專利名稱：：戊型肝炎病毒抗原、其抗原組合物、及其含有該抗原或抗原組合物的試劑盒和應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種肝炎病毒抗原，尤其涉及一種戊型肝炎病毒抗原、其抗原組合物、及其含有該抗原或抗原組合物的試劑盒和應用。
背景技術：
：HEV是一種無包膜的單股正鏈RNA病毒，基因組全長約7.2kb，有三個開放型讀碼框(0RF)，從5'端依次為非編碼區(NCR)、0RF1、0RF2、0RF3和3'端非編碼區及PolyA尾巴。其中0RF3與0RF1C末斷的一個氨基酸和0RF2的N端部分氨基酸重疊。0RF1編碼1690個氨基酸，主要是與病毒復制相關的非結構蛋白。0RF2編碼660個氨基酸，為病毒的結構蛋白。0RF3編碼123個氨基酸，功能尚不太清楚。目前國際病毒分類委員會(ICTV)暫未對其進行準確分類。Lu(LuL，LiCH，Hagedorn.2006.PhylogeneticanalysisofglobalhepatitisEvirussequences:geneticdiversity，subtypesandzoonosis.RevMedVirol16:5-36.)等對Genbank中421個HEV的核苷酸序列進行了分析，HEV主要分為4個基因型，而且具有明顯的地域性。1型主要分布在亞洲和非洲等發展中國家，2型主要分布在墨西哥，3型主要在歐洲以及美洲等發達國家，4型主要在亞洲。中國即有1型，也有4型的流行。目前從豬等動物中分離出了大量的HEV3型和4型的病毒株，認為HEV3型和4型是人畜共患性，但1型和2型是否是人畜共患性傳染病尚需進一步研究。戊型肝炎(HE)是由戊型肝炎病毒(HEV)引起的一種非甲非乙型病毒性肝炎。HE屬典型的自限型疾病，急性肝炎期約持續一到四周，一般不會發展成慢性肝炎。主要經糞-口途徑傳播，既有散發，也有流行，在衛生條件差的地區常引起大規模爆發流行，主要由水源污染所引起。感染率在1540歲青壯年最高，孕婦感染HEV后死亡率可達20%，尤其是懷孕三個月左右的孕婦致死率甚至高達25%，幸存者也有著較高的流產率和死胎率。接觸傳染的幾率較低，有可能存在垂直傳播和血液傳播。HE在亞洲、非洲和美洲等發展中國家人群中發生比較普遍，在一些地區可占到急性病毒性肝炎的50%，是導致發病和病死的重要因素。在一些非HE流行的國家的獻血員中HEV抗體陽性率達15%。在非HE流行區的養豬者和與豬密切接觸的獸醫中，抗HEV抗體陽性率遠高于普通獻血員。血清學和核酸檢測是戊型肝炎流行病學和臨床診斷的主要方法。其中前者主要是檢測血清中的抗HEV抗體IgM，IgG和IgA;核酸檢測主要是通過檢測血清，膽汁和糞便中的HEVRNA.，這些檢測可以互補用于幫助臨床區別新近感染和既往感染，以減少誤診。現有的戊型肝炎病原學檢測主要有以下幾種方法1.免疫學檢測免疫學檢測的方法主要針對抗HEV抗體，采用酶聯免疫檢測方法，檢測血清中的抗HEVIgM，IgG禾口IgA抗體。抗HEVIgG出現的較早，在急性期滴度升高，持續時間長，目前其檢測主要采用間接ELISA法，利用重組的0RF2和0RF3抗原進行檢測。世界范圍內使用較為普遍的商業化試劑為Genelab公司和Abott公司的檢測試劑盒。他們均采用HEV1型和2型抗原為檢測抗原。但是，由于抗HEVIgG抗體持續時間較長，所以無法區別既往感染和近期感染。Chauetal認為，IgA抗體也可以作為HEV近期或急性感染的標識抗體，雖然其陽性持續時間與HEV診斷中的意義還有待臨床和流行病學研究的進一步證實。但是，在急性期感染的診斷中，IgA的檢測可以作為IgM檢測的輔助試驗，確證診斷。通常認為，IgM作為急性感染最重要的標志性抗體出現的要比IgG早。