態是通過抑制FL酶轉化成為FL3P來減輕的，該方法是給予患者至少一種天然產物，該天然產物具有FL至FL3P酶轉化的抑制劑作為其組分，以有效抑制這種轉化的數量給予；
-預防、改善和/或逆轉內在和/或外在皮膚衰老的方法，該方法是給衰老皮膚局部施加包含至少一種天然產物的組合物，該天然產物具有FL至FL3P酶轉化的抑制劑作為其組分，以有效抑制這種轉化的數量施加；
-改善衰老皮膚的外觀、質地或彈性的方法，該方法是給衰老皮膚局部施加包含至少一種天然產物的組合物，該天然產物具有FL至FL3P酶轉化的抑制劑作為其組分，以有效抑制這種轉化的數量施加；或
-治療由于氧化應激和/或產生AGEs所造成的皮膚損傷的方法，該方法是給損傷皮膚局部施加包含天然產物的組合物，該天然產物具有FL至FL3P酶轉化的抑制劑作為其組分，以有效抑制這種轉化的數量施加。
[0030]按照本發明，還已經發現，許多天然產物含有不同數量的3DG，在某些實例中，其可以對使用它們的患者(人和動物)造成健康危險。當用作食品、化妝品、藥物或營養增補劑成分時，可以通過降低3DG含量來提高這種含有3DG物質的純度(健康危險的可能性相應地降低)，例如，與3DG失活試劑混合。在下面的詳細說明中，鑒定為此目的的合適失活試劑。
[0031]

【具體實施方式】
含有F3K酶的抑制劑和/或3DG失活劑的天然產物可以有利地用于治療或預防與3DG(以F3K活性的副產物形式產生)有關的病癥或疾病狀態。可以用本發明方法治療或預防的疾病狀態包括炎癥性病癥，糖尿病的并發癥，衰老疾病，高血壓癥，中風，神經變性病癥，循環疾病，動脈粥樣硬化，骨關節炎和白內障。本文所描述的方法還可以用于治療或預防皮膚病癥，尤其是與內在或外在的衰老有關的那些皮膚病癥。皮膚的內在衰老是由自然老化過程引起的逐漸退化，這種過程引起蛋白的化學結構發生變化，包括膠原和彈性蛋白，部分地是由于形成AGEs所造成的。許多外因，常常與自然老化過程結合起作用，致使皮膚的過早衰老。絕大部分外在的衰老是由日光照射或“光老化”引起的；然而，其它因素，例如，重復的面部表情和吸煙可以促進這種過早衰老。
[0032]各種不同的天然產物可以用于治療或預防病癥或疾病狀態，這種病癥或疾病狀態可以通過抑制果糖賴氨酸至果糖賴氨酸-3-磷酸鹽的酶轉化和/或通過3DG的體內失活而得到減輕。本文使用的術語“天然產物”是指自然界中發現的化學物質，例如，從陸生植物、海洋動物或植物及其它生物機體的組織中獲得的物質，以及這種物質的衍生物。可以用于本發明實踐的天然產物(和其提取物)的代表性的例子包括:來自植物和動物源的材料，多肽，寡肽，維生素，前維生素等等。天然產物提取物可從各種渠道商購，并且可以使用一般性地描述在美國專利6，485，756 (Aust和Wilmott)中的提取方法來制備。
[0033]適合于實踐本發明的天然產物可以使用下文所描述的F3K試驗來鑒別。對多種天然產物進行該試驗的結果列在下面的表I和IA中。通過直接測定果糖賴氨酸-3-磷酸鹽產生來測定F3K抑制活性的替代性試驗描述在上述美國專利6，004, 958中。
[0034]如果需要的話，可以與本文所描述的天然產物結合給予輔助活性劑。合適的輔助活性劑包括，例如，麻醉劑，抗生素，抗過敏劑，抗霉菌劑，殺菌劑，抗刺激劑，消炎劑，抗微生物劑，鎮痛劑和抗高血壓劑，例如ACE抑制劑。
[0035]本文所描述的天然產物以及任何輔助活性劑可以使用有效抑制酶催3DG產生的任何數量和任何給藥途徑來給予。所給予的確切數量可以根據患者的種類、年齡和一般條件、所治療病癥或疾病狀態的性質、使用的具體天然產物和其給藥模式來變化。本文使用的術語“患者”是指動物，包括哺乳動物，優選人和家畜。
[0036]通過供給患者(人或動物)富含糖化賴氨酸殘基或FL的食品，并且測定供給食品前后的患者尿中的3DG和3DF數量，可以評價給予患者的天然產物數量的效果。與在給予天然產物之前相同患者的分泌水平相比較，在系統中具有有效抑制數量的F3K抑制劑的患者顯示出3DG和/或3DF的分泌減少和FL的尿分泌增加。用于本發明實踐的天然產物通常以粉末形式獲得。因此，可以容易地將它們配制為局部或口服形式給藥，優選局部給藥形式。
