一種基于二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的免疫傳感器的制備方法及應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及一種基于二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的免疫傳感器的制備方法及應用，屬于新型功能材料、生物傳感檢測【技術領域】。基于二茂鐵功能化的氧化亞銅立方納米框架具有良好的催化能力，顯著提高了免疫傳感器的靈敏度，對甲胎蛋白的早期診斷具有重要的意義。
【專利說明】一種基于二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的免疫傳感器的制備方法及應用

【技術領域】
[0001]本發明一種基于二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的免疫傳感器的制備方法及應用。具體是采用二茂鐵功能化的氧化亞銅立方納米框架，制備一種檢測甲胎蛋白的電化學免疫傳感器，屬于新型功能材料與生物傳感檢測【技術領域】。

【背景技術】
[0002]甲胎蛋白是一種糖蛋白，正常情況下，這種蛋白主要來自胚胎的肝細胞，但當肝細胞發生癌變時，會產生大量甲胎蛋白，而且隨著病情惡化，甲胎蛋白在血清中的含量會急劇增加，甲胎蛋白就成了診斷原發性肝癌的一個特異性臨床指標，因此對甲胎蛋白的早期診斷很重要。目前已有的甲胎蛋白的臨床檢測方法很多，如放射免疫分析、酶聯免疫分析、化學發光免疫分析等。電化學免疫傳感器是將免疫學方法與電化學方法相結合的一種生物傳感器，利用抗原與抗體之間的特性性結合，使得它具有高靈敏性、高選擇性、分析快速和操作簡便等優點。因此本發明制備了一種基于二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的免疫傳感器，實現了對甲胎蛋白的檢測。
[0003]本發明利用氧化亞銅立方納米框架具有良好的電化學催化性能，將其氨基化后，通過氨基和羧基之間的相互作用，將二茂鐵甲酸連接到氧化亞銅立方納米框架的內部和外部，增加了二茂鐵的負載量，得到的二茂鐵功能化的氧化亞銅立方納米框架實現了對雙氧水的雙重信號放大。在檢測甲胎蛋白的過程中產生了逐步放大的電化學信號，有效地增強了電化學免疫傳感器的靈敏度。該方法具有成本低、靈敏度高、特異性好、檢測快速等優點，而且制備過程較為簡單，為目前有效檢測甲胎蛋白提供了新途徑。


【發明內容】

[0004]本發明的目的之一是基于二茂鐵功能化的氧化亞銅立方納米框架，構建了一種無酶、快速且超靈敏的夾心型電化學免疫傳感器。
[0005]本發明的目的之二是將該夾心型電化學免疫傳感器應用于甲胎蛋白的檢測。
[0006]本發明的技術方案如下:
1.一種基于二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的免疫傳感器的制備方法
(1)依次用1.0,0.3,0.05 Mm的氧化鋁粉末對玻碳電極進行拋光，分別在超純水和乙醇中超聲清洗，氮氣吹干，在電極表面滴加6 yLU~3 mg/mL的三氨丙基三乙氧基硅烷功能化的石墨烯水溶液，干燥；
(2)繼續將6PL濃度為8 ~ 12 Pg/mL的甲胎蛋白捕獲抗體溶液滴加到修飾電極表面，于4°C冰箱中孵化I h，清洗干凈；
(3)用3yL濃度為5 ~ 15 mg/mL的牛血清白蛋白溶液封閉非特異性活性位點，于4°C冰箱中孵化I h，清洗干凈；
(4)將6μ L濃度為0.000005 ~ 10 ng/mL的一系列不同濃度的甲胎蛋白用于和捕獲抗體的特異性識別，室溫下孵化I h，清洗干凈；
(5)將6 UL濃度為I ~ 3 mg/mL的二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體溶液滴在電極上與抗原特異性識別，室溫下孵化I h，清洗干凈，于4°C冰箱中儲存備用O
[0007]二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體溶液的制備
(1)氧化亞銅立方納米框架的制備