一個理想的IgM檢測試劑應該具有以下特點靈敏，假陽性率低，持續時間短，能夠區別近期感染和既往感染。目前國內市面上廣泛應用的商業化試劑是新加坡Genelab公司和北京的萬泰公司所產。而大多數試劑所采用的抗原都是0RF2的C端和部分或全長的0RF3抗原。另外，Zhangetal還報道了利用組合的單克隆抗體檢測血清中的HEV抗原的方法來診斷急性感染。其ELISA使用的是源于1型和4型的0RF2抗原。2.分子生物學檢測分子生物學檢測是指使用RT-PCR方法檢測血清，糞便，膽汁和組織等樣本中的HEVRNA.。然而，HEV病毒血癥持續時間很短，許多病人就醫時已經錯過病毒血癥或已接近末期，血液中的病毒RNA拷貝數很低，難以通過RT-PCR檢出，這種情況在醫藥衛生條件不發達的發展中國家尤其突出，糞便排毒雖然持續時間略長于病毒血癥，但樣品采集困難，易受污染且糞便中可能存在影響PCR的物質。目前報道的RT-PCR在HE病人中檢出的陽性率存在很大的差異，從30%到80%不等，這可能與樣品采集時間，保存情況，引物匹配，PCR條件和其他不確定因素有關。因此，目前檢測HEVRNA的RT-PCR診斷方法僅用于實驗室研究，還沒有在臨床廣泛推廣應用的商品化試劑。綜上，目前急需一種穩定，快速，高靈敏度和特異性的HEV感染的診斷試劑和基因分型的試劑。為此，本發明人通過對HEV的0RF2和0RF3進行分段表達，并經檢測不通抗原片段的抗原性篩選出了最佳的檢測抗HEVIgM的抗原片段組合，獲得了靈敏度高，特異性強，可以盡早檢測樣品中出現的抗HEVIgM抗體的試劑盒，從而實現了在HEV感染的早期進行準確檢測診斷。
發明內容本發明的目的在于提供一種戊型肝炎病毒抗原，該抗原的抗原性較佳，特異性強。為實現本發明的目的，采用如下技術方案—種戊型肝炎病毒抗原，其中所述抗原的抗原片段為pSl-6、pS4-6、pSl-l或pS4-l;所述pSl-6為1型HEV0RF2的C末端抗原，其位點為351391到640660aa;所述pS4-6為4型HEV0RF2的C末端抗原，其位點為365405到654674aa;所述pSl-1為1型HEV0RF2的N末端抗原，其位點為120到90130aa;所述pS4-l為4型HEV0RF2的N末端抗原，其位點為120到104144aa。優選如下抗原片段所述pSl-6為1型HEV0RF2的C末端抗原，其位點為371_660aa;所述pS4-6為4型HEV0RF2的C末端抗原，其位點為385_674aa;所述pSl-1為1型HEV0RF2的N末端抗原，其位點為1-llOaa;所述pS4-l為4型HEV0RF2的N末端抗原，其位點為l_124aa。本發明中，所述的1型HEV0RF2和4型HEV0RF2參見"1型與4型戊型肝炎病毒0RF2抗原性比較"(何鵬、張華遠、王佑春和李卓的"1型與4型戊型肝炎病毒0RF2抗原性比較"，中華微生物學和免疫學雜志2006年3月第26巻第3期210-214)，其中1型HEV0RF2編碼660個氨基酸，4型HEV0RF2編碼674個氨基酸。如上述優選的抗原片段具體如下pSl-6為編碼660個氨基酸的1型HEV0RF2中取371_660aa的片段；pS4-6為編碼674個氨基酸的4型HEV0RF2中取385_674aa的片段；pSl-l為編碼660個氨基酸的1型HEV0RF2中取l-110aa的片段；pS4-l為編碼674個氨基酸的4型HEV0RF2中取l-124aa的片段。本發明的另一目的在于提供一種戊型肝炎病毒抗原組合物，該抗原組合物抗原性強，特異性強，檢出時間早，更適于臨床應用。本發明所述的抗原組合物為所述的抗原組合物為將pSl-6的C末端和pSl-l的N末端組合、pS4-6的C末端和pS4-l的N末端組合、pSl-6的C末端與pS4_l的N末端組合或pSl-l的N末端與pS4-6的C末端組合。