專利名稱：一種新的復方頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉的檢測方法
專利說明一種新的復方頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉的檢測方法 發明背景 頭孢噻肟鈉(cefotaxime sodium，CTX)是1977年德國赫司特公司研制開發的第一個三代頭孢菌素，用于治療多種革蘭氏陽性菌和陰性菌所致的感染性疾病，具有抗菌譜廣，抗菌活性強，組織分布少，低毒等特點。該產品上市近30年，在全世界多個國家與地區使用，受到廣泛好評，至今仍是臨床一線用藥。
由于大量和廣泛的臨床應用，甚至近年來濫用的出現，臨床上產生了耐頭孢噻肟的耐藥菌。這類耐藥菌大多數是通過產β-內酰胺酶降解頭孢噻肟起作用的，這樣降低了頭孢噻肟鈉的抗菌活性。針對這種情況開發的β-內酰胺酶抑制劑與抗生素合用后可有效抑制細菌的耐藥性，恢復抗生素的活性，因此，采用“抗生素+β-內酰胺酶抑制劑”的復方組合能有效地抑制了產酶菌的耐藥問題。由這種思路開發的復方制劑如“阿莫西林克拉維酸”、“頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉”、“哌拉西林鈉舒巴坦鈉”等在臨床上獲得了很大的成功。從制劑的角度來看，因為頭孢噻肟鈉含有一定水分，而他唑巴坦鈉遇水降解，不穩定，如果簡單的將兩者混合到一起，則無法解決產品的穩定性問題，須在制劑工藝上解決產品的穩定性問題。同時由于之前沒有復方制劑，均是單一成分做檢測，兩者混合后的復方檢驗需要建立新的檢測方法，這樣的檢測方法不僅要求能夠檢測出復方中單一成分的含量和有關雜質，同時，這一檢測方法對單一成分的測定還不能受到另一成分的影響，而且能夠達到專屬靈敏、簡便操作等要求，并能夠在制劑工廠以及各地檢測機構或醫院對產品質量進行檢查，針對這樣的要求我們建立了一個新的檢測復方頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉的方法。


發明內容
我們采用在工廠、藥品檢驗所、醫院等常見的高效液相色譜法(HPLC)通過優化流動相、流速、檢測波長等指標，建立了一種新的檢測方法，這種方法可以檢測復方頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉中兩種單一成分的含量和有關物質，而不會出現兩種成分相互影響與干擾，該方法簡便易行、操作步驟少，方法專屬性強、靈敏度高、線性范圍大、重復性好等，可用于復方的制劑和原料的常規檢測。
專利實例 實施例一、復方原料與制劑的初步檢測 實驗采用“注射用頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉”，比例為6∶1，規格為1.0g，因其他配比和規格在制劑上簡單的裝量變化，其原料來源、制備工藝均無顯著差異。故用該配比、規格樣品進行研究。
試驗樣品為白色、類白色或微黃白色粉末，進行以下各種試驗。
1、鑒別試驗 兩種組分他唑巴坦和頭孢噻肟均以鈉鹽形式存在，灼燒時應呈現鈉鹽的火焰反應。取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取本品，在無色的火焰中燃燒，火焰即顯鮮黃色。
兩種組分他唑巴坦鈉和頭孢噻肟鈉極性不同，可通過HPLC法進行分離，并用對照品進行對照鑒別。取本品和他唑巴坦和頭孢噻肟的標準品，分別用流動相制成每1ml含0.48mg頭孢噻肟鈉和0.08mg他唑巴坦鈉的溶液，按照本專利以下描述的含量測定項下高效液相色譜法試驗，結果供試品峰與對照品峰一致。(試驗方法見實施例二、三) 2、檢測試驗 試驗樣品酸度檢查取試驗樣品加注射用水制成每1ml中含頭孢噻肟0.1g的溶液，用酸度計測定，結果試驗樣品的pH在4.5-6.5之間，為合格產品。