首先，將8.32 ~ 16.64 mL超純水、0.50 ~ 1.00 mL濃度為0.1 mmol/L的氯化銅溶液和0.087 ~ 0.174 g十二烷基硫酸鈉在持續攪拌下混合，將裝有該混合液的玻璃瓶放在溫度為32~34°C的水浴中，當十二烷基硫酸鈉粉末完全溶解后，加入0.18 ~ 0.36 mL濃度為1.0 mmol/L的氫氧化鈉溶液，該溶液立刻變為明亮的藍色，表明生成了氫氧化銅沉淀，然后，在I s內將0.92 -1.84 mL濃度為0.1 mmol/L的鹽酸羥胺溶液立刻注入玻璃瓶，攪拌20 S，在幾秒鐘之內溶液立即從亮藍色變成了綠色，最后，加入0.08 ~ 0.16 mL濃度為1.0mmol/L的鹽酸溶液，繼續攪拌20 S，在幾秒鐘之內溶液的顏色由綠色變為黃色，溶液的全部體積為10 ~ 20 mL，將該溶液在水浴中老化I h用于納米晶體的生長，將3 ~ 6 mL體積分數為95%的乙醇加入到溶液中，靜置I h后超聲I min，清晰的淡黃色變為絮狀，將該樣品在5000 rpm下離心3 min，去除頂層溶液，沉淀用10 ~ 20 mL體積比為1:1的水和乙醇清洗，最后用5 ~ 10 mL的乙醇清洗，離心后干燥；
(2)二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體溶液的制備
將I ~ 2 mL濃度為2 mg/mL的氧化亞銅立方納米框架溶液、I ~ 2 mL的濃度為2 mg/mL 二茂鐵溶液、I ~ 2 mLl-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(10 mmol/L)/N-羥基琥珀酰亞胺(2 mmol/L)和I ~ 2 mL濃度為10 μ g/mL甲胎蛋白檢測抗體混合，震蕩12 h，離心洗滌，將得到的二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體孵化物分散于I mL、pH為7.4的磷酸鹽緩沖溶液中，將制得的二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體溶液，于4°C冰箱中儲存備用。
[0008]甲胎蛋白的檢測方法
(1)使用電化學工作站以三電極體系進行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，所制備的免疫傳感器為工作電極，在10 mL的pH值為6.8的磷酸鹽緩沖溶液中進行測試；
(2)選擇計時電流法對甲胎蛋白進行檢測，將輸入電壓設置為-0.4 V，取樣間隔設置為
0.1 S，運行時間設置為400 S ；
(3)當背景電流趨于穩定后，每隔50s向磷酸鹽緩沖溶液中注入10 UL濃度為10mol/L的雙氧水溶液，然后記錄電流隨時間的變化，繪制工作曲線；
(4 )將待測樣品溶液代替甲胎蛋白標準溶液進行檢測。
[0009]本發明的有益成果
(I)本發明首次將氧化亞銅立方納米框架引入電化學免疫傳感器作為標記物，利用其對雙氧水具有良好的催化效果，在構建電化學免疫傳感器的過程中，實現了對雙氧水的多重信號放大作用。
[0010](2)本發明通過氨基和羧基之間的相互作用，將二茂鐵甲酸分子同時固定在氧化亞銅立方納米框架的外表面和內表面，增加了二茂鐵的負載量，負載量增大到100%，使檢測信號增大一倍，顯著提高了檢測的靈敏度。
[0011](3)本發明將制備的夾心電化學免疫傳感器用于甲胎蛋白的檢測，檢測限低，線性范圍寬，可以實現簡單、快速、靈敏和特異性檢測。本發明用于甲胎蛋白的檢測，檢測限可達到 2.5 fg/mL。

【具體實施方式】
[0012]實施例1一種基于二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的免疫傳感器的制備方法
(1)依次用1.0,0.3,0.05 Mm的氧化鋁粉末對玻碳電極進行拋光，分別在超純水和乙醇中超聲清洗，氮氣吹干，在電極表面滴加6 μ L、1 mg/mL的三氨丙基三乙氧基硅烷功能化的石墨烯水溶液，干燥；
(2)繼續將6PL濃度為8 Pg/mL的甲胎蛋白捕獲抗體溶液滴加到修飾電極表面，于4°C冰箱中孵化I h，清洗干凈；
(3)用3μ L濃度為5 mg/mL的牛血清白蛋白溶液封閉非特異性活性位點，于4°C冰箱中孵化I h，清洗干凈；
(4)將6μ L濃度為0.000005 ~ 10 ng/mL的一系列不同濃度的甲胎蛋白用于和捕獲抗體的特異性識別，室溫下孵化I h，清洗干凈；
(5)將6UL濃度為I mg/mL的二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體溶液滴在電極上與抗原特異性識別，室溫下孵化I h，清洗干凈，于4°C冰箱中儲存備用。
[0013]實施例2—種基于二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的免疫傳感器的制備方法
(1)依次用1.0,0.3,0.05 Mm的氧化鋁粉末對玻碳電極進行拋光，分別在超純水和乙醇中超聲清洗，氮氣吹干，在電極表面滴加6 yL、2 mg/mL的三氨丙基三乙氧基硅烷功能化的石墨烯水溶液，干燥；
(2)繼續將6μ?濃度為10 Pg/mL的甲胎蛋白捕獲抗體溶液滴加到修飾電極表面，于4 °C冰箱中孵化I h，清洗干凈；
