一種頭孢替坦二鈉中雜質的制備與結構確證方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及藥物分析技術領域，尤其涉及一種頭孢替坦二鈉中雜質的制備與結構 確證方法。
【背景技術】
[0002] 頭孢替坦二鈉化學名稱：(6R，7S)-7-[4-(2-氨基-1-羧基-2-氧代亞乙 基）-1，3-二硫雜環丁烷-2-甲酰氨基]-7-甲氧基-3-[l-甲基-IH-四氮唑-5-硫甲 基] _8_氧代_5_硫雜-1-氣雜二環[4. 2. 0]辛_2_條_2_幾酸二納鹽。
[0003] 化學結構式：
[0004] 〇
[0005] 頭孢替坦二鈉 （Cefotetan Disodium)為注射用第二代頭孢菌素類抗生素，具有第 三代頭孢菌類藥物抗菌譜廣的特性，于1993年在日本首先上市銷售，美國阿斯利康公司的 同名產品于2003年被FDA批準在美國上市，我國尚未進口該品。按照我國的藥品注冊管理 辦法化學藥品注冊分類的規定，頭孢替坦二鈉的研制屬于三類新藥的開發。目前，僅查見美 國藥典收載該品種，但無有關物質檢查項，也未列出雜質；日本藥典收載了頭孢替坦，其已 知雜質中未列本發明的化合物，也未見其他文獻對該雜質的制備與確證報道。
[0006] 頭孢替坦二鈉收載標準中，無該雜質的制備與結構報道，《LC/MS法分析頭孢替坦 二鈉原料中的雜質》中報道采用HPLC-MS聯用技術分析頭孢替坦二鈉原料中存在的雜質，對 其中的4個雜質進行了快速鑒定，但未實現對本發明的雜質的制備與結構確認方法。
[0007] 頭孢替坦二鈉為注射用原料，其含有的雜質，將影響產品使用的安全性，特別是頭 孢類藥物的臨床副反應較多，更應對樣品中的雜質進行徹底研宄，嚴格限制。現有方法和文 獻對其中的有些雜質進行了歸屬，但仍有一個較大雜質屬未知雜質。

【發明內容】

[0008] 本發明提供了 一種頭孢替坦二鈉中雜質的制備與結構確證方法，本發明對該未知 雜質進行了分離制備，獲得了雜質單體，進行了結構確證，以此基礎制訂了嚴格的雜質限 度，為本藥品的安全使用提供了理論依據。
[0009] 本發明采用如下技術方案：
[0010] 本發明的頭孢替坦二鈉中雜質的制備與結構確證方法的具體步驟如下：
[0011] (1)取頭孢替坦二鈉樣品，以水溶解，配制為I. 〇g/ml雜質制備供試液，加入高效 液相色譜儀，進樣量100 μ 1，流速3. Oml/min，檢測波長254nm，柱溫30°C，在該色譜條件下， 雜質約在7分鐘出峰，頭孢替坦二鈉約20分鐘出峰，雜質經紫外檢測器檢測出峰后，在峰頂 位置開始柱后收集餾分，富集樣品；
[0012] (2)取收集的餾分，經旋轉蒸發儀減壓濃縮，取該濃縮液經HPLC檢測，餾分的出峰 時間約5. 6分鐘，與樣品中雜質的出峰時間一致，即獲得的餾分為目標物質；
[0013] (3)經過反復的富集，得到的制備濃縮液先經旋轉蒸發儀去除有機溶劑，將剩余溶 液經凍干處理，得到的凍干粉末以五氧化二磷減壓干燥，得雜質單體；
[0014] (4)將步驟⑶得到的雜質單體進行質譜解析，將雜質樣品用水溶解，直接注入質 譜檢測器，由雜質一級質譜圖可知，其分子離子峰[M+H] +應為592,則m/z 614為[M+Na]+， m/z 630為[M+K]+，即該雜質的分子量為591，比頭孢替坦酸分子量多了 16,初步推斷為頭 孢替坦的加氧化合物，并結合合成路線可能產生的雜質推斷和相關文獻報道，確定該雜質 為頭孢替坦氧化物，即頭孢替坦亞砜。
[0015] 將雜質進行二級質譜測定，為與文獻報道的頭孢替坦的碎片離子進行對比，選用 ESI負模式進行測定，該雜質經二級質譜的碎片解析歸屬，特別是m/z 473. 7, m/z 441.8， m/z 275. 6碎片離子的存在，較充分的證明了其結構為頭孢替坦亞砜。
[0016] 本發明所制備的頭孢替坦二鈉中雜質為頭孢替坦亞砜，化學結構為
[0017]
[0018] 步驟（1)中，色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的半制備柱 (IOmmX250mm，10 μm)，以0· 1 %三氟乙酸水溶液-甲醇-乙腈為流動相，三者體積比為 70-90:5-15:5-15,優選比例為 80:10:10。
[0019] 步驟（2)中，旋轉蒸發儀減壓濃縮溫度為5°C -40°C，優選溫度為15°C，時間為3-6 小時，優選4小時。
[0020] 步驟（3)中，凍干處理中，凍干時間為24小時。
[0021] 步驟（3)中，五氧化二磷減壓干燥時間為48小時。
[0022] 步驟⑶中，質譜解析中采用ESI正離子檢測；掃描范圍：100~1000。
[0023] 相對于現有技術，本發明的積極效果如下：
[0024] 原有文獻報道，采用HPLC-MS方法對樣品中的雜質進行結構推導，但針對較小含 量的雜質，液質聯用很難獲得滿意結果，也未見有該雜質的文獻和專利報道。本發明針對以 上問題，采用制備柱分離，富集目標雜質，并進一步分離純化，最終獲得雜質單體，進行確證 得出該雜質化學結構，方法簡單，結果準確，可用于頭孢類樣品的雜質分析控制。
【附圖說明】
[0025] 圖1是雜質一級質譜圖。
[0026] 圖2是雜質二級質譜圖。
【具體實施方式】
[0027] 下面的實施例是對本發明的進一步詳細描述。
[0028] 實施例1
[0029] 1、雜質的制備
[0030] 色譜條件如下：Agilent 1200 高效液相色譜儀，Unitary C18IOOA(10_X250_， IOym)半制備柱，以0.1%三氟乙酸水溶液-甲醇-乙腈（80 : 10 : 10)為流動相，取樣 品適量，以水溶解，配制為I. 〇g/ml雜質制備供試液，進樣量100 μ 1，流速3. Oml/min，檢測 波長254nm，柱溫30°C。在該色譜條件下，雜質約在7分鐘出峰，頭孢替坦二鈉約20分鐘出 峰，雜質經紫外檢測器檢測出峰后，在峰頂位置開始柱后收集餾分，富集樣品。
[0031] 取收集的餾分，經旋轉蒸發儀減壓濃縮（15°C )約4小時，取該濃縮液經HPLC檢 測，餾分的出峰時間約5. 6分鐘，與樣品中雜質的出峰時間一致，即獲得的餾分為目標物 質。
[0032] 經過反復的富集，得到的制備濃縮液先經旋轉蒸發儀去除有機溶劑，將剩余溶液 經凍干處理（凍干時間為24小時），得到的凍干粉末以五氧化二磷減壓干燥約48小時，得 雜質單體。
[0033] 取該雜質單體適量，以稀釋劑配制為0. 5mg/ml的溶液，按頭孢替坦二鈉有關物質 檢查方法測定，以面積歸一化法計算主峰的純度為98. 2%。為進一步驗證該樣品即為目標 雜質，將供試液添加到頭孢替坦二鈉樣品溶液中作為混合溶液進行HPLC測定，色譜