優選的，本發明所提供的抗原組合物為將pSl-6的C末端與pSl-l的N末端組合或將pS4-6的C末端與pS4-l的N末端組合而成的。本發明還提供一種檢測戊型肝炎病毒IgM抗體的試劑盒，該試劑盒實現了在HEV感染的早期進行準確檢測診斷的目的，用于間接ELISA方法檢測HEVIgM抗體本發明所提供的試劑盒含有本發明所述的任一抗原或抗原組合物。本發明還提供所述的抗原或抗原組合物在檢測戊型肝炎病毒抗體中的應用，即利用間接ELISA方法檢測樣本中HEVIgM抗體的體外方法。以下為本發明的詳細描述。現已確認的HEV基因組共存在3個開放讀碼框(0RF1-3)。0RF1(28-5106nt)編碼HEV病毒最大的蛋白，該蛋白約186kDa，包括至少4個結構區。到目前為止只有很少實驗室能夠表達完整的0RF1蛋白，分段表達的0RF1蛋白多用于功能學研究，目前0RF1片段僅在HEV抗體Western印跡檢測試劑中應用，ELISA檢測試劑中很少使用。0RF2基因長1980bp(約5147-7126nt)，編碼分子量約為72kDa的病毒衣殼蛋白。0RF2蛋白有一個111氨基酸的信號序列和三個可能用于分泌表達的潛在的羰基化位點。在HEV感染中0RF2蛋白抗體具有重要的意義，雖然HEV的感染極力仍未闡明，但作為HEV衣殼蛋白的0RF2蛋白在感染過程中很可能扮演著與宿主細胞膜上的受體結合并誘發病毒衣殼和進入細胞的角色，因此目前一經發現的多數中和抗體都為抗0RF2蛋白抗體。目前用于抗體檢測的0RF2蛋白主要來源于昆蟲細胞系統表達的完整0RF2蛋白和大腸桿菌系統表達的0RF2蛋白片段，但不同的抗原表現出不同的抗體結合力，比如0RF2蛋白片段比0RF2蛋白全長能更有效的結合恢復期病人血清中的抗HEV抗體。目前市場上所使用的試劑使用的抗原多為0RF2的C端片段，幾乎沒有使用其N端抗原的試劑。而且，其基因來源多為1型和2型。但是，在中國既有1型，也有4型，且4型的0RF2蛋白較1型的0RF2蛋白長14個氨基酸。50RF3編碼HEV病毒的一個小磷酸化蛋白，分子量約為13.5kDa。它同被成為AMBP的肝細胞骨架蛋白相互作用。0RF3蛋白較小，其含有的抗原表位也相對較少，其C端，尤其是105-122aa據說抗原性較高，HE病人中針對該表位的抗體陽性率較高，目前抗體診斷試劑中多包含0RF3蛋白的部分片段，其基因來源同0RF2，也多為1型和2型。而中國流行的4型HEV其0RF3蛋白較1型的0RF3蛋白短9個氨基酸。為了獲得檢測HEVIgM抗體的高靈敏度檢測方法，本發明人從患者的糞便樣品中釣出1型和4型的兩株病毒基因，將其在大腸桿菌中分段表達，比較兩個基因型間統一區域和基因型內不通區域抗原片段的抗原性，篩選出最佳抗原，進行ELISA檢測。除非另外定義，這里所有的技術和科學名詞都表達的是在本發明涉及領域里熟練技術人員所理解的通常含義。這里所用的命名和在細胞培養，分子遺傳學，核酸化學，免疫學實驗室操作步驟均為相應領域內廣泛使用的常規步驟。本發明的一方面，涉及兩個基因型HEV0RF2抗原的C末端和N末端抗原位點，其為所述抗原的抗原片段為pSl-6、pS4-6、pSl-l或pS4-1;所述pSl-6為1型HEV0RF2的C末端抗原，其位點為351391到640660aa;所述pS4-6為4型HEV0RF2的C末端抗原，其位點為365405到654674aa;所述pSl-l為1型HEV0RF2的N末端抗原，其位點為120到90130aa;所述pS4-l為4型HEV0RF2的N末端抗原，其位點為120到104144aa。