(3)用3μ L濃度為10 mg/mL的牛血清白蛋白溶液封閉非特異性活性位點，于4°C冰箱中孵化I h，清洗干凈；
(4)將6μ L濃度為0.000005 ~ 10 ng/mL的一系列不同濃度的甲胎蛋白用于和捕獲抗體的特異性識別，室溫下孵化I h，清洗干凈；
(5)將6UL濃度為2 mg/mL的二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體溶液滴在電極上與抗原特異性識別，室溫下孵化I h，清洗干凈，于4°C冰箱中儲存備用。
[0014]實施例3—種基于二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的免疫傳感器的制備方法 ((I)依次用1.0、0.3、0.05 Mm的氧化鋁粉末對玻碳電極進行拋光，分別在超純水和乙醇中超聲清洗，氮氣吹干，在電極表面滴加6 yL、3 mg/mL的三氨丙基三乙氧基硅烷功能化的石墨烯水溶液，干燥；
(2)繼續將6μ?濃度為12 Pg/mL的甲胎蛋白捕獲抗體溶液滴加到修飾電極表面，于4 °C冰箱中孵化I h，清洗干凈；
(3)用3μ L濃度為15 mg/mL的牛血清白蛋白溶液封閉非特異性活性位點，于4°C冰箱中孵化I h，清洗干凈；
(4)將6μ L濃度為0.000005 ~ 10 ng/mL的一系列不同濃度的甲胎蛋白用于和捕獲抗體的特異性識別，室溫下孵化I h，清洗干凈；
(5)將6UL濃度為3 mg/mL的二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體溶液滴在電極上與抗原特異性識別，室溫下孵化I h，清洗干凈，于4°C冰箱中儲存備用。
[0015]實施例4二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體溶液的制備
(1)氧化亞銅立方納米框架的制備
首先，將8.32 mL超純水、0.50 mL濃度為0.1 mmol/L的氯化銅溶液和0.087 g十二烷基硫酸鈉在持續攪拌下混合，將裝有該混合液的玻璃瓶放在溫度為32~34°C的水浴中，當十二燒基硫酸鈉粉末完全溶解后，加入0.18 1]^濃度為1.0 mmol/L的氫氧化鈉溶液，該溶液立刻變為明亮的藍色，表明生成了氫氧化銅沉淀，然后，在I s內將0.92 mL濃度為0.1mmol/L的鹽酸羥胺溶液立刻注入玻璃瓶，攪拌20 S，在幾秒鐘之內溶液立即從亮藍色變成了綠色，最后，加入0.08 1^濃度為1.0 mmol/L的鹽酸溶液，繼續攪拌20 S，在幾秒鐘之內溶液的顏色由綠色變為黃色，溶液的全部體積為10 mL，將該溶液在水浴中老化I h用于納米晶體的生長，將3 mL體積分數為95%的乙醇加入到溶液中，靜置I h后超聲I min，清晰的淡黃色變為絮狀，將該樣品在5000 rpm下離心3 min，去除頂層溶液，沉淀用10 mL體積比為1:1的水和乙醇清洗，最后用5 mL的乙醇清洗，離心后干燥；
(2)二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體溶液的制備
將I mL濃度為2 mg/mL的氧化亞銅立方納米框架溶液、I mL的濃度為2 mg/mL 二茂鐵溶液、I mLl-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(10 mmol/L)/N-羥基琥珀酰亞胺(2 mmol/L)和I mL濃度為10 μ g/mL甲胎蛋白檢測抗體混合，震蕩12 h，離心洗滌，將得到的二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體孵化物分散于I mL、pH為7.4的磷酸鹽緩沖溶液中，將制得的二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體溶液，于4°C冰箱中儲存備用。
[0016]實施例5二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體溶液的制備
(1)氧化亞銅立方納米框架的制備
首先，將12.48 mL超純水、0.75 mL濃度為0.1 mmol/L的氯化銅溶液和0.131 g十二烷基硫酸鈉在持續攪拌下混合，將裝有該混合液的玻璃瓶放在溫度為32~34°C的水浴中，當十二烷基硫酸鈉粉末完全溶解后，加入0.27 1^濃度為1.0 mmol/L的氫氧化鈉溶液，該溶液立刻變為明亮的藍色，表明生成了氫氧化銅沉淀，然后，在I s內將1.38 mL濃度為0.1mmol/L的鹽酸羥胺溶液立刻注入玻璃瓶，攪拌20 S，在幾秒鐘之內溶液立即從亮藍色變成了綠色，最后，加入0.12 1^濃度為1.0 mmol/L的鹽酸溶液，繼續攪拌20 S，在幾秒鐘之內溶液的顏色由綠色變為黃色，溶液的全部體積為15 mL，將該溶液在水浴中老化I h用于納米晶體的生長，將4.5 mL體積分數為95%的乙醇加入到溶液中，靜置I h后超聲I min，清晰的淡黃色變為絮狀，將該樣品在5000 rpm下離心3 min，去除頂層溶液，沉淀用15 mL體積比為1:1的水和乙醇清洗，最后用8 mL的乙醇清洗，離心后干燥；