試驗樣品溶液澄清度檢查取試驗樣品5瓶，分別加水制成每1ml中約含本品0.1g的溶液，與1號濁度標準液進行比較，檢查澄清度。結果試驗樣品為澄明液體，未超過1號濁度標準液，澄清度符合相關規定，為合格樣品。
試驗樣品溶液顏色檢查取試驗樣品5瓶，加水溶解，置于25ml的納氏比色管中，加水稀釋至10ml，與黃色色調標準比色液比較。結果試驗樣品為澄明液體，溶液顏色未超過黃色或黃綠色9號標準比色液，符合相關規定，為合格樣品。
試驗樣品水分檢查，取試驗樣品1g，按水分檢測法測定，結果試驗樣品水分含量均在3％左右符合標準，為合格樣品。
由于該制劑是由無菌原料直接分裝的，所以，原料與制劑的成分、含量上完全一樣，沒有差別。采用本專利的檢測方法對原料進行的檢測，得到與制劑相同的結果。
實施例二、復方原料與制劑的分析和質量控制方法 為控制產品的質量，必須對產品中的有可能出現的雜質進行分析研究。之前由于沒有將兩個物質混合在一起使用的經驗，所以現有的資料也只有對單一頭孢噻肟鈉(或他唑巴坦鈉)中有關雜質的檢驗方法。
這樣的檢驗方法雖然是對單一物質檢驗有效，但是否能夠檢驗混合物中的有關雜質還不清楚，因為制備成混合制劑以后兩種主要成分是否會相互影響對方的檢測，兩種雜質是否也會影響對方的檢測有很多不確定因素，需要進行大量的試驗來驗證。所以，我們根據頭孢噻肟鈉、他唑巴坦鈉單一物質檢測方法，建立了相應的對復方物質中雜質的檢測方法。
1、有關雜質物質檢測 由于HPLC方法已經能夠很好地用于單一的兩種成分檢測，因此我們采用HPLC方法建立復方的雜質檢測方法。
試驗首先進行破壞性試驗，按照藥物穩定性試驗指南分別進行了1)堿破壞分別取頭孢噻肟鈉、他唑巴坦鈉和注射用頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉適量，于10ml量瓶中，用0.1mol/l氫氧化鈉溶液1ml溶解，溶液顏色變微黃色，用0.1mol/l鹽酸中和，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。2)、然后采用酸破壞分別取頭孢噻肟鈉、他唑巴坦鈉和注射用頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉適量，于10ml量瓶中，用0.1mol/l鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。3)、再采用氧化降解分別取頭孢噻肟鈉、他唑巴坦鈉和注射用頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉適量，于10ml量瓶中，用水溶解，加雙氧水2滴，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
取經過上述三種供試品溶液，在下述色譜條件下測試，檢測他唑巴坦鈉、頭孢噻肟鈉是否有明顯降解，以降解產物峰與主峰分離＞2.0，頭孢噻肟鈉降解產物與他唑巴坦鈉主峰分離度＞1.5為合格標準的判斷指標。
我們首先采用如下的色譜條件進行篩選最佳的檢測方法 色譜條件(1)試驗采用Waters 515泵，Waters2487紫外檢測器；色譜柱UltimateXB-NH2正相分析柱；規格5μm，4.6*50mm；流動相正己烷-氯仿溶液(2∶1)；檢測波長220 nm-260nm；流速0.1～3ml/min；進樣量10～30μl。
色譜條件(2)試驗采用Waters 515泵，Waters2487紫外檢測器；色譜柱十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，Kromasil C18 5μm 4.6mm×20cm，；流動相乙腈-磷酸二氫鉀溶液(0.015mol/L)-四丁基氫氧化鈉溶液(10％)(180-200∶785-795∶35-5)(用磷酸調pH值為4.0)；檢測波長220nm-260nm；流速0.1～3ml/min；進樣量10～30μl。