優選如下抗原片段所述pSl-6為1型HEV0RF2的C末端抗原，其位點為371_660aa;所述pS4-6為4型HEV0RF2的C末端抗原，其位點為385_674aa;所述pSl-l為1型HEV0RF2的N末端抗原，其位點為1-llOaa;所述pS4-l為4型HEV0RF2的N末端抗原，其位點為1-124aa。本發明的另一方面，涉及抗原組合物，戊型肝炎的一型和四型的0RF2抗原的兩端組合，即對應亞型的N端和C端組合。具體為將所述的抗原組合物為將pSl-6的C末端和pSl-l的N末端組合、pS4-6的C末端和pS4-l的N末端組合、pSl_6的C末端與pS4_l的N末端組合或pSl-l的N末端與pS4-6的C末端組合。優選將pSl-6的C末端與pSl-l的N末端組合或將pS4-6的C末端與pS4-l的N末端組合而成的。本發明的再一方面，涉及一種利用前述任一抗原組合物及其中的任何一種抗原用于間接ELISA方法檢測HEVIgM抗體的試劑盒。本發明涉及一種利用間接ELISA方法檢測樣本中HEVIgM抗體的體外方法。與現有技術相比，本發明具有如下優點1)本發明所提供的抗原或抗原組合物抗原性強、特異性強；2)本發明所提供的試劑盒靈敏度高，特異性強，可以盡早檢測樣品中出現的抗HEVIgM抗體的試劑盒，從而實現了在HEV感染的早期進行準確檢測診斷；3)本發明所提供的抗原或抗原組合物可應用在檢測戊型肝炎病毒抗體中，從而利用間接ELISA方法檢測樣本中HEVIgM抗體的體外方法。圖l-A為純化后的融合多肽pSl-l到6的SDS-PAGE檢測；6圖1-B為純化后的融合多肽pS4-l到6的SDS-PAGE檢測；圖1-C為純化后的融合多肽pSl-9，pSl-7，pSl-8，pS4_9，pS4_7和pS4_8的SDS-PAGE檢測，其中M表示預染蛋白質marker;圖2-A為免疫印跡分析已純化的融合多肽pS4-l到9的抗HEVIgM抗體反應，圖中M表示預染蛋白質marker;圖2-B為免疫印跡分析已純化的融合多肽pSl-9到1的抗HEVIgM抗體反應，其中M表示預染蛋白質marker,—抗為抗HEVIgM抗體反應陽性的猴子免疫血清；圖3-A、圖3-B、圖3_C和圖3-D為接種了人源的1型HEV感染的猴子的系列血清測多肽的HEVIgM反應;圖3-E和圖3-F為接種了人源的4型HEV感染的猴子的系列血清測多肽的HEVIgM反應；圖3-G、圖3-H、圖3_I和圖3_J為接種了豬源的4型HEV感染的猴子的系列血清測多肽的HEVIgM反應;其中圖3-A-J中0周為接種前，接種后依次每周采血。其抗HEVIgM抗體用ELISA方法檢測，包被以下抗原1型的pSl-l，pSl-6和pSl-8，4型的pS4-l，pS4-6和pS4_8。其值使用S/CO表示，1作為陽性臨界。圖4-A-J分別使用1型和4型的組合抗原pSH+pSl-6和pS4-l+pS4-6，應用ELISA方法檢測圖3-A-J中的系列血中的抗HEVIgM反應。圖5-A-C檢測急性肝炎患者系列血清中的IgM抗體。檢測方法是ELISA，包被抗原為1型和4型的單個抗原或組合抗原。405至lj654674aa20到90130aa;20到104144aa。具體實施例方式以下為本發明的具體實施方式，所述的實施例是為了進一步描述本發明，而不是限制本發明。實施例1本實施例涉及兩個基因型HEV0RF2抗原的C末端和N末端抗原位點，其為所述pSl-6為1型HEV0RF2的C末端抗原，其位點為351391到640660aa;所述pS4-6為4型HEV0RF2的C末端抗原，其位點為365所述pSl-l為1型HEV0RF2的N末端抗原，其位點為1所述pS4-l為4型HEV0RF2的N末端抗原，其位點為1本實施例的具體實施方案為首先從臨床患者糞便樣本中釣出基因，經測序分析分別屬于l型和4型。