(2)二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體溶液的制備
將2 mL濃度為2 mg/mL的氧化亞銅立方納米框架溶液、2 mL的濃度為2 mg/mL 二茂鐵溶液、2 mLl-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(10 mmol/L)/N-羥基琥珀酰亞胺(2 mmol/L)和2 mL濃度為10 μ g/mL甲胎蛋白檢測抗體混合，震蕩12 h，離心洗滌，將得到的二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體孵化物分散于I mL、pH為7.4的磷酸鹽緩沖溶液中，將制得的二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體溶液，于4°C冰箱中儲存備用。
[0017]實施例6二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體溶液的制備
(1)氧化亞銅立方納米框架的制備
首先，將16.64 mL超純水、1.00 mL濃度為0.1 mmol/L的氯化銅溶液和0.174 g十二烷基硫酸鈉在持續攪拌下混合，將裝有該混合液的玻璃瓶放在溫度為32~34°C的水浴中，當十二烷基硫酸鈉粉末完全溶解后，加入0.36 1^濃度為1.0 mmol/L的氫氧化鈉溶液，該溶液立刻變為明亮的藍色，表明生成了氫氧化銅沉淀，然后，在I s內將1.84 mL濃度為0.1mmol/L的鹽酸羥胺溶液立刻注入玻璃瓶，攪拌20 S，在幾秒鐘之內溶液立即從亮藍色變成了綠色，最后，加入0.16 1^濃度為1.0 mmol/L的鹽酸溶液，繼續攪拌20 S，在幾秒鐘之內溶液的顏色由綠色變為黃色，溶液的全部體積為20 mL，將該溶液在水浴中老化I h用于納米晶體的生長，將6 mL體積分數為95%的乙醇加入到溶液中，靜置I h后超聲I min，清晰的淡黃色變為絮狀，將該樣品在5000 rpm下離心3 min，去除頂層溶液，沉淀用20 mL體積比為1:1的水和乙醇清洗，最后用10 mL的乙醇清洗，離心后干燥；
(2)二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體溶液的制備
將2 mL濃度為2 mg/mL的氧化亞銅立方納米框架溶液、2 mL的濃度為2 mg/mL 二茂鐵溶液、2 mLl-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(10 mmol/L)/N-羥基琥珀酰亞胺(2 mmol/L)和2 mL濃度為10 μ g/mL甲胎蛋白檢測抗體混合，震蕩12 h，離心洗滌，將得到的二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體孵化物分散于I mL、pH為7.4的磷酸鹽緩沖溶液中，將制得的二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體溶液，于4°C冰箱中儲存備用。
[0018]實施例7甲胎蛋白的檢測步驟
(1)使用電化學工作站以三電極體系進行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，所制備的免疫傳感器為工作電極，在10 mL的pH值為6.8的磷酸鹽緩沖溶液中進行測試；
(2)選擇計時電流法對甲胎蛋白進行檢測，將輸入電壓設置為-0.4 V，取樣間隔設置為0.1 S，運行時間設置為400 S ；
(3)當背景電流趨于穩定后，每隔50s向磷酸鹽緩沖溶液中注入10 UL濃度為10mol/L的雙氧水溶液，然后記錄電流隨時間的變化，繪制工作曲線；
(4 )將待測樣品溶液代替甲胎蛋白標準溶液進行檢測。
[0019](5)該電化學免疫傳感器甲胎蛋白檢測線性范圍為0.000005 ~ 10 ng/mL，檢測限2.5 f g/mL ο
【權利要求】