色譜條件(3)試驗采用Waters 515泵，Waters2487紫外檢測器；色譜柱十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，Kromasil C18 5μm 4.6mm×20cm，；流動相乙腈-磷酸二氫鉀溶液(0.015mol/L)-甲醇(10％)(180-200∶785-795∶35-5)(用磷酸調pH值為4.0)；檢測波長220nm-260nm；流速0.1～3ml/min；進樣量10～30μl。
色譜條件(4)試驗采用Waters 515泵，Waters2487紫外檢測器；色譜柱十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，Kromasil C18 5μm 4.6mm×20cm，；流動相乙腈-磷酸二氫鉀溶液(0.015mol/L)-乙醇(20％)(180-200∶785-795∶35-5)(用磷酸調pH值為4.0)；檢測波長220nm-260nm；流速0.1～3ml/min；進樣量10～30μl。
采用上述方法檢測發現，色譜條件(1)、(3)、(4)雖然也可以用于檢測但兩者的分離度都小于1.0，兩組分都分不開，而色譜條件(2)的分離度較好，但還需優化。經過三種破壞性試驗的樣品在色譜條件(2)試驗條件下他唑巴坦鈉、頭孢噻肟鈉均無明顯降解，頭孢噻肟鈉雜質峰與他唑巴坦鈉主峰分離度＞1.5。
哪是不是方法學不夠靈敏沒檢測出雜質？還是本身就沒有出現雜質？對此，我們首先采用LC-MS對樣品進行了檢驗，發現經過上述三種破壞試驗的樣品，在LC-MC檢測條件下也沒有發現有雜質出現，說明本檢驗方法是可靠。
更進一步，我們采用極端手段將上述的破壞條件增強2-10倍，用LC-MS首先檢測以保證出現雜質，觀察本試驗條件是否可以檢測出來。結果發現，采用更強烈的破壞條件后，頭孢噻肟鈉和他唑巴坦鈉均在不同程度上出現了降解，這樣的降解在3倍強化的酸破壞的條件下剛剛出現，雜質量很低，用LC-MS可以檢測到雜質的出現，更強烈破壞條件可以產生更多的雜質。我們采用上述建立的檢測方法，對于3倍強化的酸破壞的條件下剛剛出現雜質進行分析，結果該方法可以發現雜質的出現。
我們以“3倍強化的酸破壞的條件下剛剛出現雜質的溶液”作為檢測對象，對我們建立的HPLC檢測方法進行了優化，最后確定了以下方法作為最佳鑒定方法 色譜條件試驗采用Waters 515泵，Waters2487紫外檢測器；色譜柱十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，Kromasil C18 5μm 4.6mm×20cm，；流動相乙腈-磷酸二氫鉀溶液(0.03mol/L)-四丁基氫氧化鈉溶液(10％)(190∶795∶15)(用磷酸調pH值為4.0)；檢測波長230nm；流速1ml/min；進樣量20μl。
我們以上述檢驗方法，對檢驗樣品進行了檢測，結果如下 樣品溶液制備取本品適量，精密稱定，用流動相溶解制成每1ml中含頭孢噻肟鈉0.48mg和他唑巴坦鈉0.08mg的溶液，作為供試品溶液。精密量取0.33ml至10ml量瓶，用流動相稀釋至刻度，作為對照溶液。精密量取供試品溶液1ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，作為對照溶液。取對照溶液20μl注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分峰高為滿量程的20～25％，再取供試品溶液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。
