一種解淀粉芽孢桿菌ba-ka3及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種解淀粉芽抱桿菌及其應 用，屬于微生物技術及生物防治領域。
【背景技術】
[0002] 番前灰霉病是由半知菌亞門真菌一灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea)引發的一種 番茄真菌病害，可為害番茄的莖、葉、花和果實。發病后傳播迅速，對番茄生產構成極大威 脅，尤其是北方冬春季節的保護地番茄，棚室中低溫、高濕的氣候條件為灰霉病菌的侵染和 傳播提供了有利的環境，常造成番茄減產20%~40%，嚴重時可達60%以上。目前化學農藥 仍是防治該病害的主要措施，但長期使用不僅誘發病原菌產生抗藥性，增加了番茄灰霉病 的防治成本而且容易殺死環境中的有益微生物。因此尋求高效、安全的生物防治方法成為 番茄灰霉病防治的關鍵。
[0003] 解淀粉芽孢桿菌是一種好氧產芽孢的革蘭氏陽性桿狀細菌，具有抑制植物病害的 能力，又是廣泛存在的非致病細菌，對人畜無害，不污染環境，還促進植物生長，抑制線 蟲，治理水環境污染等。其代謝產物較為豐富，具有廣譜抗菌活性和較強的抗逆能力，穩 定性較好，可制成生物制劑應用于植物根部、枝干、葉、花部以及果蔬采后病害防治上。如專 利CN201110389068.X (申請日2011年11月30日）公開了一種解淀粉芽孢桿菌在防治花 生果腐病中的應用。

【發明內容】

[0004] 本發明的目的在于提供一種編號為BA-KA3的解淀粉芽孢桿菌，其揮發性物質和 代謝產物均可明顯抑制番茄灰霉病病原菌的生長、降低病原菌的生長速率和引起菌絲的畸 形；并且該菌株還具有促進植物生長的作用。另一方面本發明還提供了上述菌株的用途。
[0005] 為實現上述目的，本發明所采取的技術方案為： 本發明所述解淀粉芽孢桿菌BA-KA3已于2013年10月15日在中國微生物菌種保藏管 理委員會普通微生物中心進行了保藏，保藏號為：CGMCC No. 8342。
[0006] 本發明所述解淀粉芽孢桿菌BA-KA3具有廣譜的抑菌活性。
[0007] 本發明所述解淀粉芽孢桿菌BA-KA3具有抑制番茄灰霉病菌、小麥赤霉病菌、小麥 紋枯病菌、煙草赤星病菌、辣椒疫霉病菌、辣椒炭疽病菌、花生褐斑病菌、梨黑斑病菌以及大 蒜菌核病菌生長的活性。
[0008] 本發明所述解淀粉芽孢桿菌BA-KA3在制備農作物用生物防治制劑中的應用。 [0009] 本發明所述解淀粉芽孢桿菌BA-KA3在制備農作物用生物防治制劑中的用途。 [0010] 本發明所述解淀粉芽孢桿菌BA-KA3在制備用于番茄、花生、梨、大蒜或小麥的生 物防治制劑中的用途。
[0011] 本發明所述解淀粉芽孢桿菌BA-KA3生物防治制劑中含有解淀粉芽孢桿菌BA-KA3 菌體和/或其代謝產物。
[0012] 本發明所述的解淀粉芽抱桿菌No. 8342 的 形態學特征為菌體桿狀，產生芽孢；革蘭氏陽性，生理生化鑒定結果為：甲基紅試驗（_);丙 二酸鹽利用（_);明膠液化（+ );檸檬酸鹽利用（+ );硝酸鹽利用（+ );吲哚試驗（+ );脂肪酶 (-);V-P試驗（+);酪氨酸水解（-);纖維素分解（+);淀粉水解（+) ;H2S產生試驗（+)。平板 對峙試驗表明對番茄灰霉病菌具有明顯的抑制作用。對番茄果實、離體葉片和盆栽番茄的 灰霉病均有很好的防治效果；并且其可以顯著的提高番茄種子萌發率、出芽率和根長等植 物生長指標。
[0013] 本發明的解淀粉芽孢桿菌BA-KA3對小麥赤霉病菌、小麥紋枯病菌、煙草赤星病 菌、辣椒疫霉病菌、辣椒炭疽病菌、花生褐斑病菌、梨黑斑病菌、大蒜菌核病菌等多種病原真 菌均具有明顯的抑制作用；并且尤其適用于制作為農用制劑用于防治番茄由于番茄灰霉病 菌感染而引起的病害并且促進農作物生長。
[0014] 生物樣品保藏信息 解淀粉芽抱桿菌 BA-KA3,分類命名為 已于 2013 年 10 月15日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，簡稱CGMCC，地址：北京市 朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研宄所，郵編100101，菌種保藏號為CGMCC No. 8342〇
【附圖說明】
[0015]圖1為本發明解淀粉芽孢桿菌BA-KA3與番茄灰霉病菌的平板對峙試驗結果； 圖2為本發明解淀粉芽孢桿菌BA-KA3的16S rDNA序列系統發育樹； 圖3為本發明解淀粉芽孢桿菌BA-KA3揮發性物質對菌絲生長和顯微鏡觀察的抑菌效 果； 圖4為本發明解淀粉芽孢桿菌BA-KA3不同濃度無菌發酵液對番茄灰霉病的抑菌效 果； 圖5發明解淀粉芽孢桿菌BA-KA3無菌發酵液對灰霉病菌菌絲的影響； 圖6本發明解淀粉芽孢桿菌BA-KA3抑菌譜的測定結果。
【具體實施方式】
[0016] 實施例1解淀粉芽孢桿菌BA-KA3的分離 解淀粉芽孢桿菌BA-KA3是從河北省石家莊市欒城縣柳林屯鄉保護地番茄的根際土壤 中分離獲得。
[0017] 具體方法是：采集于河北省石家莊市欒城縣柳林屯鄉保護地番茄的根際土壤，4°C 保存，用于拮抗菌的分離。將5g番茄根際土壤用0. 9%生理鹽水分別稀釋為1(T4、1(T5、1(T6。 各吸取100 UL至PB培養基，用玻璃涂布器涂布均勻。于28°C培養箱中培養3d后，挑取菌 落形態不同的細菌進行分離純化。以番茄灰霉病菌為指示菌，采用平板對峙法對番茄灰霉 病菌的拮抗菌進行篩選，22°C黑暗培養5d后，選出具有抑菌圈的菌株進入復篩。采用十字 交叉法將初篩后的菌株點接在距平板中央3cm處的4個角上，平板中央同時移入直徑5mm 的長有灰霉病菌的瓊脂塊，22 °C培養5d后，選出具有抑菌圈且拮抗作用持久的菌株。測量、 記錄抑菌圈直徑的大小并計算抑制率。抑制率（％)=(對照組病原菌菌落直徑-處理組病原 菌菌落直徑）/對照組病原菌菌落直徑X100%。
[0018] 如圖1所示，A為對照組，B組加入解淀粉芽孢桿菌BA-KA3,待對照組病原菌長滿 平皿后，測定抑菌圈直徑，計算解淀粉芽孢桿菌BA-KA3抑菌率為63%。
[0019] 實施例2解淀粉芽孢桿菌BA-KA3的鑒定 該菌株BA-KA3,在LB培養基上生長不產生色素