經Bios皿生物軟件(軍事醫學科學院研制開發)分析其等電點和親水性，并根據文獻(PandaSK，ThakralD，RehmanS.2007.H印atitisEVirus.Rev.Med.Viroll7:151—180.)報道，按著兩個基因型對應的原則(除了N端的一對抗原外，其他的基本位置相同)將0RF2蛋白分成六段；同理，將0RF3蛋白分成三段，其具體分段位置及命名見表1。表1.重組HEV-pBVILl融合蛋白及其對抗HEV1型和4型戊型肝炎病毒抗血清的免疫反應7<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>a抗HEVIgM抗體反應陽性b抗HEVIgM抗體反應陰性或者檢測不到。抗HEVIgM抗體反應強陽性dl型HEV比4型HEV0RF2全長短14個氨基酸，同時，0RF3比后者長9個氨基酸。所有抗原片段都克隆進原核表達載體pBVILl(軍事醫學科學院構建，參見ZL00100695.9)成功進行表達(除了pS4_2，經再次克隆進pThioHis成功表達)。經常用的離子交換層析純化并凍干。其濃度測定使用商業化BCA試劑(VigorousBiotechnologyBeijingCo丄td，Beijing,China)，純度經常規薄層掃描確定。將凍干的蛋白用碳酸鹽緩沖液以0.5mg/ml的濃度溶解，取8iU進行SDS-PAGE電泳，分別進行考馬斯亮藍染色和免疫印跡分析。其中前者結果顯示所有抗原均呈現清晰條帶(圖l-A-C)，其分子量大小與預期一致，條帶單一，即成功表達純化后的蛋白基本無其他雜蛋白。后者WesternBlot檢測，其操作過程為常規操作，將蛋白轉移到硝酸纖維素膜(Hybond-CExtra,0.45ym;AmershamBiosciences,LittleChalfont，Buckinghamshire，UK)，5X脫脂牛奶的，pH7.4的PBS封閉1.5h，一抗為試驗感染的猴子陽性血清的混合體，1:500稀釋。二抗為堿性磷酸酶標記的山羊抗人IgM抗體(SantaCruzBiotechnology,Inc.SantaCruz，CA)。所有的孵育液均為含1X牛奶的PBST。最后NBT/BCIP(Dingguo，beijing，China)顯色。結果分析顯示如圖2-A-B和表l。免疫印跡結果顯示各段抗原和抗體的結合能力是明顯不同的pSl-l，pSl-6，pSl-8，pSl-9，pS4-l，pS4-6，pS4-8和pS4_9是兩個基因型中對應位置結合能力都比較強的抗原片段。其他抗原片段或者沒有反應，或者反應很弱，或者兩個基因型間不一致。進一步將所有的抗原片段包被ELISA板。檢測的系列血清來源于十只試驗感染的猴子，其中編號為JEll，JE12，JE47，JE48的猴子的攻擊毒株為人源的1型HEV;JE13，JE14的攻擊毒株為人源的4型HEV;JE15，JE16，JE51，JE52的攻擊毒株為豬源的4型HEV。其結果顯示(圖3-A-J):1)兩個不同基因型的0RF2的對應區域的抗原片段在檢測系列血時無明顯差別；2)同一基因型的0RF2的不同抗原片段有不同的抗原性，兩端的PS1_1，pS4_l，pSl-6，pS4-6抗原的抗原性最佳；3)0RF2的N端和C端表現出互補性；4)兩個不同基因型的0RF3的對應區域的抗原片段顯示出基因型的特異性；5)0RF3的pSl_8，pS4_8抗原和IgM抗體反應性最好；6)抗0RF2抗原的抗體在系列血清中出現的時間要比抗0RF3抗原的抗體早，且持續時間短；7)在系列血清中抗pSl-l，pS4-l，pSl-6，pS4_6抗原的抗體出現時間早于轉氨酶的升高。