試驗檢驗了三批生產樣品有關物質檢查結果均符合規定。結果見表1及圖1~3 表1有關物質檢查結果
2、頭孢噻肟鈉聚合物 由于頭孢噻肟鈉還有聚合物產生，如果聚合物含量高會導致不良反應的發生，需要在產品中控制聚合物的含量，按照相關要求必須對聚合物進行檢測。以往，只有在單方頭孢噻肟鈉中進行聚合物的檢測，還沒有關于復方頭孢噻肟他唑巴坦鈉混合后中進行聚合物測定的研究報告，是否單方測定的條件可以準確反應復方中的情況，或者說，復方混合物是否會影響原來條件的檢測的準確性，對此，我們也進行了研究。
我們首先進行了頭孢噻肟聚合物色譜條件與測定方法試驗。
色譜條件與系統適用性試驗用葡聚糖凝膠G-10(40~120μm)為填充劑；玻璃柱內徑1.3～1.5cm，床體積50～60ml；流動相A為磷酸鹽緩沖液(取磷酸氫二鈉21.85g和磷酸二氫鈉5.38g，加水1000ml使溶解，混勻，調節pH值至7.0)，流動相B為0.01％的十二烷基硫酸鈉溶液；流速為每分鐘1ml；檢測波長為254nm。以流動相A為流動相，用1mg/ml藍色葡聚糖2000溶液進樣200μl進行測定，理論板數以藍色葡聚糖2000峰計算應不低于900，拖尾因子應在0.75～1.5之間，以流動相B為流動相，取對照品溶液，重復進樣200μl，峰面積值的相對標準差應小于5％。
他唑巴坦鈉干擾試驗取他唑巴坦鈉原料適量，精密稱定，加流動相A溶解制成每1ml含他唑巴坦20mg的溶液，照上述方法測定。色譜圖見附圖7。結果表明他唑巴坦鈉對本品頭孢噻肟聚合物測定無干擾。
檢出限取頭孢噻肟對照溶液，依次稀釋成不同濃度，用上述色譜條件進行檢測。檢出量為41ng，檢出限約為頭孢噻肟量的0.001％。
對照品溶液的制備取頭孢噻肟對照品適量，精密稱定，加水制成每1ml中含頭孢噻肟100μg的溶液，搖勻。
測定法取樣品，精密稱定，加水制成每1ml中含20mg的溶液，搖勻，立即進樣200μl，以流動相A為流動相進行測定，記錄色譜圖；另取對照品溶液200μl注入液相色譜儀，以流動相B為流動相，記錄色譜圖，按外標法計算。
結果三批樣品頭孢噻肟聚合物測定色譜圖見附圖4-79-12，結果見表5。
表2頭孢噻肟鈉聚合物檢查結果 根據測試結果和注射用頭孢噻肟鈉的質量標準要求，質量標準中擬定本品頭孢噻肟聚合物以頭孢噻肟計不得過1.0％。
為了進一步驗證這樣的情況，我們對于上述方法采用了LC-MS驗證，結果發現，采用上述方法測定的結果和LC-MS方法測定的結果能夠很好的對應，說明復方藥物雖然是混合物，但是這樣的混合物并不影響原來測定聚合物方法的專屬性和靈敏度。
實施例三、用于該復方制劑的新檢測方法的建立和制劑含量測定驗證 為控制產品的質量，對復方制劑中兩個主要成分的含量控制是個重要指標，對于單一頭孢噻肟鈉、他唑巴坦鈉兩種含量檢測已經有比較多的研究方法建立。但是，在制備成混合物后，是否這樣的方法仍然能夠用于混合物中成分的檢測？或者說，混合物中兩個物質是否會相互影響對方的檢測？這樣的問題尚無人進行研究，其中還有很多不確定因素需要面對和解釋。對此，我們對于如何開展復方制劑中兩種成分的含量進行檢測方法進行了研究。
由于HPLC方法已經能夠很好地用于單一的兩種成分檢測，因此，我們采用HPLC方法建立復方的兩個成分含量的檢測方法。
色譜條件選用試驗采用Waters 515泵，Waters2487紫外檢測器；色譜柱十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，Kromasil C18 5μm 4.6mm×20cm，；流動相乙腈-磷酸二氫鉀溶液(0.03mol/L)-四丁基氫氧化鈉溶液(10％)(190∶795∶15)(用磷酸調pH值為4.0)；檢測波長230nm；流速1ml/min；進樣量20μl。