1.一種基于二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的免疫傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)依次用1.0,0.3,0.05 Mm的氧化鋁粉末對玻碳電極進行拋光，分別在超純水和乙醇中超聲清洗，氮氣吹干，在電極表面滴加6 yLU~3 mg/mL的三氨丙基三乙氧基硅烷功能化的石墨烯水溶液，干燥； (2)繼續將6PL濃度為8 ~ 12 Pg/mL的甲胎蛋白捕獲抗體溶液滴加到修飾電極表面，于4°C冰箱中孵化I h，清洗干凈； (3)用3yL濃度為5 ~ 15 mg/mL的牛血清白蛋白溶液封閉非特異性活性位點，于4°C冰箱中孵化I h，清洗干凈； (4)將6μ L濃度為0.000005 ~ 10 ng/mL的一系列不同濃度的甲胎蛋白用于和捕獲抗體的特異性識別，室溫下孵化I h，清洗干凈； (5)將6UL濃度為I ~ 3 mg/mL的二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體溶液滴在電極上與抗原特異性識別，室溫下孵化I h，清洗干凈，于4°C冰箱中儲存備用O
2.如權利要求1所述的一種基于二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的免疫傳感器的制備方法，所述二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體溶液的制備，其特征在于，包括以下步驟: (1)氧化亞銅立方納米框架的制備 首先，將8.32 ~ 16.64 mL超純水、0.50 ~ 1.00 mL濃度為0.1 mmol/L的氯化銅溶液和0.087 ~ 0.174 g十二烷基硫酸鈉在持續攪拌下混合，將裝有該混合液的玻璃瓶放在溫度為32~34°C的水浴中，當十二烷基硫酸鈉粉末完全溶解后，加入0.18 ~ 0.36 mL濃度為1.0 mmol/L的氫氧化鈉溶液，該溶液立刻變為明亮的藍色，表明生成了氫氧化銅沉淀，然后，在I s內將0.92 -1.84 mL濃度為0.1 mmol/L的鹽酸羥胺溶液立刻注入玻璃瓶，攪拌20 S，在幾秒鐘之內溶液立即從亮藍色變成了綠色，最后，加入0.08 ~ 0.16 mL濃度為1.0mmol/L的鹽酸溶液，繼續攪拌20 S，在幾秒鐘之內溶液的顏色由綠色變為黃色，溶液的全部體積為10 ~ 20 mL，將該溶液在水浴中老化I h用于納米晶體的生長，將3 ~ 6 mL體積分數為95%的乙醇加入到溶液中，靜置I h后超聲I min，清晰的淡黃色變為絮狀，將該樣品在5000 rpm下離心3 min，去除頂層溶液，沉淀用10 ~ 20 mL體積比為1:1的水和乙醇清洗，最后用5 ~ 10 mL的乙醇清洗，離心后干燥； (2)二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體溶液的制備 將I ~ 2 mL濃度為2 mg/mL的氧化亞銅立方納米框架溶液、I ~ 2 mL的濃度為2 mg/mL 二茂鐵溶液、I ~ 2 mLl-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(10 mmol/L)/N-羥基琥珀酰亞胺(2 mmol/L)和I ~ 2 mL濃度為10 μ g/mL甲胎蛋白檢測抗體混合，震蕩12 h，離心洗滌，將得到的二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體孵化物分散于I mL、pH為7.4的磷酸鹽緩沖溶液中，將制得的二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的甲胎蛋白檢測抗體溶液，于4°C冰箱中儲存備用。
3.如權利要求1所述的制備方法制備的一種基于二茂鐵-氧化亞銅立方納米框架標記的免疫傳感器，其特征在于，用于甲胎蛋白的檢測，檢測步驟如下: (I)使用電化學工作站以三電極體系進行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，所制備的免疫傳感器為工作電極，在10 mL的pH值為6.8的磷酸鹽緩沖溶液中進行測試； (2)選擇計時電流法對甲胎蛋白進行檢測，將輸入電壓設置為-0.4 V，取樣間隔設置為.0.1 S，運行時間設置為400 S ； (3)當背景電流趨于穩定后，每隔50s向磷酸鹽緩沖溶液中注入10 UL濃度為10mol/L的雙氧水溶液，然后記錄電流隨時間的變化，繪制工作曲線； (4 )將待測樣品溶液代替甲胎蛋白標準溶液進行檢測。
【文檔編號】G01N33/68GK104459157SQ201410783166
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月17日 優先權日:2014年12月17日
【發明者】王玉蘭, 閆濤, 李月云, 曹偉, 劉振, 吳丹, 杜斌, 魏琴 申請人:濟南大學