[0037]包括任何各種皮膚可接受的賦形劑的局部制劑可以以下列形式制備:乳劑，膏劑，香脂，光澤劑，洗劑，油膏劑，屏蔽劑，乳漿劑，調色劑，軟膏劑，油劑，摩絲，凝膠劑，油脂劑，溶液劑，液體噴霧劑，基于蠟的條狀物或小毛巾。這種制劑可以有利地包括通常在化妝品領域使用的任何成分。這些成分包括:防腐劑，液相增稠劑，脂肪相增稠劑，香料，親水性的和親脂性的活性劑，以及色素，填料，油，一或多種蠟或膠，或任何上述成分的混合物。
[0038]另外，上述制劑可以包括下列中的一或多種:皮膚滲透增強劑，表皮輸送系統，柔軟劑，皮膚除酸劑，光學擴散劑，防曬劑，表皮脫落促進劑和抗氧化劑。除了別的以外，表皮輸送系統可以是脂質體，納米物質(nanosomes),基于磷脂的非脂質體組合物(例如，選擇的脂質雙層卷(cochleates))。關于這些及其它合適化妝品成分的詳細內容可以在下列中得至丨J:Internat1nal Cosmetic Ingredient Dict1nary and Handbook(ICID), 10th ed.,Cosmetic, Toiletry and Fragrance Associat1n, at 2177-2299(2004)。
[0039]這些天然產物還可以結合進透皮貼片或類似的遞送系統中。透皮貼片可以是常規類型的結構，例如，用于遞送持續劑量的雌激素、硝化甘油、芬大尼等等的類型。
[0040]在本發明的其它實施方案中，用作食品、化妝品、藥物或規定食物的增補劑成分的含有3DG的天然產物的益處，可以通過降低其3DG含量的純化或精制過程而得到提高。可以使用下面實施例2所描述的測定技術來測定天然產物的3DG濃度。
[0041]本發明所涉及的純化或精制過程包括:使天然產物與至少一種3DG失活劑混合。合適的3DG失活劑的代表性例子列于下面表3中。精氨酸是實踐本發明的該實施方案所使用的優選的3DG失活劑。
[0042]考慮到3DG對健康的潛在有害效果，將用作食品、化妝品、藥物或規定食物的增補劑成分的天然產物的3DG含量的任何可測量的降低都會提供益處。
[0043]可以使用同樣的方法以降低食品、食品添加劑或飲料中的3DG含量，飲料例如碳酸飲料，其可以是發酵的(例如啤酒，麥芽酒等等)或未發酵的碳酸飲料(例如可樂)，以及非碳酸飲料，其可以是發酵的(例如酒)或未發酵的(例如果汁，果汁噴趣飲料，蔬菜汁或茶)。
[0044]提供下列方法和試驗數據，以便進一步詳細地描述本發明的各種實施方案。提供這些方法和數據僅僅是為了說明的目的，決不應該將其理解為對本發明的限制。
[0045]F3K 試駘
果糖胺-3-激酶(F3K)將果糖賴氨酸磷酸化，形成果糖賴氨酸-3-P，其自發地分解得到賴氨酸、Pi和3DG。該試驗是在96孔平皿中進行的，每個孔含有100 μ I的50 mM Hepes,pH8.0, ImM Mg-ATP 和 0.20 mM 果糖賴氨酸(Dynamis Therapeutics)。加入 5 μ I 試驗抑制劑樣品，用120 ηΜ人重組F3K酶(Dynamis Therapeutics)來起始反應。在37°C將該平皿培養24小時，使F3K產生FL3P，而后分解釋放Pi和3DG。按照實施例2測定3DG。
[0046]天然產物和化學制品
用各種商購的天然產物制備含水提取物。下面給出了所得到的提取物的濃度，基于重量/重量，除非另有陳述。LFK提取物和粉末得自于溶解的—FK-23。用榨汁機(Juiceman自動榨汁機)制備新鮮水果和蔬菜提取物。類似地制備草莓葉提取物(50% w/w,在水中)。使樣品沉積或離心(12，000 X g, 10 min),而后取出上清液的等分樣品,用于分析。
[0047]實施例1
F3K抑制作用
使用上述試驗，在各種天然產物的存在下測定F3K活性。抑制百分比示于表I和IA中。栗子皮、荔枝核、葡萄種子、醋栗、花生皮、貓爪藤和玫瑰的提取物抑制超過90%的F3K活性。
[0048]表I
在天然產物提取物的存在下的F3K活性

【權利要求】
1.醋栗提取物作為唯一天然產物用于制備用于治療或預防需要所述治療或預防的患者的病癥或疾病狀態的藥物中的用途，所述病癥或疾病狀態是通過抑制果糖賴氨酸酶轉化成為果糖賴氨酸-3-磷酸來減輕的，其中所述天然產物具有果糖賴氨酸至果糖賴氨酸-3-磷酸的酶轉化的抑制劑作為其組分。