波長選擇取頭孢噻肟、他唑巴坦對照品適量，分別加流動相溶解，在200～300nm波長范圍內進行掃描，結果表明頭孢噻肟在235nm波長處有最大吸收，在220～260nm波長范圍內均有較強吸收；他唑巴坦溶液沒有明顯的最大吸收峰，在230nm波長以下范圍有吸收；頭孢噻肟與他唑巴坦在230nm波長處有均有合適吸收，考慮他唑巴坦在本品中所占比例較小，且他唑巴坦鈉原料的含量測定HPLC法中所選波長亦為230nm，因此本法選擇230nm作為檢測波長。
流動相的選擇本品為復方制劑，流動相的選擇主要考慮兩主峰的出峰時間，分離效果以及主峰與雜質峰的分離情況，選用乙腈-磷酸二氫鉀溶液(0.015mol/L)-甲醇(10％)時，兩組份的分離度太小，而且頭孢噻肟鈉的保留時間過長，不適于測定。適當調節流動相組成。為避免頭孢噻肟保留時間過長，采用乙腈-磷酸二氫鉀溶液(0.03mol/L)-四丁基氫氧化銨溶液(10％)(190∶795∶15)(用磷酸調pH值為4.0)作為本品的流動相，該流動相能夠使樣品中的兩個組分有效檢出，分離度均大于1.5，能獲得較佳的分離效果。
在上述研究的基礎上，我們采用選定的色譜條件首先進行了系統適用性試驗，在上述色譜條件下，溶劑峰保留時間約3min，不干擾主成分測定。分別稱取頭孢噻肟鈉原料和他唑巴坦鈉原料，按照含量測定方法制備單組份及混合組分的樣品溶液作為供試品溶液，按照上述色譜條件進行測定。
我們進一步對檢測方法的線性范圍進行了研究 頭孢噻肟線性關系取頭孢噻肟對照品適量，精密稱定，用水稀釋制成每1ml含頭孢噻肟為265.1、353.5、441.9、530.2、618.6μg的溶液。分別取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖8-12，結果見表7，頭孢噻肟濃度-峰面積線性關系圖見下圖。
表7頭孢噻肟濃度與峰面積的關系(見附圖29)
結論在該色譜條件下，頭孢噻肟濃度265～619μg/ml范圍內，其峰面積A與濃度C呈良好線性關系。
他唑巴坦線性關系考察取他唑巴坦對照品適量，精密稱定，用水稀釋成每1ml含他唑巴坦為40.27、53.69、67.11、80.54、93.96μg的溶液。分別取20μl，注入色譜儀，記錄色譜圖(見附圖13-17)，結果見表8，他唑巴坦鈉濃度-峰面積線性關系圖見下圖。
表8他唑巴坦濃度與峰面積的關系(見附圖30)
結果表明，在該色譜條件下，他唑巴坦鈉濃度在40μg/ml~94μg/ml之間時，其峰面積A與濃度C呈良好線性關系。
再進一步，我們還進行重復性試驗按處方比例稱取頭孢噻肟鈉和他唑巴坦鈉，用流動相溶解并稀釋至刻度，按上述色譜條件重復進樣五次，記錄色譜圖，分別計算峰面積的相對標準偏差。結果見表11。
表11重復性試驗結果 我們又進行了回收率試驗按處方量稱取頭孢噻肟鈉和他唑巴坦鈉各6份，分別置50ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，取溶液進樣-，另取對照品溶液進樣，用回歸方程計算含量，并計算回收率。結果見表9及附圖18-22。
表9回收率試驗結果
由表可知本品中兩成分的回收率均較好。
從上面的試驗結果表明，我們建立的這個含量測定方法，具有靈敏度、穩定性好，重復性高。是個理想的用于檢驗復方藥物兩個成分的方法。
由于該制劑是由無菌原料直接分裝的，所以，原料與制劑的成分、含量上完全一樣，沒有差別。采用本專利的檢測方法對原料進行的檢測，得到與制劑相同的結果。
實施例四、采用新的檢測方法對復方頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉樣品進行檢測 進一步，我們采用這個新的檢驗方法對三批GMP條件下生產的試驗樣品含量進行了測定。按照前述含量測定方法進行，取本品適量，精密稱定，加流動相溶解并稀釋成每ml含頭孢噻肟鈉0.48mg和含他唑巴坦鈉0.06mg的溶液，精密量取20μl，注入色譜儀；另取頭孢噻肟鈉和他唑巴坦鈉對照品適量，同法稀釋并測定，按外標法計算供試品中他唑巴坦鈉和頭孢噻肟鈉的含量。