綜上，本發明人選擇pSl-l，pS4-l，pSl-6，pS4-6抗原作為檢測抗HEVIgM抗體的最佳抗原。實施例2本實施例涉及抗原組合物，戊型肝炎的一型和四型的0RF2抗原的兩端組合，即對應亞型的N端和C端組合。具體為將pSl-6的C末端與pSl-1的N末端組合或將pS4-6的C末端與pS4-l的N末端組合而成的。在實施例1的試驗中，本發明人發現0RF2蛋白的N端和C端抗原在檢測抗HEVIgM抗體時具有互補性，將pSl-1和pSl-6，pS4-l和pS4-6分別組合包被檢測上述十只猴子的系列血清，結果顯示(圖4-A-J)，組合抗原的檢出時間和單個看抗原的檢出時間幾乎一致，但是組合包被抗原后的試劑靈敏性增強，其檢測陽性率是兩個個體抗原的檢測率的累加。例如，pSl-l和pSl-6組合后除了JE16，可以檢測出其他所有的系列血中的抗體，相比之下，基于pSl-l單一抗原的試劑卻又三份血清陰性，而僅以pSl-6為基礎的試劑也有兩份血清陰性。抗原的組合比例為基于各自單獨包被的濃度l:1。實施例3本實施例涉及一種利用前述抗原組合物及其中的任何一種抗原用于間接ELISA方法檢測HEVIgM抗體的試劑盒。9試驗采用間接ELISA法，使用96孔聚苯乙烯板進行包被，使用pH9.6的碳酸鹽緩沖液將抗原稀釋成0.5mg/ml。采用梯度稀釋法選擇最佳包被濃度，即將欲包抗原梯度稀釋進行包被，分別選取確證陽性和陰性的樣品作為陽性和陰性對照，隨著抗原包被濃度的減小，其P/N值會逐漸變大，達到一個平臺期，本發明人選擇此時的抗原濃度作為ELISA的抗原包被濃度。選擇的抗原pSl-l，pSl-6，pS4-l，pS4-6，pSl-l+pSl-6和pS4-l+pS4-6的最適包被濃度分別為0.5，2.0，0.5，2.0，0.5+2.0和0.5+2.0yg/ml，每孔加100溶液，37t:，2h，然后fC過夜，pH7.4的PBST洗滌三次后，每孔加入含20%牛血清的包被緩沖液200iU，37t:封閉2h，去除封閉液，保存于4t:備用。使用100份抗HEVIgG和IgM雙陰性的獻血源血清進行CUT-OFF值的確定，計算其平均值和標準差。pSl-l，pSl-6，pS4-l，pS4-6，pSl-l+pSl-6和pS4-l+pS4-6抗原包被板的平均值加標準差分別為0.241±0.071，0.359±0.123，0.345±0.097forpS4_l，0.366±0.127，0.174-/+0.055和0.251-/+0.029。當CUT-OFF值設為平均值加上3倍的標準差時所有的陰性樣品呈陰性。其值大約等于每個板子的三個陰性對照的平均值依次加上0.21，0.36，0.29，0.38，0.16和0.09。進行樣品檢測時，使用含5X牛血清的PBST將待測樣品1:10稀釋，100ul/孔加入包被有抗原的微孔板中，37°C孵育30min，PBST洗滌5遍，然后每孔加入lOOulHRP標記的濃度為0.liig/ml的抗人IgM抗體，空白孔除夕卜，37t:，30min孵育后，去除液體，并用PBST洗滌5遍，加入TMB底物，37。C顯色15min，在波長450nm和630nm處讀取各空A值。實施例4本試驗例涉及利用1型HEV0RF2的C末端抗原、位點為371_660aa的pSl_6間接ELISA方法檢測HEVIgM抗體的試劑盒。本實施例所采用的方法與實施例3相同，結果顯示其抗原性較佳，試劑靈敏性增強。對于1型HEV0RF2的C末端抗原、位點為351391至lj640660aa的其它pSl-6抗原片段進行了類似的試驗，其結果與該實施例的結果一致。實施例5本試驗例涉及利用4型HEV0RF2的N末端抗原、位點為l_124aa的pS4_l間接ELISA方法檢測HEVIgM抗體的試劑盒。