2.權利要求1的用途，其中氧化應激有助于所述病癥或疾病狀態的起始和/或發展。
3.權利要求2的用途，其中晚期糖化最終產物(AGEs)的產生有助于所述病癥或疾病狀態的起始和/或發展。
4.權利要求1的用途,其中所述疾病狀態選自下面一組:炎癥性病癥,糖尿病并發癥，衰老疾病，高血壓癥，中風，神經變性病癥，循環疾病，動脈粥樣硬化，骨關節炎和白內障。
5.權利要求1的用途，其中配制所述藥物以供人使用。
6.權利要求1的用途，其中配制所述藥物以供家畜使用。
7.權利要求1的用途，其中所述病癥是皮膚病癥。
8.權利要求7的用途，其中所述皮膚病癥與內在或外在的衰老有關。
9.權利要求7或8的用途，其中所述皮膚病癥的癥狀包括下列中的至少一種:皮膚皺紋，皮膚網紋，皮膚無彈性，皮膚的粗紋理和不均勻的色素淀積。
10.醋栗提取物作為唯一天然產物用于制備用于預防、改善和/或逆轉內在和/或外在皮膚衰老的藥物中的用途，其中所述天然產物具有果糖賴氨酸至果糖賴氨酸-3-磷酸的酶轉化的抑制劑作為其組分。
11.醋栗提取物作為唯一天然產物用于制備用于改善衰老皮膚的外觀、質地或彈性的藥物中的用途，其中所述天然產物具有果糖賴氨酸至果糖賴氨酸-3-磷酸的酶轉化的抑制劑作為其組分。
12.醋栗提取物作為唯一天然產物用于制備用于治療由于氧化應激和/或產生AGEs所造成的皮膚損傷的藥物中的用途，其中所述天然產物具有果糖-賴氨酸至果糖-賴氨酸-3-磷酸的酶轉化的抑制劑作為其組分。
13.提高制劑的純度的方法，該制劑含有作為食品、化妝品、藥物或營養增補劑成份的氨基葡糖和其可藥用鹽和衍生物，所述方法包括:通過與3DG失活劑混合降低其3-脫氧葡糖醛酮(3DG)含量，所述3DG失活劑為醋栗提取物。
14.精制含有3DG的天然產物的方法，該天然產物作為食品、化妝品、藥物或營養增補劑成分，所述方法包括:通過與3DG失活劑混合降低所述天然產物的3DG含量，所述3DG失活劑為醋栗提取物。
15.降低含有3DG的飲料、食品或食品添加劑的3-脫氧葡糖醛酮(3DG)含量的方法，所述方法包括:使3DG失活劑與所述飲料、食品或食品添加劑混合，所述3DG失活劑為醋栗提取物。
16.權利要求15的方法，其中所述3DG失活劑與碳酸飲料混合。
17.權利要求16的方法，其中所述碳酸飲料是發酵飲料。
18.權利要求15的方法，其中所述3DG失活劑與非碳酸飲料混合。
19.權利要求18的方法，其中所述飲料是發酵飲料。
20.權利要求18的方法，其中所述飲料是果汁、果汁賓治、蔬菜汁或茶。
21.可提高杯狀細胞增殖的天然產物用于制備用于治療或預防干燥粘膜病癥的藥物中的用途，其中所述天然產物為醋栗提取物。
22.權利要求21的用途，其中所述病癥選自下面一組:干眼癥、口干燥和便秘。
23.一種局部組合物，其包含醋栗提取物作為唯一天然產物和至少一種皮膚可接受的賦形劑，其中該天然產物能夠起到抑制由果糖賴氨酸酶催產生3-脫氧葡糖醛酮的作用。
24.權利要求23的組合物，進一步包含下列中的至少一種:皮膚滲透增強劑，柔軟劑，皮膚除酸劑，光學擴散劑，防曬劑，表皮脫落促進劑和抗氧化劑。
25.權利要求23的組合物，其中所述賦形劑是包含至少一種脂質體、納米物質(nanosomes)和基于磷脂的非脂質體制劑的遞送賦形劑。
26.制品，其包含結合進透皮貼片中的權利要求23的組合物。
27.局部組合物，其包含醋栗提取物作為唯一天然產物和至少一種皮膚可接受的賦形齊U，其中該天然產物為3-脫氧葡糖醛酮的失活劑。
28.權利要求27的組合物，其中所述賦形劑選自下面一組:皮膚滲透增強劑，柔軟劑，皮膚除酸劑，光學擴散劑，防曬劑，表皮脫落促進劑和抗氧化劑。
29.權利要求27的組合物，其包括遞送賦形劑，其中遞送賦形劑包含脂質體、納米物質和基于磷脂的非脂質體制劑。
30.制品，其包含結合進透皮貼片中的權利要求27的組合物。
【文檔編號】A61P19/02GK104173392SQ201410250459
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2009年5月29日 優先權日:2008年5月30日
【發明者】A.M.托比亞, A.馬西, B.蘇, T.尼瓦 申請人:戴納米斯制藥公司