說明W對對照品的稱樣量，W樣樣品的稱樣量，W裝樣品的平均裝量，A標對照品的峰面積，A樣樣品的峰面積，對％對照品的純度，標示量樣品的標示量 三批樣品含量測定結果見表8，色譜圖見圖23-28。
表8三批樣品含量測定結果
由于該制劑是由無菌原料直接分裝的，所以，原料與制劑的成分、含量上完全一樣，沒有差別。采用本專利的檢測方法對原料進行的檢測，得到與制劑相同的結果。
實施例五、新檢測方法對不同配比的復方原料與制劑的檢測 采用上述實例建立的檢測方法，我們對不同配比的頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉的復方制劑進行了檢測，以觀察這樣的方法是否可以用于不同的配比的復方制劑的檢測，結果發現，對于頭孢噻肟鈉/他唑巴坦鈉20∶1，10∶1，8∶1，6∶1，5∶1，4∶1，3∶1，2∶1，1∶1，1∶2，1∶3，1∶4，1∶5，1∶6，1∶8，1∶10，1∶20等17個不同配比的樣品的檢測，本專利建立的新方法均能很好的對兩個組成成分進行測定，該方法有很好的靈敏度和可靠性。說明本方法對頭孢噻肟他唑巴坦鈉的測定在20∶1～1∶20范圍內不受配比的影響。
由于該制劑是由無菌原料直接分裝的，所以，原料與制劑的成分、含量上完全一樣，沒有差別。采用本專利的檢測方法對原料進行的檢測，得到與制劑相同的結果。實施例六、采用該種檢驗方法評判為合格制劑的進行動物試驗的結果 根據GMP規范進行三批樣品制備，按照本專利實例一、二、三的方法對三批樣品進行檢驗，采用上述標準檢驗合格的制劑樣品進行動物試驗，檢查通過上述新檢測方法檢驗合格的樣品是否能夠符合動物試驗的要求。
試驗樣品首先進行無菌檢查。在無菌室內進行無菌操作，取三批試驗樣品各6支，分別加入100ml 0.9％無菌氯化鈉溶液使溶解，搖勻，打開濾器蓋，在火焰旁打開樣品供試液的塞子使瓶口通過火焰，立即倒入濾器中，并閉濾器蓋，打開排液架的閥門，啟動真空泵進行減壓抽濾，待干后，用滅菌生理鹽水照上述操作沖洗濾膜3次，每次100ml。打開抽氣瓶排氣管，將過濾器取下，用滅菌鑷子將濾膜取出放入滅菌雙碟中。用滅菌剪刀將濾膜平均分成3份，分別置于各含50ml硫乙醇酸鹽流體培養基和改良馬丁培養基的容器中，其中一份做陽性對照。按規定的溫度培養14天。培養期間逐日觀察并記錄是否有菌生長。結果無細菌生長，無菌試驗符合規定，為合格產品。
試驗樣品進行異常毒性檢查取三批試驗樣品，加氯化鈉注射液制成每1ml中含0.15g的溶液，取15只小鼠分成三組，每組5只尾靜脈注射同一批號的溶液0.5ml，觀察48小時的內無異常反應也無死亡，結果為合格產品。
試驗樣品進行熱原檢查取三批試驗樣品，加滅菌注射用水制成每1ml中含0.15g的溶液，取9只家兔分成3組，每組3只，測定其正常體溫后15分鐘內，劑量按家免體重每1kg注射1ml，自耳靜脈緩緩注入規定劑量并溫熱至38℃的供試品溶液，然后每隔30分鐘測量其體溫1次，共測6次，以6次體溫中最高的一次減去正常體溫，即為該兔體溫的升高溫度。各兔體溫升高均低于0.6℃，而且每組家兔體溫升高總和低于1.4℃，因此三批樣品可判斷為熱源檢查符合規定，三批樣品為合格產品。
結果見表9 表9熱原檢查結果