本實施例所采用的方法與實施例3相同，結果顯示其抗原性較佳，試劑靈敏性增強。對于4型HEV0RF2的N末端抗原、位點為120到104144aa的其它pS4_l抗原片段進行了類似的試驗，其結果與該實施例的結果一致。實施例6本實施例涉及一種利用間接ELISA方法檢測樣本中HEVIgM抗體的體外方法。本發明人使用所建立組合抗原包被的ELISA方法檢測了三份臨床患者系列血清，其結果見圖5-A-C。以1028為例，隨著轉氨酶逐漸趨于正常，抗0RF3的抗體逐漸升高，達到峰值后降低，而系列血清中抗0RF2組合抗原IgM抗體隨著轉氨酶的降低漸漸降低，當轉氨酶恢復正常時，抗體也基本檢測不到。截止到檢測的最后一份樣品，患者血清中抗0RF2抗體和轉氨酶都基本恢復正常，而抗0RF3抗體卻還很強。所以，相對抗0RF3的IgM抗體，抗0RF2的抗體持續的時間短。10權利要求一種戊型肝炎病毒抗原，其特征在于所述抗原的抗原片段為pS1-6、pS4-6、pS1-1或pS4-1；所述pS1-6為1型HEVORF2的C末端抗原，其位點為351～391到640～660aa；所述pS4-6為4型HEVORF2的C末端抗原，其位點為365～405到654～674aa；所述pS1-1為1型HEVORF2的N末端抗原，其位點為1～20到90～130aa；所述pS4-1為4型HEVORF2的N末端抗原，其位點為1～20到104～144aa。2.根據權利要求1所述的戊型肝炎病毒抗原，其特征在于所述pSl-6為1型HEVORF2的C末端抗原，其位點為371660aa;所述pS4-6為4型HEV0RF2的C末端抗原，其位點為385674aa;所述pSl-l為1型HEVORF2的N末端抗原，其位點為1110aa所述pS4-l為4型HEVORF2的N末端抗原，其位點為1124aa。3.—種戊型肝炎病毒抗原組合物，其特征在于所述的抗原組合物為將pSl-6的C末端和pSl-l的N末端組合、pS4-6的C末端和pS4-l的N末端組合、pSl-6的C末端與pS4-l的N末端組合或pSl-l的N末端與pS4-6的C末端組合。4.根據權利要求3所述的戊型肝炎病毒抗原組合物，其特征在于所述的抗原組合物為將pSl-6的C末端與pSl-l的N末端組合或將pS4-6的C末端與pS4-l的N末端組合而成的。5.—種檢測戊型肝炎病毒IgM抗體的試劑盒，其特征在于所述的試劑盒含有權利要求1所述的任一抗原或權利要求3所述的任一抗原組合物。6.權利要求1或2所述的抗原在檢測戊型肝炎病毒抗體中的應用。7.權利要求3或4所述的抗原組合物在檢測戊型肝炎病毒抗體中的應用。全文摘要本發明涉及一種戊型肝炎病毒抗原，該抗原的抗原片段為pS1-6、pS4-6、pS1-1或pS4-1；pS1-6為1型HEVORF2的C末端抗原，位點為351～391到640～660aa；pS4-6為4型HEVORF2的C末端抗原，位點為365～405到654～674aa；pS1-1為1型HEVORF2的N末端抗原，位點為1～20到90～130aa；pS4-1為4型HEVORF2的N末端抗原，位點為1～20到104～144aa。本發明還涉及含有所述抗原的組合物及其含有所述任一抗原或抗原組合物的試劑盒以及在檢測戊型肝炎病毒抗體中的應用。本發明所提供的戊型肝炎病毒抗原其抗原性強、特異性強；本發明所提供的試劑盒和應用可盡早檢測樣品中出現的抗HEVIgM抗體，從而實現在HEV感染的早期進行準確檢測診斷。文檔編號G01N33/53GK101735311SQ20081022731公開日2010年6月16日申請日期2008年11月26日優先權日2008年11月26日發明者宋曉國,張賀秋,王佑春,馬紅霞申請人:中國藥品生物制品標準化研究中心;中國人民解放軍軍事醫學科學院基礎醫學研究所