圖1是wm0401批有關物質檢查圖譜 圖2是wm0402批有關物質檢查圖譜 圖3是wm0403批有關物質檢查圖譜 圖4是聚合物對照圖譜 圖5是wm0401批樣品聚合物測定圖 圖6是wm0402批樣品聚合物測定圖 圖7是wm0401批樣品聚合物測定圖 圖8是頭孢噻肟鈉線性試驗圖譜1 圖9是頭孢噻肟鈉線性試驗圖譜2 圖10是頭孢噻肟鈉線性試驗圖譜3 圖11是頭孢噻肟鈉線性試驗圖譜4 圖12是頭孢噻肟鈉線性試驗圖譜5 圖13是他唑巴坦線性圖譜1圖14是他唑巴坦線性圖譜2 圖15是他唑巴坦線性圖譜3圖16是他唑巴坦線性圖譜4 圖17是他唑巴坦線性圖譜5圖18是回收率試驗圖譜1 圖19是回收率試驗圖譜2 圖20是回收率試驗圖譜3 圖21是回收率試驗圖譜4 圖22是回收率試驗圖譜5 圖23是wm0401批含量測定圖譜1圖24是wm0401批含量測定圖譜2 圖25是wm0402批含量測定圖譜1圖26是wm0402批含量測定圖譜2 圖27是wm0403批有含量測定圖譜1 圖28是wm0403批有含量測定圖譜2 圖29是頭孢噻肟鈉濃度與峰面積的關系30是他唑巴坦濃度與峰面積的關系。
權利要求
1、一種新的用于頭孢噻肟鈉與他唑巴坦鈉復方原料和制劑的檢測方法。
2、根據權利要求1所述的方法，其特征在于該方法采用高效液相色譜法，所采用的流動相可以是正己烷，氯仿，二氯甲烷，四丁基氫氧化胺、乙腈、磷酸二氫鉀、甲醇、水等，其中優選的采用四丁基氫氧化胺，磷酸二氫鉀溶液和乙腈。
3、根據權利要求1、2所述的方法，其特征在于該方法所采用的檢測波長可以是210~260nm，優選的波長采用230nm。
4、根據權利要求1、2、3所述的方法，其特征在于該方法所采用的流動相流速可以是0.1~3.0ml/min，優選地流速采用1.0ml/min；
5、根據權利要求1、2、3、4所述的方法，其特征在于該方法所采用的色譜柱可以是胺基柱，氰基柱，十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，八烷基硅烷鍵合硅膠柱，四烷基硅烷鍵合硅膠柱，苯基硅烷鍵合硅膠柱等；優選地采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(C18柱)。
6、根據權利要求1、2、3、4、5所述的方法，其特征在于該方法對于不同比例的頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉復方均能檢測，頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉兩者成分的比例可以包括1∶50~50∶1，優選地用于1∶20~20∶1。
7、根據權利要求1、2、3、4、5、6所述的方法，其特征在于該方法可以用于頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉復方的原料檢測，也可以用于該復方的制劑檢測。
8、根據權利要求1、2、3、4、5、6、7所述方法，這種檢測頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉復方的方法，對兩個組分的含量及雜質能很好地檢測，并且這樣的檢驗不受另一成分的干擾，有很好的靈敏度、專屬性、簡便易行，該方法可以用于制藥公司在該復方的原料與制劑生產過程中對于產品質量的檢測，也可以用于藥檢所、醫院等單位對制劑質量的監控。
全文摘要
一種新的高效液相色譜(HPLC)方法，可以同時檢測頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉復方中兩種單一成分的含量及有關雜質，兩種成分不相互干擾與影響，該方法操作簡單易行，專屬性強，靈敏度高，線性范圍大，穩定性好，可用于復方制劑與原料的檢測。
文檔編號G01N30/74GK101592637SQ200810028349
公開日2009年12月2日 申請日期2008年5月28日 優先權日2008年5月28日
發明者霆 王, 鄧桂興, 孫明杰, 馬宏強 申請人:廣州威爾曼新藥開發中心有限公司, 湘北威爾曼制藥有限公司